用于使用液体剂型用β－环糊精制备多剂量制剂的抗菌防腐剂的制作方法

专利名称：用于使用液体剂型用β－环糊精制备多剂量制剂的抗菌防腐剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有治疗有效量的活性药物成分(“API”)、药物可接受的环糊精和药物可接受的防腐剂的药物组合物。本发明还涉及含有化学式I的化合物、药物可接受的环糊精和防腐剂的药物组合物，其中R2选自甲基、乙基、异丙基、仲丁基和叔丁基。
特别地，本发明涉及含有化学式Ia的化合物、药物可接受的环糊精和防腐剂的药物组合物。
本发明进一步涉及改善含有化学式I的化合物或其药物可接受的盐、β-环糊精和防腐剂的可注射水溶液的注射部位耐受性。
本发明也涉及开发防腐的API组合物的方法。
背景技术：
包括化学式I和Ia化合物的神经激肽受体拮抗剂的给药，对于注射部位耐受性存在许多问题(例如，受试者的过敏、注射部位刺激、炎症、肿胀、和/或发红)。尽管已经有大量研究关于通过使用多种物质来改善注射部位的耐受性，但没有一个研究针对神经激肽受体拮抗剂的给药。
化学式I或Ia的化合物是美国专利第5,807,867号、第6,222,038号和第6,255,320号的主题。化学式I和Ia的化合物的制备如其中所述。Ia化合物也可如共有并转让给Pfizer，Inc.的共同未决的美国临时申请第60/541,323号中所述进行制备。美国专利第5,393,762号也描述了药物组合物和使用NK-1受体拮抗剂治疗呕吐。共有并转让给Pfizer，Inc.的共同未决的美国临时申请第60/540,697号描述了通过施用化学式I或Ia的化合物改善患者麻醉恢复的方法。本说明书中引用的上述申请的文本、专利和所有其他文献在此完整引入作为参考。
化学式Ia的化合物是碱性药物，具有两个胺官能基团，仲胺pKa为4.43，叔胺pKa为9.31。化学式Ia的化合物的柠檬酸盐在pH为4.2的0.02M磷酸盐/0.02M醋酸缓冲溶液中的溶解度为2.7mg/mL。通过添加盐类(例如，NaCl、CaCl2或醋酸钠)，使用部分水性的、油性的、或胶束载体，或添加修饰的、经胃肠外给药可接受的环糊精，可以获得所需的10mgA/mL溶解度。但通常，观察到含有环糊精的制剂较其他增加溶解性的方法有改善的注射部位耐受性。
保证药物在胃肠外剂型中足够的溶解度是很重要的，特别是当药物具有低水溶性时。改变溶液的pH、选择药物的盐类形式、以及使用辅助溶剂是普遍用来达到足够溶解度的方法。非典型的方法涉及赋形剂，如络合剂。
环糊精可通过与药物分子形成包合配合物而提高溶解性，其中不溶的/疏水的药物插入至环糊精的疏水腔内。环糊精分子的亲水外壳提高整个配合物的溶解度。环糊精络合作用的标准术语将环糊精鉴别为“主”分子，药物为“客”分子。不幸的是，用来形成包合配合物的环糊精也会结合防腐剂，使许多水溶性较差的防腐剂灭活。
人们发现磺丁醚-β-环糊精(以后称为“SBE-CD”)可有效增加化学式Ia的化合物的溶解度以及改善注射部位的反应。但不幸的是，研究确认SBE-CD可与抗菌防腐剂(例如，间甲酚)和化学式Ia的化合物形成配合物，导致竞争的结合作用，通常引起抗菌效力的丧失。
因此，需要在足够浓度的环糊精(例如，SBE-CD)和抗菌防腐剂(例如，间甲酚)之间获得最佳的平衡。虽然较低浓度SBE-CD可增加抗菌防腐剂的功效，但这种优势被可接受的注射部位耐受性(“IST”)降低而抵消。这种竞争性的特征使得必须要对产品的抗菌防腐剂功效(标准A)和可接受的注射部位耐受性进行平衡。
与本申请同时提交并已经转让给Pfizer Inc.并由其拥有的共同未决的美国临时申请第60/540,644号，描述了在含有化学式I的化合物和环糊精的组合物胃肠外给药过程中改善注射部位耐受性的方法。也鉴定了可提供所需的多次使用剂量选择的、与环糊精相容的防腐剂。优选地，在制剂中使用间甲酚，以在计划的延长使用期间内防止细菌和真菌在制剂中生长。

发明内容
在一个方面，本发明涉及一种药物组合物，其包括治疗有效量的活性药物成分(API)、β-环糊精、药物可接受的防腐剂、药物可接受的载体、以及可选择的药物可接受的赋形剂，其中所述的防腐剂确认具有药物可接受的抗菌防腐作用。
在一个优选的实施方式中，β-环糊精是2-羟丙基-β-环糊精或磺丁醚-β-环糊精，优选磺丁醚-β-环糊精。
在另一个实施方式中，药物可接受的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚、或间甲酚或其组合。防腐剂优选是间甲酚。优选地，防腐剂的浓度为大约0.1mg/mL至大约600mg/mL。优选地，防腐剂为间甲酚，且其浓度为大约0.1mg/mL至大约20mg/mL。
在一个优选的实施方式中，药物组合物的pH范围为大约3至大约6。
在一个优选的实施方式中，防腐剂与环糊精的结合值小于API与环糊精的结合值。优选地，API与环糊精的结合值在500M-1至10,000M-1之间。优选地，API与环糊精的结合值在800M-1至3,000M-1之间。
在另一个实施方式中，活性药物成分与环糊精的结合常数大于或等于防腐剂与环糊精的结合常数的两倍。在一个优选的实施方式中，结合常数大于或等于5倍。在一个更优选的实施方式中，结合常数大于或等于10倍。
在一个优选的实施方式中，大约1mg/mL至大约5mg/mL的防腐剂，优选间甲酚，在环糊精中是非螯合的。优选大约2.5mg/mL的防腐剂，优选间甲酚，在环糊精中是非螯合的。
在一个优选的实施方式中，药物组合物对细菌有抗菌作用，6小时后细菌浓度减少2个或更多个对数数量级，24小时后减少3个或更多个对数数量级，28天后细菌无复苏。优选地，细菌选自大肠杆菌(细菌，革兰氏阴性)(ATCC8739)、绿脓杆菌(细菌，革兰氏阴性)(ATCC9027)或金黄色葡萄球菌(细菌，革兰氏阳性)(ATCC6538)。
在一个优选的实施方式中，药物组合物对真菌或霉菌有抗菌作用，真菌或霉菌浓度7天后减少2个或更多个对数数量级，14天后减少1个对数数量级，14天至大约28天后真菌或霉菌不再增长。优选地，真菌为白色念珠菌(真菌)(ATCC 10231)，霉菌为黑曲霉(霉菌)(ATCC16404)。
在一个优选的实施方式中，药物组合物具有的抗菌效力满足欧洲药典标准A和B以及USP AET标准。
在另一个方面，本发明涉及一种药物组合物，其含有作为活性药物成分的化学式I的化合物 或其药物可接受的盐、药物可接受的β-环糊精、药物可接受的防腐剂、药物可接受的载体和可选择的药物可接受的赋形剂，其中R2选自甲基、乙基、异丙基、仲丁基和叔丁基、优选叔丁基。
优选地，β-环糊精为2-羟丙基-β-环糊精或磺丁醚-β-环糊精，优选磺丁醚-β-环糊精。
优选地，药物可接受的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚、或间甲酚、或其组合。防腐剂优选是间甲酚。
优选地，药物组合物pH的范围是大约4至大约5。
在一个优选的实施方式中，大约1mg/nL至大约5mg/mL的防腐剂，例如间甲酚，在环糊精中是未螯合的。
