美白剂的制作方法

专利名称：：美白剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及美白剂，更详细而言，涉及以南烛树脂醇类作为美白有效成分的美白剂，所述南烛树脂醇类能有效地预防或治疗作为皮肤褐斑、雀斑等的成因的黑色(melanine)色素的生成沉着，以及有效地促进已沉着的该色素的减少。此外，还涉及具备以下功能的饮食品、香妆品、医药品因含有该美白有效成分，从而可以阻碍酪氨酸酶的作用、及/或阻碍因紫外线诱发皮肤产生的促黑素细胞激素所引起的黑素细胞的活性、抑制黑色(melanine)色素的生成、或促进己沉着的该色素的减少。
背景技术：
：皮肤的褐斑、雀斑已成为严重的皮肤困扰。特别是褐斑、雀斑以及日晒后皮肤上的黑色色素沉着会随年龄增加而产生、增加，同时越来越难以消除，因而成为中高年龄层人们无法避免的烦恼。皮肤上沉着的黑色色素几乎全是黑色素，其在表皮和真皮之间的黑素细胞(melanocyte)内的黑素体(melanosome)中产生，生成的黑素通过渗透作用向相邻细胞扩散。以往，黑素细胞内发生的生化反应如下所述。即必须脂肪酸酪氨酸在酪氨酸酶的作用下，生成多巴醌，其在酶或非酶的氧化作用下，经红色色素及无色色素转变为黑色的黑素。此过程即为黑色素的主要成因。因此，阻碍或抑制该反应第一阶段中酪氨酸酶的作用，即可抑制黑素生成，所以，探求能够阻碍或抑制酪氨酸酶作用的药物，对阻止或抑制因酪氨酸酶作用而生成的黑素而言极为重要。基于上述观点，对多种化合物进行了研究、开发，市场上出现了可期待美白效果的以美白剂为名的药物。其中，己知有例如与鞣花酸相关的物质(参照专利文献l);如抗坏血酸、抗坏血酸衍生物(参照专利文献2)这样的物质，其主要通过还原已变黑的黑素来淡化黑色；如曲酸(参照专利文献3)、氢醌(参照非专利文献1)以及熊果苷这样的物质，其直接作用于黑素生成细胞，阻碍酪氨酸酶活性，从而阻碍黑素的生成，抑制黑色；如胎盘提取液(placentaextract)这样的物质等，其通过促进新陈代谢，将黑色的黑色素排出体外(参照专利文献4)。近年来，据报道紫外线诱发皮肤产生的促黑素细胞激素(a-melanocytestimulatinghormone,以下称为"a-MSH")是褐斑、雀斑的产生原因。该a-MSH是黑素细胞活化因子之一，借助黑素细胞上的受体MC1R(melanocortin-lrec印tor)促进黑素合成(参照非专利文献25)。还证实a-MSH的产生以及MC1R的表达会因紫外线照射而增加(参照非专利文献67)。由此可认为能阻碍因a-MSH引起的黑素细胞活化的物质，可以从细胞外高效地发挥作用，达到很好的美白效果。作为此类型美白剂，已知有广东人参等(参照专利文献5)。另一方面，已知(+)-南烛树脂醇及/或(-)-南烛树脂醇是具有抗菌作用、抗氧化作用、香气增强作用的化合物(参照专利文献6)，被用作抗菌性化妆料(参照专利文献7)。此外，因南烛树脂醇糖苷具有促进表皮细胞增殖的作用，所以，也被用作具有抗氧化作用的同时具有上述功能的防止老化(皱纹、皮肤干糙)化妆料(参照专利文献8)。还已知其具有抑制过氧化脂质生成、自由基捕捉活性、氧自由基清除活性等各种抗氧化活性。但是，关于南烛树脂醇的美白作用(抑制或阻碍黑素生成的作用)，还不为人所知。专利文献l:日本特开昭64-79103号公报专利文献2:日本特开平2-45408号公报专利文献3:日本特开昭53-3538号公报专利文献4:日本特开平8-104616号公报专利文献5:日本再公表W02004/017980专利文献6:日本特开2003-128568号公报专利文献7:日本特开平10-139601号公报专利文献8:日本特开平10-236940号公报专利文献9:日本特开平11-255639号公报非专利文献l:JAMA.，第194巻，p.965-967，1965年非专利文献2:J.CellSci.，第105巻，p.1079-1084，1993年非专利文献3:J.CellSci.，第107巻，p.205-211，1994年非专利文献4:Anal.Biochem.，第159巻，p.191-197，1986年非专利文献5:Proc.Natl.Acad.Sci.USA,第92巻，p.1792-1793，1995年非专利文献6:Biochem.Biophys.Acta.，第1313巻，p.130-138，第1996年非专利文献7:BritishJ.Darmatol，第139巻，p.216-224，1998年
