具有长贮存期的二氢蝶啶酮的输注溶液的制作方法

专利名称：具有长贮存期的二氢蝶啶酮的输注溶液的制作方法
技术领域：
本发明涉及贮存稳定的水性输注或注射溶液，其含有通式(I)的活性物质，以及其量足以溶解该活性物质并作为稳定剂的生理上可接受的酸或酸的混合物，以及任选其他适用于胃肠外给药的合适的制剂赋形剂，及涉及用于制备根据本发明的可输注或可注射溶液的方法， 其中基团L、R1、R2、R3、R4和R5具有权利要求和说明书内所给予的含义。
背景技术：
根据本发明式(I)的二氢喋啶酮是为快速生长型癌的肿瘤学治疗上的新颖抑止细胞生长的活性物质。通常，细胞生长抑制药物是经非胃肠制剂给药，纵然其口服的生物利用性可能极佳。其原因为用细胞抑制剂治疗时，通常会伴随某种程度的胃肠副作用，其特征常为恶心、呕吐及/或腹泻，且因此通过口服给药的有效治疗会有危险。
这种情况也适用于式(I)的二氢喋啶酮且使得有必要制备胃肠外的输注或注射的溶液。
现有技术EP 0219784和WO 01/78732描述了通过使用一种或多种生理上可接受的有机或无机酸来制备和稳定含环丙沙星(ciprofloxacin)的输液的方法。EP A 0287926描述通过使用高纯度的环丙沙星可极大减少颗粒形成的风险。EP 0143478 A1说明适于注射的稳定的顺铂(cisplatin)的盐酸溶液的制备，其特别没有其他添加剂。DE 197 03023公开了输液的稳定性可通过使用具有硅氧烷化表面的玻璃容器而大大改善杂质微粒的形成。
本发明的目的是要提供符合治疗需求的剂量范围的式(I)的二氢喋啶酮的稳定的可输注或可注射溶液。本发明的另一目的是该稳定的输注或注射溶液不仅可作为即时使用的溶液并且还作为可进一步稀释的浓缩物，所述稀释使用常用于胃肠外给药的溶液，例如等渗NaCl溶液、等渗葡萄糖溶液或林格(Ringer)乳酸盐溶液进行，以可弹性配合剂量。

发明内容
出乎意料地发现含通式(I)的活性物质的贮存稳定的水性输注或注射溶液，所述溶液含有其量足以溶解该活性物质并作为稳定剂的生理上可接受的酸或酸的混合物，以及任选其他适于非经肠胃给药的制剂赋形剂，所述溶液可制成无颗粒并长期稳定，与各种情况下的活性物质的性质无关，特别与污染的形态(contamination profile)无关。
本发明因此涉及贮存稳定的水性输注或注射溶液，其含通式(I)的活性物质， 其中R1、R2其可相同或不同，代表氢或任选取代的C1-C6-烷基，或R1和R2共同代表2-至5-员烷基桥，其可含有1至2个杂原子，R3代表氢或选自任选取代的C1-C12-烷基、C2-C12-链烯基、C2-C12-炔基和C6-C14-芳基的基团，或选自任选取代的及/或桥连的C3-C12-环烷基、C3-C12-环烯基、C7-C12-多环烷基、C7-C12-多环烯基、C5-C12-螺环烷基、C3-C12-杂环烷基，其包含1至2个杂原子，及包含1至2个杂原子的C3-C12-杂环烯基中的基团，或R1和R3或R2和R3共同代表饱和或不饱和的C3-C4-烷基桥，其可含1个杂原子，R4代表选自氢、-CN、羟基、-NR6R7和卤素的基团，或选自任选取代的C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C2-C6-炔基、C1-C5-烷氧基、C2-C5-链烯基氧基、C2-C5-炔基氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基亚磺酰基(alkylsulphoxo)和C1-C6-烷基磺酰基(alkylsulphonyl)中的基团，L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基及含1或2个氮原子的杂芳基，n代表0或1，m代表1或2，R5代表选自任选取代的吗啉基、哌啶基、哌嗪基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、茛菪烷基(tropenyl)、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基(sulphoxomorpholinyl)、4，4-二氧代硫吗啉基(sulphonylmorpholinyl)、硫吗啉基(thiomorpholinyl)，-NR8R9及氮杂环庚基的基团，R6、R7可相同或不同，代表氢或C1-C4-烷基，和R8，R9代表在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，代表氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基(arylsulphonyl)、C1-C4-烷基磺酰基(alkylsulphonyl)及-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团，或其互变异构体、外消旋物、对映体、非对映体或任选为生理上有效的衍生物或代谢物，以及其量足以溶解活性物质并作为稳定剂的生理上可接受的酸或酸的混合物，以及任选的其他适用于胃肠外给药的制剂赋形剂。
优选的贮存稳定溶液为含有式(I)的化合物的那些，其中R1至R4、R6和R7如前述定义，且L代表连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基及含1或2个氮原子的杂芳基，n代表1，m代表1或2，R5代表经氮原子连结至L的基团，所述基团选自任选取代的吗啉基、哌啶基、R8-哌嗪基、吡咯烷基、莨菪烷基(tropenyl)、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基(sulphoxomorpholinyl)、4，4-二氧代硫吗啉基(sulphonylmorpholinyl)、硫吗啉基，-NR8R9及氮杂环庚基，及R8、R9代表在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷基氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基-、C6-C14-芳基磺酰基-、C1-C4-烷基磺酰基-及C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基-，任选为其互变异构体、外消旋物、对映体、非对映体和其混合物的形式，且任选为其药理上可接受的酸加成盐。
还优选含有式(I)化合物的贮存稳定的溶液，其中R1至R4、R6和R7如前述定义，和L代表连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基及含1或2个氮原子的杂芳基，n代表0或1，m代表1或2，R5代表经碳原子连结至L的基团，其选自R8-哌啶基、R8R9-哌嗪基、R8-吡咯烷基、R8-哌嗪基羰基、R8-莨菪烷基(tropenyl)、R8-吗啉基及R8-氮杂环庚基，
和R8、R9代表在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基及-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团，任选为其互变异构体、外消旋物、对映体、非对映体和其混合物的形式，且任选为其药理上可接受的酸加成盐。
特别优选的为含有式(I)的化合物的贮存稳定溶液，其中L、m、n和R3至R9如前述定义，且R1、R2其可相同或不同，代表选自氢、Me、Et和Pr中的基团，或R1和R2共同形成C2-C4-烷基桥，任选以其互变异构体、外消旋物、对映体、非对映体和混合物的形式，且任选为其药理上可接受的酸加成盐。
特别优选的为含有式(I)化合物的贮存稳定溶液，其中R1、R2、m、n和R5至R8如前述定义，且R3代表选自任选取代的C1-C10-烷基、C3-C7-环烷基、C3-C6-杂环烷基和C6-C14-芳基中的基团，或R1和R3或R2和R3共同代表饱和或不饱和的C3-C4-烷基桥，其可含有1至2个杂原子，和R4代表选自氢、OMe、OH、Me、Et、Pr、OEt、NHMe、NH2、F、Cl、Br、O-炔丙基(propargyl)、O-丁炔基(butynyl)、CN、SMe、NMe2、CONH2、乙炔基(ethynyl)、丙炔基(propynyl)、丁炔基及烯丙基的基团，且L代表连接基团，其选自任选取代的苯基、苯甲基、环己基及支链C1-C6-烷基，
任选以其互变异构体、外消旋物、对映体、非对映体和其混合物的形式，且任选为其药理上可接受的酸加成盐。
本发明还涉及含有前述通式(I)的二氢蝶啶酮的贮存稳定溶液，该二氢蝶啶酮是选自下列通式(I)的二氢蝶啶酮

