专利名称：治疗肿瘤和转移性疾病的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本申请涉及使用抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或抗α4整联蛋白配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白治疗患有牵涉α4整联蛋白表达的恶性肿瘤和/或转移性疾病的方法。还提供药物制剂用于抑制肿瘤生长和/或转移性进展和/或转移灶发展的用途。
背景技术：
已知良性的和恶性的肿瘤都是以在正常细胞中未发现的模式表达蛋白质。肿瘤或恶性细胞表达的蛋白质模式可以反映疾病的进展(即，初期阶段或转移性疾病)。随着恶性肿瘤进展，细胞倾向于越来越不同于它们来源的组织。随着癌症进展变得更加未分化的，无论用于确定癌症进展的阶段格式(staging schema)如何，细胞变得更可能转移和/或更难通过常规疗法控制。癌症治疗可包括以下治疗的一种或多种化疗、手术、放疗、高热、免疫治疗、骨髓移植、激素治疗、和生物治疗。
整联蛋白为涉及细胞粘合、免疫细胞迁移和活化的细胞表面糖蛋白家族。α-4整联蛋白由除嗜中性粒细胞之外的所有循环白细胞表达，并且与β-1(β1)或β-7(β7)整联蛋白亚单位结合形成杂二聚型受体。α-4β-1(α4β1)整联蛋白和α-4β-7(α4β7)整联蛋白两者都在白细胞穿过血管内皮的迁移(Springer等人，Cell，1994，76301-14；Butcher等人，Science，1996，27260-6)和促进实质内的细胞活化和存活(Damle等人，J.Immunol.，1993，1512368-79；Koopman等人，J.Immunol.，1994，1523760-7；Leussink等人，Acta Neuropathol.，2002，103131-136)中起作用。α4β1整联蛋白在淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、和嗜酸性粒细胞上进行结构表达。
α-4β-1(又名极迟抗原-4、VLA-4)结合于血管细胞粘着分子-1(VCAM-1)(Lobb等人，J.Clin.Invest.，1994，941722-8)，其由慢性炎症的许多部位的血管内皮表达(Bevilacqua等人，1993，Annu.Rev.Immunol.，11767-804；Postigo等人，1993，Res.Immunol.，144723-35)。α4β1整联蛋白具有其它的配体，包括粘连蛋白和其它细胞外基质(ECM)组分。
α-4β-7整联蛋白与粘膜地址素细胞粘着分子(MAdCAM-1)相互作用，并且介导淋巴细胞到内脏的归巢(Farstad等人，1997，Am.J.Pathol.，150187-99；Issekutz，1991，J.Immunol.1474178-84)。因此，需要抑制癌生长和转移的新的药物、组合物、和使用这些药物和组合物的方法，其可单独使用或与其它药物组合使用，用于治疗癌症，特别是晚期肿瘤，其典型地涉及转移。
发明简述本发明提供用于治疗肿瘤和/或转移性疾病和/或抑制肿瘤生长的新的方法、组合物、和联合疗法。优选所述方法、组合物和联合疗法涉及治疗表达α4的癌症如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌，以及治疗任何表达α4的原发肿瘤的转移性疾病。
因此，本发明的一个方面提供抑制肿瘤生长和/或转移或转移性扩散的方法，所述方法包括对有需要的主体给药抑制肿瘤生长、和/或转移灶和/或转移性扩散的足够量的抗-α4免疫球蛋白或抗α4整联蛋白配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。优选抗-α抗体结合于α4β1整联蛋白和/或α4β7整联蛋白，更优选免疫球蛋白为单克隆抗体(如，那他珠他单抗(natalizumab))。
本发明的另一方面为治疗的肿瘤为实体瘤或软组织瘤。考虑用所示方法、联合疗法、和抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或抗α4整联蛋白配体的免疫球蛋白治疗的实质组织瘤包括但不限于黑素瘤(如，皮肤黑素瘤、转移性黑素瘤、或眼内黑素瘤)、前列腺癌、和其它原发肿瘤的转移灶。
本发明的另一方面考虑了待治疗的肿瘤为软组织瘤如骨瘤、白血病(如，慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母细胞性白血病、急性髓性白血病、成熟B细胞急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、幼淋巴细胞性白血病、或毛细胞白血病)、或淋巴瘤(如，非何杰金氏淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、或何杰金氏病)。
本发明的另一个实施方案考虑了对主体给药约1mg/kg主体体重到约100mg/kg主体体重(及该范围内的任何整数值)的量的抗-α4整联蛋白免疫球蛋白。更优选地，将抗-α4整联蛋白免疫球蛋白以约1mg/kg主体体重到约10mg/kg主体体重的量对主体给药。优选地，免疫球蛋白为那他珠他单抗。
在本发明的另一个方面中，免疫球蛋白可以单独给药或在多模态形式中与其它癌症治疗模式组合使用。例如，如果肿瘤为黑素瘤，则可以在已经通过手术除去黑素瘤之后对主体给药那他珠他单抗。如果肿瘤为黑素瘤，则上述方法可以另外结合癌症治疗模式，如隔离肢体灌注、区域性化疗输注、系统性化疗、或用第二抗体(如，抗-GM2神经节苷脂抗体、抗-GD2神经节苷脂抗体、抗-GD3神经节苷脂抗体)、或抗血清的免疫治疗。化疗剂可为以下的一种或多种达卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、牛磺莫司汀、福莫司汀、司莫司汀、顺铂、卡铂、长春新碱、长春碱、长春地辛、紫杉醇、二溴卫矛醇、地托比星(detorubicin)、吡曲克辛、和干扰素(如，干扰素-α2)。
本发明的另一个方面考虑了治疗向脑、肺、肝、或骨转移的方法。
本发明的又一个方面考虑了使用抗α4整联蛋白或其配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白与其它淋巴瘤治疗模式组合用于治疗淋巴瘤的方法。
本发明的另一个方面考虑了其中将抗α4整联蛋白或其配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白与本领域已知的其它肿瘤治疗模式组合的联合疗法。本发明的另一个方面提供药物制剂在对有需要的主体给药时抑制肿瘤生长、和/或抑制转移、和/或抑制或延缓疾病进展的应用，药物制剂包括抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或抗α4整联蛋白配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。
本发明的另一个方面考虑了药物制剂在对有需要的主体给药时抑制肿瘤生长和/或转移性进展和/或转移灶发展的应用，药物制剂包括抗-α4整联蛋白免疫球蛋白。优选地，主体另外用化疗、免疫治疗、手术、放疗、高热、或改善癌症治疗的副作用的药物进行治疗。优选地，肿瘤为黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。
图1表示在形成肿瘤之后给药对照、紫杉醇、IgG4或那他珠他单抗时，MOLT-4异种移植的原发肿瘤生长图。将SCID小鼠用盐水(N＝20)、那他珠他单抗(N＝20)、IgG4(N＝20)、或紫杉醇(N＝20)处理。盐水、那他珠他单抗和IgG4在第-7、-4、0、3、7、10、14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天给药。在第0天将MOLT-4白血病异种移植物皮下植入。紫杉醇在第1-5天静脉给药。每周两次测量肿瘤。
发明的详细说明1.定义和缩写根据本详细说明，使用以下缩写和定义。需要指出的是，如本文中使用的，除非另外说明，单数形式“一(a)”“一个(an)”和“该(the)”包括复数。因此，例如，“抗体”包括多个这种抗体，“剂量”包括本领域技术人员已知的一个或多个剂量及其等价物，等等。
提供的在本文所讨论的公开仅用于它们在本申请提交日之前的公开。不应将本文中的任何引用看作是本发明根据在先发明而无权先于这种公开的承认。另外，提供的
公开日期可能不同于实际的出版日期，其可能需要独立确认。
1.1定义如本文中使用的，术语“主体”或“患者”是指包括哺乳动物。哺乳动物可为犬科动物、猫科动物、灵长类动物、牛类、绵羊类、猪类、骆驼类、山羊类、啮齿动物、或马类。优选地，哺乳动物为人。
“那他珠他单抗”或“Tysabri”是指如美国专利5,840,299和6,033,665中所述的抗VLA-4的人源化抗体，所述专利被全文并入本文作为参考。本文还考虑了其它VLA-4特异性抗体。这种抗-VLA-4抗体和免疫球蛋白包括但不限于在美国专利6,602,503和6,551,593、公开的美国专利申请20020197233(Relton等人)中所述的那些免疫球蛋白。抗体可以通过在这些专利和申请中公开的方法，通过哺乳动物细胞表达、或通过转基因动物表达系统(如，山羊)制备。
如本文中使用的，术语“效力”是指具体治疗方案的有效性。效力可以根据各特征(但不限于这些特征)如肿瘤生长的抑制、肿瘤质量的降低、通过例如放射性成像评价的转移灶的减少、肿瘤生长减慢、不存在可检测到的肿瘤相关抗原等进行测量。评价肿瘤进展的另外的方法在本文中讨论，并且为治疗医生和诊断医生已知的。
术语“可药用载体”和“可药用赋形剂”是指用于形成制剂的一部分并且只起到作为载体的作用(即本身不具有生物活性)的任何化合物。可药用载体或赋形剂通常是安全的、无毒的，且既没有生物学方面又没有其它方面的不希望的作用。如本文中使用的，可药用载体或赋形剂包括一种和一种以上的所述载体或赋形剂。