发明内容如上所述，作为美白剂，已提出种种药物，但仅将这些美白剂配合而成的美白化妆料中，大多数可期待的效果不明显，在制剂的稳定性、皮肤剌激这样的安全性方面也存在不足之处，并不令人满意。例如，抗坏血酸稳定性不好，会诱发皮肤炎，曲酸及其衍生物美白作用强，但遇光、热易分解。此外，氢醌美白作用也很强，但不稳定，在Micelle及乳液这样的化妆品的制造方法中，存在易脱色的问题，而且即使是低浓度也会诱发过敏性的接触性皮肤炎(J.Ind.Med.,第45(6)巻，p.376-80，1988年)。另外，关于广东人参等生药，原生药本身价格高，难以向消费者提供廉价的美白剂。本发明提供配合量低也具有优异美白效果的美白剂，是皮肤刺激等的安全性优异且稳定性优异的化合物，还提供为了易于该化合物的摄取或给与而制得的饮食品、香妆品、医药品。本发明者为了解决上述课题，反复潜心研究，结果发现将栎木类等壳斗科栎属植物特别用乙醇等低级醇的水溶液提取，通过添加提取得到的提取物，可以得到美白用组合物，并申请了专利(国际公开W02005/28126)。进一步对该组合物进行潜心研究，结果意外地发现美白的有效成分是南烛树脂醇及其异构体。进一步反复探讨的结果还发现(+)-南烛树脂醇对a-MSH引起的黑素细胞活化具有较强的阻碍作用，(_)-南烛树脂醇具有阻碍酪氨酸酶活性作用这样的性质，上述作用机制不同的美白材料即(+)-南烛树脂醇和(_)-南烛树脂醇的混合物可抑制或预防黑素生成，可用作美白剂，从而完成了本发明。式中，Me表示甲基；(2)上述(1)所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化2]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>》式中，Me表示甲基，[化3]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>式中，Me表示甲基；(3)上述(1)或(2)所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分具有阻碍酪氨酸酶活性作用；(4)上述(3)所述的美白剂，其特征在于，阻碍酪氨酸酶活性作用的有效成分是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，式中，Me表示甲基；(5)上述(1)或(2)所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分具有阻碍黑素生成作用；(6)上述(5)所述的美白剂，其特征在于，阻碍黑素生成作用的有效成分是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，[化5]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式中，Me表示甲基；(7)香妆品、饮食品或医药品，其特征在于，含有上述(1)或(2)所述的至少一种化合物作为美白有效成分；(8)上述(7)所述的香妆品或医药品，其是外用香妆品或医药品；(9)上述(7)所述的香妆品或医药品，其是经口使用香妆品或医药品；(10)上述(7)所述的饮食品，其附有如下内容的标志用于获得美白作用、阻碍酪氨酸酶活性作用及/或阻碍黑素生成作用的饮食品；(11)皮肤的美白方法，其特征在于，将含有下式(A)(H)表示的南烛树脂醇类的至少一种作为美白有效成分的美白剂给与哺乳动物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式中，Me表示甲基;(12)上述(11)所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化7](E)式中，Me表示甲基；(13)上述(11)或(12)所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分具有阻碍酪氨酸酶活性作用；(14)上述(13)所述的美白方法，其特征在于，阻碍酪氨酸酶活性作用的有效成分是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>式中，Me表示甲基；(15)上述(11)或(12)所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分具有阻碍黑素生成作用；(16)上述(15)所述的美白方法，其特征在于，阻碍黑素生成作用的有效成分是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>式中，Me表示甲基；(17)上述(11)或(12)所述的美白方法，其特征在于，美白剂是香妆品、饮食品或医药品；(18)上述(11)或(12)所述的美白方法，其特征在于，美白剂是外用美白剂；(19)上述(11)或(12)所述的美白方法，其特征在于，美白剂是经口使用美白剂；(20)下式(A)(H)表示的南烛树脂醇类的至少一种的使用，其用于制造美白剂，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(21)上述(20)所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化12](A)式中，Me表示甲基，