专利名称：中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法
技术领域：
本发明涉及一种中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法，属中草药制备工艺技术领域。
背景技术：
研究中药龙血竭降血糖活性成分及生物功能，是充分利用国产资源发挥传统医药优势，进行药物研究自主创新的一条有效途径。
发明人在大量实验的基础上，首次发现龙血竭(Dragon′s Blood)具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，降血糖功能显著。为降血糖纯中药药物的研制，提供了理论依据。申请了有关专利(03151455.3，03151456.1，200410067070.5，200510025259.25，200510025261.X，200510028232.9，200510028234.8)。在此基础上，作了进一步改进，提取出活性更强的降血糖部位。创建了具有强α-葡萄糖苷酶抑制活性、胰岛素促泌作用显著的龙血竭黄酮类提取物的工艺方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种用于降血糖的中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法。其特征在于具有以下的过程和步骤a.龙血竭的超临界萃取将龙血竭磨碎、过筛，随后将其装入超临界萃取装置的萃取釜中，用超临界CO2为溶剂，进行血竭的超临界萃取，萃取压力为10～30MPa，温度为40～50℃，萃取时间为1～5小时，CO2流量为25～35kg/h；萃取流出物的解析过程为两级，第一级解析压力7～11MPa，解析温度为50～60℃，第二级解析压力4～10MPa，解析温度为40～50℃，弃去提取部分，收集萃取残余物，萃取釜中的萃取残余物即为除去部分无效组分的龙血竭有效部位；(参照《超临界流体萃取中药血竭有效成分》专利申请号03151456.1)b.超临界萃余物的丙酮抽提自制一个放大的仿索氏抽提器的循环回流装置，将上述超临界萃余物放入自制的循环回流装置的浸出器内，然后加入5～8倍重量的丙酮溶液，水浴加热温度为70～80℃，反复抽提4～8小时，抽提完全后，提取物回收溶剂并浓缩至干；将所得提取物再置于真空干燥器中50～70℃减压干燥2～3小时，取出，粉碎、过筛；c.丙酮提取物的正丁醇溶及碱液萃取将上述丙酮提取物溶于20～30倍重量的正丁醇，超声波助溶，待完全溶解后，装入分液装置中，加入与正丁醇同体积的1～3％NaOH溶液，振摇20～40分钟，进行液液萃取，静置30～60分钟，分层后，收集下层NaOH萃取液；重复上述液液萃取操作3～5次，合并NaOH萃取液；用1∶1盐酸溶液调pH至2～2.5；待沉淀完全，抽滤，用蒸馏水洗涤沉淀物，至pH中性；减压干燥所得沉淀物，温度控制在50～70℃，干燥时间为3～5小时，取出后，粉碎、过六号筛，得到中药龙血竭黄酮类提取物。
本发明方法所制得的龙血竭黄酮类提取物，其用途可用作降血糖药物。
本发明方法从龙血竭中有针对性的提取分离得到了黄酮类提取物，具有强α-葡萄糖苷酶抑制活性与促胰岛素分泌功能，它能使来自碳水化合物的葡萄糖降解和吸收入血液的速度变缓，降低餐后血糖的升高，使平均血糖值下降，促进胰岛素的分泌，进而起到降血糖的作用。
具体实施例方式
现将本发明的具体实施例进一步叙述于后。
实施例1本实施例龙血竭黄酮类提取物的具体制备工艺步骤如下(1)龙血竭的超临界萃取将龙血竭磨成过四号筛的中粉，称取2.5kg，将其装入超临界萃取装置的萃取釜中，用超临界CO2为溶剂，进行龙血竭的超临界萃取，萃取压力为20MPa，温度为45℃，萃取时间为2小时，CO2流量为30kg/h；超临界萃取流出物的解析过程为两级，第一级解析压力7MPa，解析温度为60℃，第二级解析压力6.4MPa，解析温度为40℃，弃去提取部分，萃取釜中的萃取残余物即为除去部分无效组分的龙血竭有效部位，收集萃取残余物2.36kg作为活性成分的粗提物。
(2)超临界萃余物的丙酮抽提自制一个放大的仿索氏抽提器的循环回流装置，将上述超临界萃余物300g放入自制的循环回流装置的浸出器内，加入6倍重量的丙酮溶液，水浴锅温度为80℃，抽提8小时；抽提完全后，提取物回收溶剂并浓缩至干，将所得提取物再置于真空干燥器中60℃减压干燥2小时，取出，粉碎至过六号筛，该细粉即为以黄酮类化合物为主的龙血竭粗提物，粗提物为285g。
5、质量对比研究及质量控制指标
