专利名称：含有adp受体拮抗剂和硝酸酯类药物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于新的西药复方。
背景技术：
硝酸酯类药物是用于治疗心肌缺血性疾病疗效最为确切的药物，它包括硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯、戊四硝酯等。此类药物现在仍然是临床上最为常用的治疗心肌缺血性疾病的药物。单硝酸异山梨酯是硝酸酯类药物的典型代表，它是硝酸异山梨酯的代谢产物之一。其特点是无肝脏首过效应，经胃肠道吸收完全而迅速，生物利用度几乎达100％。适用于冠心病的长期治疗和预防心绞痛的发作，也适用于心肌梗死后的治疗和肺循环高血压的治疗。
血小板激活后的聚集是凝血系统最为重要的启动因子，血栓的形成参与了很多的心脑血管系统疾病的发生和发展。在冠状动脉硬化发生之后，冠脉内血栓的形成极易诱发心肌缺血和心绞痛的发作。ADP受体在血小板聚集中占有十分重要的地位。氯吡格雷和日本三共制药公司、Ube公司共同开发的Prasugrel(CS-747，LY640315)均具有很强的抗血小板活性。这两种药物在作用机制上均是通过阻断ADP受体而起作用的，用来防止由血小板表面的二磷酸腺苷受体被封闭而导致的血小板激活。对于需要接受经皮冠状动脉介入(PCI)手术的急性冠心病患者，氯吡格雷和Prasugrel可以有效的预防围术期和术后的缺血性事件发生。
阿司匹林通过抑制TXA2的合成而具有弱的抗血小板作用。小剂量的阿司匹林在临床上用于预防老年冠心病和脑中风患者的血栓形成，疗效确切。阿司匹林和单硝酸异山梨酯的复方制剂现已应用于临床，对于预防冠心病患者急性心肌缺血的发生具有较好的作用。阿司匹林和氯吡格雷、Prasugrel等ADP受体拮抗剂抗血小板的作用机理完全不同，对于ADP受体拮抗剂和单硝酸异山梨酯联合使用在预防冠心病患者心肌缺血的发生是否具有很好的效果，尚不能够得知，二者合用对于患者的安全性也没有考察过。
发明内容
氯吡格雷现在已经应用于临床。Prasugrel，其化学名称为2-乙酰氧基-5-(α-环丙基羰基-2-氟苄基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶，已经进入III期临床。我们根据CN1041730C所公开的化合物结构式，合成了Prasugrel以及其可药用的盐，并对氯吡格雷和Prasugrel等ADP受体拮抗剂与单硝酸异山梨酯联合使用的协同性效果进行了大量系统的研究。我们的实验结果表明，在大鼠体内血栓形成实验中，单硝酸异山梨酯可以增强ADP受体拮抗剂的抗血栓形成作用，而且其抗血栓形成效果要显著优于单硝酸异山梨酯和阿司匹林联合用药；在大鼠血瘀模型加小剂量垂体后叶素所致的急性心肌缺血实验中，单硝酸异山梨酯和ADP受体拮抗剂取得了显著的协同性作用，而且其效果也明显优于阿司匹林和单硝酸异山梨酯联用。
具体实施例方式 实施例1 氯吡格雷、Prasugrel与单硝酸异山梨酯联用对大鼠体内血栓形成的影响 实验目的观察氯吡格雷、Prasugrel分别与单硝酸异山梨酯联合使用对大鼠体内血栓形成的影响。
实验材料 氯吡格雷购自北京恒天易德化工有限公司； Prasugrel鲁南制药集团科研部有机合成实验室合成； 单硝酸异山梨酯鲁南制药集团贝特公司生产。
SD大鼠鲁南制药集团山东新时代药业有限公司动物中心提供。
主要仪器BT87-3型实验性体内血栓形成仪，包头医学院电器维修科技开发部制造。
实验方法 取健康大鼠70只，体重180-230g，雌雄各半，按体重随机分为下列7组 模型对照组，给予生理盐水灌胃； 氯吡格雷组，给予氯吡格雷8mg/kg灌胃； Prasugrel组，给予Prasugrel 1.5mg/kg灌胃； 单硝酸异山梨酯组，给予单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃； 氯吡格雷联合用药组，给予氯吡格雷8mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃； Prasugrel联合用药组，给予Prasugrel 1.5mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃； 阿司匹林联合用药组，给予阿司匹林1.5mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃。
上述动物在灌胃后40min，腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，分离一侧颈总动脉，用BT87-3型实验性体内血栓形成仪刺激颈动脉，刺激电流1.5mA，刺激时间为7分钟，观察颈动脉血流阻塞时间(即血栓形成时间OT)。