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>式中，Me表示甲基；(22)上述(20)或(21)所述的使用，其特征在于，美白剂具有阻碍酪氨酸酶活性作用；(23)上述(22)所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>(E》式中，Me表示甲基；(24)上述(20)或(21)所述的使用，其特征在于，美白剂具有阻碍黑素生成作用；(25)上述(24)所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，(A〉式中，Me表示甲基；(26)上述(20)或(21)所述的使用，其特征在于，美白剂是香妆品、饮食品或医药品；(27)上述(20)或(21)所述的使用，其特征在于，美白剂是外用美白剂；(28)上述(20)或(21)所述的使用，其特征在于，美白剂是经口使用美白剂。本发明所提供的美白剂，通过阻碍或抑制上述黑素生成原因第一阶段的酪氨酸酶的作用及/或阻碍因紫外线诱发皮肤产生的促黑素细胞激素(a-MSH)所引起的黑素细胞活性，不仅抑制黑色素自身的生成，同时还具有减少己生成沉着的色素量的功效。特别是作用机制不同的美白材料即具有阻碍酪氨酸酶活性作用的(_)-南烛树脂醇和具有阻碍黑素细胞活性作用的(+)-南烛树脂醇的混合物，即使低浓度配合也可以获得优异的美白效果。而且，本发明所提供的美白剂，含有一直以来作为饮食摄取的威士忌、咸梅汁等中含有的南烛树脂醇及其异构体作为美白有效成分，不仅不剌激皮肤，而且经口摄取也很安全。另外，本发明所提供的美白剂还具有稳定性优异这样的特征。此外，本发明所提供的美白剂也可以通过化学合成来制造，因此还具有如下优点能够向消费者提供廉价美白剂。图l表示用各种浓度的乙醇水溶液提取美国白栎及西班牙栎(新材、旧材)2得到的提取液的南烛树脂醇含量。图中，A符号表示40容量％乙醇，V符号表示60容量％乙醇，口符号表示70容量％乙醇，〇符号表示96容量％乙醇。图2表示从壳斗科栎属植物的乙醇提取物(威士忌)中鉴定阻碍酪氨酸酶活性的有效成分的工序。图3表示(+)-南烛树脂醇及(-)-南烛树脂醇的酪氨酸酶阻碍活性。纵轴表示阻碍率(％)。图4表示南烛树脂醇(消旋体)、(+)-南烛树脂醇及(-)-南烛树脂醇的小鼠细胞内黑色素瘤细胞中的黑素生成量。图5表示与受试样品涂布和紫外线照射相对应的豚鼠皮肤的明度变化情况。纵轴表示以受试样品涂布前的L值为0时从紫外线照射前到受试样品涂布开始后的L值的差(AL)，横轴表示天数。具体实施例方式本发明涉及美白剂，其特征在于，含有下式(A)(H)表示的化合物的至少一种南烛树脂醇类作为美白有效成分，[化16]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>及式中，Me表示甲基。上述式(A)(H)是立体异构体，上述式中，已知(A)表示的化合物是(+)-南烛树脂醇((+)-Lyoniresinol)，(E)表示的化合物是(-)-南烛树脂醇((-)-Lyoniresinol)。因此，南烛树脂醇是式(A)及(E)表示的化合物。作为酪氨酸酶活性阻碍剂，己提出含有下述木脂素类衍生物及/或去甲木脂素衍生物作为美白有效成分的酪氨酸酶活性阻碍剂(参照专利文献9)，所述木脂素类衍生物及/或去甲木脂素衍生物具有木脂素类或去甲木脂素类的碳骨架，有取代基的2个苯环中至少一个为4位取代间苯二酚骨架，与其连接的苄基位的碳原子不带取代基，但上述式(A)(H)表示的本发明所涉及的化合物是具有芳基四氢萘骨架的木脂素类，因此不同于上述具有间苯二酚骨架的木脂素类。本发明使用的南烛树脂醇类即南烛树脂醇及其异构体，是天然存在的物质，但也可通过化学合成获得，无论由何种方法获得，均可在本发明中使用，无不良影响。当采用天然物时，不限于精制得到的南烛树脂醇，含有南烛树脂醇的原料的提取物、粗精制品也可作为本发明的美白剂使用，例如，可以使用壳斗科(Fagaceae)栎属(Quercus)植物、这些植物的低级醇水溶液提取物、或其精制品。还可以使用在青梅酒、咸梅干等的制造中大量产生的副产物咸梅汁、其提取物、或咸梅汁提取物的精制品。作为上述栎属植物，可列举蒙古栎(Q.mongolicaFisch.)、柞栎(QuercusdentateThunb)、袍栎(QuercusserrataThunb)、麻栎(QuercusacutissimaCairuth)、青稠(QuercusmyrsinaefoliaBl.)、白栎(QuercusalbaL.)、夏栎(QuercusroburL;也称为Limousin0ak、法国栎或西班牙栎)、无梗花栎(QuercuspetraeaL.)、西班牙栓皮栎(QuercussuberL.)等。虽然根据植物的产地、收获时期、提取条件等不同而不同，但上述栎属植物中，作为威士忌、白兰地等的制造、贮藏用桶的原料使用的植物群(被称为栎木类的植物)含有高浓度南烛树脂醇，因此成为优选，可以特别优选使用夏栎、蒙古栎，因其含有高浓度南烛树脂醇。