专利名称：一种中药复方及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药研制领域，涉及一种中药复方及其制备方法和用途，具体涉及一种由吴茱萸、通关藤、白英、南蛇藤、鸡矢藤、鸡血藤、忍冬藤、野葡萄藤、大血藤、苦参、重楼、甘草等中药材组成的中药复方及其制备方法，还涉及了该复方及其制剂在制备治疗肺癌、肝癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、骨癌等各种癌症疾病，特别是治疗肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等各种原发性支气管肺癌的药物中的应用。
背景技术：
癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病。根据国家卫生部的统计，癌症是我国继心脑血管疾病之后的第二大死亡原因。如果将心血管和脑血管病分开来统计，肿瘤则位居第一。据统计，全世界每年新发的癌症病人有1000万，每年死亡的癌症病人有600万。在我国，估计每年新发现200万～230万癌症病人，每年死亡的癌症病人约为120万～150万，目前全国肿瘤患者总数估计在450万人左右，并以每年3％的速度递增。世界卫生组织2001年报道，世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了22％，今后20年还将上升大约50％。近半个世纪来，世界许多国家和地区肺癌的发病率和死亡率都在逐渐上升。在28个发达国家中，肺癌已成为恶性肿瘤中最常见的死亡原因，居所有肿瘤发病率的首位，成为本世纪发病率和死亡率增长最快且严重危害人类健康和生命的恶性肿瘤。肺癌也已成为我国第一大癌症，在第14届世界心胸外科医生学会上，全国肿瘤防治研究办公室公布了我国肺癌的发病现状和趋势分析。2000～2005年，中国的肺癌发病人数将增加12万，其中男性患者将从26万增至33万，增加26.9％；女性从12万增至17万，增加38.4％。目前畅销的用于肿瘤的化学药品有紫杉醇、吉西他滨、托泊替康、多西他赛等，虽然这些药品具有不错的治疗效果，但是同时也存在有很多毒副作用，例如常常发生骨髓抑制、白血球低下、腹泻、恶心、疲倦等。很多化学药品在肿瘤的治疗过程中常常联合用药，在增加治疗效果的同时，毒副反应也大大增加，再加上肿瘤化疗、放疗费用的高昂、患者的耐受性差等各种因素，使治疗不能顺利进行，有相当一部分人由于不能耐受或经济原因而放弃治疗。
中医对肿瘤的治疗认识已久，对肿瘤的发生发展亦有独到的见解，在临床治疗实践中也收到了很好的效果。借助于先进的科学技术，以及在和西医结合的过程中，中医对肿瘤的认识不断加深，中医中药治疗肿瘤的地位也逐渐被世人所肯定。和西药相比，中医中药在治疗肿瘤疾病方面具有整体观念强，能增强机体全身的内在抗癌机理，毒副作用小、弥补其他治疗的不足，机体耐受性好、病人易于接受等优势。因此，深入研究中医药，开发具有毒副作用小、治疗效果确切的抗肿瘤中药产品是医药研发工作者义不容辞的一个重要任务。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种中药复方及其制剂，还提供该复方的制备方法以及在制备治疗各种癌症疾病的药物中的应用，特别是在制备治疗肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等各种原发性支气管肺癌的药物中的应用。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案得以实现的。
本发明所述的中药复方是由吴茱萸、通关藤、白英、南蛇藤、鸡矢藤、鸡血藤、忍冬藤、野葡萄藤、大血藤、苦参、重楼、甘草等中药材所组成的，其中所用药材的用量范围以重量计为吴茱萸1～150份、通关藤1～50份、白英1～150份、南蛇藤1～50份、鸡矢藤1～50份、鸡血藤1～50份、忍冬藤1～50份、野葡萄藤1～50份、大血藤1～50份、苦参1～50份、重楼0.5～30份、甘草1～50份。
所用药材的优选用量范围以重量计为吴茱萸5～50份、通关藤2～30份、白英5～50份、南蛇藤2～30份、鸡矢藤2～30份、鸡血藤2～30份、忍冬藤2～30份、野葡萄藤2～30份、大血藤2～30份、苦参2～30份、重楼0.5～10份、甘草2～30份。
所用药材的最佳用量以重量计为吴茱萸20份、通关藤6份、白英20份、南蛇藤6份、鸡矢藤6份、鸡血藤6份、忍冬藤6份、野葡萄藤6份、大血藤6份、苦参6份、重楼2份、甘草6份。
本发明所要求保护的中药复方并不局限于上述的罗列，凡是主要药味或者大部分药味和本发明所提供的中药复方相同或相似，或者是所用药材相同，仅仅是用量有所变化者，均在本发明所提供的中药复方的保护范围之内。
方中的药材经过精选、清洗、粉碎、溶媒提取、合并、浓缩、干燥等多个工艺步骤，得到药材的水提物和/或醇提物，以所得的提取物作为有效药料，用于制备药品中的应用。