结果表明，与模型对照组相比较，单硝酸异山梨酯组对大鼠血栓形成时间有延长的趋势，其他各用药组可使大鼠血栓形成时间明显延长，其中，氯吡格雷联合用药组和Prasugrel联合用药组的血栓形成时间延长最为显著，且明显优于单独用药的氯吡格雷组或Prasugrel组。具体结果见表1。
表1，氯吡格雷、Prasugrel分别与单硝酸异山梨酯联合使用对大鼠体内血栓形成的影响 **与模型对照组相比较，P＜0.01. §§与单硝酸异山梨酯组相比较，P＜0.01. ※※与氯吡格雷组相比较，P＜0.01. ★★与Prasugrel组相比较，P＜0.01. &&与阿司匹林联合用药组相比较，P＜0.01. 我们将实施例1中所使用的单硝酸异山梨酯用硝酸异山梨酯、硝酸甘油或戊四硝酯代替，同样取得了很好效果，与ADP受体拮抗剂取得了显著的协同性作用。
实施例2 氯吡格雷、Prasugrel与单硝酸异山梨酯联用对血瘀模型大鼠小剂量垂体后叶素所致急性心肌缺血的保护作用 实验目的观察氯吡格雷、Prasugrel分别与单硝酸异山梨酯联合使用对血瘀模型大鼠小剂量垂体后叶素所致急性心肌缺血的保护效应。
实验材料 FX-211型单道自动心电图机北京福田公司生产； 氯吡格雷购自北京恒天易德化工有限公司； Prasugrel鲁南制药集团科研部有机合成实验室合成； 单硝酸异山梨酯鲁南制药集团贝特公司生产。
SD大鼠鲁南制药集团山东新时代药业有限公司动物中心提供。
垂体后叶素上海生物化学制药厂生产。
乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；激酸激酶MB亚型(CK-MB)试剂盒由Rapid Diagnostics，Inc.，Division of MP Biomedicals Inc.公司生产。
实验方法取健康大鼠80只，体重180-230g，雌雄各半，按体重随机分为下列8组 正常对照组、模型对照组、氯吡格雷组、Prasugrel组、单硝酸异山梨酯组、氯吡格雷联合用药组、Prasugrel联合用药组和阿司匹林联合用药组。
其中，正常对照组，每天灌胃同体积的生理盐水，连续7d；模型对照组，每天灌胃同体积生理盐水，连续7d，第7天皮下注射盐酸肾上腺素(Adr)8μg(8ml)/kg共2次，两次间隔4h，在2次注射肾上腺素之间(第一次注射后2h)将大鼠浸入冰水内5min。处置后停食，次日上午腹腔注射脑垂体后叶素10U/kg，正常对照组腹腔注射等体积的蒸馏水。其它各用药组在给予垂体后叶素前12小时和1小时两个时间点分别给予各组相对应的药物。氯吡格雷组，给予氯吡格雷8mg/kg灌胃；Prasugrel组，给予Prasugrel 1.5mg/kg灌胃；单硝酸异山梨酯组，给予单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃；氯吡格雷联合用药组，给予氯吡格雷8mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃；Prasugrel联合用药组，给予Prasugrel1.5mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃；阿司匹林联合用药组，给予阿司匹林1.5mg/kg和单硝酸异山梨酯2.0mg/kg灌胃。
在造血瘀模型之前以及腹腔注射垂体后叶素诱发心肌缺血后2min、5min、8min、15min，用FX-211型单道自动心电图机记录心电图，以T波上升≥50％、T波变低平、双向、倒置作为心肌缺血指标，用ST-T的振幅变化率来表示心肌缺血的严重程度。5小时后，断头处死大鼠，取血4ml，3000r/min离心30分钟。按照试剂盒说明书中的方法检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)和激酸激酶MB亚型(CK-MB)的活性。
所有实验结果资料用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较用方差分析。