在各种情况下，表中所用的缩写X1、X2、X3、X4和X5表示与表中所示的通式中的位置的连接，以代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5。
长期稳定性定义为在25℃/60％r.h.和30℃/70％r.h.之下贮存期为至少12个月，优选为在25℃/60％r.h.和30℃/70％r.h.之下为至少36个月。
根据本发明的输注或注射溶液除了添加生理上可接受的酸或酸的混合物以外，并无增溶剂或有机助溶剂，特别是有机助溶剂。
优选的水性输注或注射溶液为其中溶解的式(I)活性物质含量为在1ml的输注或注射溶液中为0.1mg至10.0mg，特别是0.5至5mg的那些。
还优选水性输注或注射溶液，其中一种或多种用于稳定贮存及稀释的酸选自盐酸、醋酸、羟基醋酸、甲磺酸、乙磺酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、丙酸、抗坏血酸、马来酸、苹果酸、谷氨酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和乳酸，优选的为醋酸、盐酸、磷酸、酒石酸、柠檬酸和富马酸，特别优选为盐酸、柠檬酸和醋酸。
因pH相容性的原因，如

图1所示，优选的水性输注或注射溶液其生理上可接受的酸或酸的混合物与活性物质的摩尔比为最多3∶1，优选为1.25∶1至3∶1，特别优选为1.5∶1至3∶1，以确保pH为2.4以上。
优选本发明还涉及输注或注射溶液，其每毫升水性溶液含有0.1mg至10.0mg活性物质，和基于1mol的活性物质至多3.0mol的盐酸。盐酸的量优选为1.25mol至3.0mol，特别是1.5至2.4mol。
本发明还涉及4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯酰胺的输注或注射溶液，其含有1.6至2.0mol盐酸每摩尔活性物质。
根据本发明的输注或注射溶液还可加以修饰使其含有至多为10mg/ml的活性物质，及至多1摩尔盐酸每摩尔的活性物质，以及一种或多种其他生理上可接受的酸(acid(s))，条件是酸的总量为至少1.25mol每摩尔活性物质，但不超过3.0mol每摩尔活性物质。
每摩尔活性物质所需的最小酸量取决于该活性物质的浓度，和所使用的酸，并因此而非定值。然而，其可通过描述于例如EP 0219784和WO01/78732中的简单的测试而确定本发明的限定。
特别优选的水性输注或注射溶液含有一种或多种其他选自下列的配制助剂络合剂、结晶抑制剂、增稠剂、等渗剂、防腐剂、光保护剂及抗氧化剂。
合适的络合剂为例如真性(genuine)及取代的环糊精、EDTA、白蛋白以及柠檬酸及其盐和衍生物。
合适的结晶抑制剂为例如PVP、纤维素衍生物、藻酸盐、泊洛沙姆(Poloxamer)和聚山梨醇酯。
合适的增稠剂为例如葡聚糖、甘油和可溶性纤维素衍生物，特别是羧甲基纤维素和其盐，以及羟基烷基纤维素。
合适的等渗剂为例如NaCl、甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖及甘油、优选为NaCl、甘露醇、葡萄糖、蔗糖和甘油、特别优选为NaCl、甘露醇和葡萄糖。
合适的防腐剂为例如对-羟基苯甲酸、苄醇、山梨酸和苯甲酸的酯类。
合适的光保护剂为例如对-羟基苯甲酸的衍生物以及肉桂酸及其衍生物。
合适的抗氧化剂为例如抗坏血酸及其盐。
还特别优选的水性输注或注射溶液为其中输注或注射溶液的同渗质量摩尔浓度(osmolality)为200-600mOsmol/kg，优选为260-350mOsmol/kg。其可使用等渗剂，例如，NaCl、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、木糖醇、果糖和甘油或上述物质的混合物制备。优选的输注或注射溶液为其中除了活性物质、水、酸(acid(s))及其他配制助剂以外，还含有一定量的NaCl或其他等渗剂以使其溶液具有与人类或动物体的组织液等渗或稍微低渗或高渗的溶液。
最优选的水性输注或注射溶液的pH范围为2.4至5.3，优选为3.5至5.0，特别优选为3.9至4.5。
根据本发明的输注或注射溶液还适于用标准市售的用于补充电解质而无碳水化合物的输注或注射载体溶液进行稀释，所述载体溶液例如等渗NaCl溶液、等渗葡萄糖溶液、Ringer乳酸盐溶液等(Rote List 2004，Verzeichnis des Bundesverbandes der Pharmazeutischen Industrie e.V.，[Directory of Drug Products of the Members of the Federal Association of thePharmaceutical Industry]，Editio Cantor，Aulendorf/Württ.，主分类52.1和52.2.1)以达到所要求的浓度或剂量使之不具任何物理或化学的不兼容性。
还最优选的水性输注或注射溶液为含有1.25至3.0mol，优选为1.5至2.4mol盐酸每摩尔活性物质，基于100ml的输注或注射溶液含0.75至1.2gNaCl，优选为0.85至0.95g NaCl，且同渗质量摩尔浓度为260至350mOsmol/kg且pH为3.5至5.0。
本发明还涉及冻干物、浓缩物及悬浮液，其通过添加水可产生根据本发明的水性输注或注射溶液之一。
本发明还涉及用作具有抗增殖活性的药物组合物的根据本发明的输注或注射溶液。
本发明还涉及根据本发明的输注或注射用溶液在制备用以治疗肿瘤疾病、感染、炎症和自身免疫疾病的药物中的用途。
本发明还涉及用以治疗及/或预防肿瘤疾病、感染、炎症和自身免疫疾病，优选为肿瘤疾病的方法，其中对患者给药有效量的根据本发明的输注或注射溶液。
本发明还涉及根据本发明的输注或注射溶液的用途，其剂量范围相当于0.1至50mg活性物质/kg体重，优选为0.5至25mg活性物质/kg体重。
根据本发明的输注或注射溶液可贮存于适当的用于胃肠外制剂的玻璃容器或软塑料(flexible plastic)容器内，优选为非PVC材料，例如聚烯烃基制品，其可移出的体积为20至1000ml，优选为50至500ml。该容器可设计成对根据本发明的输注或注射溶液提供特殊保护，例如保护其避免光或氧。基本包装的特殊表面处理(例如玻璃容器表面的(烘烤)硅烷化)以改善根据本发明的输注或注射用溶液的稳定性，既不是必需的也不是有害的。软塑料容器可含有另外的保护，例如以铝箔包装的形式。
根据本发明的输注或注射溶液适于最终消毒，例如以加压蒸气，并因而可以特殊经济方式无菌且无热源地制备，并具有具有高度的产品安全性(低污染风险)。
根据本发明的输注或注射溶液可根据文献中已知的水性液体制剂的制备方法进行制备。
因此，本发明涉及用于制备根据本发明的输注或注射溶液的方法，所述输注或注射溶液每毫升含0.1至10mg式(I)的活性物质的。该方法的中将适当量的活性物质，任选以其盐的形式，和阴离子性抗衡离子、水合物或盐的水合物，或这些盐/水合物的混合物，以及相对于精确的[需要量]过量的生理上可接受的酸或酸的混合物混合，以溶解活性物质或其盐或水合物并防止物理上的不稳定性，其他配制赋形剂(formulating excipients)可任选添加，并用水(注射用)制成制品，从而得到每亳升输注或注射溶液含0.1至10mg活性物质的浓度范围。
制备输注或注射溶液时，也要注意该溶液要具有上述关于pH、酸量和同渗质量摩尔浓度的性质。如果使用盐，最好使用酸，所述酸的阴离子相当于该活性物质的盐或盐水合物的阴离子。
活性物质或其盐或水合物任选悬浮于水中，且每摩尔活性物质至多加入3.0摩尔的生理上可接受的酸或酸的混合物，优选为盐酸。
最后，加入其他赋形剂，特别是等渗剂，优选为NaCl，其还可任选在以水调节至所需的活性物质浓度之前通过在配制混合物内形成中和反应而进行。
根据本发明的输注或注射溶液的pH值可用(生理上)可接受的酸及/或碱，特别是NaOH调整至上述指定的pH值。
要加速制备过程，特别是溶解固态成份，可将溶液全部或部分稍稍加热，优选加热到20℃至80℃之间的温度。
根据本发明的溶液可通过浓缩溶液特别经济地制备。将制剂所需用量的活性物质与大多数(＞90％)的生理上可接受的酸或酸的混合物混合，并任选稍微加热及/或加入少量的水以进行溶解。再将此浓缩液以水稀释，再加入其他配制赋形剂，并最后以剩余的酸或水调整至额定重量。
溶液制备后，将其经0.2μm膜或深滤器过滤，虽然其最后用加压蒸气最终灭菌以去除任何可能存在的颗粒及/或热源。
适当过滤方法的细节可于现有技术中得知(M.J.Groves，ParenteralTechnology Manual，Interpharm Press Inc.，第二版，1988)。颗粒数受限于调控规格并经济上合适的，例如每包装6000个颗粒≥10μm及600个颗粒≥25μm(包装≤100mL)或每毫升25个颗粒≥10μm及3个颗粒≥25μm(包装＞100mL)、USP 27<788>。
本发明的溶液具有优良的贮存稳定性，其既不受限于可视或次可视范围的颗粒数，也不受限于活性物质的分解反应。
本发明的溶液对于活性物质的药物动力学特性具有足够的局部相容性(local compatibility)，并无溶血性。
本发明的输注或注射溶液是以下列实施例进行说明。这些实施例仅用于说明并不视为限制。
图1表明即用(ready-to-use)溶液的pH对酸/酸的混合物与活性物质的摩尔比的关系性，这里的活性物质为4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯酰胺(表1的示例46)。
为了要改善静脉内输注/注射的局部相容性，根据本发明的输注或注射溶液中的酸(类)对活性物质的最大摩尔比限定为最高3∶1，以确保其pH在2.4以上。
实施方式输注或注射的胃肠外溶液的实施例缩写WFI代表注射用水。
在下列通用实施例1中，活性物质为上文说明的通式(I)的二氢蝶啶酮之一。
通用的实施例1