术语“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”等在本文中通常是指得到所需的药理学和生理学效果。更具体地，用于治疗患有肿瘤和转移性疾病的主体的本文所述的试剂通常以治疗有效量提供，以实现以下的一项或多项效果肿瘤生长抑制、肿瘤质量降低、转移灶消失、治疗开始后新的转移灶的发展得到抑制、或肿瘤减少，从而没有可检测到的疾病(通过如放射性成像、生物流体分析、细胞遗传学、荧光原位杂交、免疫细胞化学、集落试验、多参数流式细胞术、或聚合酶链式反应评价)。如本文中使用的，术语“治疗”包括对哺乳动物特别是人的疾病的任何治疗。
“治疗有效量”是指当对哺乳动物给药时足以有效对抗肿瘤的本文公开的药物、试剂、化合物、组合物、或试剂组合的量。
术语“肿瘤”包括良性和恶性生长或癌症。因此，除非另外说明，术语“癌症”可以包括良性和恶性生长。优选地，肿瘤为恶性的。肿瘤可为实体组织瘤如黑素瘤，或软组织瘤如淋巴瘤、白血病、或骨癌。
术语“原发肿瘤”是指原发赘生物而不是位于患者体内其它组织或器官中的转移灶。术语“转移性疾病”、“转移灶”、和“转移性灶”是指已经迁移到相对于原发肿瘤较远位置的一组细胞。
1.2缩写以下缩写通常用于相关术语，并且是本领域中已知的。
α4β1α-4β-1α4β7α-4β-7Ab抗体ABDIC 多柔比星、博来霉素、达卡巴嗪、洛莫司汀、和泼尼松ALL 急性淋巴细胞性白血病
AML 急性髓性白血病BMT 骨髓移植CAF 环磷酰胺、阿霉素、和5-氟尿嘧啶CAMP 洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和泼尼松CAVP 洛莫司汀、美法仑、依托泊苷、和泼尼松CBVD 洛莫司汀、博来霉素、长春碱、地塞米松CCNU 洛莫司汀CEFF(B) 环磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、泼尼松、和博来霉素CEM 洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤CEP 洛莫司汀、依托泊苷、和泼尼莫司汀CEVD 洛莫司汀、依托泊苷、长春地辛、和地塞米松CHOP 环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、和泼尼松CLL 慢性淋巴细胞性白血病CMF 环磷酰胺、甲氨蝶呤、和5-氟尿嘧啶CML 慢性髓性白血病CNS 中枢神经系统CTCL 皮肤T细胞淋巴瘤DHAP 地塞米松、高剂量阿糖胞苷、和顺铂ECM 细胞外基质EPOCH依托泊苷、长春新碱、多柔比星、环磷酰胺、和泼尼松ESHAP依托泊苷、甲泼尼龙、高剂量(HD)阿糖胞苷、和顺铂EVA 依托泊苷、长春碱、和多柔比星EVAP 依托泊苷、长春碱、阿糖胞苷、和顺铂GAP-BOP 环磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博来霉素、长春新碱、和泼尼松HD 高剂量3H-FUDR 3H-氟尿苷IFN 干扰素IFN-α2 干扰素-α2IFNβ-1a 干扰素β-1aIHC 免疫组织化学
i.m. 肌内IMVP-16 异环磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷i.p. 腹膜内i.v. 血管内m-BACOD 甲氨蝶呤、博来霉素、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、地塞米松、和亚叶酸MAb 单克隆抗体MACOP-B 甲氨蝶呤、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、泼尼松、博来霉素、和亚叶酸MadCAM-1 粘膜地址素细胞粘着分子1(又名CD106)MeCCNU司莫司汀或甲基CCNUMF蕈样真菌病MIME 甲基-gag、异环磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷MINE 米托胍腙(mitoquazone)、异环磷酰胺、长春瑞滨、和依托泊苷MOPLACE 环磷酰胺、依托泊苷、泼尼松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、和长春新碱MOPP 氮芥、长春新碱、丙卡巴肼、和泼尼松MS多发性硬化MTX 甲氨蝶呤MTX-CHOP 甲氨蝶呤和CHOPNAT 那他珠他单抗(Tysabri)PBMC 周围血液单核细胞PCVP 长春碱、丙卡巴肼、环磷酰胺、和泼尼松p.o. 口服给药(经口)ProMACE-MOPP 具有标准MOPP的泼尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、亚叶酸s.c. 皮下SDS-PAGE 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳SCID 重度联合免疫缺损TNM 肿瘤、结点、和转移灶为American Joint Commission onCancer的阶段分类
VABCD 长春碱、多柔比星、达卡巴嗪、洛莫司汀、和博来霉素VCAM-1 血管细胞粘着分子1(又名CD106和INCAM-110)VLA-4 极迟抗原4(又名α-4β-1、α4β1整联蛋白、VLA-4a、和CD49d)2.疾病在本发明的一个方面中，本文公开的方法和组合物可用于抑制或延缓恶性肿瘤的进展。这些恶性肿瘤可为实体组织瘤或软组织瘤。软组织瘤包括骨癌、淋巴瘤、和白血病。本发明的另一个方面为所述方法和组合物抑制或预防转移灶或转移性进展的应用。
因此，本发明的一方面为用免疫球蛋白治疗肿瘤或转移性疾病。这种免疫球蛋白可以靶向α4并优选α4β1整联蛋白和/或α4β7整联蛋白。或者，免疫球蛋白可以靶向α4的配体(如VCAM-1、MadCAM-1)。这些免疫球蛋白可单独使用、彼此组合使用、与其它癌症治疗模式组合使用，其它癌症治疗模式例如但不限于化疗、手术、放疗、高热、免疫治疗、激素治疗、生物学治疗(如，引起细胞破坏的免疫效应物机理、细胞因子、免疫治疗、干扰素、白细胞介素-2、癌症疫苗疗法、和过继疗法)、和用于改善这种癌症治疗模式的不良副作用的药物。
2.1癌症治疗术语癌症包含由许多亚类组成的各个器官的各种癌症的恶性肿瘤的集合。典型地，在癌症诊断时，“癌症”实际上包括具有不同的遗传学、生物化学、免疫学、和生物学特征的细胞的多个亚群体。
通过本发明的组合物和方法治疗的癌症类型为表达α4整联蛋白(即，α4β1和/或α4β7)或其配体(如，VCAM-1和/或MadCAM-1)的那些。优选的癌症包括但不限于黑素瘤(如，皮肤黑素瘤、转移性黑素瘤、和眼内黑素瘤)、前列腺癌、淋巴瘤(如，皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤、和原发性中枢神经系统淋巴瘤)、白血病(如，前B细胞急性淋巴母细胞性白血病、慢性和急性淋巴细胞性白血病、慢性和急性髓性白血病、成年急性淋巴母细胞性白血病、成熟B细胞急性淋巴母细胞性白血病、幼淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、和T细胞慢性淋巴细胞性白血病)、和在细胞表面上表达这些蛋白质的转移性瘤。需要指出的是，虽然蕈样真菌病(MF)、Sézary综合症、皮肤的网状细胞肉瘤和几种其它的皮肤淋巴细胞性恶液质曾经被认为是单独的病况，但是它们现在被认为是皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的不同临床表现，因此包括在该术语中。参见Lynn D.Wilson等人，″Cutaneous T-CellLymphomas，″在CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2220-2232(Vincent T.DeVita，Jr.等人，编者，第5版，1997)；Bank等人，1999，J.Cutan.Pathol.，26(2)65-71。
2.2转移性疾病一旦患者被诊断为患有肿瘤，第一个问题是肿瘤是否进展并扩散到区域性淋巴结和远处器官。最后，大多数癌症死亡源于对常规的癌症疗法具有耐受性的转移灶。转移灶可以位于不同的器官内和同一器官的不同区域内，使得通过手术、辐射、药物、和/或生物治疗几乎不可能完全根除。
还考虑了使用本文的方法、联合疗法、和组合物的治疗用于转移性癌症的治疗。癌症通常只在原发组织的一个位置中开始生长。随着癌症进展，癌症可转移到患者体内的远处位置。例如，在前列腺中开始的癌症可能转移到肺。转移性疾病常见的和本文考虑的其它位置包括转移性癌症移向脑、肺、肝、和骨。已经发现，几种整联蛋白亚单位(即，α2、α4、和β3)在转移灶中比在正常的前列腺组织和正常的黑素细胞中的表达增加。Hartstein等人，1997，Ophthal.Plast.Reconstr.Surg.，13(4)227-38。
在所有肿瘤中转移灶的形成有必需的步骤。这些步骤包括以下(1)在肿瘤性转化之后，由肿瘤所处的器官/组织环境支持的肿瘤性细胞的进行性增生。
(2)肿瘤的新血管生成(Neovascularization)或血管生成，以进一步生长使直径超过1到2mm。
(3)粘着分子的表达的负调节，其中细胞具有增加的运动性或从原发性病灶脱离的能力。
(4)单一肿瘤细胞或细胞聚集物的分离和栓化(embolization)，这些细胞的大多数被迅速地破坏。
(5)一旦肿瘤细胞经受住分离和栓化步骤而存活，它们必须在血管内腔内继续增殖。然后细胞继续通过类似于在侵入过程中起作用的机制溢出进入器官实质中。
(6)具有适当的细胞表面受体的肿瘤细胞可以对旁分泌生长因子作出反应，从而在器官实质中增殖。
(7)肿瘤细胞逃避宿主的防御(特异性免疫反应和非特异性免疫反应)。
(8)为了使转移灶增殖超过直径1到2mm，转移灶必须形成血管网络。
因此，如果原发肿瘤有充分的时间进行这些步骤，其可在原发肿瘤位置或远离原发肿瘤的位置形成转移灶。本文公开的试剂、方法、和联合疗法抑制或预防上述转移性过程中的一个或多个步骤。对于肿瘤转移的机理和病理学的附加细节，参见Isaiah J.Fidler，″MolecularBiology of CancerInvasion and Metastasis，″，CANCERPRINCIPLES& PRACTICE OF ONCOLOGY 135-152(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
