专利名称：莪术油眼用凝胶及其生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，特别是涉及一种眼用凝胶。
背景技术：
病毒性角膜炎(Viral Keratoconjunctivitis)是重要的致盲性眼病之一，病程较长，复发率高，临床治疗困难。
发明内容
本发明的目的是利用卡波姆凝胶为辅料配成莪术油眼用凝胶及其配制工艺。
本发明的配方是(单位是重量份)莪术油0.03-5增溶剂0.1-15抑菌剂 0.01-5凝胶基质 0.01-35 PH调节剂本发明所述的增溶剂是指吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种。
本发明所述的抑菌剂是指尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、硫柳汞、苯氧乙醇、新洁尔灭或洁尔灭中的一种。
本发明所述凝胶基质是指卡波姆934、卡波姆940、卡波姆980，甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇中的一种。
本发明的PH调节剂采用三乙醇胺或氢氧化钠。
本发明的制备方法是首先将莪术油和增溶剂在研钵内研磨均匀，加入抑菌剂研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将凝胶基质加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加PH调节剂，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
本发明的最佳配制方法是将莪术油和吐温80在研钵内研磨均匀，加入尼泊金乙酯研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将处方量卡波姆934加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加三乙醇胺，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
本发明利用卡波姆凝胶为辅料配成莪术油眼用凝胶，应用于兔单纯疱疹病毒和腺病毒角膜炎动物模型，并对其治疗效果作出评价，结果表明莪术油眼用凝胶对单纯疱疹病毒和腺病毒角膜炎动物模型均具有一定疗效。对人类单纯疱疹病毒及腺病毒所导致的兔实验病毒性角膜均有明显疗效，角膜病变程度与病毒对照组比较P＜0.05，TCID50差值大于1，提示莪术油眼用凝胶对病毒性角膜炎具有临床治疗作用。
具体实施例方式
本发明的配方是(单位是重量份)莪术油0.03-5 增溶剂0.1-15 抑菌剂 0.01-5凝胶基质 0.01-35PH调节剂本发明所述的增溶剂是指吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种。
本发明所述的抑菌剂是指尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、硫柳汞、苯氧乙醇、新洁尔灭或洁尔灭中的一种。
本发明所述的凝胶基质是指卡波姆934、卡波姆940、卡波姆980，甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇中的一种。
本发明的PH调节剂采用三乙醇胺或氢氧化钠。
本发明的制备方法是首先将莪术油和增溶剂在研钵内研磨均匀，加入抑菌剂研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将凝胶基质加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加PH调节剂，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
本发明的最佳配制方法是将莪术油和吐温80在研钵内研磨均匀，加入尼泊金乙酯研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将处方量卡波姆934加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加三乙醇胺，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
