专利名称：一种治疗脑血管疾病的注射乳剂及其制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种银杏内酯，特别涉及一种用特殊方法制备的银杏内酯；本发明的还涉及一种药物制剂，特别涉及一种治疗缺血性脑血管疾病的银杏内酯所制成的注射乳剂及其制备工艺。
背景技术：
银杏内酯是银杏叶中的有效部位之一，主要由白果内酯(Bilobalid)、银杏内酯A(Ginkgolides A)、银杏内酯B(Ginkgolides B)、银杏内酯C(Ginkgolides C)和银杏内酯J(Ginkgolides J)等组成。银杏内酯是很强的血小板活化因子(PAF)的抑制剂，可抑制因缺血所致的各类异常炎性反应及栓塞的形成，抑制自由基的释放，从而保护脑组织免受损伤，其中的白果内酯可以加强神经细胞中多种神经生长因子的功能，从而保护神经细胞免受缺血性损伤。银杏内酯可用于多种疾病的治疗，特别是在治疗缺血性脑血管疾病方面有很好的疗效。
银杏内酯属于萜类内酯类成分，极性小，水溶性差，将其做成传统的注射液过程中发现该注射液澄明度较差，放置一段时间后易析出晶体，稳定性不易达到注射剂的要求。目前银杏内酯注射剂的制备工艺，以葡钾胺为助溶剂，则银杏内酯不是很稳定，内酯环容易开环；以羟丙基-β-环糊精做为注射剂增溶剂，它的安全性目前还没有确切的结论。
乳剂是互不相溶的两相液体混合形成的非均匀相液体分散体系。乳剂液滴大小一般小于1微米，分散度很大，药物吸收和药效的发挥很快，有利于提高生物利用度。脂溶性药物制成乳剂能解决药物溶解性问题，保证制剂质量，并能提供一定营养能量。
发明内容
本发明目的在于提供一种银杏内酯及其制备方法；本发明另一目的在于提供该银杏内酯的指纹图谱质量检测方法；本发明的另一目的还在于提供一种银杏内酯注射乳剂及其制备方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明银杏内酯的制备方法可以是如下方法之一以银杏叶为起始原料将银杏叶粗粉用75～95％乙醇溶液回流提取3次，每次0.5～1小时，第一次乙醇溶液用量为原生药量的8～12倍，第二次和第三次分别为6～10倍和4～8倍，合并提取液，浓缩至约每1ml含生药0.5～1.5g，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用0.5～2％的碳酸钠或碳酸氢钠溶液洗涤1～3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用40～60％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用30～50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1～5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用25～45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用20～40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用10～30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯；或以常规银杏叶提取物为起始原料将银杏叶提取物用3～10倍量的水加热溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用0.5～2％的碳酸钠或碳酸氢钠溶液洗涤1～3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用40～60％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用30～50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1～5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用25～45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用20～40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用10～30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
本发明银杏内酯的优选制备方法如下以银杏叶为起始原料取银杏叶粗粉用85％乙醇溶液回流提取3次，每次1小时，第一次乙醇溶液用量为原生药量的10倍，第二次和第三次分别为8倍和6倍，合并提取液，浓缩至约每1ml含生药1.0g，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1.5％的碳酸钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加3％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用35％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用20％