在一个优选的实施方式中，化学式I的化合物或其药物可接受的盐，其量为大约0.1mg/mL至大约100mg/mL，β-环糊精的量为大约20mg/mL至大约200mg/mL，防腐剂是间甲酚。优选地，β-环糊精的量为55mg/mL至100mg/mL，间甲酚的量为大约2.5mg/mL至3.5mg/mL。
在一个优选的实施方式中，化学式I的化合物是化学式Ia的化合物 或其药物可接受的盐。
优选地，化学式Ia的化合物或其药物可接受的盐，其量为大约0.1mg/mL至大约100mg/mL，β-环糊精的量为大约20mg/mL至大约200mg/mL，防腐剂是间甲酚，其量为大约1mg/mL至大约5mg/mL。优选地，β-环糊精的量为大约55mg/mL至大约100mg/mL，防腐剂是间甲酚，其量为大约2.5mg/mL至大约3.5mg/mL。优选地，β-环糊精是磺丁醚-β-环糊精。
在第三个方面，本发明涉及一种药物组合物，其含有化学式Ia的化合物 或其药物可接受的盐、药物可接受的载体和可选择的药物可接受的赋形剂，其中所述的化学式Ia的化合物为10mgA/mL，磺丁醚-β-环糊精的量为大约63mg/mL，间甲酚的量为大约3.3mg/mL。优选地，化学式Ia的化合物的药物可接受盐是柠檬酸盐。
在第四个方面，本发明涉及一种治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复的方法，包括给哺乳动物胃肠外注射水性药物组合物，该组合物包括上述化学式I或Ia化合物的药物组合物和其量足以改善注射部位注射耐受性的β-环糊精。优选地，药物可接受的盐是柠檬酸盐。优选地，组合物经皮下给药。
在第五个方面，本发明涉及一种在治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复的治疗过程中，改善注射部位耐受性的方法，包括给哺乳动物经胃肠外注射上述化学式I或Ia化合物的药物组合物的药物可接受溶液。优选地，药物可接受的盐是柠檬酸盐。优选地，组合物经皮下给药。
在第六个方面，本发明涉及一种开发防腐的API组合物的方法，该组合物包括治疗有效量的API、β-环糊精和药物可接受的防腐剂。
在一个优选的实施方式中，防腐剂与环糊精的结合值小于API与环糊精的结合值。优选地，防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚或间甲酚或其组合。
在一个优选的实施方式中，API与环糊精的结合值大于50M-1。优选地，API与环糊精的结合值在500至10,000M-1之间。优选地，API与环糊精的结合值在800至3,000M-1之间。
在一个优选的实施方式中，抗菌效力试验(AET)的要求满足欧洲药典标准A和B以及USP AET标准。
在又一个方面，本发明涉及如本文所定义的药物组合物，当组合物包括化学式I或Ia的化合物时，特别是用作治疗对如NK-1受体拮抗剂之类的神经激肽拮抗剂有适应症的疾病的药物。
在又一个方面，本发明涉及一种如本文所定义的药物组合物在制备药物中的应用，该药物用于治疗对如NK-1受体拮抗剂之类的神经激肽拮抗剂有适应症的疾病，该组合物包括化学式I或Ia的化合物。
在又一个方面，本发明涉及一种治疗哺乳动物疾病的方法，该疾病对如NK-1受体拮抗剂之类的神经激肽受体拮抗剂有适应症，该方法包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的如本文所定义的药物组合物，该药物组合物包括化学式I或Ia的化合物。
定义在此使用的术语“化学式I的化合物”和“化学式Ia的化合物”是指化学式I或Ia的一种或多种化合物、其前体药物以及该化合物或前体药物的药物可接受的盐。在本发明中使用的化合物可被分离和以原形使用，或以其药物可接受的盐、溶剂合物和/或水合物的形式使用。
术语“药物可接受的盐”是指本发明化合物的无机和有机盐。这些盐类可在最终的化合物分离和纯化过程中原位制备，或通过分别将化合物、或前体药物与合适的有机酸或无机酸反应并分离盐而形成。代表性的盐类包括氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、苯磺酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、丙二酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、六氟磷酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、naphthylate、甲磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐、以及十二烷基磺酸盐、和类似物。参见，例如Berge等人的J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)。
优选地，药物可接受的盐是柠檬酸盐。在此使用的术语“柠檬酸盐”是指化学式Ia化合物的柠檬酸一水合盐，分子量为660.82，基于活性成分的理论效力(theoretical potency)为709mg/g。
在此使用的术语“活性药物成分”或“API”是指具有治疗特性，并具有与环糊精结合或“螯合”能力的药用物质。优选地，API与环糊精的结合值大于50M-1。更优选地，API与环糊精的结合值在大约800M-1至大约3,000M-1之间。更为优选的是，API与环糊精的结合值在大约500M-1至大约10,000M-1之间。而且，API与环糊精的结合常数优选大于防腐剂的两倍。更优选地，API与环糊精的结合常数大于5倍。更为优选的是，API与环糊精的结合常数大于或等于10倍。
在此使用的术语“活性成分”或“mgA/mL”是指化学式Ia的化合物的游离碱的分子量为468.69。
术语“环糊精”是指包括环状α(1→4)连接的D-吡喃葡萄糖单位的化合物。α-环糊精是指具有6个环状连接的D-吡喃葡萄糖单位的环糊精，β-环糊精有7个环状连接的D-吡喃葡萄糖单位，γ-环糊精有8个环状连接的D-吡喃葡萄糖单位。这些环状连接的D-吡喃葡萄糖单位确定了疏水空腔，环糊精已知可与其他有机分子、盐、固态或水溶液形式的卤素形成包合化合物。
环糊精在结构和特性上不同。例如，在取代的和未取代的α-、β-和γ-环糊精中，疏水空腔的大小(例如，直径和深度)和功能性(例如，疏水性、电荷、与氢键的反应性和能力)不同。制剂要选择的环糊精典型地具有一定的大小和功能性，可与制剂中其他成分的靶成分结合。对于现在的制剂和方法，人们认为取代的环糊精，如羟烷基环糊精和磺烷基醚环糊精具有的大小和功能性适于制剂中的其他成分。优选的环糊精包括羟丙基-β-环糊精和磺丁醚-β-环糊精。更优选的环糊精是磺丁醚-β-环糊精(“SBE-CD”)。
短语“治疗有效量”是指本发明的化合物的量(i)可治疗或预防本文所述的特定的疾病、病症或紊乱，(ii)减轻，改善或消除特定疾病、病症或紊乱的一种或多种症状，或(iii)预防或延缓特定疾病、病症或紊乱的一种或多种症状的发作。