实施例1将13g莪术油与20g吐温20混合后，与28g羟丙基甲基纤维素和500ml蒸馏水混合，搅拌分散均匀，形成粗胶。取5g尼泊金甲酯溶于水后加入粗胶中。用三乙醇胺将pH调至8.5，加蒸馏水至1000g，搅拌均匀后115℃灭菌30分钟，制得莪术油眼用凝胶。
实施例2将3g卡波姆973撒于500ml注射用水中，分散均匀。过夜，使其自然溶胶，用10mol/L NaOH(约3ml)调pH至6.9。称取1.0g莪术油加吐温40混合均匀，溶解于20ml注射用水中，搅拌至完全溶解，0.22um微孔滤膜过滤，将滤液加入粗胶中，搅拌至均匀。称取0.5g尼泊金乙酯于200ml注射用水中，水浴加热搅拌至完全溶解，加入胶中，搅拌均匀。补加注射用水至1000g，测得pH6.9。将配好的胶用牛皮纸封好，121℃高压湿热灭菌10min。在无菌实验室内紫外照射2h后，制得莪术油眼用凝胶。
实施例3将15g卡波姆934、5.0g莪术油、10g吐温40和0.5g洁尔灭与500ml注射用水混合，分散均匀，形成粗胶。经0.30um微孔滤膜除菌过滤后，用10％NaOH调pH至7，加注射用水至1000g，120℃灭菌20min，制得莪术油眼用凝胶。
实施例4
将5g羧甲基纤维素钠、5g聚乙烯吡咯烷酮(K17、K30或K90)分散在水中，形成粗胶。将50g莪术油、20g吐温60、5g尼泊金丙酯和15g氯化钠用4ml 10％NaOH溶解，然后加入粗胶中，搅拌均匀，加水至1000g，搅拌均匀后灭菌分装。
实施例5将5g卡波姆941、12g羟丙基甲基纤维素分散在水中，形成粗胶，121℃高压湿热灭菌10min。将50g莪术油、50g吐温80、10g苯氧乙醇用5ml 10％NaOH溶解，经0.30um微孔滤膜除菌过滤后，加入粗胶中，搅拌均匀，加水至1000g，搅拌均匀后分装。
实施例6将100g聚乙烯醇和90g莪术油与500ml蒸馏水混合，搅拌分散均匀，形成粗胶。取8g硫柳汞溶于水后加入粗胶中。调pH至8.5，加蒸馏水至1000g，搅拌均匀后115℃灭菌30分钟，制得莪术油眼用凝胶。
实施例7将20g聚乙烯醇、20g聚乙二醇1000和120g莪术油与500ml蒸馏水混合，搅拌分散均匀，形成粗胶。取12g尼泊金丙酯溶于水后加入粗胶中。调pH至7.5，加蒸馏水至1000g，搅拌均匀后115℃灭菌30分钟，制得莪术油眼凝胶眼药。
本发明的具体实验过程试验目的本项试验目的在于通过动物体内模型，观察莪术油眼用凝胶对病毒性角膜炎的治疗效果。
受试药物莪术油眼用凝胶(莪术油绝对含量为0.2％)，淡黄色半透明凝胶，批号041201，长春博泰医药生物技术有限责任公司提供。
配制方法1、将2g莪术油和10g吐温80在研钵内研磨均匀，加入处方量的尼泊金乙酯研磨至完全溶解，加20g丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入约150g的水，边加边研磨至混合均匀。将上述混合液转移至搅拌器中。
2、制备凝胶将处方量卡波姆934加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶涨后，滴加三乙醇胺，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水至1000g，灭菌，灌装。
阳性对照药阿昔洛韦滴眼液，规格为8ml(8mg)×20只，武汉五景药业有限公司，批号05010301。购于长春市医药商店。
仪器多用气体培养箱，NCPC03100-1，美国；深低温冰箱，SANYO，日本；双人超净工作台，SW-CT-ZF型，中国苏州；离心沉淀机，LXT-II型，中国上海；真空冷冻干燥机，MRK，日本；双筒显微镜，OLYMPUSBHF，日本。数码照相机，索尼828，日本；离心机，LDZ5-2型自动平衡离心机，北京医用离心机厂。角膜环钻，中国苏州。YZ-5F型裂隙灯，中国成都。
试剂盐酸布比卡因，上海禾丰制药有限公司，生产批号0306031。IMDM细胞培养液，GIBCO公司，美国；新生小牛血清，大连生化试剂厂；胰蛋白酶，SIGMA，美国。
细胞非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)，由吉林大学再生医学科学研究所病毒研究室提供。
实验动物日本大耳白兔42只，雌雄各半，体重1.75±0.25kg，购于吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号(吉)2003-2001。