因此，本发明的一个方面提供使用抗α4整联蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的方法和包括抗α4整联蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的组合物。优选的抗-α4整联蛋白免疫球蛋白为抗-VLA-4抗体如那他珠他单抗。这些免疫球蛋白可单独使用或与预防转移灶或抑制转移灶进展的其它药物或癌症治疗模式组合使用。因此，所述组合物和方法可用于治疗表达α4整联蛋白或α4整联蛋白的配体的任何原发肿瘤的任何转移灶。
3.免疫球蛋白疗法考虑了用于治疗上述癌症的免疫球蛋白包括抑制α4β1和/或α4β7结合于其同源配体如VCAM-1或MAdCAM-1的抗-α4整联蛋白抗体。还考虑了对抗该配体的免疫球蛋白。这些免疫球蛋白可为抗体(即，单克隆抗体、灵长动物化(primatized)抗体、人源化抗体、或人抗体、以及嵌合抗体、和双特异性抗体)。免疫球蛋白也可为抗体的免疫原片段(如，Fab、scFv、Fab′、F(ab′)2、Fab″、Fabc、或重组合成的片段)或重组产生的免疫球蛋白。优选的抗-α4抗体为那他珠他单抗。然而，还考虑了其它抗-α4整联蛋白免疫球蛋白，包括可以区分α4β1和α4β7的免疫球蛋白。如果患者为人，则优选的免疫球蛋白为单克隆抗体，更优选的免疫球蛋白为人源化或灵长动物化抗体。
这些抗体可单独使用或与其它抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或对抗α4整联蛋白配体的免疫球蛋白组合使用。本发明的另一个方面考虑了抗-α4抗体以联合疗法的形式与其它常规的癌症治疗模式组合的应用。
4.联合疗法对于癌症，现有许多治疗。用于治疗癌症的具体的癌症治疗或疗法组合在很大程度上取决于癌症的类型、其阶段、患者(如，体重、性别、年龄、健康状态、先前的癌症等)、和患者所处的治疗时期(如，首次治疗、暴发危象(in blast crisis)、对首次治疗的反射(refractiveto initial treatments)、癌症复发、或可能由数月或数年以前治疗第一癌症诱导的第二癌症)。因此，医生经常必须将最适于患者抵御该疾病和患者自我决定生活质量的需要的各种治疗模式组合。治疗模式包括但不限于手术、放疗、化疗、生物学治疗(如，细胞因子、免疫治疗、和干扰素)、激素治疗、和高热。
常规的化疗可以进一步分为激素治疗(如，抗雌激素药、芳香酶抑制剂、促性腺激素释放激素类似物、和抗雄性激素)、抗肿瘤烷化剂(如，氮芥、亚硝基脲、四嗪、和氮丙啶)、顺铂及其类似物、抗代谢物(如，甲氨蝶呤、抗叶酸物、5-氟嘧啶、阿糖胞苷、阿扎胞苷、吉西他滨、6-巯基嘌呤、和羟基脲)、拓扑异构酶相互作用药、抗微管药物(如，长春花生物碱、紫杉烷(taxanes)、和雌莫司汀)、分化药物(如，类维生素A、维生素D3、极性-非极性化合物、丁酸酯和苯乙酸酯、细胞毒类药物、细胞因子、及其组合)、和其它化疗剂如氟达拉滨、2-氯脱氧腺苷、2′-脱氧助间型霉素、高三尖杉酯碱(HHT)、苏拉明、博来霉素、和L-天冬酰胺酶。
4.1治疗淋巴瘤的联合疗法本发明的一个方面考虑了抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或结合于α4整联蛋白配体(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白在治疗淋巴瘤中的应用。考虑了使用本文公开的联合疗法治疗表达α4整联蛋白或α4整联蛋白配体的任何淋巴瘤细胞。
考虑了通过这些联合疗法治疗的淋巴瘤包括T细胞淋巴瘤，例如但不限于皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、T细胞非何杰金氏淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、抗免疫母细胞淋巴瘤、和前体T-LBL。淋巴瘤的治疗也取决于治疗的主体、疾病的类型及其阶段。用于白血病和淋巴瘤的现有治疗模式的一般描述参见CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。还考虑了治疗B细胞淋巴瘤(如，滤泡性淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、B-CLL/SLL、免疫细胞瘤/Waldenstrom′s、和MALT型/单核细胞样B细胞淋巴瘤)。还考虑治疗儿科淋巴瘤如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、弥散性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、前体B-LBL、前体T-LBL、间变性大细胞淋巴瘤、和外周T细胞淋巴瘤。
用于治疗淋巴瘤的常见的药物组合包括但不限于CHOP(即，环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、和泼尼松)、GAP-BOP(即，环磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博来霉素、长春新碱、和泼尼松)、m-BACOD(即，甲氨蝶呤、博来霉素、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、地塞米松、和亚叶酸)、ProMACE-MOPP(即，与标准MOPP组合的泼尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、亚叶酸)、ProMACE-CytaBOM(泼尼松、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷、阿糖胞苷、博来霉素、长春新碱、甲氨蝶呤、和亚叶酸)、和MACOP-B(甲氨蝶呤、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、泼尼松、博来霉素、和亚叶酸)。对于复发的攻击性非何杰金氏淋巴瘤，可将以下化疗药物组合与本文所述的抗体和药物组合使用IMVP-16(即，异环磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MIME(即，甲基-gag、异环磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、DHAP(即，地塞米松、高剂量阿糖胞苷、和顺铂)、ESHAP(即，依托泊苷、甲基泼尼松、高剂量阿糖胞苷、和顺铂)、CEFF(B)(即，环磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、泼尼松、和博来霉素)、和CAMP(即，洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和泼尼松)。参见Margaret A.Shipp，等人，″Non-Hodgkin′sLymphomas，″，CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2165-2220(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997) 。
用于某些淋巴瘤如复发的抗药性何杰金氏病的抢救性化疗治疗包括但不限于VABCD(即，长春碱、多柔比星、达卡巴嗪、洛莫司汀、和博来霉素)、ABDIC(即，多柔比星、博来霉素、达卡巴嗪、洛莫司汀、和泼尼松)、CBVD(即，洛莫司汀、博来霉素、长春碱、地塞米松)、PCVP(即，长春碱、丙卡巴肼、环磷酰胺、和泼尼松)、CEP(即，洛莫司汀、依托泊苷和泼尼莫司汀)、EVA(即，依托泊苷、长春碱、和多柔比星)、MOPLACE(即，环磷酰胺、依托泊苷、泼尼松、甲氨蝶呤、cytaravine、和长春新碱)、MIME(即，甲基-gag、异环磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MINE(即，mitoquazone、异环磷酰胺、长春瑞滨、和依托泊苷)、MTX-CHOP(即，甲氨蝶呤和CHOP)、CEM(即，洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤)、CEVD(即，洛莫司汀、依托泊苷、长春地辛、和地塞米松)、CAVP(即，洛莫司汀、美法仑、依托泊苷、和泼尼松)、EVAP(即，依托泊苷、长春碱、阿糖胞苷、和顺铂)、和EPOCH(即，依托泊苷、长春新碱、多柔比星、环磷酰胺、和泼尼松)。参见例如Vincent T.DeVita等人，″Hodgkin′s Disease，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2242-2283(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
对于CTCL，常规疗法取决于患者的评价。因此，根据TNM进展，患者可进行区域性化疗、补骨脂素紫外线治疗、局部外束放疗、体外光化疗、干扰素(IFN)、用核苷酸衍生物的系统性化疗、或光子辐射与本文公开的方法和组合物的组合进行治疗。另外的治疗模式为本领域中已知的。一般参见，CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
因此，本发明的一个方面考虑了抗-α4免疫球蛋白或者对抗α4、α4β1和α4β7的配体的免疫球蛋白在抑制主体中的淋巴瘤进展和/或淋巴瘤的转移中的应用。试剂可单独使用，或与本文中讨论的其它淋巴瘤治疗组合使用。