在此使用的术语“哺乳动物”或“动物”是指人类，伴侣动物，例如但不限于狗、猫和马，食源动物(例如，牛、猪和羊)，动物园动物和其他类似的动物种属。
短语“药物可接受的”表示物质或组合物必须在化学上和/或毒理学上与其他成分包括制剂、和/或被其治疗的哺乳动物相容。
术语“治疗”包括预防性的含义，即预防和姑息治疗。
在此使用的术语“改善的注射部位耐受性”是指如本文表IV中所规定的评分为两分或小于两分。
在此使用的术语“药物可接受的防腐剂”是指一种防腐剂。特别是根据欧洲药典第四版2003(5.1.3)对胃肠外制剂和USP26 NF21S2，<51>对1类药品提出的标准，含有防腐剂的制剂要保持其功效。优选地，防腐剂与环糊精的结合值较API低，这样在环糊精中有足够的防腐剂是“未螯合的”，可提供有效的抗菌作用。


图1描述的是SBE-CD和化学式Ia化合物的饱和间甲酚溶液。间甲酚的浓度显示随SBE-CD的增加而线性增加。药物的浓度没有显著地改变间甲酚在SBE-CD中的溶解度。
图2描述的是在化学式Ia的化合物为1、0.5、和0.25mM时，化学式Ia的化合物浓度与时间的曲线，拟合为方程式11。
图3描述的是在6小时和24小时时间点上，对于金黄色葡萄球菌，比较细菌效力作为间甲酚总量的函数和其作为计算的螯合间甲酚的函数。
图4描述的是保证防腐剂效力的制剂窗，其根据欧洲药典标准A，注射中没有疼痛，小于3.5mg/mL间甲酚，小于80mg/mL SBE-CD。
具体实施例方式
使用环糊精增溶或为其他目的开发胃肠外制剂，需要理解药物和环糊精之间的相互作用。可被环糊精溶解的药物以与固有的结合常数相关的化学计量关系进行结合。这个关系根据几种因素而变化，如药物、环糊精的结构、以及溶液特性(例如，pH、离子强度、和共溶度)。
具有多种赋形剂的制剂进一步使相互作用复杂化。例如，在含有防腐剂的胃肠外多次使用制剂中，防腐剂可与药物竞争结合环糊精。以前报道2-羟丙基-β-环糊精不仅与药物分子作用，而且也可与抗菌防腐剂形成配合物。Loftsson，T.等人，Drug Development and IndustrialPharmacy 1992，18(13)，1477-1484。
但防腐剂和环糊精的结合降低了防腐剂的抗菌效力，因为需要防腐剂在溶液中是未结合的。对于胃肠外产品的防腐剂效力的最小要求在欧洲药典(可适用标准A)和美国药典中都有描述。对于计划制剂的抗菌防腐剂根据抗菌效力试验(“AET”)标准来评价。
含有10mgA/mL化学式Ia化合物和10％(w/v)环糊精的化学式Ia化合物的多次剂量制剂，在pH 4.4被用来鉴定不与环糊精发生显著相互作用的有效的抗菌防腐剂。从初步实验中，化学式I化合物的溶解度在2-羟丙基-β-环糊精存在时，与SBE-CD存在时的溶解性相似。而且，都能得到具有可接受的注射部位耐受性(“IST”)的制剂。除了与例如SBE-CD的环糊精有相容性以外，还有其他的标准对制剂中可接受的抗菌防腐剂进行限制。这些标准是物理上和化学上与化学式Ia化合物的相容性；在大约pH 4.4下对细菌、霉菌和酵母的防腐效力以及可接受的注射部位耐受性。
如在实验章节更加详尽讨论的，使用氯甲酚、苯基乙醇、苯甲醇、乙醇、溴硝丙二醇、蔗糖、葡萄糖酸洗必太、乙基汞硫代水杨酸钠、卞索氯铵、苯扎氯铵、氯代丁醇、苯甲酸、间甲酚、苯酚、和25％丙二醇对化学式Ia化合物多次剂量制剂的抗菌防腐剂进行初步的筛选。初步的结果显示乙基汞硫代水杨酸钠、氯代丁醇/苯基乙醇、乙醇和丙二醇(50％)满足USP/Ph.Eur.的要求(表VII)。
当考虑注射部位耐受性的问题时，氯代丁醇/苯基乙醇，乙醇和丙二醇证明注射部位耐受性很低(表VIII)。相反，乙基汞硫代水杨酸钠和间甲酚显示良好的注射部位耐受性。
卞索氯铵和苯甲酸在7天后都不能减少微生物。丙二醇(25％)仅在有SBE-CD存在时对细菌有活性，但对真菌无效。另一方面，酚类化合物，苯酚和间甲酚可有效减少微生物，但当制剂中存在SBE-CD时，它们对细菌的活性大大降低。
本发明者怀疑并已确定，对所需制剂防腐遇到的困难来自抗菌防腐剂(例如间甲酚)与SBE-CD之间的相互作用。特别是防腐剂，例如间甲酚，可能被SBE-CD螯合，使间甲酚对细菌和真菌失去活性。为了证明这个理论，测定化学式Ia的化合物对SBE-CD以及间甲酚对SBE-CD的结合常数(KP)。这些常数用来计算被检测抗菌效力的制剂中未螯合的间甲酚的浓度。用来计算的平均值是药物的结合常数(″KD″＝1000)和防腐剂的结合常数(″KP″＝28)。
在一种组分需要优先结合的情况下，需要对平衡状态下每种组分的结合部分进行定量。使用例如光谱法或量热法的技术可以测量一种组分相对另一种组分在溶液中的结合。Gadre，A.，和Connors，K.A.“Binding of Substituted Acetic Acids to α-Cyclodextrin in AqueousSolution(取代的醋酸与α-环糊精在水溶液中的结合)”J.Pharm.Sci.1997 86(11)1210-1214.)。为了区分包含结合(inclusion binding)与三元剂型剂的其他可能的增溶作用，如堆积(stacking)或水溶助长性，需要一种方法来确定在其他竞争结合剂存在下，一种组分与环糊精结合的结合常数。区分结合与其他作用模式的能力对于理解和设计最佳剂型是很重要的。
在本发明中，在含有SBE-CD和防腐剂的多次使用胃肠外制剂的开发中，确定结合常数的方法使用平衡透析法。特别是，该方法用于开发含有化学式Ia化合物、环糊精(SBE-CD)和防腐剂(间甲酚)的胃肠外制剂。这种方法在胃肠外制剂的开发中可适用于化学式Ia化合物以外的化合物，也包括在本发明的范围内。使用本方法对制剂的开发可以优化环糊精与药物结合而不与防腐剂结合。这种方法的意义在于，其能够测量竞争与环糊精结合的多个化合物的结合常数。通过透析后建立的平衡所显示的相互作用程度，实验性透析数据也对制剂中的结合作用提供了一种很容易解释的表示方法。
平衡透析允许通过模拟有平衡终点的跨半透膜所得扩散率来计算结合常数。平衡透析通过使底物在平衡透析装置(元件)的供给室中含有结合底物和配基的溶液中随时间与接受室进行平衡而进行。Ono，N.，Hirayama，F.，Arima，H.，Uekama，K.“Determination of StabilityConstant of β-Cyclodextrin Complexes Using the Membrane PermeationTechnique and the Permeation Behavior of Drug CompetingAgent-β-Cyclodextrin Temary Systems(使用膜渗透技术和药物竞争剂-β-环糊精三元系统的渗透行为确定β-环糊精配合物的稳定性常数)”Eur.J.Pharm.Sci.1999 9133-139。接受单元不含有配基。膜是半渗透的，允许典型的低分子量的底物自由扩散，同时环糊精(MW＝2163)仍保留在供给室中。随时间变化从两个室中采样得到了透析单元供给室和接受室中底物的时间-浓度曲线。