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V，将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯；或以常规银杏叶提取物为起始原料取银杏叶提取物用5倍量的水加热溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1％的碳酸氢钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品，银杏内酯粗品用42％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1.5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
本发明银杏内酯中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C加起来所占的质量分数大于80％；银杏内酯中主要活性成分白果内酯和银杏内酯B所占的质量分数分别大于25％和大于10％。用常规方法纯化银杏内酯时白果内酯损失很大。
本发明银杏内酯的指纹图谱的质量检测方法包括如下步骤照高效液相色谱法测定，《中华人民共和国药典》一部附录VI D；色谱条件与系统适应性试验，色谱柱美国Alltech Platinum ODS，4.6mm×250mm，5μm；流动相水-甲醇-四氢呋喃为65∶25∶10；流速1ml/min；进样量20μl；ELSD2000检测器，漂移管温度105℃，载气流速3.00L/min，柱温40℃；参照物溶液的制备，精密称取白果内酯对照品25mg，置50ml量瓶中，加甲醇10ml超声溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3.0ml于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；供试品溶液的制备，取银杏内酯6mg精密称定，加甲醇1ml使溶解，然后加流动相稀释至10ml，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至1小时；本发明银杏内酯供试品指纹图谱应与银杏内酯对照指纹图谱有良好的相似性，相似度≥0.90；银杏内酯含有萜类内酯≥80％，其HPLC高效液相色谱指纹图谱包括5个共有峰，1号峰为银杏内酯J、2号峰为银杏内酯C、S峰为白果内酯、3号峰为银杏内酯A、4号峰为银杏内酯B，5个共有指纹峰的相对保留时间分别为1号峰0.73～0.89，2号峰0.80～0.98，S峰1.00，3号峰1.02～1.24，4号峰1.17～1.43；其中，5个共有指纹峰的优选相对保留时间分别为1号峰0.81，2号峰0.89，S号峰1.00，3号峰1.13，4号峰1.30；1号峰0.74，2号峰0.97，S号峰1.00，3号峰1.03，4号峰1.42或1号峰0.88，2号峰0.93，S号峰1.00，3号峰1.23，4号峰1.127；共有指纹峰的相对峰面积分别为2号峰0.194～0.323，S号峰1.000，3号峰0.719～1.078，4号峰0.229～0.382；其中，共有指纹峰的优选相对峰面积分别为2号峰0.258，S号峰1.000，3号峰0.898，4号峰0.305；2号峰0.195，S号峰1.000，3号峰1.077，4号峰0.230或2号峰0.322，S号峰1.000，3号峰0.720，4号峰0.381。
上述本发明银杏内酯可以制成注射乳剂，该注射乳剂的组份为
银杏内酯 0.04～25重量份 油 脂 100～300重量份乳 化 剂 5～30重量份 稳定剂 0.5～5重量份等渗调节剂20～50重量份助溶剂与增溶剂 3～25重量份。
上述原料优选重量配比如下银杏内酯 24重量份 大豆油 200重量份大豆卵磷脂20重量份油酸 0.5重量份甘 油 25重量份；银杏内酯 0.2重量份棉籽油 150重量份蛋黄卵磷脂12重量份胆酸 1重量份 甘 油 25重量份；银杏内酯 20重量份 棉籽油 110重量份大豆卵磷脂10重量份油酸 1重量份 山梨醇 50重量份 丙二醇3重量份；银杏内酯 7.5重量份大豆油 300重量份蛋黄卵磷脂15重量份油 酸 钠 0.8重量份山梨醇 45重量份 丙二醇5重量份；银杏内酯 0.05重量份 大豆油 290重量份大豆卵磷脂6重量份油酸 4.8重量份山梨醇 22重量份 丙二醇20重量份或银杏内酯 24重量份 棉籽油 110重量份蛋黄卵磷脂28重量份胆酸 0.6重量份甘油 70重量份。
上述本发明银杏内酯制成的注射乳剂原料中所述的油脂选自大豆油、棉籽油、玉米油、芝麻油、花生油、茶油、菜子油或橄榄油，优选大豆油、棉籽油；乳化剂选自大豆磷脂、氢化大豆磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、卵磷脂、羟基卵磷脂、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪醇醚或泊洛沙姆，优选蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂；稳定剂选自胆酸、胆盐、脱氧胆酸、脱氧胆盐、油酸、油酸钠、聚氧乙烯蓖麻油、聚乙二醇或泊洛沙姆，优选油酸、油酸钠、胆酸；等渗调节剂选自甘油、丙二醇、山梨醇、氯化钠或葡萄糖，优选甘油、山梨醇；助溶剂与增溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油或泊洛沙姆，优选甘油、丙二醇。