作为上述栎属植物的低级醇水溶液提取物的制造中所用的提取溶剂，可列举碳数为14的低级醇(例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等)水溶液等。关于水溶液中低级醇的浓度，关键是使其为能高效提取南烛树脂醇的浓度，具体而言，低级醇水溶液中的低级醇浓度约为10100容量％，优选约3070容量％，更优选约4060容量％。上述低级醇中，考虑到最终可配合到饮食品等中，作为提取溶剂，从安全性的观点出发优选使用乙醇水溶液。而且，在所述提取溶液中，除低级醇外，只要不较大程度上有损提取效率，也可以含有其他成分，例如，糖类、盐类、酸类、碱类或氨基酸类等水溶性成分，或乙酸乙酯、丙酮等各种其他溶剂。另外，提取时间只要适当设定即可，一般而言，提取时间越长，提取的南烛树脂醇越多。关于从上述栎属植物提取物或咸梅汁提取物中精制南烛树脂醇的方法，没有特殊限定，优选利用柱色谱法精制，特别优选利用效率高的凝胶过滤色谱法精制。作为精制时使用的树脂载体，对以根据目标纯度，选择利用Pharmacia公司制造的S印hadex(注册商标)或聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel)等被广泛应用的树脂。用这些树脂进行精制时，作为展开液，优选使用乙腈、乙醇、甲醇、丙酮或苯等溶剂以及它们的水溶液。本发明涉及的南烛树脂醇类也可通过化学合成来制造，其合成可大致如下所述进行。即以4-羟基-3，5-二甲氧基苯基丙炔酸为原料，仿照INDIANJ.CHEM.，VOL.14B，FEBRUARY,1976年，第128页等中记载的方法来制造。另外，可以用手性柱，利用高效液相色谱法(HPLC)从上述天然物提取物或化学合成的南烛树脂醇中分离精制式(A)表示的(+)-南烛树脂醇及式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，[化17]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(A)式中，Me表示甲基，[化18]式中，Me表示甲基。上述(+)-南烛树脂醇以及(-)-南烛树脂醇均是作为美白剂有用的材料，但其作用机制不同。具体而言，(+)-南烛树脂醇对因促黑素细胞激素(a-MSH)引起的黑素细胞活化具有较强的阻碍作用，从细胞外高效地发挥美白作用，而(-)-南烛树脂醇则直接作用于黑素生成细胞，阻碍酪氨酸酶活性，从而阻碍黑素的生成。在本发明的美白剂中，上述精制得到的(+)-南烛树脂醇以及(-)-南烛树脂醇可以根据目的按任意比例[约l:99约99:1(W/W)]混合使用。通过配合美白有效成分南烛树脂醇类来制造本发明的美白剂，例如，可以制得具有优异美白效果的饮食品、香妆品及医药品。关于上述本发明的饮食品、香妆品及医药品中南烛树脂醇类的配合量，根据其形态、用途的不同而不同，通常优选约0.000110重量％，特别优选约0.055重量％。作为含有本发明的美白有效成分的饮食品，可列举包括运动饮料、碳酸饮料、果汁在内的各种饮料或红茶饮料等清凉饮料水类；蛋糕、饼干、面包、糖果或冰淇淋等糕点类；乌冬面、荞麦面、拉面、意大利面、挂面等面条类；酱、酱油、醋、色拉油、芝麻油、黄油、奶酪、豆浆或牛奶等不论何种种类或形态的一般可作为食品摄取的饮食品。将本发明的美白有效成分在食品中溶解、混合等，即可制造上述饮食品。作为香妆品，可列举例如化妆水、凝胶、露、霜、面膜剂、乳液、乳液状或膏状粉底、口红、粉剂、洗面奶、生发液等无论是液状、固体状、液胶状还是糊状的适合外用的香妆品，口中崩解的软胶囊或向口中喷雾的香妆品等。除本发明涉及的美白有效成分外，也可以使用常用的其他材料，利用公知的方法制造上述香妆品。作为常用的其他材料，可列举油脂类(例如蜂蜡以及卡那巴蜡等蜡、荷荷巴油、貂油、可可脂、椰子油、棕榈核油、山茶油、芝麻油、蓖麻油、橄榄油等)、表面活性剂(例如甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯鲸蜡醚、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚甘油脂肪酸酯等)、低级或高级醇类(例如鲸蜡醇、异硬脂醇、月桂醇、十六烷醇、二十二烷醇、辛基十二烷醇等)、脂肪酸类(例如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、十一碳烯酸、油酸等)、水溶性高分子(例如聚羧乙烯、烷基改性聚羧乙烯、纤维素、藻酸钙等)、多糖类(例如透明质酸、硫酸软骨素等)、多肽类(例如胶原蛋白等)、防腐剂(例如苯甲酸及其盐类、异丙基甲酚、盐酸氯己定、邻苯基苯酚、葡萄糖酸氯己定、氯甲酚、氯苯甘醚、氯丁醇、山梨酸及其盐类、脱氢醋酸及其盐类、对氧乙烯苯甲酸酯、卤卡班等)、增粘剂(例如羧甲基纤维素钠、藻酸钙、多糖类等)、保湿剂(例如甘油、木糖醇、山梨醇、二丙二醇、丁二醇、丙二醇、聚乙二醇200600、聚氧乙烯甲基葡萄糖苷、麦芽糖醇、甘露醇等)、色素、香料、水或pH调节剂等。