一个描述药物跨膜扩散率的数学模型可从溶液中含有两个或多个组分的系统中获得。底物的透析率和结合常数可通过使用非线性曲线拟合软件解析方程式而获得。根据各组分之间的相互作用，有可能描述发生在溶液中的竞争性结合作用。平衡结合常数是根据下面的化学平衡方程式测量与SBE-CD结合的间甲酚相对浓度S＝间甲酚，L＝SBE-CD。S∶L表示间甲酚和SBE-CD之间形成的配合物。
KS+LS∶LK=[S:L][S][L]]]>溶解度分析化学式Ia化合物的柠檬酸盐在pH 4.2、0.02M磷酸盐/0.02M醋酸盐缓冲溶液中的溶解度为2.7mg/mL。传统的溶解度法最初是用来确定溶解度和化学式Ia化合物和防腐剂与SBE-CD的结合常数的。这些研究可确定SBE-CD与化学式Ia化合物之间结合的化学计量关系，如化学式Ia化合物和SBE-CD的摩尔溶解度关系的线性斜率所示(图1)。
使用溶解度分析来计算间甲酚的结合作用。实验以化学式Ia的化合物在不同浓度下进行，以确定是否溶液中药物的存在对间甲酚结合常数有影响。在过量(饱和)间甲酚中测量间甲酚的溶解度，使用下面的方程式计算平衡结合常数St=SO+K11SOLt1+K11SO]]>其中St为间甲酚的总溶解度，s0是间甲酚的固有溶解度，Lt是SBE-CD(配基)的总浓度，K11是假设1∶1结合化学计量时的间甲酚平衡结合常数。
应用溶解度法，各研究中的间甲酚的平衡结合常数平均为27.6M-1。如表I所示，这是化学式Ia化合物的存在对结合作用的最小影响。这个数据用来比较本研究的平衡透析法的结果。化学式Ia的化合物在pH 4.4时的结合常数为1040M-1。
表I

表I从间甲酚饱和溶解度实验中通过改变SBE-CD和药物(化学式Ia的化合物)计算的结合常数。间甲酚溶解度的斜率对比SBE-CD浓度用来估计结合作用。添加化学式Ia的化合物没有显著地改变间甲酚的浓度。
平衡透析法最初的实验建立了化学式Ia的化合物和间甲酚跨500 MWCO透析膜的平衡透析通量率。最初将三种不同浓度的化学式Ia化合物负载在透析板(dialysis well)的供给侧。以不同的时间间隔撤出样品，使用HPLC测量游离组分的浓度。在大约4天后对每个待测条件完成平衡。使用讨论中给出的单一系统模型将光滑的线条拟合为数据。所有这些对照实验中在全部药物的50％均匀地分布在板的供给和接受侧后达到平衡点。这种平衡的渐进方法被建模，并计算透析率，见表II。
表II


表II.从平衡透析法计算的结合常数。使用数值线-拟合软件(numericalline-fitting software)将渐进扩散率拟合为方程式11，从而得到结合常数。
分析数据的基本方法是从平衡透析数据进行计算，如下所述。特别地，跨膜扩散率可使用下面的方程式进行计算供给相的扩散率由下面的关系式确定[D]t-[D]eq＝([D]0-[D]eq)e(-2kt)(1)进入接受相的扩散率[D]eq-[D]t＝[D]eqe(-2kt)(2)其中k＝渗透率常数，min-1[D]0＝在时间0时供给相或接受相中的浓度[D]t＝在时间t时供给相或接受相中的浓度[D]eq＝在平衡时供给相或接受相中的浓度t＝时间(min)在SBE-CD存在时计算的基础是假设根据标准的配合反应，配合作用仅发生在供给相中KD+L  D∶LK=[D:L][D][L]]]>决定药物扩散至接受相的微分方程如下d[D]Adt=k[D]F-k[D]A---(3)]]>药物在系统中的质量平衡描述如下[D]tot＝[D]F+[D]A+[D∶CyD](4)其中[D]F和[D]A分别是供给板和接受板中的游离药物。得到保留在供给相中的、系统中的环糊精的质量平衡如下[CyD]tot＝[CyD]F+[D∶CyD](5)将质量平衡(eq)中的配合药物代入平衡关系中得到K=([D]tot-[D]F-[D]A)[D]F[CyD]F---(6)]]>求解游离药物，并带入进eq.3中得到dDAdt=k[(Dtot-DA1+K·CyDF)-DA]---(7)]]>简化结果得到dDAdt=k[Dtot-(K·CyDF+2)DA1+K·CyDF]---(8)]]>使用环糊精质量平衡，并根据已知的值求解游离环糊精得到CyDF＝CyDtot-Dtot+DF+DA(9)通过其平衡关系替换游离药物，DF，得到CyDF=CyDtot-Dtot+DA+D0-DA1+K·CyDF---(10)]]>求解游离环糊精的二次方程，CyDF，得CyDF=-1+K·DA-K·D0+K·CyDtot±4K·CyDtot+(1-K·DA+K·D0-K·CyDtot)22·K---(11)]]>CyDF的值可带入方程式8中。使用方程式8和11的隐含解，通过使用时间、浓度日期、和初始条件，可确定进入接受相的平衡结合常数K和扩散率k。
从透析室的供给侧取样并去掉高浓度的药物(例如，化学式Ia的化合物)，得到表示达到平衡浓度的原始数据，其中点偏离50％以下。这种抽样偏差要被校正，曲线被标准化以代表50％中点。这种标准化要在将曲线拟合成模型之前进行。
使用该法对药物和SBE-CD提供了测定的结合常数。从平衡透析法获得的数值为1092M-1(±352M-1，n＝3)，相比溶解度法为1040M-1(n＝1)。防腐剂和SBE-CD的结合常数，使用溶解度法为28M-1(n＝1)，相比使用平衡透析为83M-1(±7M-1)。数据证明，在二元系统中，药物(例如，化学式Ia的化合物)和防腐剂结合于SBE-CD中的空腔，尽管在此例中，药物结合常数超过防腐剂13倍。数据显示在由SBE-CD、药物(例如，化学式Ia的化合物)和防腐剂组成的三元系统中，以测试的比例，平衡曲线表明由于与药物的竞争结合，防腐剂不与环糊精结合。
根据上述的计算获得了螯合间甲酚和化学式Ia化合物的量，开发计划的制剂，并评价抗菌效力。图3证明了抑制已知量的金黄色葡萄球菌后6或24小时后，制剂中包含的总间甲酚浓度与细菌群体对数减少之间没有明确的关系(即，含有大约3mg/mL间甲酚的制剂似乎同样可产生低至0或高至超过4.6的对数减少)。但当相同的数据集相对于计算的制剂中未螯合的间甲酚浓度作图时(图4)，关系很明显。该数据集可用含有9.0至11.0mgA/mL的化学式Ia化合物、2.5至4.75mg/mL间甲酚以及60至100mg/mL SBE-CD的多种制剂来产生。在更高浓度下出现平台仅仅是由于细菌效力测定方法的限制所致。因为该法在于评价未被防腐剂杀死的细菌群体，当全部群体死亡时(即，～100％时几乎任何细菌都检测不到)，引用的数字是下面的形式对数减少大于通常在3和5之间的数值。
另一个因素是未螯合的化学式Ia化合物的浓度，因为更高的浓度证明可引起注射疼痛。而且，如果浓度达到化学式Ia化合物在制剂所需的大约pH 4.4下水溶性的限度，还有沉淀的危险。因此，尝试将浓度保持在2mg/mL以下将未螯合的化学式Ia化合物的水平最小化。