本发明银杏内酯制成的注射乳剂的具体制备工艺如下取银杏内酯、助溶和增溶剂，混匀，溶解，再加入油脂，混匀，加热至55～85℃，作为油相；将乳化剂、稳定剂、等渗调节剂置高速搅拌机中，加入55～85℃注射用水800重量份，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌10～20分钟，即得到初乳液；用pH调节剂将初乳液调pH为6.0～9.0，加注射用水至1000重量份，转移至高压乳匀机中，循环乳化3～6次，至滴粒粒径小于5μm，且90％的滴粒粒径为0.1～1μm，微孔滤膜滤过，灌装，灭菌，即得本发明药物组合物注射乳剂；上述pH调节剂选自盐酸、磷酸、枸橼酸、冰醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾，优选盐酸、氢氧化钠。
本发明银杏内酯制成的注射乳剂的优选制备工艺如下取银杏内酯、助溶和增溶剂，混匀，溶解，再加入油脂，混匀，加热至70℃，作为油相；将乳化剂、稳定剂、等渗调节剂置高速搅拌机中，加入70℃注射用水800重量份，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌15分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为7.0，加注射用水至1000重量份，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，灌装，灭菌，即得。
本发明银杏内酯注射乳剂中银杏内酯的每次用量在10～50mg，制剂规格可以是2ml/支、5ml/支、10ml/支，也可以是100ml/瓶、250ml/瓶等，银杏内酯的含量范围是10mg/250ml～50mg/2ml，即0.04～25mg/ml。
银杏内酯是以银杏叶或银杏叶提取物为原料精制而来，并建立了银杏内酯的指纹图谱，能很好的控制该药品质量，保证临床疗效。本发明银杏内酯制成的注射乳剂稳定性好，粒径小。该乳剂具有活血化瘀通络，拮抗PAF(血小板活化因子)、抗血小板聚集、溶栓等作用；用于缺血性脑血管疾病的治疗，如脑缺血、脑血管痉挛、脑栓塞和血管性痴呆等。同时根据毒性实验表明本发明银杏内酯注射乳剂无明显的不良反应，副作用少，使用安全。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1药效学实验1抗血小板聚集实验取健康家兔24只，体重2～3kg，随机分成4组，即空白组、2.0mg/kg、4.0mg/kg、8.0mg/kg的本发明银杏内酯注射乳剂组，每组6只。以上各组均以5.3ml/kg体重经耳缘静脉注射给药。给药前取血一次，给药后10、30、60、90和120min分别取血，制备富血小板血浆和贫血小板血浆，观察药物静脉注射后对抗血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集功能的影响。
实验结果表明，银杏内酯注射乳剂静脉注射后，剂量为4.0mg/kg时，在注射后30min和60min明显抑制PAF引起的血小板聚集；剂量为8.0mg/kg时，在注射后10min起效，于60min达到最大抑制作用，抗PAF作用持续至90min，结果见表1。
表1银杏内酯注射乳剂对PAF诱导的血小板聚集功能的影响
2溶栓实验血栓模型制备取雄性SD大鼠40只，体重240～280g，随机分为4组，每组，即空白组、2.0mg/kg、4.0mg/kg、8.0mg/kg的本发明银杏内酯注射乳剂组，每组10只，用改良Charlton等方法制备血栓模型，以血流量降低为刺激前的50％作为血栓形成。
血栓活性的测定根据Tomihisa等方法，以刺激结束后至血流量降低为刺激前的50％所需的时间定为血栓形成时间。形成血栓后20min，上述各组均经股静脉一次性注射，观察给药后1小时内血管再通情况。
实验结果表明，2.0mg/kg本发明银杏内酯注射乳剂组的血栓血管与空白组相似，均无一再通；4.0mg/kg、8.0mg/kg本发明银杏内酯注射乳剂组血管再通率分别为30％、60％；4.0mg/kg本发明银杏内酯注射乳剂组的血管再栓率为66.7％，8.0mg/kg本发明银杏内酯注射乳剂组的再栓率为50％。再通后1小时内，血管开放状态表现为，空白组均持续栓塞；8.0mg/kg的本发明银杏内酯注射乳剂组血管开放状态良好，结果见表2。
表2银杏内酯注射乳剂对动脉血栓的溶栓作用
实验例2毒性实验1急性毒性实验取体重18~22克的昆明种小鼠20只，体重100-120克的SD大鼠20只，雄雌各半，尾静脉注射本发明药物组合物注射乳剂50mg/ml，给药量分别为0.5ml/20g体重和1ml/100g体重，给药后连续观察两周，测得本发明药物组合物注射乳剂的LD50大于0.6g/kg，相当于临床拟推荐剂量的600倍。
2长期毒性实验取SD大鼠120只随机分成4组大剂量组、中剂量组、低剂量组、阴性对照组，每组30只。给药各组分别ip24mg/kg/day(低剂量组)、60mg/kg/day(中剂量组)、150mg/kg/day(高剂量组)，每天一次，连续8周。经血液、生化、病理组织检查，动物未见明显的毒副反应，表明本发明药物组合物注射乳剂无明显的不良反应，副作用少，使用安全。