本发明所提供的中药复方的制备方法，主要包括①吴茱萸、白英的乙醇回流或温浸提取；②药渣和其余药材的水煎醇沉；③所得水提物和醇提物的混合。其详细的工艺流程如下所述 a、将精选、清洗后的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入5～12倍60％～95％的乙醇溶液，采用回流或温浸之一种或两种方法提取2～4次，每次提取时间0.5～6小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用； b、将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入5～20倍量水煎煮2～4次，每次煎煮时间0.5～3小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.0～1.3(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到50％以上，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥； c、将步骤a和步骤b所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
本发明所提供的中药复方的制备方法，优选以下工艺流程 a)、将精选、清洗后的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入8～10倍80％的乙醇溶液，回流提取3次，每次提取时间1～3小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用； b)、将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入8～10倍量水煎煮3次，每次煎煮时间1～2小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.05～1.25(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到70％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥； c)、将步骤a和步骤b所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
本发明所提供的中药复方及其提取物可制备成药剂学上能够接受任何一种制剂形式，给药方式可以是口服给药、直肠给药、肌内给药、静脉给药、鼻腔给药、阴道给药、皮下给药等所有给药形式。可以按照各个制剂的常规制备方法制成片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、胶丸、颗粒剂、口服液、糖浆剂、合剂、丸剂、注射剂、冻干粉针剂、乳剂、吸入剂、气雾剂或栓剂等所有药学上可接受的药物制剂。在片剂的制备过程中可以根据不同需要制备成普通片、包衣片、缓释片、控释片、分散片、口腔崩解片、泡腾片、含片等。不论制备成何种剂型，本发明所提供的复方的每日有效服用量以生药材计算为20～180克，其制剂的规格可以为1～500mg每单位。
本发明在传统中医理论的指导下，根据现代药理研究结果，以上述中药材组方配伍，攻补兼施，扶正祛邪，共奏清热解毒消痈，活血散结止痛之功效。所用中药材经过水和/或醇等溶媒提取，去除大量的杂质，所得提取物主要由皂苷、生物碱、黄酮类等活性成分所组成，采用现代分析手段对对主要成分进行含量测定，以求药物质量的可控性。本发明药物能够有效抑制恶性肿瘤的增值分化，抑制肿瘤的复发和转移。患者可以连续、长期用药，毒副作用少。本发明所提供的中药复方以及该中药复方经过提取所得的提取物可以用于制备治疗各种癌症药物中的应用，其抗癌谱广泛，可以用作肺癌、肝癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、骨癌等所有癌症疾病的治疗药物，特别是在制备治疗肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等各种原发性支气管肺癌的药物中的应用。
图1对本品PG-49细胞生长曲线的影响； 图2对本品SPC-A1细胞生长曲线的影响。
以下通过实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不仅限于此。
具体实施例 实施例1片剂 吴茱萸10kg 通关藤3kg 白英 10kg 南蛇藤3kg 鸡矢藤3kg 鸡血藤3kg 忍冬藤3kg 野葡萄藤 3kg 大血藤 3kg苦参3kg 重楼 1kg甘草3kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入10倍80％的乙醇溶液，回流提取3次，提取时间分别为2.5小时、1.5小时、1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入8倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为2小时、1.5小时和1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.30(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到70％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将上述所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/片 