4.2黑素瘤的联合治疗本发明的另一方面考虑了抑制黑素瘤生长和/或抑制黑素瘤转移灶的生长或扩散。抗-α4整联蛋白(即，α4β1和α4β7)免疫球蛋白或识别α4整联蛋白的配体的免疫球蛋白可单独使用或与其它癌症治疗模式组合使用，用于治疗黑素瘤。考虑了所述方法和组合物用于但不限于治疗皮肤黑素瘤、转移性黑素瘤和眼内黑素瘤。治疗这些黑素瘤的常规疗法为本领域中已知的。参见例如Anthony P.Albino等人，″Molecular Biology ofCutaneous Malignant Melanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY 1935-1947(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)；CharlesM.Balch等人，″CutaneousMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY，1947-1994；和Jose A.Sahel等人，″IntraocularMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY，1995-2012。
例如，对于转移性黑素瘤的治疗，手术、隔离肢体灌注、区域性化疗输注(用例如，decarbazine或顺铂)、放疗、免疫治疗(如，用抗GD2和GD3神经节苷脂的抗体治疗)、病灶内免疫治疗、系统性化疗、高热、系统免疫治疗、肿瘤疫苗、或其组合的应用可另外与抗-α4免疫球蛋白或对抗α4、α4β1、和α4β7的配体的免疫球蛋白组合。
4.3治疗白血病的联合疗法本发明的另一个方面提供使用抗α4免疫球蛋白或对抗α4配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白与用于在治疗白血病的常规疗法模式组合来治疗某些白血病。
用于急性髓性白血病(AML)的常规疗法包括但不限于基于小红莓类(anthracycline)/阿糖胞苷的诱导方案、症状缓解后的加强疗法诸如骨髓移植(BMT)或高剂量(HD)阿糖胞苷。
用于急性早幼粒细胞性白血病的常规疗法包括但不限于视黄酸和基于小红莓类/阿糖胞苷的治疗。也可对患者给药冷凝蛋白质或新鲜冷冻血浆，以维持纤维蛋白原水平大于100mg/dL。输入血小板也可能必要，以维持人体中＞50,000/μL的每日血小板计数。
用于急性淋巴母细胞性白血病(ALL)的常规治疗模式包括使用小红莓类、环磷酰胺、天冬酰胺酶或加上长春新碱和泼尼松的组合的四或五种药物诱导方案。或者，医生可选择使用基于阿糖胞苷与小红莓类、epidophillotoxins的组合；或抗代谢物与本文所述的免疫球蛋白组合物的组合的加强巩固疗法。又一个方面可为使用口服甲氨蝶呤与巯嘌呤的组合和本发明的免疫球蛋白用于延长的维持治疗的应用。另一个方案考虑了用于CNS预防的预防性鞘内化疗(有或者没有颅侧放疗)与本发明的免疫球蛋白组合的应用。对于可用于与本发明组合的治疗白血病的治疗模式的另外的信息，参见Issa Khouri等人，″Molecular Biology of Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY 2285-2293(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)；David A.Scheinberg等人，″Acute Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2293-2321；和Albert B.Deisseroth等人，″Chronic Leukemias，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOF ONCOLOGY 2321-2343。
4.4用于治疗转移性疾病的联合疗法转移灶的治疗取决于转移灶的位置和产生转移灶的原发肿瘤的位置可使用单独的本文中所述的组合物、联合疗法、和方法，或其与其它癌症治疗模式的组合进行。肿瘤转移的最常见位置为脑、肺、肝、骨、恶性胸膜和心包腔积液、和恶性腹水。
4.4.1脑转移灶当起源于中枢神经系统(CNS)之外的组织的肿瘤细胞继发性地扩散以直接牵涉脑时形成脑转移灶。颅内转移灶可牵涉脑实质、脑神经、血管(包括硬模窦)、硬膜、柔脑膜、和头骨的内板。对于颅内转移灶，最常见的是实质内(intraparenchymal)转移灶。由原发肿瘤形成脑转移灶的频率为肺肿瘤(48％)、乳房肿瘤(15％)、黑素瘤(9％)、结肠肿瘤(5％)、其它已知的原发肿瘤(13％)、和其它未知的原发肿瘤(11％)。参见Jay S.Loeffler，等人，″Metastatic Brain Cancer，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2523-2536(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。与脑转移灶有关的症状包括精神状态改变、轻偏瘫、半部知觉(hemisensory)丧失、视神经乳头水肿、和步态共济失调。因此，经常对新诊断为患有脑转移灶的患者采取长期的抗惊厥药预防和皮质类固醇。这种药物包括苯妥英钠和苯巴比妥。
如果脑转移灶容易触及，它们可以通过手术切除转移灶而进行治疗。通过事先成像和定位技术，与手术除去脑转移灶有关的致病率已经降低。然而，仍然存在危险。因此，放疗为治疗脑转移灶患者的主要依赖性疗法。放疗可作为手术的辅佐疗法与手术组合。或者，可使用放射外科学。放射外科学为使用多会聚性电子束对小体积递送高的单剂量辐射的外部辐射技术。放疗可与其它化疗剂如甲基-CCNU或ACNU组合给药，或放疗、甲基-CCNU、ACNU、和替加氟(口服给药的5-氟尿嘧啶)组合。
化疗也可用于脑转移灶。取决于原发肿瘤，可对患者给药以下药物的任一种或其组合环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、长春新碱、甲氨蝶呤、多柔比星、泼尼松、和阿霉素(如，CAF或CMF的组合)。
可将本文中公开的抗体组合物和抗体用法与本文所述的或本领域已知的任何常规治疗模式组合(参见例如Jay S.Loeffler等人，1997)用于脑转移灶。
4.4.2肺转移灶肺为转移性疾病的第二常见部位。在解剖学上，肺是富含血管的位置并且是循环肿瘤细胞在它们离开其原发肿瘤的静脉引流系统后遇到的第一个毛细血管床。因此，肺起到最初的过滤位置的作用，其中扩散的肿瘤细胞被机械地捕获。然而，被捕获在其中并且继续增殖和形成转移灶的细胞主要取决于它们所由来的最初的原发肿瘤。肺转移灶的这种血原性过程是最常见的方式，但是肺转移灶又可以通过淋巴系统发生。参见Harvey I.Pass等人，″Metastatic Cancer to the Lung，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2536-2551(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
发展为肺转移灶的最常见的原发肿瘤包括软组织肉瘤、结肠癌、生殖细胞瘤、骨肉瘤、某些儿科肿瘤(如，横纹肌肉瘤、尤因氏肉瘤、肾母细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、蜂窝状肉瘤、滑膜肉瘤、纤维肉瘤、神经原性肉瘤、和上皮肉瘤)、黑素瘤、肾细胞癌、和乳癌。大部分源于这些原发肿瘤的转移灶通过手术治疗。然而，一些人推荐与化疗组合的手术。例如，转移到肺的生殖细胞瘤通过手术切除术，随后进行基于治疗性顺铂的组合化疗。
肺转移灶的治疗经常涉及转移灶切除术(即，肺转移灶的手术去除)。因此，本发明的一个方面考虑了公开的抗体与本文所讨论的或本领域已知的常规疗法组合用于治疗肺转移灶的应用。对于另外的治疗模式，参见例如Harvey I.Pass等人，1997。
因此，本发明的一方面考虑了将抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或识别并且结合于α4配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白与用于治疗肺转移灶的任何可用的治疗模式组合及其用法。
4.4.3肝转移灶肝的转移性疾病可以从许多原发肿瘤部位发生。由于解剖学的静脉引流，胃肠道肿瘤优先扩散到肝，使得许多患者最初诊断为在肝中具有癌症。对于转移到肝的大多数胃肠道肿瘤，确诊后的存活率极低。但是，结肠直肠到肝的转移灶可以在切除疗法之后进行治疗。
系统性化疗是肝转移灶最常使用的治疗模式。对系统性化疗的响应根据原发肿瘤而定。另一种选择的治疗模式为肝动脉化疗。肝转移灶几乎只由肝动脉灌注，而正常肝细胞从门静脉和肝动脉得到它们的血液。因此，肝动脉化疗，其中将3H-氟尿苷(3H-FUDR)(或其它一种或多种化疗剂)注入到肝动脉中，引起转移灶中药物浓度比正常肝组织显著增加(15倍)。通过肝动脉给药的另外的药物包括但不限于氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶-2-脱氧尿苷、双氯乙基亚硝基脲、丝裂霉素C、顺铂、和多柔比星。
对于肝转移灶，治疗模式可以包括系统性化疗(使用例如3H-氟尿苷)、肝内治疗、肝动脉结扎或栓塞、化学栓塞(chemoembolization)、放疗、醇注射、和冷冻手术。对于化学栓塞，可使用以下药物方案(1)DSM和丝裂霉素C；(2)胶原蛋白、顺铂、多柔比星、和丝裂霉素C；(3)氟尿嘧啶、丝裂霉素C、乙碘油、和明胶；(4)血管抑素(或抑制新血管生成或血管生成的其它药物)、顺铂、多柔比星、和丝裂霉素C；(5)碘化油(cipiodol)和多柔比星；(6)凝胶泡沫、多柔比星、丝裂霉素C、和顺铂；(7)多柔比星、丝裂霉素C、和碘化油；和(8)聚乙烯、醇、氟尿嘧啶、和干扰素。对于另外的治疗和细节，参见John M.Daly等人，″Metastatic Cancer to the Liver，″inCANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY，2551-2569(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