下列实施例中，活性物质为4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯酰胺(表1的实施例46)。
实施例2 实施例3


实施例4 实施例5


实施例6 实施例7


实施例8 实施例9


实施例10实施例11


下列实施例中，活性物质为N-[反式-4-[4-(环丙基甲基)-1-哌嗪基]环己基]-4-[[(7R)-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-8-(1-甲基乙基)-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-苯酰胺(表1的实施例110)。
实施例12实施例13


实施例14实施例15


实施例16实施例17


根据本发明的化合物可按以下描述的合成方法A进行制备，因此通式(A1)至(A9)的取代基具有上述的含义。这方法是作为说明本发明而不使之受限于其内容。
方法A步骤1A将式(A1)的化合物与式(A2)的化合物反应得到式(A3)的化合物(图示1A)。此反应可根据WO 00/43369或WO 00/43372加以实施。化合物(A1)是可市售取得，例如购自City Chemical LLC，139 Allings Crossing Road，West Haven，CT，06516，USA。化合物(A2)的制备可通过文献中得知的方法，例如得自(a)F.Effenberger，U.Burkhart，J.Willfahrt Liebigs Ann.Chem.1986，314-333，(b)T.Fukuyama，C.-K.Jow、M.Cheung，Tetrahedron Lett.1995，36，6373-6374，(c)R.K.Olsen，J.Org.Chem.1970，35，1912-1915，(d)F.E.Dutton，B.H.Byung Tetrahedron Lett.1998，30，5313-5316；(e)J.M.Ranajuhi，M.M.Joullie Synth.Commun.1996，26，1379-1384。
图示1A 于步骤1A中，将1当量的化合物(A1)和1至1.5当量，优选为1.1当量的碱，优选为碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠或碳酸氢钠、碳酸钙，最优选为碳酸钾在任选与水混合的稀释剂中搅拌，所述稀释剂例如丙酮、四氢呋喃、乙醚、环己烷、石油醚或二噁烷，优选为环己烷或乙醚。
于0至15℃，优选为5至10℃的温度下，逐滴加入溶于有机溶剂中的1当量的式(A2)的氨基酸，所述有机溶剂例如丙酮、四氢呋喃、乙醚、环己烷或二噁烷。将该反应混合物于搅拌之下加热至18℃至30℃，优选约22℃，并再搅拌10至24小时，优选约12小时。然后将稀释剂蒸馏除去，将残留物与水合并并用有机溶剂萃取该混合物二至三次，所述有机溶剂例如乙醚或乙酸乙酯，优选为乙酸乙酯。将合并的有机萃取物干燥并将溶剂蒸馏除去。该残留物(化合物A3)可不经任何事先纯化直接使用于步骤2中。
步骤2A将步骤1A所得的化合物(A3)于硝基处还原并环化成式(A4)的化合物(图示2A)。
图示2A 于步骤2A中，将1当量的硝基化合物(A3)溶于酸中，优选冰醋酸、甲酸或盐酸，更优选冰醋酸，并加热至50至70℃，优选约60℃。然后加入还原剂，例如锌、锡或铁，优选为铁屑，直至该放热反应完成为止，并将该混合物于100至125℃之下，优选约117℃之下搅拌0.2至2小时。冷却至环境温度以后，将铁盐滤除并将溶剂蒸馏除去。使残留物溶于溶剂或溶剂混合物中，例如乙酸乙酯或二氯甲烷/甲醇9/1和半饱和的NaCl溶液中并经例如硅藻土过滤。将有机相干燥并蒸发。残留物(化合物(A4))可通过色谱法或通过结晶法加以纯化，或作为合成步骤3A的粗产物使用。
步骤3A如示3A所示，步骤2A中获得的化合物(A4)可通过如图示3A的亲电子性取代反应而形成式(A5)的化合物。
图示3A
在步骤3A中，将1当量的式(A4)的酰胺溶于有机溶剂中，并冷却至约-5至5℃，优选0℃，所述有机溶剂如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选二甲基乙酰胺。
然后加入0.9至1.3当量的氢化钠和0.9至1.3当量的甲基化试剂，例如碘甲烷。将该反应于约0至10℃，优选为约5℃之下搅拌0.1-3小时，优选为约1小时，并可任选于此温度下再静置12小时。将该反应混合物倒至冰水中并分离沉淀物。残留物(化合物(A5))可通过色谱法，优选在硅胶上或通过结晶法纯化，或在合成步骤4A中作为粗产物使用。
步骤4A可根据得知于文献例如(a)M.P.V.Boarland，J.F.W.McOmie J.Chem.Soc.1951，1218-1221或(b)F.H.S.Curd，F.C.Rose J.Chem.Soc.1946，343-348的方法4.1A，或得知于例如(a)Banks J.Am.Chem.Soc.1944，66，1131，(b)Ghosh和Dolly J.Indian Chem.Soc.1981，58，512-513或(c)N.P.Reddy和M.Tanaka Tetrahedron Lett.1997，38，4807-4810的方法4.2A的方法，将步骤3A中得到的化合物(A5)胺化以生成式(A9)的化合物(图示4A)。
图示4A
例如在方法4.1A中，将1当量的化合物(A5)和1至3当量，优选约2当量的化合物(A6)不加溶剂或在有机溶剂，例如环丁砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、甲苯、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜或二噁烷，优选为环丁砜中，在100至220℃，优选约160℃下加热0.1至4小时，优选为1小时。冷却之后，通过加入有机溶剂或溶剂混合物，例如乙醚/甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚，优选为乙醚/甲醇9/1，将产物(A9)结晶或通过色谱法纯化。
例如在方法4.2A中，将1当量的化合物(A5)和1至3当量的化合物(A6)与酸，例如1-10当量的10-38％盐酸及/或醇，例如乙醇、丙醇、丁醇，优选为乙醇，于回流温度下搅拌1至48小时，优选约5小时。
将沉淀的产物(A9)滤出并任选用水洗涤，干燥并从适当的有机溶剂中结晶出来。
例如于方法4.3A中，将1当量的化合物(A5)和1至3当量的化合物(A7)溶于溶剂中，所述溶剂例如甲苯或二噁烷，并与膦配体，例如2，2’-双-(二苯基膦基)-1，1’-联萘和钯催化剂，例如三(二亚苄基-丙酮)-合二钯(0)和碱，例如碳酸铯混合，并回流1-24小时，优选17小时。将反应混合物于例如硅胶上纯化并将产物(A8)自溶液中分离或通过适当的结晶获得。
将产物(A8)溶于适当的溶剂中，例如二噁烷中并与酸例如半浓(semiconcentrated)盐酸以例如溶剂与酸的比例3∶1混合。再将该混合物回流1-48小时，例如12小时并将生成的沉淀物分离。如需要用结晶法将该产物(A9)纯化。
步骤5A图示5A 例如将1当量的化合物(A9)用1当量的活化剂，例如O-苯并三唑基-N，N，N’，N’-四甲基脲输(tetramethyluronium)四氟硼酸酯(TBTU)和碱，例如约1.5当量二异丙基乙胺(DIPEA)溶解，所述二异丙基乙胺溶于有机稀释剂，例如二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基乙酰胺，优选为二氯甲烷或二甲基甲酰胺。加入1当量的胺(A10)之后，将该反应混合物于20℃至100℃之下搅拌0.1至24小时，优选约2小时。通过例如结晶或色谱纯化得到式(A11)的产物。
通式(I)的化合物可类似下列合成实施例合成。然而这些实施例仅作为进一步说明本发明方法的实例，而非将本发明限定于其主题内。
一些用以合成该化合物的中间体化合物的制备也在下文中加以说明。
酸的制备为了合成实施例94和实施例95的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z1。
将50.0g(0.48mol)的D-丙氨酸甲酯xHCl和49.1g(0.50mol)环己酮置于300mL二氯甲烷中并再与41.0g(0.50mol)醋酸钠和159.0g(0.75mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该混合物搅拌过夜并再加入300mL的10％碳酸氢钠溶液。以二氯甲烷萃取水相。合并的有机相以10％碳酸氢钠溶液洗涤，经Na2SO4干燥并蒸发。