作为医药品，例如搽剂、贴附剂、软膏剂、液胶状涂布剂等外用制剂，除此之外，还可列举经口摄取的颗粒剂、细粒剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂或液体制剂等。除本发明涉及的美白有效成分外，使用常用的其他材料，利用公知的方法即可制造上述医药品。作为常用的其他材料，可列举各种添加剂，例如赋形剂(例如乳糖、白糖、葡萄糖、淀粉、结晶纤维素等)、粘合剂(例如淀粉糊液、羟丙基纤维素溶液、羧甲基纤维素溶液、阿拉伯胶溶液、明胶溶液、藻酸钠溶液等)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素钠、碳酸钙等)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸钙等)、表面活性剂(例如聚山梨酯80、聚氧乙烯氢化蓖麻油等)或增粘剂(例如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇等)等。另外，作为口中用医药品、香妆品的剂型，可列举咀嚼片或含片等。下面，记述实施例，更详细地说明本发明，但并不因此限定本发明。实施例1含有南烛树脂醇的提取物的制造(1)原料植物采用栎木材(美国白栎及西班牙栎的新材、旧材)。将工业用乙醇与水混合，制成40容量％、60容量％、70容量％、96容量％乙醇水溶液，在该乙醇水溶液中添加上述栎木材的木片(1XlX2cm)240g，于85匸加热5分钟后，室温放置24小时，再于85。C加热5分钟。测定得到的提取液的南烛树脂醇含量。测定条件如下。柱Cosmosil5C18AR-II柱尺寸3X250mm流动相乙腈/水/甲酸=20/80/0.1(v/v/v)流速0.5mL/分钟检测波长280nm结果如图1所示。可知用4060容量％乙醇、特别是60容量％乙醇提取的南烛树脂醇最多。实施例2含有南烛树脂醇的提取物的制造(2)制备作为威士忌贮藏用原酒使用的new-pot。即将发芽的大麦(麦芽)粉碎，与温水混合，使其糖化，在过滤得到的糖液中加入酵母，使其发酵，得到酒精度数为7.07.5容量%的醪液。将醪液装入铜制罐式蒸馏器(单式蒸馏器)中二次蒸馏，得到酒精浓度60容量％的组合物(new-pot)。然后，采用威士忌制造用木桶(白栎、西班牙栎、蒙古栎的新桶)，在这些木桶中装入上述new-pot并封口，在忙藏库保存5年，得到桶材提取液。5年后，测定得到的桶材提取液的南烛树脂醇含量。各桶材提取液的南烛树脂醇含量白栎4.9mg/L、西班牙栎11.39mg/L、蒙古栎10.7mg/L。实施例3含有南烛树脂醇的提取物的制造(3)采用威士忌制造用美国白栎木桶(旧材)，装入与实施例2同样制得的new-pot，制造桶材提取液。经时(0、4、8、12年)采集桶材提取液，测定该提取液的南烛树脂醇含量。经时采集的桶材提取液的南烛树脂醇含量贮藏0年0mg/L、4年0.68mg/L、8年1.13mg/L、12年2.15mg/L。实施例4南烛树脂醇及其异构体的精制作为来自壳斗科栎属植物的低级醇水溶液提取物，采用市售的威士忌(三得利株式会社制"山崎18年"、酒精浓度60%)(桶材雪利桶(sherryvat)、南烛树脂醇含量7.7mg/L)。将400mL威士忌蒸发后，冷冻干燥，得到l.Omg干燥物(WhiskeyCongener)。在此干燥物中加入纯水，将得到的纯水组分用正己烷、乙酸乙酯或正丁醇提取，通过以下方法测定酪氨酸酶阻碍活性(图2-l)。在活性高的乙酸乙酯组分中加入纯水，提供给凝胶过滤色谱法。凝胶过滤色谱法采用Pharmacia公司制Sephadex(注册商标)LH-20柱(0>1.3x90cm)，用流速lmL/10min的甲醇展开，分离分析。得到13的组分[分配系数(Kd^O-0.5、0.5-1.0、1.0-1.5]。进一步对上述组分中活性最高的组分进行分离分析，得到15的组分(Kd=0.4-0.5、0.5-0.6、0.6-0.7、0.7-0.8、0.8-0.9)，测定酪氨酸酶阻碍活性(图2-2)。测定结果显示，酪氨酸酶阻碍活性在Kd=0.6-0.7时最高。通过HPLC分离得到上述Kd=0.6-0.7的活性组分。柱采用YMC-PackODS-AM(10X300mm),在流动相38%(v/v)甲醇水溶液、流速2.0mL/min、检测波长280nm的条件下分离。其结果显示，酪氨酸酶阻碍活性在峰No.2最高(图2-3)。该组分得到精制，在HPLC上为单峰。该组分在上述HPLC条件下的保留时间约为17.5分钟。(酪氨酸酶阻碍活性的测定方法)小鼠B16黑色素瘤细胞，用含有10%(W/W)胎牛血清的DMEM(Dulbecco改良Eagle)培养基，在5%(v/v)C02、37。C的条件下培养。