专利名称：6-氧-咖啡酰-熊果甙、含其的岩茶提取物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种6-氧-咖啡酰-熊果式、含有6-氧-咖啡酰-熊果甙 的岩茶提取物及制备方法。
背景技术：
岩茶，又名樟叶越桔(变种)(Vaccinium dunalianum Wight var. dmmliamim),别名饭米果(云南昆明)、长尾越桔(中国高等植物 图鉴)。常绿灌木，稀攀援灌木，高l-4米，偶成乔木，高3-17米， 通常地生，稀附生；幼枝紫褐色，有细棱，无毛。叶片革质或厚革质， 椭圆形、长圆形、长圆状披针形或卵形，长4.5-13厘米，宽2-5厘米， 顶端尾状渐尖，尾尖部分可达3厘米，基部楔形或钝圆，全缘，表面 无毛，背面散生贴伏的具腺短毛，侧脉3-4对，自叶片下部向上斜升， 连同中脉在两面突起；叶柄长5-7亳米，通常无毛，有时密被短柔毛。 花序腋生，总状，多花，长3-6厘米，无毛；苞片卵形，长7-10毫米, 早落；花梗长5-8毫米，稍粗壮；萼简无毛，萼齿三角形，长l毫米 许；花冠淡绿带紫红色或淡红色，宽钟状，长约6毫米，裂片三角形， 开展或上部反折，外面无毛，内面被疏柔毛；雄蕊鲜黄色，与花冠近 等长，花丝扁平，长约l毫米，疏生短柔毛，药室背部有开展的距， 药管长为药室的2倍。浆果球形，直径4-12亳米，成熟时紫黑色，被 白粉。花期4-5月，果期9-12月。
从岩茶中提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，是一种有效的抗氧化剂， 对于肌肤美白、祛斑等有特别功效，可广泛用于化妆品、食品。
经过专利检索，目前还没有发现以岩茶为原料的提取物；也没有 发现6-氧-咖啡酰-熊果甙的相关研究报导。
发明内容
本发明的目的在于提供一种6-氧-咖啡酰-熊果甙
(6-O-caffeoyl-Arbutin )、含有6-氧-咖啡酰-熊果式的岩茶提取物及制
备方法。
本发明一种6-氧-咖啡酰-熊果甙，它具有下列分子结构<formula>formula see original document page 5</formula>
本发明提供了一种含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物，它以
岩茶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶和千燥制得的， 提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的重量含量为80%以上。
本发明所述的含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物为淡黄色， 粉末状，味苦，易溶于水，熔点为20(TC。
本发明同时提供了 一种制备所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶 提取物的方法，它以岩茶为原料，包括提取溶媒提取、浓缩、分离纯 化、结晶和干燥步骤。提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙重量含量为80% 以上。
本发明方法釆用岩茶的叶、芽、花、果实为原料，可以在提取前 先将原料进行粉碎，岩茶经粉碎后有利于活性成分的充分溶出。 本发明所述提取方法为加热提取。
本发明加热提取时提取溶媒为水或低碳醇，溶媒用量为原料重量 的3~15倍量，最佳为8倍量；温度为50 10CTC, 7(TC最佳；提取 时间为溶媒沸腾后1~2小时，提取次数为2 3次。其中所述低碳醇 为甲醇、乙醇，所述低碳醇的重量浓度为1%~95%, 50%为最佳浓
度。
本发明所述岩茶提取后需要进行回收低碳醇处理，温度控制在60 "C以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的药液与原料重量 比应控制在1: 2~5之间。
本发明所述岩茶提取、回收低碳醇、离心(卧式离心机:4800r/min) 后，浓缩液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和滤液；用 水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶l。
本发明所述分离纯化为柱层析分离纯化。
本发明所述柱层析分离纯化为
1) 液经浓缩，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2、回收低碳醇、 离心(卧式离心机4800r/min)后，直接进入大孔树脂柱， 流速控制在0.5 ~ 1.5BV/hr左右；吸附比例为2:1，即两份树 月旨:一份原料；
2) 用去离子水洗柱至流出液清澈，约2h;
3) 用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，流速略慢于吸附的速
度；
4) 收集从大孔树脂柱中的流出的澄清、透明，略带醇味的洗 脱液，至流出液完全无醇味，收集洗脱液约是树脂量的1~ 3倍左右；
5) 醇水洗脱液经真空浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；
6) 浓缩液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和滤 液；用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶 2