*P＜0.05，**P＜0.01v.s.模型组由表1可知，与糖尿病模型组比较，龙血竭黄酮类提取物低、中、高剂量组都能显著降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的血糖(P＜0.01)，与阳性对照组acarbose具相似降糖效果。实验中糖尿病模型组采用四氧嘧啶选择性的破坏胰岛β细胞，从而造成小鼠血糖升高。这表明龙血竭黄酮类提取物具有减弱四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤或改善受损伤细胞的功能，从而缓解糖尿病小鼠的症状。
(3)龙血竭黄酮类提取物对正常小鼠血清胰岛素的影响取65只正常昆明小鼠随机分为5组，每组13只，即龙血竭黄酮类提取物三个剂量组(100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg)，阳性对照组(糖适平，12mg/kg)及阴性对照组(Control，生理盐水)。均按0.10ml/10g体积灌胃给药，每日1次，连续14d，末次给药前禁食8h，给药1h后眼眶静脉窦采血，分离血清供试样品液。将血清受试样品用放射免疫分析法测定胰岛素(INS)，所得数据进行组间t检验。结果见表2。
表2 龙血竭黄酮类提取物对正常小鼠血清胰岛素的影响
*P＜0.05，**P＜0.01v.s.正常对照组传统的胰岛素增敏剂，经血液吸收后转运到胰腺，选择性地作用于胰岛β细胞的KATP通道，不仅刺激胰岛素早期相释放，从而抑制餐后胰升糖素的释放及由之引起的内源性餐后高血糖，使餐时及总体血糖获得更好的控制，又减轻胰岛负荷，避免慢性高胰岛素血症及其引起的诸多不良反应。而且可使肌肉及脂肪细胞的葡萄糖转运体(Glut)-4去磷酸化，易于向细胞膜移位，提高Glut-4的表达，增强胰岛素介导的葡萄糖摄取。
根据胰岛素测定结果表2表明给药小鼠血清中胰岛素比空白小鼠高，尤其是中剂量组和高剂量组胰岛素分泌量有明显的提高(P＜0.01)。中剂量组和高剂量组胰岛素分泌量接近糖适平(格列喹酮，gliquidone)，促胰岛素分泌效果与糖适平相近。由上述可知，龙血竭黄酮类提取物具有促进胰岛素分泌的效果，所以增加胰岛素的分泌可能是其降血糖作用机理之一。
龙血竭黄酮类提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性优于拜糖苹，胰岛素促泌试验效果接近糖适平。由于α-葡萄糖苷酶抑制活性与胰岛素促泌活性的共同作用，使龙血竭黄酮类提取物龙血竭黄酮类提取物有很强的降血糖作用，为临床治疗糖尿病提供了科学依据。
权利要求
1.一种中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法。其特征在于具有以下的过程和步骤a.龙血竭的超临界萃取将龙血竭磨碎、过筛，随后将其装入超临界萃取装置的萃取釜中，用超临界CO2为溶剂，进行血竭的超临界萃取，萃取压力为10～30MPa，温度为40～50℃，萃取时间为1-5小时，CO2流量为25～35kg/h；萃取流出物的解析过程为两级，第一级解析压力7～11MPa，解析温度为50～60℃，第二级解析压力4～10MPa，解析温度为40～50℃，弃去提取部分，收集萃取残余物，萃取釜中的萃取残余物即为除去部分无效组分的龙血竭有效部位；b.超临界萃余物的丙酮抽提自制一个放大的仿索氏抽提器的循环回流装置，将上述超临界萃余物放入自制的循环回流装置的浸出器内，然后加入5～8倍重量的丙酮溶液，水浴加热温度为70～80℃，反复抽提4～8小时，抽提完全后，提取物回收溶剂并浓缩至干，将所得提取物再置于真空干燥器中50～70℃减压干燥2～3小时，取出，粉碎、过筛；c.丙酮提取物的正丁醇溶解及碱液萃取将上述丙酮提取物溶于20～30倍重量的正丁醇，超声波助溶，待完全溶解后，装入分液装置中，加入与正丁醇同体积的1～3％NaOH溶液，振摇20～40分钟，进行液液萃取，静置30～60分钟，分层后，收集下层NaOH萃取液；重复上述液液萃取操作3～5次，合并NaOH萃取液；用1∶1盐酸溶液调pH至2～2.5；待沉淀完全，抽滤，用蒸馏水洗涤沉淀物，至pH中性；减压干燥所得沉淀物，温度控制在50～70℃，干燥时间为3～5小时，取出后，粉碎、过六号筛，得到中药龙血竭黄酮类提取物。
2.权利要求1所述的一种中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法所制得的龙血竭黄酮类提取物，因其具有强α-葡萄糖苷酶抑制活性与促胰岛素分泌功能，其用途是用作降血糖药物。
全文摘要
本发明涉及一种中药龙血竭黄酮类提取物的制备工艺方法，属中草药制备工艺技术领域。该工艺方法的特征在于具有以下的工艺过程和步骤(1)龙血竭的超临界萃取将龙血竭磨碎、过筛，随后用超临界CO
文档编号A61P3/10GK1857570SQ20061002524
公开日2006年11月8日 申请日期2006年3月30日 优先权日2006年3月30日
发明者吕敬慈, 雍克岚, 刘培培, 陈旭, 顾惠娟 申请人:上海大学