实验例3安全性实验1、刺激性实验取家兔采用肌内注射和耳缘静脉滴注给药的途径，观察银杏内酯注射乳剂对其产生的刺激性作用。结果银杏内注射乳剂经家兔肌内注射和耳缘静脉滴注给药，未见刺激性反应。
2、过敏性实验取豚鼠进行银杏内酯注射乳剂的全身过敏试验，结果表明银杏内酯注射乳剂重复给药不引起豚鼠的全身过敏性反应。
3、溶血实验取家兔心脏血进行银杏内酯注射乳剂的溶血试验，结果银杏内酯注射乳剂溶血试验合格，可供注射用。
实验例4稳定性实验取本发明银杏内酯注射乳剂与银杏内酯葡萄糖注射液进行稳定性的对比实验。
将本发明银杏内酯注射乳剂放置于20±2℃的恒温中3个月，放置之前进行样品检测，银杏内酯注射乳剂没有分层现象，粒径均没有大于5μm，90％小于1μm，检验合格；银杏内酯葡萄糖注射液为无色澄明液体，没有可见异物，检验合格。放置3个月后再取样检测，结果后银杏内酯注射乳剂没有分层现象，粒径检查合格率为95.2％，质量稳定；银杏内酯葡萄糖注射液为无色澄明液体，可见异物的灯检合格率为65.8％，析出白点较多，不溶性微粒合格率为50.7％，质量不稳定。
实验结果表明本发明银杏内酯注射乳剂稳定性好。
图1银杏内酯对照指纹图谱。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
具体实施例方式实施例1银杏内酯制备方法取银杏叶粗粉用85％乙醇溶液回流提取3次，每次1小时，第一次乙醇溶液用量为原生药量的10倍，第二次和第三次分别为8倍和6倍，合并提取液，浓缩至约每1ml含生药1.0g，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1.5％的碳酸钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加3％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用35％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用20％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V，将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
实施例2银杏内酯制备方法取常规银杏叶提取物用5倍量的水加热溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1％的碳酸氢钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品，银杏内酯粗品用42％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1.5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
实施例3银杏内酯的指纹图谱的质量检测方法取实施例1所制备的银杏内酯，照高效液相色谱法测定，《中华人民共和国药典》一部附录VI D；色谱条件与系统适应性试验，色谱柱美国Alltech Platinum ODS，4.6mm×250mm，5μm；流动相水-甲醇-四氢呋喃为65∶25∶10；流速1ml/min；进样量20μl；ELSD2000检测器，漂移管温度105℃，载气流速3.00L/min，柱温40℃；参照物溶液的制备，精密称取白果内酯对照品约25mg，置50ml量瓶中，加甲醇10ml超声溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3.0ml于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；供试品溶液的制备，取银杏内酯6mg精密称定，加甲醇1ml使溶解，然后加流动相稀释至10ml，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至1小时。
银杏内酯供试品指纹图谱应与银杏内酯对照指纹图谱有良好的相似性，相似度≥0.90；银杏内酯HPLC高效液相色谱指纹图谱包括5个共有峰，1号峰为银杏内酯J、2号峰为银杏内酯C、S峰为白果内酯，3号峰为银杏内酯A，4号峰为银杏内酯B。实施例1所制备的银杏内酯的5个共有指纹峰的相对保留时间分别为1号峰0.81，2号峰0.89，S号峰1.00，3号峰1.13，4号峰1.30；共有指纹峰的相对峰面积分别为2号峰0.258，S号峰1.000，3号峰0.898，4号峰0.305。
实施例4银杏内酯的指纹图谱的质量检测方法取实施例2所制备的银杏内酯，按照实施例3的检测方法，测定其指纹峰保留时间及面积，其中5个共有指纹峰的相对保留时间分别为1号峰0.74，2号峰0.97，S号峰1.00，3号峰1.03，4号峰1.42；共有指纹峰的相对峰面积分别为2号峰0.195，S号峰1.000，3号峰1.077，4号峰0.230。
实施例5银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例1制成的银杏内酯25g，并取大豆油200g，大豆卵磷脂20g，油酸0.5g，甘油25g。