对于肝转移灶，可将任何可用的治疗模式与包括本发明的免疫球蛋白的方法和组合物组合使用。
4.4.4骨转移灶骨转移灶的治疗最好使用多模态方法学进行。骨的一个问题是骨折的发生和骨愈合。骨肿瘤的肿块可以通过手术进行并且可以包括截肢。除手术治疗之外，辐射可用于骨骼转移灶。可以考虑局部外辐射、hemibody辐射、或系统放射性核治疗用于广泛扩散的骨病。提倡使用亲骨同位素如89Sr，因为它们比高能量同位素32P-正磷酸盐更易耐受。对于治疗骨转移灶的另外的治疗模式和细节，参见例如John H.Healy，″Metastatic Cancer to the Bone，″CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OFONCOLOGY 2570-2586(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
对于骨转移灶，可将任何可用的治疗模式与使用抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或对抗结合于α4整联蛋白的配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的抗体的方法和组合物组合使用。
4.5用于改善与癌症治疗有关的状况的联合疗法通常，使用辐射或化疗的初始癌症治疗模式背后的想法是使比正常细胞增殖更快的癌细胞中毒，使得它们更易受化疗和辐射的影响。然而，用辐射和化疗乃至一些更新的癌症治疗模式治疗患者对被治疗的患者有不良副作用。因此，本发明的一个方面考虑了改善由治疗患者所使用的治疗模式的组合产生的消极作用的化合物和组合物的应用。例如，可将药物与可能治疗各副作用如但不限于恶心、呕吐、粘膜炎和其它口腔并发症、膀胱炎、肺毒性、心脏毒性、脱发、和性腺生成障碍的抗癌疗法协同对患者给药。虽然这些试剂中的一些可表现为纯粹的表面作用(如，抑制脱发)，研究已经表明，对癌症治疗保持积极的态度和预防抑郁症可有助于被治疗患者的全面的治疗响应。因此，本文中讨论的试剂和组合治疗可以进一步与改善这些副作用的药物疗法组合，以及与任何常规的癌症治疗模式组合。对于与改善癌症疗法副作用的方法有关的细节，通常参见CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，编者，第5版，1997)。
5.免疫球蛋白制剂和给药方法本发明的一个方面考虑了抗-α4免疫球蛋白或结合于α4配体(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的应用。这种免疫球蛋白可为完整的抗体、抗体片段、或识别并且结合于这些多肽的重组产生的免疫球蛋白。
优选上述讨论的感兴趣的抗体或免疫球蛋白在生理学可接受的载体中对主体给药。抗体可通过多种方法给药，包括但不限于肠胃外给药，包括皮下(s.c.)、硬膜下、静脉内(i.v.)、肌内(i.m.)、鞘内、腹膜内(i.p.)、脑内、动脉内、或病灶内(intralesional)的给药途径、局部给药(如，手术施加或外科栓剂)、和经肺给药(如，气雾剂、吸入、或粉末)和如以下进一步描述的。优选地，抗-α4免疫球蛋白或抗α4的配体的免疫球蛋白进行静脉内或皮下给药。
取决于引入的方式，免疫球蛋白可以多种方式配制。制剂(即，在给药时对主体为治疗有效的制剂)中治疗活性的免疫球蛋白的浓度可为约0.01mg/mL到1g/mL优选地，在对有需要的主体给药时，免疫球蛋白组合物在给药主体的血液中达到约10μg/mL或更高的浓度。
优选地，免疫球蛋白配制为在适当的惰性载体如无菌生理盐水中，用于肠胃外给药。例如，载体溶液中免疫球蛋白的浓度典型地为约1-150mg/mL。给药剂量由给药途径决定。优选的给药途径包括肠胃外、皮下、或静脉内给药。
对于肠胃外给药，本发明的免疫球蛋白可以与可药用载体作为在生理学可接受的稀释剂中的溶液或悬浮液的可注射剂型给药，生理学可接受的稀释剂可为加入或未加入表面活性剂的无菌液体如水和油类。其它可接受的稀释剂包括动物油、植物油、或合成来源油，例如花生油、豆油、和矿物油。通常，二醇如丙二醇或聚乙二醇(PEG)为优选的液体载体，特别用于可注射溶液。本发明的抗体和免疫球蛋白可作为可以配制为使得允许活性成分持续释放的储库型注射剂或植入制剂的形式给药。优选的组合物包括在包含50mM L-组氨酸、150mM NaCl(用HCl调节到pH 6.0)的含水缓冲液中配制的20mg/mL的单克隆抗体。
根据本发明的一个方面，识别并且结合于α4、α4二聚体、或与α4(或其二聚体)结合的配体的免疫球蛋白可单独给药，或与以上讨论的用于治疗和/改善肿瘤的其它药物组合给药。这些试剂也可在用于治疗患者的医药制剂中使用。其它癌症治疗剂的给药可以在给药免疫球蛋白之前、同时、或之后进行。本发明的免疫球蛋白的给药可以在外科治疗、放疗、激素治疗、免疫治疗、高热、或其它癌症治疗模式之前、过程中、或之后进行。本发明的免疫球蛋白的给药可以根据需要每天、每周、或每月进行。优选地，免疫球蛋白每周给药，持续进行一周或多周。
将免疫球蛋白的治疗用制剂制备为冻干饼或水溶液的形式用于储存，通过将具有所需纯度的免疫球蛋白与非必要的生理学可接受的载体、赋形剂、防腐剂、或稳定剂混合(REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第16版，A.Osol，Ed.，1980和最近的版本)。可接受的免疫球蛋白载体、赋形剂或稳定剂为在采用的剂量和浓度下对接受者无毒的、无治疗作用和/或无免疫原性的，其包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐、和其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质如血清白蛋白、明胶、或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸、或赖氨酸；单糖、二糖、和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂如乙二胺四乙酸盐(EDTA)；糖醇如甘露醇或山梨醇；成盐的平衡离子如钠；和/或非离子型表面活性剂如吐温、Pluronics、或聚乙二醇(PEG)。载体分子的具体例子包括但不限于糖胺聚糖(如，硫酸肝素)、透明质酸、硫酸角质素、软骨素4-硫酸盐、软骨素6-硫酸盐、硫酸乙酰肝素、硫酸dermatin、基底膜聚糖、和pentopolysulfate。
如果需要，包括免疫球蛋白的药物组合物还可以包括可药用的、无毒的载体或稀释剂，其为通常用于配制动物或人给药用药物组合物的介质。选择稀释剂使得其不影响所述组合的生物活性。其例子包括但不限于蒸馏水、生理学磷酸缓冲盐溶液、林格溶液、葡萄糖溶液、Hank′s溶液。
本发明的药物可以配制为注射用制剂，通过将它们在水性或非水溶剂中溶解、悬浮、或乳化制剂，非水溶剂如植物油或其它类似的油类、合成的脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸的酯或丙二醇。制剂也可包含常规的添加剂，如增溶剂、等渗剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。
免疫球蛋白也以气雾剂形式使用，以通过吸入或经肺递送给药。本发明的药物可以配制在加压的可接受的推进剂如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等中。
免疫球蛋白也可通过例如凝聚技术或通过界面聚合(如，羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚甲基丙烯酸甲酯微胶囊))包封在微胶囊中、在胶态给药系统(如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米粒子和毫微囊剂)、或在粗乳剂(macroemulsion)中。这种技术在REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES(同上)中公开。
用于体内给药的免疫球蛋白必须是无菌的。这通过在冷冻干燥和重构之前或之后经无菌过滤膜过滤容易地实现。免疫球蛋白通常以冻干形式保存或保存在溶液中。
通常将治疗用免疫球蛋白组合物置于具有无菌入口的容器如静脉内溶液袋中、或具有可由皮下注射针头或类似的锐利工具刺穿的塞子的小瓶中。
持续释放制剂的适当的例子包括包含蛋白质的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，该基质为成形制品如薄膜或微胶囊的形式。持续释放基质的例子包括聚酯；水凝胶(如，聚(甲基丙烯酸-2-羟乙酯))，如Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.15167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.1298-105(1982)描述的；或聚(乙烯醇))；聚交酯(美国专利3,773,919)；L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人，Biopolymers，22547-556，1983)不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人，同上)；可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(即，由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)；和聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。