硬脂酸镁0.1～0.3毫克/片 羧甲基淀粉钠4～12毫克/片 微晶纤维素 10～100毫克/片 将中药复方有效药料与羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合，过筛，使其混匀，加入适量的水或适宜浓度的乙醇制粒，干燥后，整粒，加入适量的硬脂酸镁，然后用适当直径的冲压装置将颗粒压片。
实施例2硬胶囊剂 吴茱萸20kg 通关藤6kg 白英 20kg 南蛇藤6kg 鸡矢藤6kg 鸡血藤6kg 忍冬藤6kg 野葡萄藤 6kg 大血藤6kg 苦参 6kg 重楼 3kg 甘草 6kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入8倍70％的乙醇溶液，回流提取3次，提取时间分别为3小时、2小时、0.5小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入10倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为3小时、2小时、1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.10(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到80％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/粒 糊精10～200毫克/粒 微粉硅胶10～200毫克/粒 将中药复方有效药料过筛，与糊精、微粉硅胶混合，过筛，加入适量的水或适宜浓度的乙醇制粒，干燥后，整粒，用合适的装置将该混合物装入硬明胶胶囊中。通过改变净重，以及按照需要改变胶囊的大小可以制备不同的胶囊。
实施例3丸剂 吴茱萸1kg通关藤1kg 白英 1kg南蛇藤1kg 鸡矢藤1kg鸡血藤1kg 忍冬藤1kg野葡萄藤 1kg 大血藤1kg苦参 1kg 重楼 0.5kg 甘草 1kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入5倍60％的乙醇溶液，温浸提取3次，提取时间分别为6小时、4小时和2小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入5倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为2小时、1小时和0.5小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.05(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到50％以上，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/粒 辅料适量 将中药复方有效药料过筛，加入适宜辅料，均匀混合后，泛丸。
实施例4颗粒剂 吴茱萸150kg 通关藤50kg 白英 150kg 南蛇藤50kg 鸡矢藤50kg 鸡血藤50kg 忍冬藤50kg 野葡萄藤 50kg 大血藤50kg 苦参 50kg 重楼 30kg 甘草 50kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入12倍95％的乙醇溶液，温浸提取4次，提取时间分别为6小时、4小时、2小时、1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入12倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为3小时、2小时、1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.15(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到75％以上，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～20克/袋 糊精2～10克/袋 蔗糖2～15克/袋 矫味剂 适量 甜味剂 适量 将中药复方有效药料和蔗糖、糊精、矫味剂、甜味剂混合均匀，加入适量的水或适宜浓度的乙醇制粒，干燥后，整粒，分装。