病毒株单纯疱疹病毒I型(herpes simplex virus，HSV-I)，腺病毒III型(AdenovirusIII，ad3)，均由吉林大学再生医学科学研究所病毒研究室提供。
1实验分组与建立兔病毒性角膜炎模型实验组采用日本大耳白兔36只，雌雄各半，单笼饲养。具体方法双眼用1％的布比卡因粘膜表面麻醉，将角膜表面平均分成四个象限，用3mm角膜环钻创伤每个象限居中的部分，深至前弹力层，用手术刀片刮去环钻创伤部位的角膜上皮，而后在结膜囊内分别滴入10TCID50的单纯疱疹病毒I型和腺病毒III型病毒液各50μl[7]，双手手指分别夹住上下眼睑，使之闭和并与眼球成一定距离，轻轻晃动眼睑，可避免病毒液渗出，分别感染18只日本大耳白兔，连续感染3日，隔离喂养。每日记录观察兔眼病变状况。
病毒性角膜炎动物模型随机分成6组，每组6只，分别为单纯疱疹病毒感染对照组(每日滴赋形剂)；单纯疱疹病毒阳性药物治疗对照组；单纯疱疹病毒莪术油眼用凝胶治疗组；腺病毒感染对照组(每日滴赋形剂)；腺病毒阳性药物治疗对照组；腺病毒莪术油眼用凝胶治疗组，同时设正常对照组6只(每日滴赋形剂)。
2病毒性角膜炎动物模型的治疗实验单纯疱疹病毒感染组和腺病毒感染组在第一次感染4d和5d后，分别出现病毒性角膜炎症状。单纯疱疹感染组的实验动物于第一次接种病毒4天后出现病毒性角膜炎的典型症状——角膜生翳，即角膜表面出现点状或树枝状病变，还可观察到虹膜大面积充血，伴有新生血管，瞳孔边缘不清晰，环有灰色区域，及畏光，流泪，分泌物增多的症状。腺病毒感染组实验动物于首次接种5天后出现角膜生翳的症状，但较单纯疱疹病毒感染组动物角膜上皮病变程度轻，也出现瞳孔不清晰，虹膜充血，畏光，流泪，分泌物多症状。每个病毒感染组内模型随机分成三组，即莪术油治疗组，阳性药物治疗组，病毒对照组。
2.1实验步骤单纯疱疹病毒感染组和腺病毒感染组中的莪术油治疗组和阳性药物治疗组均于第一次病毒接种后的第5日开始结膜囊给药，每天6次，每2个小时一次，连续给药10天。病毒对照组给药亦同。记录每只用于实验兔子体重变化并在裂隙灯观察下列规定的各项指标变化。10日后对每只实验兔眼进行拍照，活取双眼角膜置5ml含2％小牛血清IMDM培养液中，匀浆，0.22μm微型滤器除菌，分别配置原液、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6病毒液，以20万/mlVero细胞接种96孔细胞培养板(0.1ml/孔)，24小时后去培养液，加入上述病毒液0.2ml/孔，采用CPE法检测各孔病毒滴度，采用Reed-Muench法计算LgTCID50[8]，以与病毒对照组的差值大于1判为有效。
2.2评分标准和统计学方法每天进行观察，综合多种症状并结合Trouzdale标准[9](病变面积小于角膜面积的25％为1分；26％～50％为2分；51％～75％为3分；76％～100％为4分)，制定出本实验对角膜炎症状评分标准(见表1)，运用独立样本组间比较进行统计学处理。
3实验结果3.1疗效标准显效全部症状消失或主要症状体征消失，疗效率≥60％；有效主要症状体征基本消失，疗效率≥30％；无效各方面症状体征无改善，疗效率＜30％。疗效率＝(1-治疗后积分治疗前积分/治疗前积分)×100％。并对最终治疗效果(见表2，3，
图1)进行统计学评价。
3.2对病毒性角膜炎治疗效果的评价单纯疱疹病毒感染组中，莪术油治疗组的显效率为83.3％，有效率为100％，阳性药物治疗组显效率与前者一致，有效率为83.3％。腺病毒感染组中，莪术油治疗组的显效率为83.3％，明显高于阳性药物治疗组(50％)，两组有效率同为100％。莪术油对单纯疱疹病毒感染组的治疗效果与阳性药物无大差别，对腺病毒感染组治疗效果明显优于阳性药物对照组。见表7对每个治疗阶段进行统计学评价，单纯疱疹病毒感染组治疗3d时，莪术油治疗组与病毒对照组比较可见显著差异(p＜0.05)，治疗6d时，与病毒对照组比较成极显著差异(p＜0.01)，治疗10d时，全部实验动物角膜上皮病变症状消失(p＜0.001)，而阳性药物治疗组到治疗6d，与病毒对照组比较p＜0.05；腺病毒感染组治疗2天时，莪术油治疗组与病毒对照组相比也出现显著差异(p＜0.05)，不同的是，在第6d两组比较呈极显著差异p＜0.001，而阳性药物治疗组治疗3d时，与病毒对照组比较仍没有表现出显著差异，见表6。
3.3莪术油眼用凝胶对病毒繁殖的抑制作用用Reed-Muench法计算各实验组lgTCID50，并将每个病毒感染组中两个治疗组与病毒对照组比较，差值均大于1，表明莪术油眼用凝胶对单纯疱疹病毒I型和腺病毒III型均有一定的繁殖抑制作用(结果见表8，9)。