实验结果 药物对心肌缺血大鼠心电图ST-T振幅变化率的影响比较见表2。与模型对照组相比较，氯吡格雷联合用药组和Prasugrel联合用药组在腹腔注射垂体后叶素2min后心电图的ST-T振幅变化率小于模型对照组(P＜0.01)；氯吡格雷组、Prasugrel组和单硝酸异山梨酯组在腹腔注射垂体后叶素15min后心电图的ST-T振幅变化率小于模型对照组(P＜0.05)；阿司匹林联合用药组在腹腔注射垂体后叶素8min后心电图的ST-T振幅变化率小于模型对照组(P＜0.01)； 由表中的数据可以看出，氯吡格雷联合用药组和Prasugrel联合用药组在5min和8min两个时间点上，氯吡格雷和单硝酸异山梨酯联合使用，Prasugrel和单硝酸异山梨酯联合使用对心肌缺血大鼠心电图ST-T振幅变化率的抑制作用取得了显著的协同性作用。这就充分表明，氯吡格雷和单硝酸异山梨酯联合使用，Prasugrel和单硝酸异山梨酯联合使用对急性心肌缺血取得了显著的协同性作用，并且其效果要显著优于阿司匹林联合用药组。具体实验结果见表2。
表2.药物对心肌缺血大鼠心电图ST-T振幅变化率的影响比较(x±s) *与模型对照组相比较，P＜0.05. **与模型对照组相比较，P＜0.01. §与单硝酸异山梨酯组相比较，P＜0.05. §§与单硝酸异山梨酯组相比较，P＜0.01. ※与氯吡格雷组相比较，P＜0.05. ※※与氯吡格雷组相比较，P＜0.01. ★与Prasugrel组相比较，P＜0.05. ★★与Prasugrel组相比较，P＜0.01. &与阿司匹林联合用药组相比较，P＜0.05. &&与阿司匹林联合用药组相比较，P＜0.01. 药物对心肌缺血大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)和激酸激酶MB亚型(CK-MB)活性的影响见表3。由表中的数据可以看出，单硝酸异山梨酯、氯吡格雷或Prasugrel分别单独使用，对血瘀模型大鼠小剂量垂体后叶素所致急性心肌缺血没有表现出显著的保护作用，仅单硝酸异山梨酯组的CK-MB活性与模型组相比较有显著性差异。氯吡格雷联合用药组和Prasugrel联合用药组在降低血清中LDH活性和CK-MB活性方面取得了显著的协同性作用，且其保护作用要显著优于阿司匹林联合用药组。
表3.药物对心肌缺血大鼠血清中LDH和CK-MB活性的影响 *与模型对照组相比较，P＜0.05. **与模型对照组相比较，P＜0.01. §§与单硝酸异山梨酯组相比较，P＜0.01. ※※与氯吡格雷组相比较，P＜0.01. ★★与Prasugrel组相比较，P＜0.01. &与阿司匹林联合用药组相比较，P＜0.05.&&与阿司匹林联合用药组相比较，P＜0.01. 我们将实施例2中所使用的单硝酸异山梨酯用硝酸异山梨酯、硝酸甘油或戊四硝酯代替，同样取得了很好效果，与ADP受体拮抗剂取得了显著的协同性作用。
实施例3 氯吡格雷单硝酸异山梨酯片 氯吡格雷20g 单硝酸异山梨酯 10g 甘露醇 10g 乳糖40g 微晶纤维素 20g 6％PVP的无水乙醇溶液适量 山榆酸甘油酯2g 制备工艺 氯吡格雷和单硝酸异山梨酯分别过100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的氯吡格雷和单硝酸异山梨酯以及甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，50℃以下干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯作为润滑剂，压片即得。
实施例4 氯吡格雷单硝酸异山梨酯缓释胶囊 a、 氯吡格雷 30g 空白丸芯 300g 7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 200g 制备工艺 将氯吡格雷过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度35℃，CYL3bar，CAP10.6bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为95％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。
b、 a中制得的含氯吡格雷小丸 乙基纤维素 50g 硬脂酸 60g 聚乙二醇-40008g 滑石粉 10g 95％乙醇 1000g 制备工艺 将a中制得的含氯吡格雷小丸倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风温度35℃，入风压力0.5bar，CYL3bar，CAP1 1.0bar，蠕泵6％，转盘转速160rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。