产量72.5g的化合物Z1a(澄清液体)将72.5g的化合物Z1a置于500mL水中并加入溶于500mL乙醚的76.6g(0.39mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶。于-5℃之下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液。将该混合物于-5℃之下搅拌3小时并于环境温度之下再搅拌12小时。将有机相分离，经Na2SO4干燥。于蒸发时结晶出产物。
产量48.0g的化合物Z1b(黄色结晶)将48.0g的化合物Z1b溶于350mL冰醋酸并加热至60℃。将温度升至105℃的同时，加入47.5g铁粉。将该反应混合物于80℃之下搅拌3小时，再趁热经纤维素过滤，然后蒸发。将残留物于水和乙酸乙酯中搅拌，抽滤并以乙酸乙酯洗涤浅灰色的沉淀物。以稀氨水和水洗涤滤液，将有机相经Na2SO4干燥、经活性碳过滤，然后蒸发。又得到一些浅灰色的固体。
产量29.5g的化合物Z1c(浅灰色结晶)将32.1g的化合物Z1c置于300mL二甲基乙酰胺中并与13mL(0.2mol)碘甲烷混合。于-5℃之下，将6.4g(0.16mol)氢化钠以60％于矿物油中的分散体形式分批加入。2小时之后，将反应混合物倒至800mL冰水中。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量33.0g的化合物Z1d(米色结晶)将4.0g的化合物Z1d和2.3g(15mmol)的4-氨基-3-甲基苯甲酸悬浮于50mL乙醇和120mL水中，与2mL浓盐酸混合并回流48小时。将冷却所形成的沉淀物抽滤并以水、乙醇和乙醚洗涤。
产量2.9g的化合物Z1(无色结晶)为了合成实施例188和实施例203的化合物，首先如下述说明制备中间化合物Z2。
将128.2g(0.83mol)D-丙氨酸乙酯xHCl和71.5g(0.85mol)环戊酮的1500mL二氯甲烷溶液与70.1g(0.85mol)醋酸钠和265.6g(1.25mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该反应混合物搅拌12小时然后倒至1.5L的10％碳酸氢钠溶液内。以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量143.4g的化合物Z2a(无色油状物)
将66.0g的化合物Z2a置于500mL水中并与溶于500mL乙醚中的85.0g(0.44mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶混合。于-5℃下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液并将该反应混合物于环境温度之下搅拌48小时。以乙醚萃取水相，使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。暗红色固体与石油醚一起搅拌并抽滤。
产量88.0g的化合物Z2b(黄色结晶)将88.0g的化合物Z2b溶于1000mL冰醋酸中并于60℃下分批加入85g铁粉，同时温度升至110℃。将该混合物于60℃下搅拌1小时，再趁热经纤维素抽滤，然后蒸发。将该褐色固体与700mL水一起搅拌并抽滤。
产量53.3g的化合物Z2c(浅棕色结晶)将53.3g的化合物Z2c溶于300mL二甲基乙酰胺中并与13mL(0.21mol)碘甲烷混合。于-5℃下，将5.0g(0.21mol)氢化钠以60％于矿物油中的分散体形式分批加入。12小时之后，将反应混合物倒至1000mL冰水中并将所生成的沉淀物抽滤。
产量40.0g的化合物Z2d(无色结晶)将4.0g的化合物Z2d和2.8g(16mmol)的4-氨基-3-氯苯甲酸悬浮于25mL乙醇和60mL水中，与3mL浓盐酸混合并回流43小时。将冷却时所生成的沉淀物抽滤并用水、乙醇和乙醚洗涤。
产量0.9g的化合物Z2(无色结晶)为了合成实施例19、21、22、23、45、55、58、116、128、131、133、134、136、138、177、217、231、239、46、184、166和187的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z3。
将54.0g(0.52mol)D-2-氨基丁酸悬浮于540mL甲醇中并与132g(1.1mol)亚硫酰氯慢慢混合，同时以冰冷却。将该混合物回流1.5小时，然后蒸发。将剩余的油与540mL的叔丁基甲基醚混合，并将所得的无色结晶抽滤。
产量78.8g的化合物Z3a(无色结晶)将74.2g的化合物Z3a和43.5mL(0.49mol)环戊酮溶于800mL二氯甲烷中。于0℃下加入40.0g(0.49mol)醋酸钠和150.0g(0.71mol)三乙酰氧基硼氢化钠之后，将该混合物于环境温度之下搅拌12小时并然后加入500mL的20％碳酸氢钠溶液。以二氯甲烷萃取水相。以水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥并加以蒸发。
产量85.8g的化合物Z3b(淡黄色油状物)将40.0g的化合物Z3b和30.0g(0.22mol)碳酸钾悬浮于600mL丙酮中并与溶于200mL丙酮的45.0g(0.23mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶混合，同时以冰冷却。12小时之后，加入另外5.0g的2，4-二氯-5-硝基嘧啶并将该混合物搅拌3小时。将该反应混合物蒸发，溶解于800mL乙酸乙酯和600mL水中并以乙酸乙酯萃取水相。以水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥并蒸发。
产量75.0g的化合物Z3c(褐色油状物)将100g的化合物Z3c溶于650mL冰醋酸中并于70℃下分批加入20g铁粉。将该混合物于70℃下搅拌1小时，然后在100℃下搅拌1.5小时，再趁热经硅藻土过滤。将该反应混合物蒸发，溶于甲醇/二氯甲烷中，加于硅胶上并以乙酸乙酯进行Soxhlet提取来纯化。去除溶剂并将残留物与甲醇一起搅拌。
产量30.0g的化合物Z3d(浅棕色结晶)将25.0g的化合物Z3d和6.5mL(0.1mol)碘甲烷置于250mL二甲基乙酰胺中并于-10℃下加入以60％于矿物油中的分散体形式的3.8g(0.95mol)氢化钠。将该混合物于0℃搅拌20分钟，再于环境温度之下搅拌30分钟并最后加入冰。将该反应混合物蒸发并与300mL水混合。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量23.0g的化合物Z3e(无色固体)将6.0g的化合物Z3e和5.1g(31mmol)的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于90mL乙醇和350mL水中，与3.5mL浓盐酸混合并回流48小时。将该反应混合物蒸发，将残留物与甲醇/乙醚一起搅拌并将所生成的沉淀物抽滤。
产量6.3g的化合物Z3(浅米色结晶)为了合成实施例81、82、93及137的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z4。
将25.0g(0.19mol)1-氨基环丙烷-1-羧酸乙酯xHCl和16.8g(0.20mol)环戊酮溶于300mL二氯甲烷中并与16.4g(0.20mol)醋酸钠和61.7g(0.29mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该混合物搅拌过夜并再将该反应混合物倒至400mL的10％碳酸氢钠溶液中。以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量34.5g的化合物Z4a(无色油)将溶于350mL乙醚的42.5g(0.22mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶加至于34.5g的化合物Z4a在350mL水中的混合物中。在-5℃下，将混合物与80mL的10％碳酸氢钾溶液混合并将该混合物于环境温度下搅拌过夜。以乙醚萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量53.8g的化合物Z4b(褐色油状物)将20.1g的化合物Z4b溶于200mL冰醋酸中并于60℃下分批加入19.1g铁粉，同时温度升至100℃。将该混合物于60℃下搅拌3小时，再通过纤维素抽滤并蒸发。在水和乙酸乙酯中搅拌残留物并将该黄色沉淀抽滤。以稀氨水和水洗涤滤液，将有机相经Na2SO4干燥并蒸发。加入乙醚之后，结晶出产物。
产量4.0g的化合物Z4c(黄色结晶)将7.8g的化合物Z4c和2.6mL(0.04mol)碘甲烷溶于100mL二甲基乙酰胺中并于-5℃下分批加入以60％于矿物油中的分散体形式的1.5g(0.04mol)氢化钠。经2小时之后，将反应混合物倒至冰水中并将所生成的沉淀物抽滤。