制备方法取银杏内酯、甘油，混匀，溶解，再加入大豆油，混匀，加热至65℃，作为油相；将大豆卵磷脂、油酸置高速搅拌机中，加入65℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌15分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为8.0，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，分装，封口，121℃下灭菌15分钟，即得。
实施例6银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例2制成的银杏内酯0.2g，并取棉籽油150g，蛋黄卵磷脂12g，胆酸1g，甘油25g。
制备方法取银杏内酯、胆酸、甘油，混匀，溶解，再加入棉籽油，混匀，加热至80℃，作为油相；将蛋黄卵磷脂置高速搅拌机中，加入80℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌12分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为8.5，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，取样进行检验，合格后分装于100ml输液瓶中，扎盖，121℃下灭菌15分钟，即得。
实施例7银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例2制成的银杏内酯20g，并取棉籽油110g，大豆卵磷脂15g，油酸1g，山梨醇50g，丙二醇3g。
制备方法取银杏内酯、山梨醇、丙二醇，混匀，再加入棉籽油，混匀，溶解，加热至60℃，作为油相；将大豆卵磷脂、油酸置高速搅拌机中，加入60℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌18分钟，即得到初乳液；用1％盐酸溶液将初乳液调pH为6.0，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，分装于1ml安培中，封口，121℃下灭菌15分钟，即得。
实施例8银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例1制成的银杏内酯7.5g，并取大豆油200g，蛋黄卵磷脂15g，油酸钠0.8g，山梨醇45g，丙二醇5g。
制备方法取银杏内酯、油酸钠，混匀，溶解，再加入大豆油，混匀，加热至70℃，作为油相；将蛋黄卵磷脂、山梨醇、丙二醇置高速搅拌机中，加入70℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌15分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为7.0，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，分装于2ml安培中，封口，121℃下灭菌15分钟，即得。
实施例9银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例1制成的银杏内酯0.05g，并取大豆油290g，大豆卵磷脂6g，油酸4.8g，山梨醇22g，丙二醇20g。
制备方法取银杏内酯、甘油，混匀，溶解，再加入大豆油，混匀，加热至65℃，作为油相；将大豆卵磷脂、油酸置高速搅拌机中，加入65℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌15分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为8.0，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，分装，封口，121℃下灭菌15分钟，即得。
实施例10银杏内酯注射乳剂制备方法取实施例2制成的银杏内酯24g，并取棉籽油110g，蛋黄卵磷脂28g，胆酸0.6g，甘油70g。
制备方法取银杏内酯、山梨醇、丙二醇，混匀，再加入棉籽油，混匀，溶解，加热至60℃，作为油相；将大豆卵磷脂、油酸置高速搅拌机中，加入60℃注射用水800ml，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌18分钟，即得到初乳液；用1％盐酸溶液将初乳液调pH为6.0，加注射用水至1000ml，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，分装于1ml安培中，封口，121℃下灭菌15分钟，即得。
权利要求