实施例5软胶囊剂 吴茱萸100kg 通关藤30kg 白英 100kg 南蛇藤30kg 鸡矢藤30kg 鸡血藤30kg 忍冬藤30kg 野葡萄藤 30kg 大血藤30kg 苦参 30kg 重楼 10kg 甘草 30kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入8倍75％的乙醇溶液，回流提取3次，提取时间分别为2.5小时、1.5小时、1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入10倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为2小时、1.5小时和1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.10(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到65％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将上述所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/粒 稀释剂 50～450毫克/粒 助悬剂 1～7.5毫克/粒 每粒囊壳的组份和含量如下 明胶 100～150毫克 甘油 30～50毫克 水100～150毫克 防腐剂适量 将明胶置于胶罐中，加入可溶解明胶量的纯化水，胶罐温度适宜，溶化后，加入甘油、防腐剂，搅拌均匀，抽真空脱气后保温静置；按比例将中药复方有效药料与稀释剂、助悬剂等混合均匀，将内容物和制备好的明胶置旋转压囊机，压制成软胶囊，定型、干燥即可。可以按照不同需要，改变内容物制备成不同规格的软胶囊。
实施例6滴丸 吴茱萸5kg通关藤2kg 白英 5kg南蛇藤2kg 鸡矢藤2kg鸡血藤2kg 忍冬藤2kg野葡萄藤 2kg 大血藤2kg苦参 2kg 重楼 0.6kg 甘草 2kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入10倍90％的乙醇溶液，温浸提取3次，提取时间分别为4小时、2小时、1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入12倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为3小时、2小时、1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.25(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到85％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料1～20毫克/粒 基质40～80毫克 冷凝液 甲基硅油(适量) 在中药复方有效药料中加水制成均匀糊状，再加入熔融的基质液，加热熔融成澄清液体，倒入已预热的滴丸器中，控制滴制温度和滴速，滴入冷凝液中，成丸后吸干冷凝液，收集滴丸，置干燥器内即得。
实施例7糖浆剂 中药复方有效药料1～100毫克 适宜辅料适量 纯化水至10～100毫升 将中药复方有效药料和适宜辅料充分混匀，和纯化水制成溶液调制需要体积并混合均匀，灭菌后分装。
实施例8舌下片 吴茱萸30kg通关藤10kg 白英 30kg南蛇藤10kg 鸡矢藤10kg鸡血藤10kg 忍冬藤10kg野葡萄藤 10kg 大血藤10kg苦参 10kg 重楼3kg甘草10kg 将所用重量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入12倍95％的乙醇溶液，温浸提取4次，提取时间分别为6小时、4小时、2小时、1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入12倍量水煎煮3次，煎煮时间分别为3小时、2小时、1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.20(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到75％以上，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/片 可压蔗糖10～100毫克/片 将中药复方有效药料经合适的筛过筛后与可压蔗糖混合均匀，并用适当的冲压装置压片。可以通过改变活性成分与载体的比例或者通过改变压缩重量而制备成不同强度的片剂。
实施例9直肠给药的栓剂 吴茱萸50kg通关藤15kg 白英 50kg南蛇藤15kg 鸡矢藤15kg鸡血藤15kg 忍冬藤15kg野葡萄藤 15kg 大血藤15kg苦参 15kg 重楼 5kg 甘草 15kg 将选定用量的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入8倍80％的乙醇溶液，回流提取3次，提取时间分别为第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入10倍量水煎煮3次，每次煎煮时间分别为2小时，1.5小时和1小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.10(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到70％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；将所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