上述步骤中所述低碳醇为甲醇、乙醇，低浓度醇水溶液的浓度最 低为体积浓度30 % ,高浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度95 %;
本发明所述柱层析分离纯化中使用的大孔树脂为以聚苯乙烯为 骨架的材料；所述大孔树脂型号为DIOI、 D130、 AB-8或HP-20。 本发明方法中得到的粗晶1、粗晶2经合并后，加入8 10倍重
量的低碳醇，加热待其溶解后，放置24小时，析出大量的结晶，抽 滤，得成品；其中所述低碳醇为甲醇、乙醇，低浓度醇水溶液的浓度 最低为体积浓度20% ，髙浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度40% ， 以30%为最佳浓度。
本发明同时提供了一种从岩茶提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，它为 淡黄色，粉末状，味苦，易溶于水，经HPLC (High Performance Liquid Chromatography)法高效液相色谱测定，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果 甙重量含量为80%以上。
本发明通过核磁共振(NMR)和质谱(Mass Spectrum)确定了 6-氧-咖啡酰-熊果甙的分子结构，如下所示
本发明从岩茶中提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，是一种有效的抗氧 化剂，对于肌肤美白、祛斑等有特别功效，可广泛用于化妆品、食品。
图1为本发明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的特征指紋图谱。 图2为本发明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的核磁共振(NMR) 结果。
图3为本发明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的质谱(Mass Spectrum)图谱。
图4、图5为本发明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的核磁共振 (NMR)图谱。
具体实施方式
实施例l
如图1-5所示，通过核磁共振(NMR)和质谱(MassSpectrum) 确定了 6-氧-咖啡酰-熊果甙的分子结构，如下所示
OH
实施例2
1) 前处理将拣选、剔除杂质后的岩茶粉碎；
2) 提取将原料与去离子水按l: IO比例混合装入提取罐，加热 至沸腾后保持温度2小时，收取第一次提取料液，第二次提取再加入 3倍量的去离子水，加热沸腾保温2小时，收取第二次提取料液。
3) 减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制 在60。C以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收的药液与原料重量比 控制在1: 3之间；
4) 离心将浓缩后的药液通过离心机离心；
5) 离心后的药液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀 和滤液；用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶1;
6) 浓缩、离心后的滤液直接进D101树脂柱；
7) 用水洗柱至流出液清澈；用30%乙醇洗柱至流出液无味；收 集从大孔树脂柱中的流出液；
8) 洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；9) 浓缩液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和滤液，; 用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶2;
10) 粗晶l和粗晶2经合并后，加入8倍重量的50%体积浓度的 乙醇，加热待其溶解后，放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得 成品。
实施例3
1) 前处理将拣选、剔除杂质后的岩茶粉碎；
2) 提取将原料与50%体积浓度的乙醇按1: 8比例混合装入提 取罐，加热至沸腾后保持温度l小时，收取第一次提取料液，第二次 提取再加入8倍量的50%体积浓度的乙醇，加热沸腾保温l小时，收 取第二次提取料液。
3) 减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制 在60。C以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收乙醇的药液与原料重 量比控制在1: 2之间；
4) 离心将浓缩后的药液通过离心机离心；
5) 离心后的药液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀 和滤液；用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶l;
6) 浓缩、离心后的提取液直接进D101树脂柱；
7) 用水洗柱至流出液清澈；用30%乙醇洗柱至流出液无味；收 集从大孔树脂柱中的流出液；