1.一种银杏内酯，其特征在于该银杏内酯由如下方法制成以银杏叶为起始原料将银杏叶粗粉用75～95％乙醇溶液回流提取3次，每次0.5～1小时，第一次乙醇溶液用量为原生药量的8～12倍，第二次和第三次分别为6～10倍和4～8倍，合并提取液，浓缩至约每1ml含生药0.5～1.5g，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用0.5～2％的碳酸钠或碳酸氢钠溶液洗涤1～3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用40～60％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用30～50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1～5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用25～45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用20～40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用10～30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯；或以常规银杏叶提取物为起始原料将银杏叶提取物用3～10倍量的水加热溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用0.5～2％的碳酸钠或碳酸氢钠溶液洗涤1～3次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用40～60％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用30～50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1～5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用25～45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用20～40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用10～30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
2.如权利要求1所述的银杏内酯的制备方法，其特征在于该方法为以银杏叶为起始原料取银杏叶粗粉用85％乙醇溶液回流提取3次，每次1小时，第一次乙醇溶液用量为原生药量的10倍，第二次和第三次分别为8倍和6倍，合并提取液，浓缩至约每1ml含生药1.0g，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1.5％的碳酸钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品；银杏内酯粗品用50％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加3％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用35％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用30％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用20％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V，将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯；或以常规银杏叶提取物为起始原料取银杏叶提取物用5倍量的水加热溶解，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，萃取液用1％的碳酸氢钠溶液洗涤2次，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，蒸干，得到银杏内酯粗品，银杏内酯粗品用42％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体I；滤液蒸干，残渣用45％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体II；滤液加1.5％的活性炭煮沸30分钟脱色，过滤，滤液蒸干，残渣用40％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体III；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体IV；滤液蒸干，残渣用25％乙醇加热溶解，过滤，冷却，让其结晶，过滤，将结晶用乙醇洗涤，真空干燥，得到晶体V；将晶体I～V合并，研细，混匀，即得银杏内酯。
3.如权利要求1所述的银杏内酯的指纹图谱的质量检测方法，其特征在于该方法为照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适应性试验，色谱柱美国Alltech Platinum