中药复方有效药料0.01～0.40克/粒 Witepsol H150.1～2克 中药复方有效药料在熔融WitepsolH15中的悬浮液，并且适当的装置将其装入栓剂模中。
下面用药理实验结果阐明其药效作用 一、实验材料 1、受试药物本发明所述的复方有效药料，文中简称“本品”。在实验前可配制成所需浓度。
2、受试动物SD大鼠；昆明种小鼠；C57BL C小鼠；BALB C裸小鼠。
3、细胞A549，NCI-H460；SPC-A1、PG-49、ASP-I、Lewis瘤株；S180、EAC、H22瘤株。
二、细胞实验 1、对人肺腺癌细胞A549和人大细胞肺癌细胞NCI-H460的抑制作用 实验方法 含药血清制备方法本品粉末用蒸馏水配制成混悬液(可加适当助溶剂)，以5g/kg大鼠灌胃给药，每天两次，连续7次，在最后一次给药后1h大鼠颈动脉取血，离心分离血清，血清56℃下灭活1h，最后过0.22um膜，进行无菌处理，得血清2ml左右，4℃保存备用。
试药浓度设置因无法确定血清中药物含量，以每孔血清加入量来确定试药的终浓度，拟设置20ul、10ul、5ul三个加入量浓度。另设置两组DMSO溶剂溶解本品组，终浓度分别为20ug/ml、4ug/ml。
接种细胞用0.25％胰蛋白酶消化处于对数生长期的A549和NCI-H460肿瘤细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔约0.4×104个细胞接种于96孔板中，将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下培养24小时后加药。
加药按试药浓度设置项加药，每个浓度平行8孔，加入体积不同组，最后以培养基补齐，细胞继续培养24小时。
呈色弃上清，每孔加200μl新鲜配制的含0.4mg·ml-1MTT的无血清培养基，继续培养4h，然后弃上清加200μl DMSO溶解MTT甲臢沉淀，用微型振荡器振荡混匀。
比色酶标仪测定570nm处光密度值(以空白对照孔调零)，按下式计算肿瘤细胞抑制率。
细胞抑制率(％)＝(对照组OD值-试验组OD值)/对照组OD值×100％ 实验结果 本品含药血清在加量20ul时对A549人肺腺癌的抑制率达到46％，加10ul时抑制率为28.4％，加5ul时抑制率为9.6％，抑制率随着含药血清量的降低而降低；DMSO溶解本品20ug/ml对A549人肺腺癌的抑制率为41.3％。DMSO溶解本品20ug/ml对NCI-H460人大细胞肺癌的抑制率为51.3％。实验数据见表1和表2。
表1本品对A549人肺腺癌的影响作用
表2本品对NCI-H460人大细胞肺癌的影响作用
2、对人肺癌细胞SPC-A1、人巨细胞肺癌PG-49细胞瘤株体外生长的抑制作用 实验方法 细胞培养将SPC-A1细胞和PG-49细胞分别接种于RPMI-1640培养液中(内含20％胎牛血清，100U ml青霉素和100μg ml链霉素)，置于5％CO2、37℃培养箱中培养每2～3天换液，当细胞铺满培养瓶后传代。
细胞生长抑制率检测(采用MTT还原法)将生长良好的细胞，用0.25％胰酶消化后，制成1×105/ml细胞悬液，接种于96孔培养板内，每孔200μl，待培养24h后，吸出培养液，分别加入含本品0、10、100、200μg ml的1640培养液200μl，每个浓度平行8个复孔。继续培养48h，培养结束后，加入MTT(5mg ml)20μl，4h离心弃上清，加DMS0200μl，避光振荡5min，立即于全自动酶标仪上测各孔570nm处的吸光度(A570)。
抑制率＝(A对照-A实验)/A对照×100％。
对细胞生长曲线的影响将生长良好的细胞，用0.25％胰酶消化后，制成1×105/ml细胞悬液，接种于25ml培养瓶中，每瓶接种1.5ml，随机分成三组，每组平行三瓶，分别加入含本品0、10、100、200μg ml的1640培养液，培养24h后，各组更换新鲜的培养液，继续培养，并逐日收集细胞，计数作为当天细胞的增值数，并以此为纵坐标，以培养天数为横坐标，作细胞生长曲线。
实验结果 形态学观察SPC-A1细胞和PG-49细胞均为贴壁生长，胞浆饱满，生长与相邻细胞生长融合成片。经本品处理后，可见细胞脱落，悬浮于培养液中，细胞圆缩，核颜色加深，折光性增强，100μg ml和200μg ml浓度影响最为明显。
MTT法结果显示本品100μg ml和200μg ml的浓度对SPC-A1细胞体外生长都有一定的抑制作用，生长抑制率为66.5％、71.0％；三个浓度对PG-49细胞的生长都有明显的抑制作用，抑制率分别为45.8％、73.9％、79.0％。实验数据见表3。
生长曲线结果显示本品三个浓度都能使PG-49细胞和SPC-A1细胞生长受到抑制，增殖速度与空白组比较都明显减慢，分别见说明书附图1和附图2。
表3对SPC-A1细胞和PG-49细胞生长抑制率的影响(n＝8)