产量7.5g的化合物Z4d(浅棕色结晶)将3.0g的化合物Z4d和1.9g(11mmol)的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于40mL乙醇和80mL水中，与2mL浓盐酸混合并回流20小时。然后加入另外0.5g的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸并将该混合物回流48小时。将冷却时产生的沉淀物抽滤并用水、乙醇和乙醚洗涤。
产量2.1g的化合物Z4(无色结晶)为了合成实施例162、43、53、161、202、211、215和212的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z5。
将73.4mL(0.5mol)的2-溴异丁酸乙酯、87.1mL(0.75mol)3-甲基-1-丁胺、82.5g(0.6mol)碘化钠和76.0g(0.6mol)碳酸钾于1000mL乙酸乙酯中的混合物回流3天。滤除存在的任何盐并将滤液蒸发。
产量97.0g的化合物Z5a(红色油状物)将49.0g(0.25mol)的2，4-二氯-5-硝基嘧啶和38.3g(0.28mol)碳酸钾悬浮于500mL丙酮中并于0℃下与溶于375mL丙酮的93.0g的化合物Z5a混合。将该反应混合物于环境温度下搅拌过夜，过滤并蒸发。用水洗涤溶于乙酸乙酯中的残留物并将有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量102.7g的化合物Z5b(褐色油状物)将22.7g的化合物Z5b溶于350mL冰醋酸中并于60℃下分批加入17.4g铁粉。加完之后，将该混合物回流0.5小时，趁热过滤并蒸发。将残留物溶解于200mL二氯甲烷/甲醇(9∶1)中并用氯化钠溶液洗涤。将有机相通过硅藻土抽滤，经MgSO4干燥，蒸发并以柱色谱法纯化(洗脱液乙酸乙酯/环己烷1∶1)。
产量1.9g的化合物Z5c(无色结晶)将1.9g的化合物Z5c溶于32mL二甲基乙酰胺中并在用冰冷却的同时与呈60％分散于矿物油的0.3g(7mmol)氢化钠混合。10分钟后加入0.5mL(7mmol)的碘甲烷并将该混合物于环境温度下搅拌3小时。将该反应混合物蒸发并与水混合。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量1.6g的化合物Z5d(无色结晶)将14.0g的化合物Z5d和10.0g(0.06mol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于200mL二噁烷和80mL水中，与10mL浓盐酸混合并回流40小时。将冷却时生成的沉淀物抽滤并以水、二噁烷和乙醚洗涤。
产量13.9g的化合物Z5(无色结晶)为了合成实施例88、194、229和89的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z6。
将6.0g(0.06mol)L-2-氨基丁酸置于80mL的0.5M硫酸中并于0℃下与溶于15mL水中的5.5g(0.08mol)亚硝酸钠混合。将反应混合物于0℃下搅拌22小时，与硫酸铵混合并过滤。将滤液以乙醚萃取并将合并的有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量6.0g的化合物Z6a(黄色油状物)用冰冷却的同时，将200mL甲醇相继与65.0mL(0.89mol)亚硫酰氯和76.0g的化合物Z6a于50mL甲醇中混合。将所得混合物于0℃下搅拌1小时并于环境温度下搅拌2小时并再于0℃下，以真空去除甲醇和剩下的亚硫酰氯。
产量40.0g的化合物Z6b(黄色油状物)将30.0mL(0.17mol)三氟甲磺酸酐置于150mL二氯甲烷中并于以冰冷却的同时，于一小时内加入20.0g的化合物Z6b和14.0mL(0.17mol)吡啶于50mL二氯甲烷中的溶液。将该混合物于环境温度下搅拌2小时，将所生成的所有盐抽滤并再用以100mL水洗涤。将有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量42.0g的化合物Z6c(淡黄色油状物)将于200mL二氯甲烷中的42.0g的化合物Z6c于一小时内，在用冰冷却的同时逐滴加至15.5mL(0.17mol)苯胺和24.0mL(0.17mol)三乙胺的400mL二氯甲烷的溶液中。将该混合物于环境温度下搅拌1小时并于35℃下再搅拌2小时。以水洗涤该反应混合物，经MgSO4干燥并蒸发。将所剩的残留物经蒸馏纯化(95-100℃、1*10-3毫巴)。
产量14.0g的化合物Z6d(无色油状物)将14.0g的化合物Z6d和16.0g(0.1mol)碳酸钾悬浮于100mL丙酮中并于10℃下与16.0g(0.08mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶混合。将该混合物于40℃下搅拌4小时，将生成的所有盐抽滤并将滤液蒸发。残留物溶于300mL乙酸乙酯中并用水洗涤。有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量31.0g的化合物Z6e(褐色油状物)将31.0g的化合物Z6e溶于200mL冰醋酸中并于60℃分批加入10g铁粉，同时温度升至85℃。将该混合物于60℃下再搅拌1小时，经硅藻土过滤并蒸发。残留物用甲醇提取。
产量4.5g的化合物Z6f(褐色结晶)将于矿物油中的60％分散体形式的0.6g(16mmol)的氢化钠于-20℃下分批加至4.5g的化合物Z6f和1.0mL(16mmol)碘甲烷于100mL二甲基乙酰胺中的混合物中。1小时之后，将该反应混合物与50mL水混合并蒸发。将残留物与200mL水一起搅拌，并将沉淀物抽滤并用石油醚洗涤。
产量4.5g的化合物Z6g(无色结晶)将1.5g的化合物Z6g和1.4g(8mmol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯的30mL甲苯的悬浮液与0.4g(0.6mmol)的2，2’-双-(二苯基膦基)-1，1’-联萘(binaphthyl)、0.23g(0.3mmol)三(二亚苄基丙酮)-合二钯(0)和7.0g(21mmol)碳酸铯混合并回流17小时。将该反应混合物加于硅胶上并以柱色谱法纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇9∶1)。
产量1.7g的化合物Z6h(黄色结晶)将1.7g的化合物Z6h溶于50mL二噁烷中，与15mL半浓盐酸混合并回流12小时。冷却之后将所生成的沉淀物抽滤。
产量1.1g的化合物Z6(无色固体)为了合成实施例26、20、32、56、101、112及209的化合物，首先如下文说明制备中间化合物Z7。
将50.0g(0.36mol)的D-丙氨酸甲酯xHCl悬浮于500mL二氯甲烷和35mL丙酮中并与30.0g(0.37mol)醋酸钠和80.0g(0.38mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该混合物搅拌12小时并再倒至400mL 10％碳酸氢钠溶液中。使有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量51.0g的化合物Z7a(黄色油状物)
将51.0g的化合物Z7a在450mL水中的悬浮液与450mL乙醚中的80.0g(0.41mol)2，4-二氯-5-硝基吡啶混合。于-5℃下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液。将反应混合物搅拌3小时，使有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量74g的化合物Z7b(黄色油状物)将18.6g的化合物Z7b溶于200mL冰醋酸中并于60℃下，分批加入20.0g的铁粉。将该混合物于60℃下搅拌2小时，然后经纤维素抽滤。将残留物溶于乙酸乙酯中并用水和浓氨水洗涤。将有机相经Na2SO4干燥并蒸发。使残留物自乙醚中结晶。
产量9.8g的化合物Z7c(无色结晶)将17.0g的化合物Z7c和7mL(0.1mol)碘甲烷溶于200mL二甲基乙酰胺中并于-5℃下与于矿物油中的60％分散体形式的4.0g(0.1mol)氢化钠混合。将该反应混合物搅拌30分钟并然后倒至300mL冰水中。将所生成的沉淀物抽滤并用石油醚萃取。
产量14.8g的化合物Z7d(米色结晶)将0.9g的化合物Z7d和1.5g(9mmol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸在210℃加热30分钟。冷却之后，残留物与乙酸乙酯一起搅拌并将所得的沉淀物抽滤。
产量1.2g的化合物Z7(灰色结晶)下列酸类能通过例如类似于上述的合成方法制备。