虽然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羟基乙酸能够在100天内释放分子，某些水凝胶在较短时间内释放蛋白质。当包封的抗体长时间保留在体内时，它们可能由于在37℃暴露于潮气下而变性或聚集，引起生物活性损失和可能的免疫原性改变。可以根据涉及的机制设计合理的策略使免疫球蛋白稳定。例如，如果发现聚集机制为通过巯基-二硫化物互换的分子间S-S键形成，则可以通过修饰巯基残基、从酸性溶液冻干、控制含水量、使用适当的添加剂、形成具体的聚合物基质组合物等而实现稳定化。
持续释放免疫球蛋白组合物还包括脂质体包封的免疫球蛋白。包含免疫球蛋白的脂质体通过本身已知的方法制备。参见例如，Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 823688-92(1985)；Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 774030-4(1980)；美国专利4,485,045；4,544,545；6,139,869；和6,027,726。通常，脂质体为其中脂质含量大于约30摩尔％(mol％)胆固醇的小型(约200到约800埃)的单层类型；调节选择比用于免疫球蛋白治疗。
本发明的免疫球蛋白可以持续释放形式给药，如可以配制为允许活性成分持续释放的储库型注射剂、植入制剂、或渗透泵形式。用于释放制剂的植入物为本领域公知的。植入物配制为具有生物可降解型或生物不可降解型聚合物的微球、小片等。例如，乳酸和/或羟基乙酸的聚合物形成宿主耐受性良好的可侵蚀型聚合物。将植入物置于例如实体瘤的附近，使得在该位置的活性剂的局部浓度相对于身体的其余位置增加。
典型的免疫球蛋白的日剂量为约1μg/kg主体体重到最多约200mg/kg主体体重，更优选约0.01mg/kg主体体重到约150mg/kg主体体重，更优选约0.1mg/kg主体体重到约100mg/kg主体体重，更优选约1mg/kg主体体重到约75mg/kg主体体重(和这些数值之间的每个整数值)，取决于本文中提及的各因素。典型地，临床医生可给药免疫球蛋白，直到达到获得预期效果的剂量。这种治疗的进展可以容易地通过常规试验进行监控。
“稳定的”免疫球蛋白、抗体、或抗体片段制剂为其中在储存时其中的蛋白质基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。本领域中有用于测量蛋白质稳定性的多种分析技术并在例如Peptide and Protein Drug Delivery，247-301(Vincent Lee Ed.，MarcelDekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.1991)和A.Jones，Adv.DrugDelivery Rev.1029-90(1993)中综述。稳定性可以在选定温度下在选定的时间段内进行测量。优选地，制剂在室温(约30℃)或40℃下在至少1个月内是稳定的，和/或在约-2-8℃下在至少2年内是稳定的。此外，制剂可在制剂的冷冻(到例如-70℃)和解冻时是稳定的。
例如，如果根据抗原-结合试验确定的在给定时间内免疫球蛋白的生物活性在药用制剂制备时表现出来的生物活性的约10％(在的误差内)内，则药用制剂中的免疫球蛋白“保持其生物活性”。
虽然已经参考以下实施例详细描述了本发明，但是应该理解，可进行多种修饰而不脱离本发明的精神实质，并且为本领域技术人员容易地已知的。
实施例实施例1那他珠他单抗在体外对肿瘤细胞增殖的影响为了评价那他珠他单抗诱导或抑制可能引起肿瘤形成的转化细胞和克隆扩张的潜力，进行各实验以测定那他珠他单抗在体外刺激表达受体的恶性细胞生长的能力，并且各研究在动物肿瘤模型中进行。
使用3H-胸苷结合试验评价对肿瘤细胞系增殖的阳性或阴性结果。使用肿瘤异种移植体裸鼠/SCID小鼠模型评价人肿瘤细胞生长和/或转移的抑制或促进。筛选三十二个肿瘤细胞系。在三十二个肿瘤细胞系中，十二个为结肠癌、结肠直肠腺癌、结肠腺癌、或结肠癌细胞系；七个是黑素瘤或无黑色素性黑素瘤；六个是膀胱转移细胞癌或膀胱癌；三个是白血病；两个是淋巴瘤；两个是前列腺癌。
进行免疫组织化学法(IHC)和荧光活化细胞分选法(FACS)以测试α4表达。通过IHC评价二十六个细胞系中的五个呈阳性。通过免疫组织化学法(IHC)认为是阴性的或可疑的二十一个细胞系中的四个通过FACS分析呈强阳性(＞85％)。由IHC分析为阴性的或可疑的两个细胞系通过FACS分析呈弱到中等阳性(22.5和77.6％)。六个细胞系没有通过IHC评价。只有一个细胞系通过FACS分析(68.4％)呈中等阳性。
还进行了VCAM-1结合的粘合试验。评价的十一个细胞系中有七个呈阳性。在初步细胞增殖试验中，评价的九个细胞系全部都没有细胞毒或增生作用。将AS283、HT-29、MOLT-4、和UM-UC-3细胞系用Tysabri(那他珠他单抗)治疗。测量氚化胸腺嘧啶摄取。在暴露于八个不同浓度(0.001-100mg/mL)下的第1、2、3、4和5天，没有观察到细胞毒或增生作用的证据。
实施例2那他珠他单抗对SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4异种移植物的作用该研究的目的是测定用那他珠他单抗治疗在雌性SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4急性淋巴母细胞性白血病异种移植物的生长的作用。
材料和方法活体(In-life)实验工作从第0天开始，并且在第80天终止。从Taconic Farms，Inc.(Germantown，NY)购得五到六周大的雌性SCID小鼠并且在实验之前在实验室中适应一周。将动物圈养在micro-isolator笼中没有病原体的屏蔽设施中，每笼五只动物，处在12-小时照明/黑暗循环下。动物接受经过滤的伯明翰城市用水和无菌的啮齿动物食品。对小鼠喂食可灭菌的啮齿动物餐(Harlan-Teklad TD8656)。鼠笼每周更换两次。每天观察动物并且记录临床征象。
使用12号套管针针头将MOLT-4人白血病的三十到四十毫克片段植入在小鼠的接近右腹侧区域(right auxillary area)内并允许其生长。肿瘤片段植入的当天标为实验的第0天。允许肿瘤达到75-114mg重量(75-144mm3大小)，然后开始治疗。为足够数目的小鼠植入，使得在开始治疗时(肿瘤植入之后的第14天)选择尽可能窄的重量范围用于试验。将选择的具有适当尺寸范围的动物随机分为试验组。治疗第一天的平均肿瘤重量为84或96mg；在第14天的中值肿瘤重量为75或88mg。
在肿瘤片段植入的当天收获一个供体肿瘤并将其切成两半。将肿瘤的一半在O.C.T.化合物中冷冻，肿瘤的另一半在10％经缓冲的福尔马林中固定。冷冻的和用福尔马林固定的半份肿瘤都运送到BiogenIdec Inc.进行分析。将用于小鼠植入的每个供体肿瘤的一个片段置于具有乙醇酸盐培养基的试管中并在+37℃培养24小时。
从Biogen Idec Inc.得到那他珠他单抗(20mg/mL溶液，GensiaSicor Pharmaceuticals Inc.，批号F23014和G23004)和稀释液(Placebofor Tysabri，Gensia Sicor Pharmaceuticals Inc.，批号F85002)并在收到时在+2-8℃储存。具有0.97mg/mL人免疫球蛋白(IgG4)溶液的小瓶由Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，批号122K9159)提供，并且在收到时在-84℃储存。购买Taxol(紫杉醇(placlitael))的临床制剂(6.0mg/mL，在50％cremophor-EL/50％乙醇中，Bristol-MyersSquibb Company，Princeton，NJ；批号2L57296)并在收到时冷藏。盐水(0.9％盐水溶液，只用于动物)购自Phoenix Pharmaceutical，Inc.(St.Joseph，MO，批号262053F、206205F、208281F)并在室温下储存。一瓶新的盐水只用于每一天的制剂。
在第14天，将20mg/mL的那他珠他单抗溶液用Tysabri用安慰剂稀释到1.0mg/mL。在随后的注射日，通过用Tysabri用安慰剂稀释20mg/mL原液配制0.5mg/mL的那他珠他单抗溶液。注意不要摇动装有那他珠他单抗的小瓶，将小瓶反转进行混合。每天的制剂使用新的那他珠他单抗和Tysabri用安慰剂的小瓶。在第14天，将提供的0.97mg/mL的IgG4原液解冻并注射到小鼠中。在随后的注射日，通过用0.9％盐水溶液稀释0.97mg/mL原液配制0.5mg/mL的IgG4溶液。每天的制剂使用新的IgG4小瓶。在每个注射日，用0.9％盐水溶液稀释市售的配制好的Taxol在50％ cremophor-EL/50％乙醇中的6mg/mL溶液等分试样以制备在12.5％cremophor-EL/12.5％乙醇/75％盐水中的1.5mg/mL溶液。所有的给用溶液在配制的2到3小时内注射。
在第14、17、24、31、38、和45天，在制剂配制完之后，立即从给用瓶抽出第1组(盐水)和第2组(那他珠他单抗)的给用溶液的两个1mL等分试样。将那他珠他单抗和盐水的每个1mL等分试样分配在标有研究名称、组号、化合物名称、剂量、给药途径、注射量、研究日、和单词“Prep.Lab.”的小瓶中，并将小瓶立即冷藏。在每个组开始注射之前，将盐水和那他珠他单抗的相同剂量溶液的另外两个1mL等分试样抽取到每组两个注射器中(1mL/注射器)，并使注射器在对组中所有二十只动物剂量给药过程中处在室温下。在处理完成之后，将每个注射器的内容物分配在标有研究编号、组号、化合物名称、剂量、给药途径、注射量、研究日、和单词“Animal Lab”的小瓶中，并将小瓶立即冷藏。在实验完成之后，将这些等分试样运输到CovanceLaboratories，Inc.进行分析。