*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较 3、对S180，H22等实体瘤的影响 实验方法 选用体重为18～22g的雄性昆明种小鼠，移植性肿瘤研究法，在无菌条件下取接种一周后生长良好的S180、H22细胞株，用玻璃匀浆器加无菌生理盐水磨匀浆，并稀释至106～107个细胞/ml的浓度，分别接种在小鼠腋部皮下，接种量为0.2ml。接种24小时后称重，并随机分组给药。模型组，给予等量生理盐水；本品给药I组，1.5g kg；本品给药II组3.0g kg；本品给药III组6.0g kg；环磷酰胺组50mg kg。各组小鼠均灌胃给药(水)，qd×9天。停药后次日各组小鼠称重，脱颈椎处死小鼠并分离瘤块，称重并计算肿瘤抑制率(％)，进行组间比较。计算公式如下肿瘤生长抑制率％＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％ 实验结果 本品对两种肿瘤模型均有明显的抑瘤活性。对小鼠移植性S180实体瘤模型，两个剂量组3.0g kg和6.0g kg的抑瘤率分别为35.0％和50.9％。对小鼠移植性H22实体瘤模型，3.0g kg和6.0g kg两个剂量组的抑瘤率分别为39.5％，47.3％。实验数据分别见表4、表5。
表4本品对小鼠移植性肿瘤S180实体瘤的影响
注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表5本品对小鼠移植性肿瘤H22实体瘤的影响
注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
4、对小鼠艾氏腹水癌(ECA)的影响 实验方法 选用体重为18～22g的雄性昆明种小鼠，无菌条件下取生长良好的荷瘤小鼠的腹水，用无菌生理盐水稀释成1×107个细胞/ml的浓度，每只小鼠腹腔接种癌细胞悬液0.2ml只。接种后24小时随机分组，包括模型对照组，给予等量生理盐水；本品给药I组(1.5g kg)；本品给药II组(3.0g kg)；本品给药III组(6.0g/kg)；环磷酰胺组(50mg kg)。各组小鼠均灌胃给药(水)，qd×9天。停药后观察小鼠存活情况，记录死亡数和存活天数，计算各组动物的生命延长率％，并进行组间比较。计算公式如下 生命延长率(ILS)＝(给药组平均生存天数-对照组平均生存天数)/对照组平均生存天数×100％ 实验结果 本品1.5g kg、3.0g kg和6.0g kg三个剂量组均能延长感染肿瘤小鼠的存活天数，生命延长率分别为25.9％、49.0％、61.2％。实验数据见表6。
表6本品对小鼠艾氏腹水瘤ECA的影响(n＝15)
5、对小鼠ASP-I肺癌细胞生长的影响 实验方法 取小鼠随机分成5组模型对照组；治疗I组(1.5g kg)；治疗II组(3.0g kg)；治疗III组(6.0g kg)环磷酰胺组(50mg kg)。于各组小鼠右侧腋窝皮下接种ASP-I肺癌实体瘤细胞0.2ml，次日各组分别灌胃给药(水)，灌胃容量为0.2ml 10g，qd×21。停药次日处死动物，摘取瘤体、胸腺、脾脏，称重，按公式计算抑瘤率和脏器指数。
抑瘤率＝(对照组瘤重-治疗组瘤重)/对照组瘤重×100％ 胸腺(脾)指数(mg g)＝胸腺(脾)重/体重 实验结果 本品3.0g/kg、6.0g kg剂量组对ASP-I肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用，抑制率分别为34.6％、40.9％。且还能增加荷瘤小鼠的胸腺和脾脏指数，与对照组比较有显著性差异，阳性对照组使小鼠的脏器指数降低。提示本品不仅有抑制肿瘤生长的作用，同时尚具有增强免疫功能的作用。数据见表7。
表7本品对小鼠移植性肿瘤ASP-I生长的影响
注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
6、对Lewis肺癌以及自发肺转移模型的影响 实验方法 取皮下接种10d的肿瘤作为瘤源，制成1×107个细胞/ml单细胞悬液，进行常规足趾皮下接种0.02ml(相当于2×105个细胞/ml)，接种次日给药，在给药10天后，将荷瘤后足趾从足关节处剪下，分别称重，给药组荷瘤足趾重与模型组足趾重比较，计算原发灶的抑瘤率。继续给药至30天结束实验。将小鼠称重、称肺重，解剖显微镜下观察计数转移瘤集落数。计算自发转移肺集落的抑制率。
实验结果 本品3.0g/kg、6.0g kg剂量组对Lewis肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用(P＜0.01)，抑制率分别为36.4％、47.3％。且还能抑制Lewis肿瘤细胞在向肺部的转移，抑制率分别为32.5％、43.5％；提示本品不仅有抑制Lewis肿瘤细胞生长的作用，同时尚具有抑制Lewis肿瘤细胞自发性肺转移的作用。数实验据分别见表8、表9。
表8本品对小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌的影响
注与模型组比较，**P＜0.01与模型组比较。