氨基组分L-R5的合成下列胺，1，1-二甲基-2-二甲基氨基-1-基-乙胺和1，1-二甲基-2-哌啶-1-基-乙胺可如下获得 根据下列参考文献可制备所述化合物(a)S.Schuetz等人，Arzneimittel-Forschung 1971，21，739-763，(b)V.M.Belikov等人，Tetrahedron1970，26，1199-1216和(c)E.B.Butler和McMillan J.Amer.Chem.Soc.1950，72，2978。
其他胺能用改进的上述文献中的方法制备如下。
1，1-二甲基-2-吗啉-1-基-乙胺。
取8.7mL吗啉和9.3mL 2-硝基丙烷，并以冰冷却反应，慢慢逐滴加入7.5mL甲醛(37％)和4mL的0.5mol/L NaOH溶液(＜10℃)。再将该混合物于25℃下搅拌1小时并于50℃搅拌1小时。用水和乙醚处理该溶液并用乙醚萃取水相3次。使合并的有机相经NaSO4干燥并与二噁烷中的HCl(4mol/l)混合，将所生成的沉淀物抽滤。产量21.7g白色粉末。
将5g的白色粉末溶于80mL甲醇中并加入2g RaNi，于35℃和50psi下以氢处理40分钟。得到3.6g的1，1-二甲基-2-吗啉-1-基-乙胺。
下列的胺能类似制备。
1，1-二甲基-N-甲基哌嗪-1-基-乙胺 1，1-二甲基-2-吡咯烷-1-基-乙胺 1，3-二吗啉-2-氨基-丙烷 将5g由Messrs.Aldrich得到的1，3-二吗啉-2-硝基丙烷溶于80mL甲醇中并加入2g RaNi，于30℃和50psi下以氢处理5.5小时。这获得4.2g的1，3-二吗啉-2-氨基-丙烷。
4-氨基苄基吗啉 此胺的制备如下列参考文献所述S.Mitsuru等人，J.Med.Chem.2000，43，2049-2063。
4-氨基-1-四氢-4H-吡喃-4-基-哌啶 将20g(100mmol)的4-叔丁氧羰基-氨基哌啶溶于250mL CH2Cl2中并于室温下与10g(100mmol)四氢-4H-吡喃-4-酮和42g(200mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。加入水和碳酸钾，将有机相分离出来，干燥并于真空中将溶剂蒸出。将残留物溶于200mL CH2Cl2中并于室温下与100mL三氟醋酸一起搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物溶解于CHCl3处理并再次蒸发，然后溶于丙酮中并用HCl乙醚溶液将盐酸盐沉淀。产量14.3g(56％)。
顺式-和反式-4-吗啉代-环己胺 联苄基(dibenzyl)-4-吗啉代-环己胺将3.9g(30mmol)4-联苄基环己酮(dibenzylcyclohexanone)溶于100mLCH2Cl2中并于室温下与3.9g(45mmol)吗啉和9.5g(45mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相，将其干燥并于真空中将溶剂去除。此残留物经硅胶柱纯化(约20mL硅胶；约500mL乙酸乙酯90/甲醇10+1％浓氨水)。将合适的级分于真空中蒸发。产量6.6g(60％)顺式-异构体和2g(18％)反式-异构体。
或者可通过系列方法制备反式-联苄基-4-吗啉代-环己胺。
将33g(112mmol)4-联苄基环己酮溶于300mL MeOH中，与17.4g(250mmol)盐酸羟胺混合并于60℃下搅拌4小时。将溶剂真空蒸发，与500mL水和50g碳酸钾混合并用300mL二氯甲烷萃取两次。将有机相干燥，于真空中蒸发，将残留物自石油醚中结晶，溶于1.5L EtOH中并加热至70℃。分批加入166g钠并将该混合物回流至钠溶解为止。于真空中将溶剂去除，将残留物与100mL水混合并以400mL乙醚萃取两次。用水洗涤有机相，干燥并于真空中蒸发并使用柱(大约1.5L硅胶；大约2L乙酸乙酯80/甲醇20+2％浓氨水)分离该反式-异构体。产量12.6g(41.2％)。
将6.8g(23mmol)反式-1-氨基-4-联苄基氨基环己烷溶于90mL DMF中并于100℃下与5mL(42mmol)的2，2’-二氯乙基乙醚和5g碳酸钾一起搅拌8小时。冷却之后，加入30mL水，将沉淀的结晶抽滤并通过短柱纯化(大约20mL硅胶、大约100mL乙酸乙酯)。使残留物自甲醇和浓HCl中以二盐酸盐的形式结晶。产量7.3g(72.4％)。
反式-4-吗啉代-环己胺将7.2g(16.4mmol)的反式-联苄基-4-吗啉代-环己胺溶于100mL的MeOH中并于30-50℃下，于1.4g Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量3.9g(93％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-哌啶子基(piperidino)-环己胺 反式-联苄基-4-哌啶子基-环己胺将2.0g(6.8mmol)反式-1-氨基-4-联苄基氨基环己烷(参见实施例2)溶于50mL DMF中并于室温下与1.6g(7mmol)1，5-二溴丙烷和2g碳酸钾搅拌48小时。将该混合物冷却，与水混合，用100mL二氯甲烷萃取两次，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经柱(大约100mL硅胶、大约500mL乙酸乙酯80/甲醇20+1％浓氨水)纯化。将需要的部分于真空中蒸发并自石油醚中结晶。产量1.2g(49％)。
反式-4-哌啶子基-环己胺将1.7g(4.8mmol)的反式-联苄基-4-哌啶子基-环己胺溶于35mL的MeOH并于20℃下，在350mg的Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量1.1g(78％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己胺 将4.1g(25.3mmol)4-联苄基环己酮溶于50mL二氯甲烷中并于室温下与7.4g(25.3mmol)N-苯基哌嗪和7.4g(35mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经硅胶柱(乙酸乙酯80/甲醇20+0.5％浓氨水)纯化。产量1.7g(15.8％)顺式-异构体和0.27g(2.5％)反式-异构体。
反式-4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己胺将270mg(0.61mmol)反式-联苄基-[4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己基]-胺溶于5mL MeOH中并于20-30℃下在40mg Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量110mg(69％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺
将9.8g(33.4mmol)4-联苄基环己酮溶于100mL二氯甲烷中并于室温下与5.6g(40mmol)N-环丙基甲基哌嗪和8.5g(40mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相并干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经硅胶柱(大约50mL硅胶、大约3L乙酸乙酯95/甲醇5+0.25％浓氨水)纯化。将合适的级分于真空中蒸发。将较快洗脱的顺式化合物自乙酸乙酯中结晶。使反式化合物自乙醇+浓HCl中结晶。产量8.5g(61％)顺式-异构体和2.2g(13％)反式-异构体。
顺式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺将8.5g(20mmol)顺式-联苄基-[4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己基]-胺溶于170mL MeOH并于30-50℃下在1.7g Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量4.4g(91％)。
反式-异构体可以类似的方法制备。
合成实施例实施例152将0.15g的化合物Z10、0.14g TBTU、0.13mL DIPEA溶于二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入90μL的1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。通过添加石油醚、乙醚和乙酸乙酯至有机相中将产物沉淀。产量0.16g的米色固体。
实施例164将0.10g的化合物Z10、0.1g TBTU、0.08mL DIPEA溶于4mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入44μL二甲基氨基丙胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。再以二氯甲烷稀释该溶液并以水萃取。通过加石油醚、乙醚和丙酮至有机相以使产物沉淀出来。产量0.08g黄色固体。
实施例242将0.15g的化合物Z10、0.14g TBTU、0.13mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入75μL的1-(2-氨基乙基)哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。再以二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。通过加石油醚、乙醚和乙酸乙酯至有机相以沉淀出产物。产量0.14g黄色固体。
实施例188将0.1g的化合物Z2、0.09g TBTU、0.05mL DIPEA溶于15mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入33mg 1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下再搅拌3小时。以20mL水萃取该溶液，然后于真空中蒸发。用乙醚使产物结晶。产量0.047g白色结晶。
实施例203将0.1g的化合物Z2、0.09g TBTU、0.5mL DIPEA溶于15mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入50mg 4-氨基-1-苄基哌啶并将该混合物于25℃下搅拌3小时。以20mL水萃取该溶液，然后于真空中蒸发。再将残留物于硅胶上进行色谱法分离并使分离的产物自乙醚中结晶。产量0.015g白色结晶。
实施例94将0.17g的化合物Z1、0.19g TBTU、0.11mL DIPEA溶于50mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入63mg的1-甲基-4-氨基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌17小时。将50mL水和1g碳酸钾加至该溶液中并使用相分离柱(phase separation cartridge)将有机相分离，然后于真空中蒸发。再通过硅胶色谱将产物纯化并使用乙醚使纯化的产物结晶。产量0.1g白色结晶。