药物治疗将动物随机地分成六个组(每组20只动物)，和一个组(30只动物)。将两个组(第1和5组)用0.9％盐水溶液(盐水)处理。第2、6、和7组的动物用那他珠他单抗处理。第3组的动物用IgG4处理(同型对照)。第4组的动物用Taxol处理(阳性对照)。用盐水、那他珠他单抗、和IgG4处理(第1、2、3、5、和6组)在第14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天(Q3D×2，进行五周，星期五-星期一时间表)IP给药。在第7组(30只小鼠的组)用那他珠他单抗处理在第14、17、21、24、28、31、35、和38天给药(Q3D×2，四周)。在第14天，那他珠他单抗以10mg/kg的剂量给药，随后进一步用5mg/kg/剂量的剂量处理。在第14天，IgG4以9.7mg/kg的剂量给药，随后进一步用5mg/kg/剂量的剂量处理。Taxol从第14天开始以15mg/kg/剂量的剂量静脉内(IV)给药，一天一次，连续进行5天(Q1D×5)。所有的试验化合物根据确切的个体动物体重在处理日以0.1mL/10g体重的介质量给药。
在第14天开始的给药处理的每天都将动物称重并且测量皮下的(SC)肿瘤，除了有两次测量是在注射的一天之前(第24和41天)进行之外。在处理完成之后，每周两次收集肿瘤和体重数据。通过卡尺测量(mm)和椭球球体公式L×W2/2＝mm3测定肿瘤体积，其中L和W是指在每次测量时收集的较大和较小的垂直尺寸。这个公式还用于计算肿瘤重量，假定单位密度(1mm3＝1mg)。
在处理过程中收集第7组动物的血液。动物编号1-5在第14天注射之后的8小时采血。五只动物在第21天(动物编号6-10)、第28天(动物编号11-15)、第35天(动物编号16-20)、和第38天(动物编号21-25)的注射之前采血。动物编号26-30在第38天的注射8小时之后采血。在CO2/O2麻醉下通过眼窝后穿刺收集血液。使用无涂层的毛细管对动物采血血液的最大量(末端流血)并允许血液在室温下凝结30分钟，从每个采血时间点的最后一只动物开始。然后将血样在+4℃下以10,000rpm离心10分钟，分离血清并在干冰上冷冻。所有的血清样品储存在-84℃，直至运输到Biogen Idec进行分析。
在第28天(第5组的中值肿瘤重量达到466mg一天后)将第5和6组的动物的原发肿瘤通过手术切除。麻醉剂的给药和手术/术后恢复过程根据批准的标准实验室方法进行。简要地，将每只动物麻醉并用抗菌溶液准备切口位置。产生沿肿瘤一侧外周的切口(至多比肿瘤直径长3-4mm)，将皮肤翻过来并将肿瘤通过切口翻转。将肿瘤从皮肤和肌肉剖开。用4.0mm创缘夹将切口关闭。将每个切除的肿瘤切成两半，一半肿瘤在O.C.T.化合物中冷冻，另一半肿瘤保存在10％缓冲的福尔马林中。每周两次对切除位置监控肿瘤再生长，并且在形成新的实体瘤时记录其尺寸。
第1-4组的动物编号1-10在肿瘤植入之后的第47天(2003年5月16日)无痛处死；第1-4组的动物编号11-20在肿瘤植入之后的第48天(2003年5月17日)无痛处死。第5和6组的所有生存动物(除了第5组的动物编号12和第6组的动物编号8之外，参见以下说明)在肿瘤植入之后的第80天(2003年5月19日)无痛处死。第5组的动物编号12由于过大的肿瘤重量(＞4,000mg)而在第73天处死。第6组的动物编号8由于肿瘤溃疡而在第73天处死。第7组的五只动物在第14、21、28、35天无痛处死，十只动物在第38天无痛处死。将在第47、48、和80天存活的所有动物的尸体提交到the Safety AssessmentDepartment of Southern Research Institute进行尸检，随后进行全面的组织病理学评价。第7组的动物没有进行尸检和全面的组织病理学评价。对于第1-6组的动物，在第0天进行肿瘤植入(皮下)。在第14天开始处理，并在第45天停止处理。在第5和6组中，在植入后的第28天进行原发肿瘤切除。动物在第80天处死。未切除组的动物在第47-48天处死。
表1
对于第7-10组的动物，在第0天进行肿瘤植入(皮下)。在第-7天开始处理，并在第45天停止处理。动物在第46-47天处死。
表2
对于第11组的动物，肿瘤植入(皮下)在第0天进行。在第14天开始处理，并在第45天停止处理。在第1、7、14、21、24、24天处死每组五只动物。这个组用于检验那他珠他单抗的血清水平。
表2
在规定的研究日开始以10mg/kg的负荷剂量进行那他珠他单抗给药。随后的剂量每周两次给药(即，每3-4天)。根据单一剂量之后的药代动力学模型、和验证性多剂量药代动力学研究中的谷血清浓度选择剂量水平。选择剂量水平用于在多剂量给药时提供20ml/mL的最低血清浓度。
在建立MOLT-4肿瘤之后的那他珠他单抗处理在切除组中引起肿瘤生长缓慢，并且切除组中的一些动物在处理后没再有肿瘤。在MOLT-4肿瘤植入之前开始的那他珠他单抗处理引起肿瘤生长的显著减少。那他珠他单抗处理不会不利地影响动物的健康状态，如在处理过程中体重增加所证明的。
测定非特异性死亡的数目、部分和全面肿瘤退化的数目、没再有肿瘤的幸存者数目、和个体动物达到评价尺寸的时间(达到四个肿瘤块加倍的时间)。个体动物达到四个肿瘤块加倍的时间用于计算中值肿瘤生长的总时延(T-C)。在所有的计算中，第1组(盐水处理的动物)用作对照组(C)。在数据收集的每天从每个组计算中值肿瘤重量、平均肿瘤重量和标准偏差、和试验组(T)的中值和平均肿瘤重量与对照组(C)的中值和平均肿瘤重量的比较(分别为，MEDIAN T/C＝中值T/中值C×100％，平均T/C＝平均T/平均C×100％)(数值在表8-2到8-8中表示)。在数据收集的每天从每个组计算平均体重和标准偏差(数值在表8-9到8-15中表示)。
在第47天收获第1、2、3、和4组的动物编号1-10的肿瘤。在第48天收获第1、2、3、和4组的动物编号11-20的肿瘤。第5和6组的动物编号1-20的原发肿瘤在第28天通过手术切除。在第80天收获第5和6组中所有生存的动物的继发瘤(在原发肿瘤的位置再生长的)。第6组的动物编号1和15在第80天的尸检时没有继发瘤。(第5组的动物编号4和第6组的动物编号3在手术后恢复过程中在第28天死亡，因此没有继发瘤。在第47天发现死亡的第5组的动物编号19进行死后尸检。第5组的动物编号12由于过大的肿瘤重量(4224mg)而被从实验中排除。第6组的动物编号8由于肿瘤溃疡而被从实验排除。第5组的动物编号10、17、和20在第73天发现死亡，由于显著的自溶而没有进行尸检。)将称重超过100mg的每个肿瘤切成两半，每个肿瘤的一半使用干冰/乙醇冰凌在O.C.T.化合物中冷冻并且储存在-84℃下。称重小于100mg的肿瘤(第4组中动物编号1、3、7、9、11、12、14-18、和20的肿瘤)全部在O.C.T.中冷冻。称重小于100mg的第4组的动物编号2、4、5、6、8、13、和19的肿瘤全部保存在10％缓冲的福尔马林中。在实验完成之后，将在O.C.T.化合物中冷冻的所有肿瘤样品(总共145个肿瘤)运输到Sierra Biomedical，Division of Charles RiverLaboratories，通过免疫组织化学检查以验证MOLT-4在体内表达VLA-4，因此是用于这项研究的有效的肿瘤模型。
使用市售的抗-CD49d抗体和得自各个试验组的动物子集的MOLT-4肿瘤的冷冻部分进行免疫组织化学。将每个肿瘤的第二半，如果存在，在10％缓冲的福尔马林中固定并送交Safety AssessmentDepartment Southern Research Institute进行组织病理学评价。
数据分析收集个体的肿瘤测量和体重并使用Southern Research Institute开发的软件ADAS(Automated Data Acquisition System)进行处理。然后将数据输出到MS Excel中用于报告。使用SigmaPlotTM图解表示原始数据。使用终止前最后一次测量当天(第1-4组为第47天，第5和6组为第80天)的个体动物的肿瘤重量作为端点，以便统计学比较组间的生长数据。
使用SigmaStatTM软件进行学生t检验。当数据集没有通过常态或等方差检验(equal variance test)时，使用Mann-Whitney秩和检验代替t检验。为这个报告附上统计分析结果的复本。
剂量溶液分析两个剂量溶液(MP-21520和MP-21522)或多或少地超过目标浓度±15％，分别为+16％和+19％偏差。这些差别归于存在于盐水剂量溶液和稀释液中0.01-0.04单位的280nm吸光度。这种吸光度归于盐水可在样品容器塞子中萃取。
SC MOLT-4白血病异种移植的生长在其中在肿瘤片段植入日放置肿瘤片段并且在+37℃培养24小时的具有硫基乙酸盐培养基的任何试管中都没有观察到生长。在对照、盐水处理组(第1组)中有95％肿瘤异种移植获得比例，在二十个中只有一个异种移植没能生长(未获得)。没有获得肿瘤的第1组的动物编号20被从所有的计算排除。肿瘤生长和盐水的给药得到耐受，没有体重损失。中值肿瘤重量在第47天达到1764mg并且在30.2天实现四个肿瘤块加倍。
第5组中所有的二十只用盐水处理的动物的肿瘤在植入之后逐渐生长。在第28天通过手术切除肿瘤。在手术后恢复过程中有一只动物死亡(动物编号4)。在手术之后动物体重立即减轻(最大的平均体重损失为2g[10％])但是后来体重再增加并且继续生长。观察到的体重可以归于麻醉剂的给药以及切除的肿瘤的重量的净损失。在实验过程中有四只动物死亡动物编号19在第47天死亡；动物编号10、17、和20在第73天死亡。在切除之后，所有动物的肿瘤在原发肿瘤的位置再生长。中值肿瘤重量在第80天达到2363mg，中值肿瘤在第60.9天达到四个肿瘤块加倍。
那他珠他单抗的作用那他珠他单抗的给药(第2组)得到很好的耐受，没有死亡，在处理的第一周过程中产生1g(5％)的体重波动。在实验过程中所有的二十个肿瘤都生长。中值肿瘤重量在第47天达到1240mg，中值肿瘤在第33.5天达到四个肿瘤块加倍。对在第47天的对照、盐水处理组(第1组)和那他珠他单抗处理组(第2组)的个体肿瘤重量的比较显示，与盐水处理组的肿瘤重量相比较，那他珠他单抗处理组的肿瘤重量没有统计学差异(p＝0.1032，Mann-Whitney秩和检验)，表明两个组的肿瘤以类似的速率生长。