将待测样品和由小鼠B16黑色素瘤细胞制备的酪氨酸酶粗酶液混合，作为底物，添加L-多巴并使其浓度为0.05%(W/W)。在37。C下反应20分钟，测定492nm处的吸光度A(与多巴色素量成比例)。作为对照，在木目同反应体系中不添加受试样品，进行同样的操作，测定492nm处的吸光度B，根据下式算出酪氨酸酶阻碍率。阻碍率(％)=(卜吸光度A/吸光度B)X100实施例5活性物质的结构确定对实施例4中分离精制的活性物质(组分)，按照规定方法，实施质量分析(FAB-MASS)以及核磁共振(力-NMR、13C-NMR)，进行谱分析。将活性物质溶解在DMS0-De中实施FAB-MASS的结果表明，作为分子离子，质量/电荷(m/z)为433(M+Na)+，分子量为420。然后，实施核磁共振CH-醒R、13C-NMR)，进行谱分析。用BrukerBiospin公司DMX-7500i-NMR)或DMX-500(13C-NMR)测定。测定结果显示，上述分离精制的活性物质的碳原子的化学位移(PPm)及分子量与Magn.Reson.Chem.，1985年，第23巻，p.369中记载的完全一致。由质谱(FAB-MASS)及核磁共振谱CH-醒R、13ONMR)的分析结果表明，显示阻碍酪氨酸酶活性作用的活性物质的化学结构是下述式(A)(H)的一种或两种以上的混合物。M<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>(式中，Me表示甲基。)实施例6南烛树脂醇的合成按照INDIANJ,CHEM.,VOL.14B，FEBRUARY,1976年，第128页(以下简称文献A)中记载的公知的方法，制造南烛树脂醇。更详细而言，通过下述反应式，制造下述实施例713中使用的南烛树脂醇。艮P:消旋体(式中，Ac表示乙酰基，Me表示甲基。)文献A中的式(I)、(11)、(III)、(IV)分别用上述式(1)、(2)、(3)、(4)代替，除此之外均与文献A完全相同，得到式(5)的化合物。该南烛树脂醇的核磁共振和质量分析与实施例5完全相同。另外，圆二色性(CD)光谱分析的结果表明合成品是(+)-南烛树脂醇和(-)-南烛树脂醇的混合物(消旋体)。实施例7(+)-南烛树脂醇及(_)-南烛树脂醇的精制用手性柱，通过高效液相色谱法(HPLC)对实施例6中合成的南烛树脂醇(消旋体)实施分离。HPLC的分析条件如下。柱CHIRALCELAD-H柱尺寸0.461.DX25cm流动相甲醇/乙醇/乙酸=50/50/0.1(v/v/v)流速1.0mL/分钟检测波长254nm分离得到的(+)-南烛树脂醇和(_)_南烛树脂醇的光学纯度分别为98%^以上。此外，得到的(+)-南烛树脂醇和(-)-南烛树脂醇的比例约为1:1(W/W)。实施例8酪氨酸酶阻碍活性(IC5。)的测定作为受试物质，采用实施例7中分离得到的(+)-南烛树脂醇和(-)_南烛树脂醇。将受试物质5mg分别溶解于DMS0(二甲基亚砜)中，与实施例4同样，测定酪氨酸酶阻碍活性。作为阳性对照，用具有阻碍酪氨酸酶活性作用的市场上被广泛使用的熊果苷，与上述同样制备样品，测定酪氨酸酶阻碍活性。结果如图3所示。可知(+)-南烛树脂醇和(-)-南烛树脂醇均具有酪氨酸酶阻碍活性。算出受试物质的酪氨酸酶阻碍活性的IC5。。结果如表1所示。结果显示，(-)-南烛树脂醇的ICs。比熊果苷的ICs。低，(-)-南烛树脂醇的酪氨酸酶阻碍活性高于熊果苷。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>实施例9黑素生成量的测定作为受试物质，采用实施例7中分离得到的(+)-南烛树脂醇和(-)_南烛树脂醇以及实施例4中制备的含有南烛树脂醇类的WhiskeyCongener,溶解于DMS0(二甲基亚砜)中，分别制成最终浓度为100ug/mL。将4X104个小鼠B16黑色素瘤细胞接种在60mm塑料皿中，进行前培养。24小时前培养后，添加上述受试物质并混合，在37"C下培养3天。用PBS洗净该细胞，在1X106个的离心残渣中添加lmL的1MNaOH并溶解，测定470nm处的吸光度。另外，对于在前培养后添加O.lraMNle4d-Phe7-a-促黑素细胞激素(NDP-a-MSH)和受试物质并混合并在37。C下培养3天的样品，同样测定470nm处的吸光度。将没有添加受试物质和NDP-a-MSH的样品在470rnn处的吸光度定为细胞内黑素量100%，算出与此相对的各样品的比值。用熊果苷作阳性对照，与上述同样制备样品，测定细胞内黑素量。结果如图4所示。在(+)-南烛树脂醇以及含有南烛树脂醇类的WhiskeyCongener中，无论有无添加NDP-a-MSH，黑素生成均受到显著抑制。该效果比熊果苷的效果更好。实施例10使用豚鼠的黑素生成抑制的测定(1)受试动物及词养方法购入4周龄weisermaples系雄性褐色豚鼠，在室温23.5°C、相对湿度50±10%、换气次数10-15次/小时、照明时间7:00到19:OO的设定好的饲养室内，分别在聚碳酸酯制笼子(宽29.2cm、高20cm、进深44cm)中预饲养1周。