实施例95将0.17g的化合物Z1、0.19g TBTU、0.11mL DIPEA溶于50mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入77mg外-3-β-氨基-茛菪烷并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。将50mL水和1g碳酸钾加至该溶液中并使用相分离柱将有机相分离，然后于真空中蒸发。再通过硅胶色谱将产物纯化并使用乙醚使经纯化的产物结晶。产量0.03g白色结晶。
实施例46将0.15g的化合物Z3、0.12g TBTU、0.12mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入50mg的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌2.5小时。然后用水萃取该溶液，然后蒸发。将残留物溶于温乙酸乙酯中并使用乙醚和石油醚使之结晶。产量0.025g白色结晶。
实施例80将0.2g的化合物Z8、0.2g TBTU、0.1mL DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入100mg的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。以稀碳酸钾溶液萃取该溶液并蒸发。用乙醚使残留物结晶。产量0.12g白色结晶。
实施例190将0.2g的化合物Z8、0.2g TBTU、0.3mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并将该混合物于25℃下搅拌1小时。然后加入0.13g 4-氨基-1-苄基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌1小时。以10mL二氯甲烷稀释该溶液并以20mL水萃取。然后将该产物于硅胶上纯化并用乙酸乙酯和乙醚使之结晶。产量0.23g的化合物Z8。
将0.23g苄基胺Z8溶于10mL甲醇中，与50mg Pd/C混合并于25℃和3巴下氢化3小时。加入石油醚和乙酸乙酯得到白色结晶。将其进行硅胶色谱分离并用乙酸乙酯和乙醚使之结晶。产量0.075g白色结晶。
实施例196将0.1g的化合物Z10、0.09g的TBTU、0.3mL的DIPEA溶于4mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入67mg的1，1-二甲基-N-甲基哌嗪-1-基-乙胺胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。以二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。然后将其进行硅胶色谱分离并将残留物溶于丙酮中，与HCl乙醚溶液混合并分离所生成的沉淀物。产量0.09g淡黄色固体。
实施例166将0.1g的化合物Z10、0.11g的TBTU、0.14mL的DIPEA溶于2mL二甲基甲酰胺中并于50℃下搅拌3小时。然后加入55mg的4-吗啉代甲基苯胺。再于17小时内将该反应冷却至环境温度。真空中去除二甲基甲酰胺，将残留物溶解于二氯甲烷中并用水萃取。然后将其进行硅胶色谱分离并使产物自乙酸乙酯和乙醚中结晶。产量0.06g淡黄色结晶。
实施例81将0.2g的化合物Z4、0.2g的TBTU、0.1mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.1g的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。用碳酸钾水溶液萃取该溶液并蒸发。用乙醚使产物结晶。产量0.16g白色结晶。
实施例162将0.1g的化合物Z5、0.07g的TBTU、0.15mL的DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入0.04g 1-甲基-4-氨基哌啶并将混合物于25℃下再搅拌2小时。再用15mL二氯甲烷稀释该溶液并用20mL水萃取。将残留物溶于MeOH和丙酮中并与1mL HCl乙醚溶液混合并蒸发。使用乙醚、乙酸乙酯和少量MeOH结晶得到产物。产量0.1g白色结晶。
实施例88将0.1g的化合物Z6、0.12g的TBTU、0.12mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.04g 1-甲基-4-氨基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用10mL二氯甲烷稀释该溶液并用10mL水萃取。使用乙醚、乙酸乙酯和石油醚结晶获得产物。产量0.6g白色结晶。
实施例89将0.1g的化合物Z6、0.08g的TBTU、0.08mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入37μL的N，N-二甲基新戊二胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用10mL二氯甲烷稀释该溶液并用10mL水萃取。然后将该产物进行硅胶色谱分离并使用乙酸乙酯、乙醚和石油醚结晶。产量0.005g白色结晶。
实施例26将0.15g的化合物Z7、0.16g的TBTU、1mL的DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.1g的4-吗啉代环己胺并将该混合物于25℃下再搅拌17小时。然后将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合，分离沉淀物并用水洗涤。将沉淀物溶于二氯甲烷并再次蒸发。使用乙酸乙酯使产物结晶。产量0.1g白色结晶。
实施例9将150mg的化合物Z9及93mg胺溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg的TBTU和1mL的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合。将沉淀物抽滤，用水洗涤，溶于二氯甲烷中，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯中结晶出来。产量82.0mg。
实施例16将150mg的化合物Z8及73mg反式-4-哌啶子基-环己胺溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg(0.50mmol)的TBTU和1mL的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合。将沉淀物抽滤，用水洗涤，溶于二氯甲烷中，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯中结晶出来。产量87.0mg。
实施例37将100mg的化合物Z9和42mg的3-氨基-1-乙基-吡咯烷溶于10mL二氯甲烷中并于室温下与90mg的TBTU和0.5mL的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合。将沉淀物抽滤，用水洗涤，溶于二氯甲烷中，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯/石油醚中结晶出来。产量24.0mg。
实施例120将100mg的化合物Z11和73mg的4-氨基-1-四氢-4H-吡喃-4-基-哌啶溶于10mL二氯甲烷中并将其于室温下与90mg的TBTU和0.5mL的DIPEA一起搅拌1小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合。将沉淀物抽滤，用水洗涤，溶于二氯甲烷中，干燥并于真空中将溶剂去除。使残留物自乙酸乙酯/石油醚中结晶。产量89mg。
实施例212将150mg的化合物Z5和150mg反式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺(盐酸盐)溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg的TBTU和2mL的DIPEA搅拌2小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液混合。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经柱(20mL硅胶、300mL乙酸乙酯90/甲醇10+2％浓氨水)纯化。将合适的级分于真空中蒸发并自乙酸乙酯中结晶。产量140mg。
实施例232将390mg的化合物Z11和240mg反式-4-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-环己胺溶于2.5mL NMP中并于室温下与482mg的TBTU和1mL三乙胺搅拌2小时。然后加入100mL水和200mg碳酸钾并将沉淀物抽滤，用水洗涤并经硅胶柱纯化。将适当的级分于真空中蒸发，溶于2mL二氯甲烷中，与2mL三氟醋酸混合并于室温下搅拌2小时，再与另外的100mL水和200mg碳酸钾混合并将沉淀物抽滤并用水洗涤。然后经硅胶柱纯化该沉淀物。将合适的级分于真空中蒸发并使残留物自乙醇和浓盐酸中结晶。产量95mg。
实施例213将60mg的实施例232的化合物溶于10mL乙酸乙酯中并于室温下与1mL醋酸酐和1mL三乙胺搅拌30分钟。于真空中将溶剂去除，将残留物与水和氨混合，将沉淀的结晶抽滤并以水和少量冷丙酮洗涤。产量40mg。
实施例218将1.2g的化合物Z9和0.5g的1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺溶于20mL二氯甲烷中并于室温下与1.28g的TBTU和4mL三乙胺一起搅拌12小时。然后加入50mL水和0.5g碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中蒸发。使残留物自乙酸乙酯中结晶，与25mL的1N盐酸和20mL甲醇混合并于50℃下搅拌30分钟。于真空中去除甲醇，将沉淀物抽滤，用水洗涤并干燥。将残留物溶于20mL二氯甲烷中并于室温下与0.5g硫代吗啉和0.5gNaBH(OAc)3搅拌12小时。然后加入与水和碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物于硅胶柱上纯化。将合适的级分于真空中蒸发并用HCl乙醚溶液将氯化氢进行沉淀。产量86mg反式-异构体；无定形粉末。
实施例187将溶于5mL二氯甲烷的200mg的化合物Z3与0.1mL二异丙基乙胺和180mg的TBTU混合并搅拌30分钟。然后加入191mg的4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基胺并将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物与水混合并以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。残留物以柱色谱法纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇100∶7)。
产量128mg(淡黄色结晶)。
表1中所列的式(I)的化合物尤其用类似于前述的方法得到。表1中在各种情况下的缩写X1、X2、X3、X4和X5代表连接至表1所示通式的位置，代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5。
表1






















