8) 洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原料的一倍量左右；
9) 浓缩液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和滤液，; 用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶2;
10) 粗晶1和粗晶2经合并后，加入IO倍重量的30%体积浓度 的乙醇，加热待其溶解后，放置24小时，析出大量的结晶，抽滤， 得成品。
权利要求
1、一种6-氧-咖啡酰-熊果甙，其特征在于它具有下列分子结构
2、 一种含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物，其特征在于它 以岩茶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶和干燥制得 的，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的重量含量为80%以上。
3、 如权利要求2所述的含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物， 其特征在于所述提取物为淡黄色，粉末状，味苦，易溶于水，熔点 为200。C。
4、 一种制备如权利要求2所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提 取物的方法，其特征在于它以岩茶为原料，包括提取溶媒提取、浓 缩、分离纯化、结晶和干燥步骤。
5、 如权利要求4所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物的制 备方法，其特征在于所述提取方法为加热提取，所述提取溶媒为水 或低碳醇，溶媒用量为原料重量的3~15倍量；提取温度为50-100 °C;提取时间为溶媒沸腾后1~2小时，提取次数为2-3次。
6、 如权利要求5所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物的制 备方法，其特征在于所述低碳醇为甲醇或乙醇；所述低碳醇的重量 浓度为1% ~95%。
7 、如权利要求6所述含有6-氧-咖啡酰-熊果式的岩茶提取物的制 备方法，其特征在于所述浓缩步骤为将提取液导入浓缩器中进行减 压浓缩，温度控制在6(TC以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收的 药液与原料重量比控制在1: 3之间；将浓缩后的药液通过离心机离 心；离心后的药液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和 滤液；用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶l;
8、 如权利要求7所述含有6-氧-咖啡酰-熊果式的岩茶提取物的制 备方法，其特征在于所述分离纯化为柱层析分离纯化。
9、 如权利要求8所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物的制 备方法，其特征在于所述柱层析分离纯化步骤为1) 滤液经浓缩，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2、回收低碳 醇、离心后，直接进入大孔树脂柱，流速控制在0.5 ~ 1.5BV/hr左右；吸附比例为2:1，即两份树脂:一份原料；2) 用去离子水洗柱至流出液清澈，约2h;3) 用低碳醇洗柱至洗脱液澄清、透明，流速略慢于吸附的速 度；4) 收集从大孔树脂柱中的流出的澄清、透明，略带醇味的洗 脱液，至流出液完全无醇味，收集洗脱液约是树脂量的1~ 3倍左右；5) 醇水洗脱液经真空浓缩，浓缩至原料的一倍量左右； 浓缩液放置24小时，析出大量的结晶，抽滤，得沉淀和滤液；用水洗至沉淀颜色为淡黄色，将沉淀真空干燥，得粗晶2;所用的大孔树脂为以聚苯乙烯为骨架的材料，大孔树脂型号为: DlOl、 D130、 AB-8或HP-20。
10、 如权利要求9所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物的 制备方法，其特征在于将粗晶1、粗晶2经合并后，加入8 10倍 重量的低碳醇，加热待其溶解后，放置24小时，析出大量的结晶， 抽滤，得成品。
全文摘要
本发明涉及一种6-氧-咖啡酰-熊果甙(6-O-caffeoyl-Arbutin)、含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的岩茶提取物及制备方法。以岩茶为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化、结晶、干燥提取6-氧-咖啡酰-熊果甙，它以水或低碳醇作为溶媒，加热提取，采用柱层析分离纯化、重结晶，得到的6-氧-咖啡酰-熊果甙为淡黄色，粉末状，味苦，易溶于水，熔点为200℃，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙重量含量经高效液相测定，为80％以上。
文档编号A61P39/00GK101104628SQ20061009109
公开日2008年1月16日 申请日期2006年7月13日 优先权日2006年7月13日
发明者孙步详, 宋云飞, 梁远盛, 汤凌志, 兴 韦 申请人:桂林莱茵生物科技股份有限公司;宋云飞