两个其他的参数是(1)总间甲酚浓度水平；和(2)环糊精(例如，SBE-CD)的水平应该保持尽可能低，特别是低于80mg/mL以防止与间甲酚结合并将其灭活。(见图4)。因此，含有9.0至11.0mgA/mL化学式I的化合物、2.5至4.75mg/mL间甲酚和60至100mg/mLSBE-CD的制剂被设计为含有已知量的计算的未螯合的化学式I化合物和已知计算量的未螯合的间甲酚。制剂进行防腐剂效力的分析。这些结果在图4中报告。从这些结果中，确定了强防腐剂效力的置信区间，并在图4中报告。
根据这些结果，选择含有计算未螯合浓度的间甲酚(2.8mg/mL)和化学式I的化合物(1.4mg/mL)的优选制剂，对应于图4中的黑色菱形。该制剂对应于pH 4.4时，实际总浓度为10mgA/mL的化学式I化合物、63mg/mL SBE-CD和3.3mg/mL间甲酚。
上面所述开发化学式Ia化合物的柠檬酸盐的药物制剂的原则，可用于开发含有药物、环糊精和防腐剂的其他胃肠外制剂。在特定浓度的药物中，环糊精和防腐剂应该将未螯合防腐剂的浓度调整到最小(当使用间甲酚时为2.1mg/ml)。
制剂。通常，制剂的制备是将治疗有效量的化学式Ia的化合物溶解在药物可接受的水性稀释剂中。也可使用化学式I化合物的药物可接受盐，如柠檬酸盐或苹果酸盐。环糊精以大约2％至大约40％的浓度范围加入至溶液中。优选地，环糊精含有大约5％至大约20％的药物组合物，更优选大约5％至大约10％。优选地，环糊精是β-环糊精羟丙基β-环糊精、磺丁醚β-环糊精或其他药物可接受的取代的β-环糊精。防腐剂根据重量加入至制剂中。
如在此所使用，对于剂量单位“治疗有效量”，可典型地为大约0.5mg至大约500mg活性成分。但剂量可根据要治疗的动物的种属、品种等、严重性和动物的体重而变化。因此，根据体重，活性成分的典型剂量范围是从每千克动物体重大约0.01至大约100mg。优选地，范围是从每千克体重大约0.10mg至大约10mg，更优选的是从每千克体重大约0.2至大约2mg。
例如，10mgA/mL化学式Ia化合物的制剂在1mg/kg剂量时，对治疗5至30kg的动物优选的注射体积为0.5至3.0mL，其覆盖了大多数的患者。在更大的哺乳动物中使用产品可通过使用更大的注射器或多次注射来满足需要。在很小的狗和猫中使用产品则需要更小的注射体积。
兽医或本领域的技术人员将能够确定适合特定个体患者的用药剂量，可根据特定患者的种属、年龄、重量和反应性而变化。上述用药剂量是平均个体的实例。因此，根据上面的因素，更高或更低的用药剂量范围也是许可的，包括在本发明的范围之内。
化学式Ia化合物的药物组合物如此进行开发，使对患者施用治疗有效量的化学式Ia的化合物时，要具有可接受的注射部位耐受性。通过观察患者反应征象，包括红斑(大小)、皮肤变厚(大小)、触痛和水肿，来测量注射部位耐受性。表VI提供了对评分系统的详细解释对每种特征和每个注射部位每天进行评分，从0(无反应)至4(严重反应)。
化学式Ia化合物的柠檬酸盐制剂在大约4.4的天然pH下，通过柠檬酸盐补偿离子(21.3mM)可自行缓冲。但如果使用其他药物可接受的盐类，需要药物可接受的缓冲液。优选的制剂为pH 4.4的10mgA/mL化学式Ia化合物的柠檬酸一水合盐、大约63mg/mL SBE-CD、和大约3.3mg/mL间甲酚。
基本实验步骤A.测定结合常数的平衡透析法材料.间甲酚(MW＝108.14)从Aldrich，St.Louis，MO获得。使用装备了2mL Teflon池(cell)和500 MWCO纤维素酯不对称膜的20池平衡透析仪(Spectrum，Rancho Dominguez，CA)。Ia化合物(游离碱＝468.69)可如实验步骤B章节所示进行制备。
制剂的制备.制备三种不同的检测制剂，由单组分对照；含有药物或间甲酚、和SBE-CD的二元系统；或含有药物、间甲酚、和SBE-CD的三元系统构成。制剂是在检测确认平衡结合之前24小时在室温下以不同的比例和浓度制备的。通过首先以合适的浓度溶解SBE-CD，然后加入药物或间甲酚，并使其溶解在环糊精溶液中而制备制剂。
透析法.1mL配合或对照制剂负载在膜的供给侧。接受侧用1mL柠檬酸钠(pH 4.4)负载以维持跨室离子平衡。在多个时间点上，从平衡透析室的供给侧和接受侧取出50μL等分量，并使用HPLC分析。对于每个比例将每一侧配基不同时间的浓度(mM)资料作图。
HPLC法.将样品小心地负载在装备有Agilent Eclipse XDB-C8柱的HP 1100 HPLC上。总运转时间为10分钟。流动相由25％25mM乙酸铵和75％甲醇组成。使用271nm的吸光度或荧光检测进行检测。使用Turbochrome软件[Perkin Elmer\San Jose，CA]对峰进行积分。
对照实验.化学式Ia化合物和间甲酚的透析率进行跨500 MWCO膜单独测定。将不同浓度的间甲酚和化学式Ia化合物置于平衡透析仪的供给侧。选择相应配合实验的浓度以便与单组分系统中的药物或防腐剂浓度相匹配。
二元系统.这些实验是对药物或间甲酚与SBE-CD的结合进行定量。检测三个独立的混合物，它们由如下物质组成化学式Ia化合物与SBE-CD、间甲酚与SBE-CD、以及药物与间甲酚。SBE-CD与药物或防腐剂的摩尔比例为1∶1、2∶1、以及4∶1。
三元系统.进行几个实验来检测所有三种制剂成分对药物和防腐剂透析率的作用。其中，SBE-CD的浓度是固定的，而化学式Ia化合物和间甲酚的量/比例是变化的。
数据处理.原始数据被标准化以校正在供给和接受池侧的浓度变化。总量的校正百分比被转换为理论mM浓度。然后使用MicromathScientist软件将这些数据同时拟合为讨论章节中所给出的方程式。
B.制备化学式I和Ia的化合物通常，化学式I和Ia的化合物可通过如下方法来制备，这些方法包括化学领域中公知的方法，特别要考虑在此所包含的描述和在美国专利第6,222,038号和美国专利第6,255,320号中公开的内容。化学式I和Ia的化合物可通过多种不同的合成路线来制备。特别是，化学式Ia的化合物也可如已转让并由Pfizer，Inc.拥有的共同未决的美国临时申请第60/541,323号中所述进行制备。合成化学式Ia的化合物的某些方法，如在上述共同未决的临时申请中更为详尽的描述，通过下面的反应方案来进行说明。
下面的反应方案说明了化学式Ia化合物、化学式Ic化合物的柠檬酸一水合盐的一种可能的制备过程。
方案I 在方案I的步骤A中，化学式Via的化合物在醇系溶剂中的混合物在钯/碳催化剂上，在加热(典型地75-80℃)和加压(典型地50 psig氢)的条件下被氢化，上述醇系溶剂为例如甲醇、乙醇或正丁醇，但优选丙-2-醇，可选择地有水存在。本领域的技术人员应该理解其他催化剂也是适合的，如钯/碳、氢氧化钯/碳、铂/碳、钯/碳酸钙、或钯/氧化铝(AI2O3)。