使其自由摄取市售的固体饲料和水(公共自来水)。试验期间，体重每周测定1次。(2)受试样品将如实施例6所述的化学合成南烛树脂醇(消旋体)以1%(W/W)浓度溶解于60%(W/W)乙醇水溶液中，作为含有南烛树脂醇的受试样品，供于试验。另外，用熊果苷作阳性对照，使用以7%(W/W)浓度溶解于60%(W/W)乙醇水溶液中的样品，与上述得到的含有本发明南烛树脂醇(消旋体)的受试样品相比较。作为对照，用60%(W/W)乙醇水溶液作为受试样品。(3)紫外线照射引起的色素沉着使用经上述预饲养的豚鼠，一组12只，用电动推剪和电动剃须刀除去各豚鼠背部的毛，以夹着正中央的上下2处、共计4处作为测定部位。在豚鼠的背部放置纸样，固定于SUMIPEX010(UV透过性丙烯酸树脂)制的固定器中，进行紫外线照射。紫外线照射采用UV照射器(CS&T0REXDERMARAY医疗用紫外线照射装置M-DMR80型)以及UV-B灯(T0REXFL20S'E-30/DMR20WATTOSHIBAMEDICALSUPPLY),以1.46mW/cm2的强度，照射6分钟UV-B(0.526J/cm2)。紫外线强度用紫外线强度计(DERMARAYUVR-3036/S2)来测定。从试验第一天开始，每日1次，连续3天进行紫外线照射，使色素沉着。(4)受试样品的涂布在试验第3天紫外线照射结束后立即开始涂布受试样品。每日1次，在各部位涂布40yL。(5)黑色素沉着抑制效果的评价用色差计(K0NICAMIN0LTACOLORREADERCR-10)对测定部位测定5次，用Lab表色系统表示皮肤颜色，用L值(明度)评价。算出L值的平均值(AL)，作为指标。(6)L值的评价结果受试豚鼠紫外线(UV-B)照射时的皮肤颜色(AL值)的变化如图5所示。紫外线照射开始后，可见因色素沉着引起的L值的降低。为了避免紫外线照射量的变动引起的测定，将受试样品涂布开始前的L值的值作为O，进行分析。涂布了含有本发明南烛树脂醇的受试样品的豚鼠组，显示出与含有熊果苷的受试样品同等的黑色素沉着抑制效果。考虑到含有本发明南烛树脂醇的受试样品的浓度是含有熊果苷的受试样品浓度的7分之一，可知本发明的南烛树脂醇优异的黑色素沉着抑制效果。另外，含有本发明南烛树脂醇的受试样品，从外表上并未观察到皮肤炎等的症状。实施例11皮肤用凝胶的制备在80g纯水中，溶解0.5g聚丙烯酸钠，在其中，同时加入实施例6中得到的南烛树脂醇(消旋体)lg和乙醇18.5g，加入少量柑橘类精华，制成凝胶。实施例12胶状剥离式面膜的制备在65g纯水中，加入羧甲基纤维素5g和聚乙烯醇10g，边加温边溶解，在其中，同时加入实施例4中得到的由威士忌精制的南烛树脂醇(消旋体)lg和乙醇19g，加入少量柑橘类精华，制成胶状剥离式面膜。本发明提供含有南烛树脂醇类的美白剂，所述南烛树脂醇类通过阻碍参与黑色素生成的酪氨酸酶活性、及/或阻碍由a-MSH引起的黑素细胞的活性，从而阻碍黑素生成。因此，本发明可在以美白为目的而提供的饮食品、香妆品、医药品等各种制品中应用。权利要求1.美白剂，其特征在于，含有下式(A)～(H)表示的南烛树脂醇类的至少一种作为美白有效成分，[化1]式中，Me表示甲基。2.根据权利要求1所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化2]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(A〉式中，Me表示甲基，[化3]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(E)式中，Me表示甲基。3.根据权利要求1或2所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分具有阻碍酪氨酸酶活性作用。4.根据权利要求3所述的美白剂，其特征在于，阻碍酪氨酸酶活性作用的有效成分是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，[化4]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式中，Me表示甲基。5.根据权利要求1或2所述的美白剂，其特征在于，美白有效成分具有阻碍黑素生成作用。6.根据权利要求5所述的美白剂，其特征在于，阻碍黑素生成作用的有效成分是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，[化5]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中，Me表示甲基。7.香妆品、饮食品或医药品，其特征在于，含有权利要求1或2所述的至少一种化合物作为美白有效成分。8.根据权利要求7所述的香妆品或医药品，其是外用香妆品或医药品。9.根据权利要求7所述的香妆品或医药品，其是经口使用香妆品或医药品。