3.4对动物体重增长率的影响正常对照组的体重增长率为7.83％，是所有实验组中最高的。单纯疱疹病毒感染组和腺病毒感染组中，莪术油治疗组的体重增长率分别为2.17％和2.47％，高于阳性药治疗组的增长率(1.78％和1.80％)，而两组病毒对照组体重均出现了负增长，结果见表4。由以上数据推断体重下降和增长缓慢的原因可能是由于病毒对照组眼部症状引起的不适而导致动物饮食和活动异常的结果。莪术油治疗组仍保持很高的体重增长率，也证明了莪术油眼用凝胶对病毒性角膜炎具有很好的治疗作用。
实验结论实验结果表明莪术油眼用凝胶对兔病毒性角膜炎模型有明显的治疗作用，其治疗作用优于阿昔洛韦滴眼液治疗组，提示莪术油眼用凝胶可以作为病毒性角膜炎的临床应用药物。
表1.病毒性角膜炎动物模型症状分级及评分标准
*将症状评分累加，0-4分为无角膜炎症状，5-7分轻度角膜炎，8-12分中度角膜炎，13-16重度角膜炎表2.莪术油眼用凝胶对单纯疱疹病毒I型引起的病毒性角膜炎的治疗效果
表3.莪术油眼用凝胶对腺病毒III型所引起的病毒性角膜炎的治疗效果
表4.治疗过程中各实验动物组体重变化
表5.各组症状评分(x±S分)
表6.莪术油眼用凝胶不同治疗时间效果的比较(P值*)
*与病毒对照组比较表7.莪术油眼用凝胶对兔病毒性角膜炎的治疗效果
表8.莪术油眼用凝胶对单纯疱疹病毒感染组TCID50的影响
表9.莪术油眼用凝胶对腺病毒感染组TCID50的影响
权利要求
1.一种莪术油眼用凝胶，其配方是(单位是重量份)莪术油 0.03-5 增溶剂 0.1-15抑菌剂 0.01-5凝胶基质 0.01-35 PH调节剂。
2.根据权利要求1所述的莪术油眼用凝胶，其特征在于增溶剂是指吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种。
3.根据权利要求1所述的莪术油眼用凝胶，其特征在于抑菌剂是指尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、硫柳汞、苯氧乙醇、新洁尔灭或洁尔灭中的一种。
4.根据权利要求1所述的莪术油眼用凝胶，其特征在于凝胶基质是指卡波姆934、卡波姆940、卡波姆980，甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇中的一种。
5.根据权利要求1所述的莪术油眼用凝胶，其特征在于PH调节剂采用三乙醇胺或氢氧化钠。
6.权利要求1所述的莪术油眼用凝胶的制备方法，其特征在于将莪术油和增溶剂在研钵内研磨均匀，加入抑菌剂研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将凝胶基质加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加PH调节剂，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
7.根据权利要求6所述的莪术油眼用凝胶的制备方法，其特征在于其最佳配制方法是将莪术油和吐温80在研钵内研磨均匀，加入尼泊金乙酯研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将处方量卡波姆934加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加三乙醇胺，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。
全文摘要
一种莪术油眼用凝胶及其生产方法，属于医药领域。本发明的目的是利用卡波姆凝胶为辅料配成莪术油眼用凝胶及其配制工艺。发明主要是由莪术油、增溶剂、抑菌剂、凝胶基质、pH调节剂组成，首先将莪术油和增溶剂在研钵内研磨均匀，加入抑菌剂研磨至完全溶解，加丙二醇继续研磨至均匀，逐渐加入水，边加边研磨至混合均匀，将上述混合液转移至搅拌器中；制备凝胶将凝胶基质加入上述溶液中，600转/分搅拌至完全溶解后，滴加pH调节剂，使之成为均匀的凝胶，继续搅拌并加水灭菌，灌装。结果表明莪术油眼用凝胶对单纯疱疹病毒和腺病毒角膜炎动物模型均具有一定疗效。对病毒性角膜炎具有临床治疗作用。
文档编号A61P31/00GK101077408SQ200610016878
公开日2007年11月28日 申请日期2006年5月26日 优先权日2006年5月26日
发明者王勇 申请人:长春博泰医药生物技术有限责任公司