c、 单硝酸异山梨酯 5g 空白丸芯 30g 7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇) 30g 制备工艺 将单硝酸异山梨酯过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP10.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速130rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。
d、将b与c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含氯吡格雷与单硝酸异山梨酯的重量分别为30mg和5mg进行填充，即可。
实施例5 氯吡格雷硝酸异山梨酯分散片 氯吡格雷15g 硝酸异山梨酯25g 甘露醇 24g 羟丙基纤维素30g 交联聚乙烯吡咯烷酮 30g 5％PVPK30水溶液 适量 硬脂酸镁 0.6g 制备工艺 将处方量的氯吡格雷和硝酸异山梨酯过100目筛，甘露醇、羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮过80目筛，混匀后加入适量5％PVPK30水溶液制粒，加入硬脂酸镁后压片即可。
实施例6 硝酸甘油prasugrel缓释胶囊 处方A 硝酸甘油溶液 20g 羟丙基淀粉 50g 水溶性淀粉 20g 20％淀粉浆 适量 处方B 盐酸prasugrel 5g 乙基纤维素 25g 硬脂酸 10g 羧甲基淀粉钠 30g PVP5g 8％PVPk30无水乙醇溶液 适量 制备工艺 将处方A中的羟丙基淀粉、水溶性淀粉分别过100目筛，混匀、加入处方量的硝酸甘油溶液，再加20％淀粉浆适量制粒，50℃以下烘干，18目筛整粒，将处方B中的prasugrel、乙基纤维素、硬脂酸、羧甲基淀粉钠、PVP分别过100目筛，混匀、加8％PVPk30无水乙醇溶液适量制粒，烘干，整粒。将处方A和处方B按重量比1∶1进行胶囊填充即可。
实施例7 戊四硝酯prasugrel缓释片 戊四硝酯60g prasugrel 8g 乳糖 30g 羟丙基甲基纤维素-15M 20g 8％PVP的95％乙醇溶液 适量 山榆酸甘油酯 2g 制备工艺 戊四硝酯和prasugrel分别过100目筛，乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M过80目筛，分别按照处方量称取，混合均匀，加入8％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。压片即得。
实施例8 单硝酸异山梨酯prasugrel胶囊 单硝酸异山梨酯 15g 马来酸prasugrel3g 预胶化淀粉 20g 微晶纤维素 20g 羧甲基淀粉钠 10g 10％淀粉浆 适量 制备工艺 将处方中的单硝酸异山梨酯、prasugrel、预胶化淀粉、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠分别过100目筛，按处方量称取，混匀、加10％淀粉浆适量制粒，55℃以下烘干，18目筛整粒，胶囊充填即可。
实施例9 单硝酸异山梨酯prasugrel注射液 单硝酸异山梨酯4.0g 硫酸prasugrel 4.0g 丙二醇200ml 加注射用水至总量 1000ml 制备工艺 将处方量的单硝酸异山梨酯和prasugrel溶解于适量的丙二醇和注射用水的混合液中，加注射用水至注射液总量为1000ml，调pH值4.0-6.0，过滤，分装即可。
权利要求
1.一种用于治疗心肌缺血性疾病的药物组合物，其特征在于它含有硝酸酯类药物和二磷酸腺苷受体拮抗剂。
2.如权利要求1所述的二磷酸腺苷受体拮抗剂，其特征在于它是氯吡格雷、Prasugrel或其盐。
3.如权利要求1所述的硝酸酯类药物，其特征在于它是硝酸甘油、单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯或戊四硝酯。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于它是口服的固体制剂。
5.如权利要求4所述的口服固体制剂，其特征在于它是片剂、胶囊、分散片、缓释片、缓释胶囊或注射液。
全文摘要
本发明通过药理试验证实了硝酸酯类药物可以增强ADP受体拮抗剂的抗血栓形成作用，而且其抗血栓形成效果要显著优于硝酸酯类药物和阿司匹林联合用药；硝酸酯类药物和ADP受体拮抗剂取得了显著的协同性作用，而且其效果也明显优于阿司匹林和单硝酸异山梨酯联用。
文档编号A61K9/52GK101028517SQ200610044408
公开日2007年9月5日 申请日期2006年3月2日 优先权日2006年3月2日
发明者赵志全 申请人:鲁南制药集团股份有限公司