10.根据权利要求7所述的饮食品，其附有如下内容的标志用于获得美白作用、阻碍酪氨酸酶活性作用及/或阻碍黑素生成作用的饮食品。11.皮肤的美白方法，其特征在于，将含有下式(A)(H)表示的南烛树脂醇类的至少一种作为美白有效成分的美白剂给与哺乳动物，[化6](a)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(a》<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(c》<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>《d》<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中，Me表示甲基。12.根据权利要求11所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化7]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中，Me表示甲基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中，Me表示甲基。13.根据权利要求11或12所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分具有阻碍酪氨酸酶活性作用。14.根据权利要求13所述的美白方法，其特征在于，阻碍酪氨酸酶活性作用的有效成分是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，[化9]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(E)式中，Me表示甲基。15.根据权利要求11或12所述的美白方法，其特征在于，美白有效成分具有阻碍黑素生成作用。16.根据权利要求15所述的美白方法，其特征在于，阻碍黑素生成作用的有效成分是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，[化10]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(A》式中，Me表示甲基。17.根据权利要求11或12所述的美白方法，其特征在于，美白剂是香妆品、饮食品或医药品。18.根据权利要求11或12所述的美白方法，其特征在于，美白剂是外用美白剂。19.根据权利要求11或12所述的美白方法，其特征在于，美白剂是经口使用美白剂。20.下式(A)(H)表示的南烛树脂醇类的至少一种的使用，其用于制造美白齐廿，[化ll]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式中，Me表示甲基。21.根据权利要求20所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(A)及/或式(E)表示的南烛树脂醇，[化12]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式中，Me表示甲基，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式中，Me表示甲基。22.根据权利要求20或21所述的使用，其特征在于，美白剂具有阻碍酪氨酸酶活性作用。23.根据权利要求22所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(E)表示的(-)-南烛树脂醇，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式中，Me表示甲基。24.根据权利要求20或21所述的使用，其特征在于，美白剂具有阻碍黑素生成作用。25.根据权利要求24所述的使用，其特征在于，南烛树脂醇类是式(A)表示的(+)-南烛树脂醇，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>式中，Me表示甲基。26.根据权利要求20或21所述的使用，其特征在于，美白剂是香妆品、饮食品或医药品。27.根据权利要求20或21所述的使用，其特征在于，美白剂是外用美白剂。28.根据权利要求20或21所述的使用，其特征在于，美白剂是经口使用美白剂。全文摘要本发明提供含有南烛树脂醇类作为美白有效成分的美白剂。本发明的美白剂作为预防或治疗黑色素沉着的饮食品、香妆品或医药品等，非常有用。文档编号A61P17/16GK101102744SQ20058004478公开日2008年1月9日申请日期2005年12月22日优先权日2004年12月24日发明者大口健司,糠谷东雄,舆水精一,诹访芳秀,赤尾幸博,野泽义则申请人:三得利株式会社;财团法人歧阜县研究开发财团