权利要求
1.贮存稳定的水性输注或注射溶液，其含有通式(I)的活性物质，或其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体或任选为生理上有效的衍生物或代谢物，以及其量足以溶解活性物质并作为稳定剂的生理上可接受的酸或酸的混合物，任选和其他适用于胃肠外给药的配制赋形剂， 其中R1、R2其可相同或不同，代表氢或任选取代的C1-C6-烷基，或R1和R2共同代表2-至5-员烷基桥，其可含有1至2个杂原子，R3代表氢或选自任选取代的C1-C12-烷基、C2-C12-链烯基、C2-C12-炔基和C6-C14-芳基中的基团，或选自任选取代的及/或桥连的C3-C12-环烷基、C3-C12-环烯基、C7-C12-多环烷基、C7-C12-多环烯基、C5-C12-螺环烷基，包含1至2个杂原子的C3-C12-杂环烷基，及包含1至2个杂原子的C3-C12-杂环烯基中的基团，或R1和R3或R2和R3共同代表饱和或不饱和的C3-C4-烷基桥，其可含有1个杂原子，R4代表选自氢、-CN、羟基、-NR6R7和卤素中的基团，或选自任选取代的C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C2-C6-炔基、C1-C5-烷氧基、C2-C5-链烯基氧基、C2-C5-炔基氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基亚磺酰基和C1-C6-烷基磺酰基中的基团，L代表连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基和含有1或2个氮原子的杂芳基，n代表0或1，m代表1或2，R5选自任选取代的吗啉基、哌啶基、哌嗪基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、莨菪烷基、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基、4，4-二氧代硫吗啉基、硫吗啉基，-NR8R9及氮杂环庚基的基团，R6、R7可相同或不同，代表氢或C1-C4-烷基，和R8、R9代表在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，代表氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基-及C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
2.如权利要求1的贮存稳定的水性输注或注射溶液，其中二氢蝶啶酮是选自下列通式(I)的二氢蝶啶酮 在各种情况下，表中所用的缩写X1、X2、X3、X4和X5表示与表中所示的通式中的位置的连接，以代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5。
3.如权利要求1或2的水性输注或注射溶液，其中1ml输注或注射溶液中所溶解的活性物质含量为0.1mg至10.0mg。
4.如权利要求1至3中任一项的水性输注或注射溶液，其中一种或多种用作贮存及稀释稳定剂的酸选自盐酸、醋酸、羟基醋酸、甲磺酸、乙磺酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、丙酸、抗坏血酸、马来酸、苹果酸、谷氨酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和乳酸。
5.如权利要求1至4中任一项的水性输注或注射溶液，其中该生理上可接受的酸或酸的混合物与活性物质的摩尔比最高为3∶1。
6.如权利要求1至5中任一项的水性输注或注射溶液，其中该溶液含有一种或多种其他选自下列的配制赋形剂络合剂、光保护剂、结晶抑制剂、增稠剂、等渗剂、抗氧化剂和正常水合剂。
7.按权利要求1至6中任一项的水性输注或注射溶液，其中输注或注射溶液的同渗质量摩尔浓度为200-600mOsmol/kg。
8.按权利要求1至7中任一项的水性输注或注射溶液，其pH值为2.4至5.3。
9.按权利要求1至8中任一项的水性输注或注射溶液，其中，所述溶液含有1.25至3.0mol盐酸每mol活性物质，基于100ml输注或注射溶液含有0.75至1.2g NaCl，并且其同渗质量摩尔浓度为260至350mOsmol/kg以及pH值为3.5至5.0。
10.冻干物、浓缩物和悬浮液，其中，通过加入水所述冻干物、浓缩物和悬浮液产生根据权利要求1至9任一项的水性输注或注射溶液。
11.根据权利要求1至9中任一项的水性输注或注射溶液，其用作具有抗增殖活性的药物组合物。
12.根据权利要求1至9中任一项的水性输注或注射溶液在制备用于治疗肿瘤疾病、感染、炎症和自身免疫疾病的药物组合物中的用途。
13.用于治疗和/或预防肿瘤疾病、感染、炎症和自身免疫疾病的方法，其中，向患者给药有效量的如权利要求1至9的输注或注射溶液。
14.根据权利要求1至9中任一项的输注或注射溶液的用途，其相当于0.1mg至50mg活性物质/kg体重的剂量范围。
15.适于胃肠外制剂的玻璃容器或软塑料容器，其含有权利要求1至9中任一项的输注或注射溶液。
全文摘要
本发明涉及具有长贮存期的水性输注或注射溶液，其含有通式(I)的活性物质，其中基团L、R
文档编号A61K31/4985GK101039676SQ200580035273
公开日2007年9月19日 申请日期2005年8月11日 优先权日2004年8月14日
发明者德特莱夫·莫尔, 克劳斯·维特, 弗里特乔夫·特劳尔森 申请人:贝林格尔·英格海姆国际有限公司