表9本品对肿瘤细胞自发性肺转移的影响
注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较。
7、对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响 实验方法 取生长良好的荷瘤小鼠，无菌条件下剥离荷瘤小鼠的皮下瘤块，剪碎，用匀浆器加入无菌生理盐水磨成匀浆，调整细胞浓度为1×107个细胞/ml，接种于C57BL C小鼠右腋皮下，每只接种0.2ml瘤细胞悬液(相当于2×106个细胞/ml)，共接种30只，制成Lewis肺癌模型。于接种24小时后将小鼠随机分组，包括模型对照组，治疗I组(1.5g kg)，治疗II组(3.0g kg)，治疗III组(6.0g kg)另取10只未造模的作为正常对照组。当日开始灌胃给药治疗，灌胃容量为0.2ml 10g，正常组和模型组均灌等量蒸馏水，qd×14。于停药后第二日眼球取血，处死，取脾脏。
检测方法 脾NK细胞活性检测取脾脏用细胞分离器制成单个细胞悬液，置于淋巴细胞分离器上，2000r/min离心10min，取中间层洗3次备用，用200μl 51铬与1×10个/mlYAC-1细胞在37℃共同孵育1h，Hanks液洗3次，调整细胞数为1×105个/ml加入V底96孔板中，每孔100μl，然后按不同比例加制备好的淋巴细胞，置于37℃5％CO2培养箱内共同培养4h，取上清液100mlγ计数器测定放射活性， 实验结果 本品1.5g kg、3.0g/kg、6.0g kg剂量组均能增加NK细胞的活性。数据见表10 表10本品对小鼠细胞活性的影响(x±s，n 10
注与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 8、对Lewis肺癌荷瘤小鼠放疗后自由基损伤的影响 实验方法 在无菌条件下，从Lewis肺癌种鼠中取出瘤块，剪碎，用匀浆器加入无菌生理盐水磨成匀浆，调整细胞浓度为1×107个细胞/ml，接种于C57BL C小鼠右腋皮下，每只0.2ml瘤细胞悬液(相当于2×106个细胞/ml)，制成Lewis肺癌模型。于接种24小时后将小鼠随机分组，包括模型对照组，放疗组，放疗加中药组。模型对照组给予等量生理盐水。放疗组采用60Co γ-射线全身垂直照射，剂量为1.0Gy次(剂量率为1.52Gy min)，每日1次，连续5次。放疗加中药组在除照射外，每天灌服本品3.0g/kg、6.0g kg，灌胃容量为0.2ml 10g，放疗组和模型组每天用生理盐水灌胃。qd×10，停药后24小时，各组小鼠称重，取血谷胱甘肽过氧化酶、SOD、MDA进行检测，检测方法均按照试剂盒方法操作。之后立即处死，剥取瘤块，摘取胸腺和脾脏，计算脏器指数。
实验结果 Lewis肺癌小鼠放疗后，胸腺指数和脾脏指数与模型组比较明显降低，提示其免疫功能受到抑制，且单纯放疗组动物的抗氧化酶活性有所下降，MDA含量明显增加，而放疗加中药组抗氧化酶活性明显提高，MDA含量降低，脏器指数也有显著升高，统计学处理有显著性差异，同时，放疗加中药组的抑瘤率也比单纯放疗组高。数据见表11、表12。
表11本品对Lewis肺癌荷瘤小鼠放疗后自由基损伤的影响
*P＜0.05与模型对照组比较；ΔP＜0.05与放疗组比较 表12本品对Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤率的影响
三、对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用 取体外培养的A549细胞制成浓度为2.5×107/ml的细胞悬液，每鼠腋下接种0.2ml含5×106个细胞)的细胞悬液。接种6天后称体重，随机分组和给药，每组9～11只，设阴性对照组、阳性药物对照组和本品低、中、高剂量组，集体分组及给药方案如下生理盐水(NS)对照组(20ml kg)、本品高剂量组(6.0g kg)、本品中剂量组(3.0g kg)、本品低剂量组(1.5g kg)灌胃给药，开始时qd×4，随后q5d×8，共给药12次；阳性药物CTX对照组(100mg kg)腹腔给药，q7d×4；。从分组当日开始每6日测定肿瘤的长径和短径，按公式1计算肿瘤体积。接种后第56天处死裸鼠，称体重，剥离瘤块并称瘤重，按公式2计算抑瘤率(IR)，在以肿瘤体积计算IR时以未次测量的肿瘤体积代替公式2的瘤重。
本品经γ射线灭菌，无菌条件下加适量聚乙二醇研磨，加注射用水调整本品浓度至0.3g ml高剂量药液)，并用注射用水稀释至0.15g ml(中剂量药液)和0.075g ml(低剂量药液) 公式1
公式2
实验结果显示CTX能显著地抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长。本品各组小鼠体重均略有增加，本品高、中、低剂量对A549细胞裸鼠移植瘤的抑制率(按瘤重计算)本别为54.7％、44.6％和23.1％；实验数据见表13。
表13本品对A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
注**P＜0.01；*P＜0.05。
权利要求