一旦中间体化合物VII完全形成，典型地1小时后，化学式VIII的化合物，典型地分别以醇系溶剂的溶液，优选丙-2-醇(异丙醇，″IPA″)，加入到反应中，不用分离化学式VII的化合物，并且混合物可选地在加热(30-120℃)的条件下在氮气氛中搅拌。一旦形成足够的中间体化合物IXa，用氢取代氮气氛。然后反应可选地在加热(大约30-120℃)和加压(典型为50psig)的条件下搅拌直至发现完全形成化合物Ib(典型为18小时)。然后将反应混合物冷却(大约20-25℃)，并排出氢气。钯/碳催化剂通过过滤去除，得到的化合物Ib溶液直接进入步骤B中。
在反应方案I的步骤B中，化合物Ib的溶液，典型地在丙-2-醇和水的混合物中，通过加入甲苯然后蒸馏而进行浓缩。然后混合物再次通过蒸馏进行浓缩，如果需要在蒸馏过程中另外加入甲苯和水，直至从混合物中去除足够的异丙醇，获得适当的溶液体积(典型为每千克化合物Ib 2-4体积)。根据需要加入水和甲苯(典型为大约3.5体积水和大约5体积甲苯)。本领域的技术人员可理解的是可使用除甲苯之外的其他溶剂，如二氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸异丙酯或叔丁基甲基醚。通过添加氢氧化钠水溶液将pH调整至合适的点(大约11.5至13.5)，如果需要加入盐酸水溶液并搅拌。
一旦获得适当的pH，通过分离去除水相。然后含有产物的有机相通过蒸馏进行浓缩。然后加入丙-2-醇和水的混合物，该混合物再次通过蒸馏浓缩。如需要可重复加入水和丙-2-醇并随后通过蒸馏浓缩的步骤，直至从混合物中去除足够的甲苯(通过GC分析甲苯典型地小于3％w/w)，并获得适当的溶液体积(相对于化合物Ib大约4体积)，得到最终粒化浆体中的溶剂组合物，其中丙-2-醇典型地超过80％w/w，水小于20％w/w，甲苯小于3％w/w。
一旦去除了足够的甲苯，混合物被冷却直至出现结晶(典型为70-75℃)。然后得到的悬液进一步冷却(典型地至20-25℃)，在可选地进一步冷却至大约0-5℃并搅拌一段时间之后，粒化一段时间。然后通过过滤收集固体，用丙-2-醇冲洗滤饼，并在真空下在加热的条件下(典型为45-55℃)干燥，得到为结晶固体的化学式Ia的化合物。本领域的技术人员可理解的是可使用除丙-2-醇之外的其他溶剂，如甲醇、乙醇、正丙醇、乙腈、乙酸异丙酯、叔戊醇和4-甲基-2-戊酮。
如在反应方案的可选步骤BX中所描述的，并不是典型所需要的，化合物Ib可进一步纯化。化合物Ib悬浮在丙-2-醇中，将混合物回流加热得到溶液。然后在低于回流温度的高温下(大约70-75℃)加热混合物大约1小时，期间典型地出现结晶。得到的悬液在该温度维持大约1至2小时，然后冷却(至大约20-25℃)。在室温下搅拌一段时间(典型为1-18小时)后，通过过滤收集固体。用丙-2-醇冲洗滤饼，然后在真空下在加热的条件下(大约45-55℃)干燥，得到为结晶固体的纯化化合物Ib。本领域的技术人员可理解的是可使用除丙-2-醇外的其他溶剂，如甲醇、乙醇、正丙醇、乙腈、乙酸异丙酯、叔戊醇和4-甲基-2-戊酮。
在反应方案的步骤C中，化合物Ib(1摩尔当量)和无水柠檬酸(典型为1.1摩尔当量)在丙酮(典型为大约8-10体积)和水(典型为大约0.4体积)的混合物中混合，得到的溶液进行过滤。然后加入更多的丙酮(典型为大约2体积)彻底冲洗转移装置。向滤液中加入过滤的醚溶剂，如甲基叔丁基醚(叔丁基甲基醚，″MTBE″)或异丙醚(″IPE″)(典型为大约10体积)，可选地在较高的温度下(30-45℃)。一旦发生结晶，其可选地通过加入一些晶种而触发，将混合物粒化一段时间(典型为18小时)，典型在20-25℃下进行，但可选地在其中一段时间在更高的温度(30-45℃)下进行。然后通过过滤收集固体。用分别过滤的醚溶剂冲洗滤饼，然后在真空下，可选地没有空气或氮气被排出，在小于60℃的温度下(如果使用异丙醚则在室温下)干燥，从而得到为结晶固体的化合物Ic的柠檬酸一水合盐。然后产物可选地被磨碎或筛分。
在可选的步骤CX中，可通过将Ic在升高的温度下(大约35-50℃)溶解在丙酮(典型为7体积)和水(典型为0.3体积)的混合物中以提高化合物Ic的纯度。然后将混合物冷却(至大约20-359C)，并可选地进行过滤。然后向得到的混合物中加入过滤的醚溶剂，如叔丁基甲基醚或异丙醚，可选地在升高的温度下(大约30-40℃)进行。一旦发生结晶，其可选地通过添加一些晶种而触发，将混合物粒化一段时间(典型为18小时)，典型地在20-25℃下进行，但可选地在其中一段时间在更高的温度(30-45℃)下进行。然后通过过滤收集固体。用分别过滤的醚溶剂冲洗滤饼，然后在真空下，可选地没有空气或氮气排出，在小于60℃的温度下(如果使用异丙醚则在室温下)干燥，从而得到为结晶固体的化合物Ic的柠檬酸一水合盐。然后产物可选地被磨碎或筛分。
除柠檬酸盐以外，可使用其他药物可接受的盐类。例如，苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、乳酸盐、和盐酸盐或其原位等价物可通过向化合物Ia游离碱溶液中加入等摩尔量适当的酸而制备。
C.评价用于药物组合物的抗菌防腐剂表III总结了被评价用于制剂中的抗菌防腐剂。每种抗菌防腐剂均以目前在市售产品中所使用的最高浓度进行检测。抗菌防腐剂均购自普通的化学品供应渠道。
表III筛选的抗菌防腐剂

**从0.5-0.1％以0.1％的增加量滴定苯基乙醇防腐制剂的制备。如果溶解度允许，以5％和10％(重量/体积)SBE-CD制备制剂。在正常制剂值(pH 4.4)以外的pH值具有最佳活性的抗菌防腐剂，使用1N HCl或1N NaOH滴定至3.5或5.0。制备含有10mgA/mL化学式Ia化合物柠檬酸盐的10％或5％(重量/体积)SBE-CD的母液。根据重量分别向制剂中加入防腐剂。
抗菌效力试验。如下进行混合USP<24>/Ph.Eur.2000抗菌效力试验(AET)根据USP/Ph.Eur.法定的要求，20mL药品分别用0.1-0.2mL细菌或真菌培养物接种。检测样品中生物体的终浓度在1×105和1×106cfu/mL之间。以开始的6小时、24小时、7天、14天和28天为时间间隔，将1mL接种的产物转移至9mL回收稀释剂中，验证并确认抗菌防腐剂的中和作用。然后将1ml稀释的样品转移至无菌陪替氏培养皿中，与15-20mL琼脂肉汤培养基混合来培养生物体。然后将培养板培养3至5天，期间进行集落计数。然后根据初始样品的稀释度计算初始的生物体污染。数值以“对数减少量”报导。在AET试验中使用的生物体列举于表IV中。
表IV在综合(USP/Ph.Eur.)抗菌效力试验中检测的生物体

通常，USP检测的要求不如Ph.Eur要求严格，典型地是要求具有快速的杀菌活性。显示在表III中Ph.Eur.的要求，根据微生物减少速率采取“标准A”或“标准B”规范，标准A需要较快的杀菌速度。为了满足组合的混合试验，初始微生物的接种数需要减少表V中列举的数量。
表VUSP/Ph.Eur.对AET(胃肠外水溶液)的要求(分别为USP 24和Ph.Eur.2000)