第6组中所有的二十只用那他珠他单抗处理的动物的肿瘤在植入之后逐渐生长。在第28天通过手术切除肿瘤。在手术后恢复过程中有一只动物死亡(动物编号3)。动物在肿瘤切除手术之后立即经历最小的体重损失(最大平均体重损失1g[5％])，但是随后继续增加体重。在切除之后，十九只动物中有十七只的肿瘤在原发肿瘤的位置再生长，两只动物在研究终止的当天(第80天)保持没有再发生肿瘤。在第80天，中值肿瘤重量达到1006mg，中值肿瘤没有达到四个肿瘤块加倍(＞66.0天)。对盐水处理组(第5组)和那他珠他单抗处理组(第6组)的个体动物体重的比较显示，那他珠他单抗处理组的肿瘤生长统计上不同于盐水处理组中的肿瘤生长(P＝0.0189，t检验)，表明那他珠他单抗处理的肿瘤的再成长速率比盐水处理组的肿瘤更慢。在第7组中所有的三十只那他珠他单抗处理的动物的肿瘤生长。由于定期从研究除去动物用于终端血液收集，没有评价肿瘤的生长。
IgG4的作用IgG4的给药(第3组)得到良好的耐受，没有死亡或体重损失。在实验的结束时所有的二十只动物都有肿瘤。中值肿瘤重量在第47天达到1731mg，中值肿瘤在第31.7天达到四个肿瘤块加倍。对在第47天的对照、盐水处理组和IgG4处理组的个体肿瘤重量的比较显示，与对照组的肿瘤重量相比较，IgG4处理组的肿瘤重量没有统计学差异(p＝0.8004，Mann-Whitney秩和检验)，表明两个组的肿瘤以类似的速率生长。
Taxol的作用Taxol的给药(第4组)得到良好的耐受，没有死亡或持续的体重损失。在处理结束之后(第17和21天)观察到5％(1g)的平均最大体重损失，这是预期的，因为Taxol作为胞毒剂以接近最大允许剂量给药。Taxol处理非常有效地抑制MOLT-4肿瘤异种移植生长。二十只动物中的十二只在实验结束时没有可测量的肿瘤，在八只具有可测量肿瘤的动物中只有三只在实验过程中肿瘤加倍一次。Taxol处理的肿瘤的生长统计上不同于介质处理的、对照组中的肿瘤生长(p＜0.0001，Mann-Whitney秩和检验)，表明Taxol处理抑制肿瘤生长。
对组织病理学评价结果的总结总起来说，在不同的处理组中随机地观察到涉及子宫、卵巢、淋巴结、肺、肝、和脾增大的肉眼损害，但是没有一个研究结果被认为是处理相关的。在来自不同试验组的小鼠随机地发生的微观的病灶包括脾和肝中的骨髓外造血、肝中的局灶性坏死和炎症、肠系膜中的炎症、和心的心外膜的矿化。所这些改变被认为是偶然的或自发的，与所有试验制品的给药无关。异种移植生长的增强在任何试验组中都不明显。在来自第5和6组的四只小鼠的腹部(腹股沟)皮肤中发现异种移植生长的扩散。在第5组的小鼠的区域淋巴结(腋窝、腹股沟、髂骨、下颌骨、和纵隔)中和第6组小鼠的腹股沟淋巴结中观察到异种移植的转移或扩散。在第5和6组中各观察到一只小鼠的胸腺转移灶。没有证据表明继发性人急性淋巴母细胞性白血病的生长或转移的恶化是由于用那他珠他单抗处理的结果。
对肿瘤的免疫组织学分析的总结通过免疫组织化学检查肿瘤部分以验证MOLT-4在体内表达VLA-4，并且因此是用于这项研究的有效的肿瘤模型。使用市售的抗-CD49d抗体和得自各个试验组的动物子集的MOLT-4肿瘤的冷冻部分进行免疫组织化学。MOLT-4细胞的CD49d-特异性免疫正性的特征在于稳固的、颗粒状到小束状、扩散细胞质和细胞表面染色。扩散细胞质染色显示，胞质内的、以及细胞表面CD49d结合于抗-CD49d抗体。得自盐水对照组和IgG4对照组的动物的肿瘤部分具有稳固的染色，并且被给予3到4的免疫组织化学染色评分(分别为“集束的细胞、密集的分布(Clustered，closely spaced)”到“稠密地堆积的细胞(Denselypacked cells)”)。在尸检之前经过延长的未处理时间的得自那他珠他单抗处理组的动物(第6组)的肿瘤部分还具有稳固的染色并且被给予3到4的免疫组织化学染色评分。在用那他珠他单抗处理并且在处理结束时处死的动物中，CD49d的免疫组织化学染色大大减少为不存在的并且肿瘤部分被给予0到2的免疫组织化学评分(分别为“没标记的细胞(No labeled cells)”到“散布的单独的细胞，密集的分布(Scattered individual cells，closely spaced)”)。用肿瘤溶解药物Taxol处理的小鼠经常在处理之后没有充分的参与肿瘤块用于评价免疫组织化学染色。这些数据证实，MOLT-4人白血病细胞系在这些研究的实验条件下确实在体内表达CD49d。
结论
SC植入的MOLT-4人急性淋巴母细胞性白血病异种移植的生长没有被给药那他珠他单抗抑制。然而，实体瘤在原发肿瘤切除位置的再生长受到给药那他珠他单抗的抑制。给药IgG4对于异种移植的生长没有影响。用Taxol处理抑制原发肿瘤生长，产生在实验结束时在二十只动物中有十二只没有可测量的肿瘤。动物的组织病理学评价显示，没有证据表明人急性淋巴母细胞性白血病的生长或转移的恶化是由于用那他珠他单抗或IgG4处理的结果。在所有的试验组只发生随机分布模式的多种肉眼可见的和微观的病灶。然而，所有的病灶结果被认为是自发的或偶然的，与用盐水、那他珠他单抗、IgG4或Taxol处理无关。
上述引用的所有参考文献都被全文并入本文作为参考。该申请涉及2004年2月6日提交的美国专利临时申请60/541,946，其被全文并入本文作为参考。
权利要求
1.抑制肿瘤生长和/或转移性进展和/或转移灶发展的方法，所述方法包括对有需要的主体给药足以抑制肿瘤生长和/或转移的量的抗-α4免疫球蛋白。
2.权利要求1的方法，其中抗-α4抗体结合于α4β1整联蛋白和/或α4β7整联蛋白。
3.权利要求1的方法，其中抗-α4免疫球蛋白为那他珠他单抗。
4.权利要求1的方法，其中肿瘤为黑素瘤、前列腺癌、白血病、或淋巴瘤。
5.权利要求4的方法，其中黑素瘤为皮肤黑素瘤、转移性黑素瘤、或眼内黑素瘤。
6.权利要求4的方法，其中淋巴瘤为非何杰金氏淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、或何杰金氏病。
7.权利要求4的方法，其中白血病为慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母细胞性白血病、成熟B细胞急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、幼淋巴细胞白血病、或毛细胞白血病。
8.权利要求3的方法，其中对主体给药约1mg/kg主体体重到约100mg/kg主体体重的量的那他珠他单抗。
9.权利要求8的方法，其中对主体给药约1mg/kg主体体重到约10mg/kg主体体重的量的那他珠他单抗。
10.权利要求8的方法，其中那他珠他单抗以约1mg/kg主体体重到约20mg/kg主体体重的量给药。
11.权利要求4的方法，其中肿瘤为黑素瘤，并且主体在手术切除黑素瘤之后给药那他珠他单抗。
12.权利要求4的方法，其中肿瘤为黑素瘤并且主体另外经历手术、隔离肢体灌注、区域性化疗输注、系统性化疗、或使用第二抗体或抗血清的免疫治疗从而治疗黑素瘤。
13.权利要求12的方法，其中第二抗体为抗-GM2神经节苷脂抗体、抗-GD2神经节苷脂抗体、或抗-GD3神经节苷脂抗体。
14.权利要求12的方法，其中区域性化疗输注或系统性化疗包括选自以下的至少一种化疗剂达卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、牛磺莫司汀、福莫司汀、司莫司汀、顺铂、卡铂、长春新碱、长春碱、长春地辛、紫杉醇、二溴卫矛醇、地托比星、吡曲克辛、和干扰素。
15.权利要求14的方法，其中干扰素为干扰素-α2。
16.权利要求1的方法，其中转移灶为转移到脑、肺、肝、或骨骼的转移灶。
17.权利要求16的方法，其中转移灶为转移到肺的转移灶，并且肿瘤为黑素瘤。
18.权利要求1的方法，其中肿瘤为淋巴瘤并且主体另外用一种或多种化疗剂和/或放疗进行治疗。
19.用于抑制肿瘤生长和/或转移性进展和/或转移灶发展的联合疗法，包括给予抗-α4整联蛋白免疫球蛋白或抗α4整联蛋白配体的免疫球蛋白，和化疗、免疫治疗、和/或放疗。
20.权利要求19的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白为抗-α4β1整联蛋白抗体或抗-α4β7整联蛋白抗体。
21.权利要求20的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白为那他珠他单抗。
22.权利要求20的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白通过静脉内、鞘内、或皮下对有需要的主体给药。
23.权利要求20的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白为那他珠他单抗，并且以约1mg/kg主体体重到约100mg/kg主体体重的量给药。
24.权利要求23的联合疗法，其中那他珠他单抗以约10mg/kg主体体重到约30mg/kg主体体重的量给药。
25.权利要求20的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白每天、每周、或每月给药。
26.权利要求25的联合疗法，其中抗-α4免疫球蛋白每周给药。
27.包括抗-α4整联蛋白免疫球蛋白的药物制剂在对有需要的主体给药时用于抑制肿瘤生长和/或转移性进展和/或转移灶发展的应用。
28.权利要求27的应用，其中主体另外用化疗、免疫治疗、手术、放疗、高热、或改善癌症治疗的副作用的药物进行治疗。
29.权利要求27的应用，其中肿瘤为黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。
全文摘要
提供了用于治疗淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌和转移性疾病的组合物、方法、和组合治疗。具体地，公开了包括抗α4整联蛋白免疫球蛋白或结合于α4整联蛋白配体(如，MadCAM－1和VCAM－1)的免疫球蛋白的组合物，用于抑制肿瘤的生长和进展、和抑制转移灶。用于治疗肿瘤和转移灶优选的免疫球蛋白为那他珠他单抗。使用这些免疫球蛋白的组合物和方法可单独使用或与其它试剂和癌症治疗模式组合使用。
文档编号A61K39/395GK1946407SQ200580012148
公开日2007年4月11日 申请日期2005年2月3日 优先权日2004年2月6日
发明者N·维纳 申请人:伊兰药品公司