1.一种中药复方，其特征在于该复方是由吴茱萸、通关藤、白英、南蛇藤、鸡矢藤、鸡血藤、忍冬藤、野葡萄藤、大血藤、苦参、重楼、甘草等中药材所组成。
2.根据权利要求1所述的中药复方，其特征在于所用中药材的用量范围以重量计为
吴茱萸1～150份通关藤1～50份
白英 1～150份南蛇藤1～50份
鸡矢藤1～50份 鸡血藤1～50份
忍冬藤1～50份 野葡萄藤 1～50份
大血藤1～50份 苦参 1～50份
重楼 0.5～30份 甘草 1～50份。
3.根据权利要求1所述的中药复方，其特征在于所用中药材的优选用量范围以重量计为
吴茱萸5～50份通关藤2～30份
白英 5～50份南蛇藤2～30份
鸡矢藤2～30份鸡血藤2～30份
忍冬藤2～30份野葡萄藤 2～30份
大血藤2～30份苦参 2～30份
重楼 0.5～10份 甘草 2～30份
4.根据权利要求1所述的中药复方，其特征在于所用中药材的最佳用量以重量计为
吴茱萸20份通关藤6份
白英 20份南蛇藤6份
鸡矢藤6份 鸡血藤6份
忍冬藤6份 野葡萄藤 6份
大血藤6份 苦参 6份
重楼 2份 甘草 6份。
5.一种权利要求1所述的中药复方的制备方法，其特征在于
a、将精选、清洗后的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入5～12倍60％～95％的乙醇溶液，采用回流或温浸之一种或两种方法提取2～4次，每次提取时间0.5～6小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；
b、将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入5～20倍量水煎煮2～4次，每次煎煮时间0.5～3小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.0～1.3(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到50％以上，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；
c、将步骤a和步骤b所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
6.根据权利要求5所述的中药复方的制备方法，其特征在于优选以下制备方法
a、将精选、清洗后的中药材吴茱萸、白英粗粉，加入8～10倍80％的乙醇溶液，回流提取3次，每次提取时间1～3小时，滤过，提取液合并后浓缩，干燥，药渣备用；
b、将上述两味药材的药渣与其它十味药材混合，加入8～10倍量水煎煮3次，每次煎煮时间1～2小时，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.05～1.25(25℃)，加入乙醇溶液使醇浓度达到70％，充分搅拌后，静置过夜，过滤，将滤液浓缩，干燥；
c、将步骤a和步骤b所得的干燥物混合，研磨混匀，即得。
7.根据权利要求1所述的中药复方，其特征在于可以将该中药复方及其提取物制备成药剂学上可以接受的包括口服给药、直肠给药、肌内给药、静脉给药、鼻腔给药、阴道给药、皮下给药等所有给药形式中的任何一种制剂形式。
8.一种权利要求1所述的中药复方的用途，其特征在于该中药复方、中药复方的提取物可以用于制备治疗肺癌、肝癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、骨癌等各种癌症疾病的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的中药复方的用途，其特征在于该中药复方、中药复方的提取物特别是可以用于制备治疗肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等各种原发性支气管肺癌的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种中药复方及其制备方法和用途，主要提供了一种由吴茱萸、通关藤、白英、南蛇藤、鸡矢藤、鸡血藤、忍冬藤、野葡萄藤、大血藤、苦参、重楼、甘草等中药材组成的中药复方，其制备方法包括①吴茱萸、白英的乙醇回流或温浸提取；②药渣和其余药材的水煎醇沉；③所得水提物和醇提物的混合。本发明提供了该复方、复方的提取物在制备治疗肺癌、肝癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、骨癌等各种癌症的药物中的用途，同时还提供了包括口服给药、直肠给药、肌内给药、静脉给药、鼻腔给药、阴道给药、皮下给药等在内的一切给药形式和片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、糖浆剂等药剂学上可接受的所有制剂形式。
文档编号A61K36/88GK101172143SQ20061009739
公开日2008年5月7日 申请日期2006年11月3日 优先权日2006年11月3日
发明者阮锦满, 史美耿, 王永毅, 石海云, 姚小燕, 钱世祥, 朱静娟 申请人:南京宇道科技开发有限公司