稳定性测定。在多种加速稳定性条件下评价潜在的先导制剂(potential lead formulation)以评估化学式Ia化合物的效力和纯度、防腐剂的含量和SBE-CD的含量。例如，在一个加速稳定性研究中，潜在的先导制剂置于稳定性烤箱(stability oven)上以测量短期热稳定性。将样品管(20mL)置于70℃、50℃、30℃、和5℃温度交变试验箱中，以1、3、6、和12-周的时间间隔，分析化学式Ia化合物的效力和纯度、抗菌防腐剂和SBE-CD含量。用以测量化学式Ia化合物、以及抗菌防腐剂和SBE-CD含量的纯度和效力化验，通过使用确证HPLC法进行。SBE-CD使用GTP 5984进行化验。
D.注射部位耐受性。
化学式Ia化合物的制剂进行注射部位耐受性(此后称为“IST”)的评价。通常，不含有SBE-CD的制剂一般难以耐受。由10mgA/mL化学式Ia化合物、10％过量间甲酚(0.33％w/v)和大约6.8％至7.6％SBE-CD组成的制剂进行IST评价。特别是含有10mgA/mL化学式Ia化合物、61至72mg/mL SBE-CD和3.2至4.2mg/mL间甲酚的制剂进行注射部位耐受性的检测，且所有都很好地耐受。
在由比格犬和杂种狗组成的4只狗的组中进行制剂检测。在连续4天的每天中，这些狗每天皮下注射两次，左肩仅注射0.1mL/kg的载体作为对照，在右肩注射活性制剂(10mgA/mL化学式Ia的化合物，1mg/kg)。每天观察这些狗注射部位的反应证据，并对下面每个参数进行0-4级的评分(见表VI)注射中的疼痛、红斑、组织变厚、触痛和水肿。每天观察这些狗至第5天(最后一次用药后24小时)。
表VI注射部位耐受性评分

实验实验1为可注射的化学式Ia化合物选择抗菌防腐剂。
研究A(大规模抗菌防腐剂筛选)研究了几种不同的抗菌防腐剂与化学式Ia化合物和SBE-CD联合使用的效力。文献指出满足USP和Ph.Eur.标准A或B要求的抗菌防腐剂是乙醇、丙二醇、苯甲酸、乙基汞硫代水杨酸钠、间甲酚、(Lucchini，J.J.；Corre，J.；和Cremieux，A.“Antibacterial activity of phenoliccompounds and aromatic alcohols(酚类化合物和芳族醇的抗菌活性)”Res.Microbiol.141，499-510，(1990))以及氯代丁醇/苯基乙醇的组合。
表VII显示了筛选多种抗菌防腐剂或其组合的结果。
表VII.抗菌效力试验筛选抗菌防腐剂系统


√表示满足USP和/或Ph.Eur.标准含有这些抗菌防腐剂的制剂进一步评价物理和化学稳定性以及注射部位耐受性。(见表VIII)。共溶剂抗菌防腐的方法，乙醇和丙二醇，不能满足可接受的IST。而且苯甲酸制剂IST的结果也很差。
表VIII研究A的结果

*所有制剂都含有10mgA/mL化学式Ia化合物√表示满足USP和/或Ph.Eur.标准。
研究B(满足Ph.Eur.标准B的抗菌防腐剂筛选)所有满足Ph.Eur.标准B的抗菌防腐剂进一步筛选注射部位耐受性和稳定性。在表VII和表IX中鉴定的满足标准B的先导物是乙基汞硫代水杨酸钠、间甲酚和苯甲酸。这些制剂进行稳定性和IST的评价(表VII)。
研究的结果表明，乙基汞硫代水杨酸钠的稳定性对制剂来说在商业上是不合乎要求的。70℃储存1周后，仅有30％的乙基汞硫代水杨酸钠保留在制剂中，6周后观察到全部消失。(Tan，M.，Parkin，L.E.“Route of decomposition of thimerosal(乙基汞硫代水杨酸钠的分解途径)”Int.J.Pharm.195 No.1-2，23-34，2000.)。
苯甲酸显示经过70℃储存12周后没有检测到减少，对于制剂来说足够稳定。尽管苯甲酸的稳定性是可接受的，但中度至严重的注射疼痛使其不被进一步考虑。
在另一方面，含有间甲酚的制剂显示了优良的稳定性和注射部位耐受性。因此，间甲酚由于其优良的注射部位耐受性、以及极好地满足Ph.Eur.标准A对防腐效力的要求，被鉴定为优选的抗菌防腐剂。由于这些良好的性能特征，制剂可对SBE-CD浓度进行优化，得到具有很高限度的溶解度、强力的抗菌防腐效力、以及可接受的注射部位耐受性的制剂。
在含有3mg/mL间甲酚、100mg/mL SBE-CD和10mgA/mL化学式Ia化合物的制剂中，间甲酚和化学式Ia化合物的稳定性在表IX中显示。证明化学式Ia化合物和间甲酚均具有良好的稳定性。化学式Ia化合物在70℃12周后有3％的损失(与5℃1周相比)，而间甲酚的效力降低了2％。
Table IX间甲酚和化学式Ia化合物的稳定性

优选实施方式A.一种药物组合物，包括治疗有效量的活性药物成分、β-环糊精、药物可接受的防腐剂、药物可接受的载体、以及可选择的药物可接受的赋形剂，其中所述的防腐剂证明具有药物可接受的抗菌防腐效力。
B.根据优选实施方式A的药物组合物，其中所述的β-环糊精是2-羟丙基-β-环糊精或磺丁醚-β-环糊精。
C.根据优选实施方式B的药物组合物，其中所述的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚、或间甲酚、或其组合。
D.根据优选实施方式B或C的药物组合物，其中所述的防腐剂与环糊精的结合值小于活性药物成分与环糊精的结合值。
E.根据优选实施方式D的药物组合物，其中所述的防腐剂的浓度为大约0.1mg/mL至大约600mg/mL。
F.根据优选实施方式E的药物组合物，其中所述的防腐剂是间甲酚，防腐剂的浓度为大约0.1mg/mL至大约20mg/mL。
G.根据优选实施方式F的药物组合物，其中大约1mg/mL至大约5mg/mL的间甲酚在环糊精中是未螯合的。
H.根据优选实施方式G的药物组合物，其中大约2.5mg/mL的防腐剂在环糊精中是未螯合的。
I.根据优选实施方式D的药物组合物，其中所述的活性药物成分与环糊精的结合值在500M-1和10,000M-1之间。
J.根据优选实施方式I的药物组合物，其中所述的活性药物成分与环糊精的结合值在800M-1和3,000M-1之间。
K.根据优选实施方式D的药物组合物，其中所述的活性药物成分与环糊精的结合常数大于或等于防腐剂与环糊精的结合常数的两倍。
L.根据优选实施方式K的药物组合物，其中所述的结合常数大于或等于5倍。
M.根据优选实施方式L的药物组合物，其中所述的结合常数大于或等于10倍。
N.根据优选实施方式D的药物组合物，其对细菌具有抗菌作用，使细菌的浓度在6小时后下降2个或更多个对数数量级，24小时后下降3个或更多个对数数量级，28天后没有细菌恢复。
O.根据优选实施方式N的药物组合物，其中所述的细菌是大肠杆菌(细菌，革兰氏阴性)(ATCC8739)、绿脓杆菌(细菌，革兰氏阴性)(ATCC9027)以及金黄色葡萄球菌(细菌，革兰氏阳性)(ATCC6538)。
P.根据优选实施方式O的药物组合物，其对真菌或霉菌具有抗菌效果，使真菌或霉菌的浓度在7天后下降2个或更多个对数数量级，14天后下降1个对数数量级，14天至大约28天后真菌或霉菌没有增加。
Q.根据优选实施方式P的药物组合物，其中所述的真菌是白色念珠菌(真菌)(ATCC 10231)。
R.根据优选实施方式P的药物组合物，其中所述的霉菌是黑曲霉(霉菌)(ATCC 16404)。