ODS，4.6mm×250mm，5μm；流动相水-甲醇-四氢呋喃为65∶25∶10；流速1ml/min；进样量20μl；ELSD2000检测器，漂移管温度105℃，载气流速3.00L/min，柱温40℃；参照物溶液的制备，精密称取白果内酯对照品25mg，置50ml量瓶中，加甲醇10ml超声溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3.0ml于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；供试品溶液的制备，取银杏内酯6mg精密称定，加甲醇1ml使溶解，然后加流动相稀释至10ml，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得；测定法，分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至1小时；本发明银杏内酯供试品指纹图谱应与银杏内酯对照指纹图谱有良好的相似性，相似度≥0.90；银杏内酯含有萜类内酯≥80％，其HPLC高效液相色谱指纹图谱包括5个共有峰，1号峰为银杏内酯J、2号峰为银杏内酯C、S峰为白果内酯、3号峰为银杏内酯A、4号峰为银杏内酯B，5个共有指纹峰的相对保留时间分别为1号峰0.73～0.89，2号峰0.80～0.98，S峰1.00，3号峰1.02～1.24，4号峰1.17～1.43；共有指纹峰的相对峰面积分别为2号峰0.194～0.323，S号峰1.000，3号峰0.719～1.078，4号峰0.229～0.382。
4.如权利要求3所述的银杏内酯的指纹图谱的质量检测方法，其特征在于该方法中的HPLC高效液相色谱指纹图谱包括5个共有峰，1号峰为银杏内酯J、2号峰为银杏内酯C、S峰为白果内酯、3号峰为银杏内酯A、4号峰为银杏内酯B，5个共有指纹峰的相对保留时间分别为1号峰0.81，2号峰0.89，S号峰1.00，3号峰1.13，4号峰1.30；共有指纹峰的相对峰面积分别为2号峰0.258，S号峰1.000，3号峰0.898，4号峰0.305。
5.如权利要求1所述的银杏内酯制成的注射乳剂，其特征在于该注射乳剂的组份为银杏内酯0.04～25重量份油 脂100～300重量份乳化剂5～30重量份 稳定剂0.5～5重量份等渗调节剂20～50重量份 助溶剂与增溶剂3～25重量份。
6.如权利要求5所述的银杏内酯制成的注射剂，其特征在于该注射乳剂中所述的油脂为大豆油或棉子油；乳化剂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂；稳定剂为油酸、胆酸或油酸钠；等渗调节剂为甘油或山梨醇；助溶剂与增溶剂为甘油或丙二醇。
7.如权利要求5所述的银杏内酯制成的注射乳剂，其特征在于该注射乳剂的组份为银杏内酯24重量份 大豆油200重量份 大豆卵磷脂20重量份油酸0.5重量份甘 油25重量份。
8.如权利要求5所述的银杏内酯制成的注射乳剂，其特征在于该注射乳剂的组份为银杏内酯0.05重量份 大豆油290重量份 大豆卵磷脂6重量份油酸4.8重量份山梨醇22重量份 丙二醇20重量份。
9.如权利要求5所述的银杏内酯制成的注射乳剂，其特征在于该注射乳剂的组份为银杏内酯24重量份 棉籽油110重量份 蛋黄卵磷脂28重量份胆酸0.6重量份甘 油70重量份。
10.如权利要求5所述的银杏内酯制成的注射乳剂，其特征在于该注射乳剂的组份为银杏内酯7.5重量份 大豆油300重量份 蛋黄卵磷脂15重量份油 酸 钠0.8重量份 山梨醇45重量份 丙二醇5重量份。
11.如权利要求5、6、7、8、9或10所述的银杏内酯制成的注射乳剂的制备方法，其特征在于该方法为取银杏内酯、助溶和增溶剂，混匀，溶解，再加入油脂，混匀，加热至55～85℃，作为油相；将乳化剂、稳定剂、等渗调节剂置高速搅拌机中，加入55～85℃注射用水800重量份，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌10～20分钟，即得到初乳液；用pH调节剂将初乳液调pH为6.0～9.0，加注射用水至1000重量份，转移至高压乳匀机中，循环乳化3～6次，至滴粒粒径小于5μm，且90％的滴粒粒径为0.1～1μm，微孔滤膜滤过，灌装，灭菌，即得。
12.如权利要求11所述的银杏内酯制成的注射乳剂的制备方法，其特征在于该方法为取银杏内酯、助溶和增溶剂，混匀，溶解，再加入油脂，混匀，加热至70℃，作为油相；将乳化剂、稳定剂、等渗调节剂置高速搅拌机中，加入70℃注射用水800重量份，高速搅拌，使溶解，作为水相；在高速搅拌下将油相加入到水相中，继续搅拌15分钟，即得到初乳液；用1％氢氧化钠溶液将初乳液调pH为7.0，加注射用水至1000重量份，转移至高压乳匀机中，循环乳化3次，至滴粒粒径小于1微米，微孔滤膜滤过，灌装，灭菌，即得。
13.如权利要求11或12所述的银杏内酯制成的注射乳剂的制备方法，其特征在于该方法中所述的pH调节剂为盐酸或氢氧化钠。
全文摘要
本发明公开一种用特殊方法制备的银杏内酯及其所制成的注射乳剂及其制备工艺。银杏内酯可通过银杏叶或其提取物为原料制备而成；银杏内酯指纹图谱的质量检测方法为以水－甲醇－四氢呋喃为流动相，照高效液相色谱法，进行检测。该银杏内酯所制成的注射乳剂以银杏内酯、油脂、乳化剂、稳定剂、等渗调节剂、助溶剂与增溶剂等组成。其制备工艺为取银杏内酯、助溶和增溶剂，混匀，溶解，再加入油脂，作为油相；将乳化剂、稳定剂、等渗调节剂搅拌，溶解，作为水相；将油相加入到水相中，搅拌得到初乳液；将初乳液调pH值，加注射用水，循环乳化，滤过，灌装。本发明还提供该银杏内酯及其所制成的注射乳剂在制备治疗缺血性脑血管疾病药物中的用途。
文档编号A61K9/107GK1830981SQ20061006665
公开日2006年9月13日 申请日期2006年4月17日 优先权日2006年4月17日
发明者谭兴根, 李转花, 鲜林, 谢莉, 梁隆, 程志鹏 申请人:四川科伦药业股份有限公司