专利名称：积雪苷在制备预防或治疗肝脏纤维化的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及积雪苷积在制药中的应用，具体涉及积雪苷在制备预防或治疗肝脏纤维化的药物中的应用。
背景技术：
积雪草是一种植物药，积雪苷是从积雪草中提取的物质，也称为积雪甙(Asiaticoside)，化学结构见式I。
式I研究发现抗皮肤粘膜损伤后，积雪苷具有纤维疤痕过增生作用，该化合物作为相关用途的化妆品和药品均有上市，在这些产品中积雪苷是其主要活性成份。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于通过设计动物实验方法，研究积雪苷的抗肝脏纤维化作用。
因此，本发明的目的是提供积雪苷在制备预防或治疗肝脏纤维化的药物中的应用。
本发明应用大鼠作为实验动物，应用市售的积雪苷为样品进行实验。
本发明通过下列具体实验研究积雪苷的抗肝脏纤维化作用。
本发明应用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化作为实验动物模型，是按文献(Rockey，DC Gene therapy for hepatic fibrosis-brining treatment into thenew millennium.Hepatology，1999；30816-818和Uleki T.Kaneda Y.Tsutsui H，Nakanishi K，Sawa Y，Morishita R，Matsumoto K.nakamura T，Takahashi H，Okamoto E，Fujimoto J.Hepatocyte growth factor gene therapy of liver cirrhosisin rats.Nat Med，1999；5226-230)中方法进行的，该方法是研究CCl4导致肝脏纤维化的一个很可靠的模型。
本发明的积极进步效果在于积雪苷具有抗肝脏纤维化的作用，由于积雪苷单体可以从积雪草中直接提取，而且提取率较高，价格不贵，所以积雪苷的应用有很好的开发前景。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作详细叙述。
实施例1材料与方法1.动物及材料SD大鼠，雄性，由上海高血压研究所提供2.样品名称积雪苷广西昌州天然产物开发有限公司或上海医药工业研究院制造，溶于蒸馏水中地塞米松上海信谊药厂生产，溶于生理盐水3.剂量积雪苷4mg/kg、12mg/kg和36mg/kg三个剂量实验方法(1)动物模型制备将60只雄性大鼠随机分成6组正常组、模型组、地塞米松组、积雪苷治疗组(分别为低剂量、中剂量和高剂量组)，每组各10只。除正常组给予正常饮食外，其余各组用皮下注射40％CCl4花生油溶液0.3ml/100g(首次每100g体重用纯CCl40.5ml)，每周2次，共12周；同时喂予高脂低蛋白饲料(79.5％玉米粉、20％猪油、0.5％胆固醇)，间日以30％乙醇为饮料。积雪苷治疗组大鼠每天给予积雪苷灌胃1次，正常组及模型组给以等渗盐水灌胃，持续12周，地塞米松组0.6mg/kg。实验结束后股动脉放血处死大鼠，留取血液及全部肝脏，血液经1500r/min离心10min，分离血清，置于-80℃低温冰箱保存，每只大鼠取相同部位肝脏用10％甲醛固定，其余部分肝脏-80℃低温冰箱保存。
结果1.各组大鼠肝脏指数、尿羟脯氨酸排出量及血清学指标变化见表1。各期积雪苷治疗组大鼠肝组织及血清透明质酸(hyaluronic acid，HA)含量、血清谷丙转氨酶活性(ALT)均低于模型对照组(p＜0.01＝。3wk时积雪苷治疗组大鼠肝脏细胞变性、坏死及炎细胞浸润程度均显著低于模型对照组。12wk时模型组成纤维细胞增生达2.8级，HE及VG染色均示假小叶形成；而积雪苷治疗组虽有成纤维细胞及胶原增生，但肝小叶形态完整，表明积雪苷能显著改善肝功能，减轻肝脏病理损害程度，抑制肝脏细胞外基质形成。
表1各组大鼠肝脏指数、尿羟脯氨酸排出量及血清学指标变化(x-±s)
*表示与模型组相比P＜0.012.各组大鼠肝脏纤维化程度CCl4肝纤维化模型组大鼠HE染色可见大量肝细胞脂肪变性存在，呈空泡状另有水样变性甚至气球样变，近90％标本可见存在不同程度的坏死肝细胞，在汇管区和小叶间有大量炎症细胞浸润，正常肝小叶结构遭到破坏；可见汇管区和小叶间有大量粗大增生的胶原纤维，组织切片中有大量假小叶形成，并且以小圆形为主；网织纤维染色切片上可见肝组织被分隔成为大小不等的假小叶，遍布大方形或小圆形假小叶，肝组织内满布绿色的网织纤维，在汇管区及纤维间隔内尤其明显，在窦周间隙内有明显的网织纤维着色，网织纤维成分显著增多。地塞米松组大鼠肝细胞变性也以脂肪变性为主，汇管区扩张，有纤维隔，但多数尚未连接。积雪苷治疗组镜下观察基本与地塞米松组相近。
3.积雪苷抗肝纤维化的分子生物学研究体外培养的3T6细胞中，以cDNA为探针进行核酸分子杂交，结果显示积雪苷能显著降低3T6细胞i、iii、iV型前胶原mRNA水平P＜0.05～0.01。在CCL4大鼠肝纤维化模型中，积雪苷治疗组早期显著降低了i、iii、iv型前胶原mRNA水平p＜0.05～0.01，提示积雪苷对i、iii、iv型胶原基因的表达具有抑制作用是在转录水平上。积雪苷亦可降低肝纤维化时PDGF，PDGF受体PDGFr-β及转化生长因子TGF-β1的MMA表达水平，提示积雪苷可能通过抑制TGFβ-1、PDGF等肝纤维化相关生长因子的表达而间接抑制胶原合成。
积雪苷对ITO细胞生长增殖的影响ITO细胞位于肝窦周围间隙内，其功能是储存脂肪和维生素A，此外还可产生结缔组织和基质。现在认为ITO细胞是肝小叶内一种相对不活动的成纤维细胞，在一定的条件下可转化为成纤维细胞，在肝硬变的发生发展中具有重要作用，它是正常及肝纤维化时产生胶原的主要细胞。在CCL4诱导的大鼠肝纤维化模型中，积雪苷能明显抑制肝组织中ITO细胞的增殖及转化，体外培养的ITO细胞中加入积雪苷后，其DNA及胶原合成显著受抑，抑制程度与积雪苷浓度及作用时间成正相关。积雪苷还可阻断血小板衍生生长因子PDGF的促ITO细胞增殖及胶原合成作用。结果显示积雪苷除直接作用外，还通过抑制PDGF的作用而起到间接的抗肝纤维化作用。
结论根据以上实验表明积雪苷具有抗肝脏纤维化的作用，而本实验利用积雪苷直接给CCL4诱发肝脏纤维化的大鼠模型实验，证明积雪苷确有抗肝脏纤维化的效果。
权利要求
1.积雪苷在制备预防或治疗肝脏纤维化的药物中的应用，其中该积雪苷具有下列化学结构式I 式I。
全文摘要
本发明公开了积雪苷在制备预防或治疗肝脏纤维化的药物中的应用。本发明通过用积雪苷对大鼠肝脏纤维化的影响，证实了积雪苷具有抗肝脏纤维化的作用。因而，积雪苷可作为活性成份用于制备抗肝脏纤维化的药物。
文档编号A61P1/16GK101032499SQ200610024399
公开日2007年9月12日 申请日期2006年3月6日 优先权日2006年3月6日
发明者王小晨, 刘全海, 陈秀华, 王光凤, 肖璘 申请人:上海医药工业研究院