S.根据优选实施方式D的药物组合物，其中所述的抗菌效力满足Ph.Eur.标准A和B以及USP AET标准。
T.一种药物组合物，包括化学式I化合物， 药物可接受的β-环糊精、药物可接受的防腐剂、药物可接受的载体和可选择的药物可接受的赋形剂，其中R2选自甲基、乙基、异丙基、仲丁基和叔丁基。
U.根据优选实施方式T的药物组合物，其中所述的β-环糊精是2-羟丙基-β-环糊精或磺丁醚-β-环糊精。
V.根据优选实施方式U的药物组合物，其中所述的药物可接受的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚或间甲酚、或其组合。
W.根据优选实施方式V的药物组合物，其中所述的防腐剂是间甲酚。
X.根据优选实施方式W的药物组合物，其pH范围是大约4至大约5。
Y.根据优选实施方式W或X的药物组合物，其中大约1mg/mL至大约5mg/mL的防腐剂在环糊精中是未螯合的。
Z.根据优选实施方式Y的药物组合物，其中化学式I化合物或其药物可接受的盐，其量为大约0.1mg/mL至大约100mg/mL，β-环糊精的量为大约20mg/mL至大约200mg/mL，防腐剂是间甲酚。
A1.根据优选实施方式Z的药物组合物，其中β-环糊精的量为55mg/mL至100mg/mL，间甲酚的量为大约2.5mg/mL至3.5mg/mL。
B1.根据优选实施方式T、U、W或X的药物组合物，其中所述的化学式I化合物是化学式Ia化合物， 或其药物可接受的盐。
C1.根据优选实施方式B1的药物组合物，其中化学式Ia化合物或其药物可接受的盐，其量为大约0.1mg/mL至大约100mg/mL，β-环糊精的量为大约20mg/mL至大约200mg/mL，防腐剂是间甲酚，其量为大约1mg/mL至大约5mg/mL。
D1.根据优选实施方式C1的药物组合物，其中β-环糊精的量为大约55mg/mL至大约100mg/mL，防腐剂是间甲酚，其量为大约2.5mg/mL至大约3.5mg/mL。
E1.根据优选实施方式D1的药物组合物，其中所述的β-环糊精是磺丁醚-β-环糊精。
F1.一种药物组合物，包括化学式Ia化合物，
或其药物可接受的盐、药物可接受的载体和可选择的药物可接受的赋形剂，其中所述的化学式Ia化合物是10mgA/mL，磺丁醚-β-环糊精的量为大约63mg/mL，间甲酚的量为大约3.3mg/mL。
G1.根据优选实施方式F1的药物组合物，其中所述的化学式Ia化合物的药物可接受的盐是柠檬酸盐。
H1.一种治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复的方法，包括经胃肠外将药物组合物水溶液注射进哺乳动物中，该组合物包括优选实施方式T、U、V、W、X、F1或G1的药物组合物、其量足以改善注射部位的注射耐受性的β-环糊精。
I1.一种治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复的方法，包括经胃肠外将药物组合物水溶液注射进哺乳动物中，该组合物包括优选实施方式F1的药物组合物。
J1.根据优选实施方式I1的方法，其中所述的药物可接受的盐是柠檬酸盐。
K1.根据优选实施方式I1或J1的方法，其中给药是经皮下给药。
L1.一种在治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复的过程中改善注射部位耐受性的方法，包括经胃肠外将根据优选实施方式T、U、V、W、X、F1或G1的药物组合物的药物可接受的溶液注射进哺乳动物中。
M1.一种在治疗哺乳动物呕吐或改善麻醉恢复过程中改善注射部位耐受性的方法，包括经胃肠外将根据优选实施方式F1的药物组合物的药物可接受的溶液注射进哺乳动物中。
N1.根据优选实施方式M1的方法，其中所述的药物可接受的盐是柠檬酸盐。
O1.一种开发防腐的API组合物的方法，该组合物包括治疗有效量的API、β-环糊精和药物可接受的防腐剂。
P1.根据优选实施方式O1的方法，其中所述的防腐剂与环糊精的结合值小于API与环糊精的结合值。
Q1.根据优选实施方式P1的方法，其中所述的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、乙二醇、苯酚或间甲酚、或其组合。
R1.根据优选实施方式P1或Q1的方法，其中API与环糊精的结合值大于50M-1。
S1.根据优选实施方式R1的方法，其中API与环糊精的结合值在500与10,000M-1之间。
T1.根据优选实施方式S1的方法，其中API与环糊精的结合值在800与3,000M-1之间。
U1.根据优选实施方式T1的方法，其中抗菌效力试验(AET)要求满足欧洲药典标准A和B以及USPAET标准。
权利要求
1.一种药物组合物，包括治疗有效量的活性药物成分、β-环糊精、药物可接受的防腐剂、药物可接受的载体、以及可选择的药物可接受的赋形剂，其中所述的防腐剂证明具有药物可接受的抗菌防腐效力。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述的活性药物成分是化学式I的化合物 或其药物可接受的盐，其中R2选自甲基、乙基、异丙基、仲丁基和叔丁基。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述的β-环糊精是2-羟丙基-β-环糊精或磺丁醚-β-环糊精。
4.根据前面任何一项权利要求所述的药物组合物，其中所述的防腐剂选自乙基汞硫代水杨酸钠、丙二醇、苯酚、或间甲酚、或其组合。
5.根据前面任何一项权利要求所述的药物组合物，其中防腐剂与环糊精的结合值小于活性药物成分与环糊精的结合值。
6.根据前面任何一项权利要求所述的药物组合物，其中大约1mg/mL至大约5mg/mL防腐剂在环糊精中是未螯合的。
7.根据前面任何一项权利要求所述的药物组合物，其中活性药物成分与环糊精的结合值在500M-1与10,000M-1之间。
8.根据前面任何一项权利要求所述的药物组合物作为药物的应用。
9.根据权利要求2至7中任何一项所述的组合物在制备治疗对神经激肽受体拮抗剂有适应症的疾病的药物中的应用。
10. 一种治疗哺乳动物中对神经激肽受体拮抗剂有适应症的疾病的方法，包括对所述的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求2至7中任何一项所述的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及含有治疗有效量的活性药物成分(“API”)、药物可接受的环糊精、以及药物可接受的防腐剂的药物组合物。本发明还涉及含有化学式(I)化合物、药物可接受的环糊精和防腐剂的药物组合物，其中R
文档编号A61K47/48GK101090735SQ200580003284
公开日2007年12月19日 申请日期2005年1月17日 优先权日2004年1月30日
发明者R·C·阿达米, F·戴维, J·A·伍德 申请人:辉瑞产品有限公司