专利名称：一种蛇床子素乳剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药配制品领域，具体涉及一种含五节环、仅有一个氧原子作为环杂原子的杂环化合物的配制品，特别是一种乳剂。
背景技术：
蛇床子素(Osthol)又名甲氧基欧芹酚，其化学名为7-甲氧基-8异戊烯基香豆素，是首先从伞形科植物中提取的一种香豆素类化合物。其结构式为 研究表明，蛇床子素药理活性广泛，具有增强免疫功能、抗骨质疏松、抗病毒、抗突变、拟植物雌激素样作用、抗诱变、抗肿瘤等功效，特别是其强大的抗肿瘤活性提示该化合物在恶性肿瘤的临床治疗方面具有广阔的前景，因而受到本领域的普遍关注。
国家知识产权局于2005年1月12日公开了一项发明专利申请“从蛇床子中提取总香豆素及单体成分的工艺及其药物制剂”(申请号200410010743.3)，该申请公开了将蛇床子素制备成各种制剂的方法；2006年1月25日公开了一项发明专利申请“高纯度蛇床子素及其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合”(申请号200510014590.4)，该申请公开了以蛇床子素为活性成分的药物组合物的制备方法。由于蛇床子素脂溶性强，几乎不溶于水，上述申请所公开的蛇床子素制剂或药物组合物，都是以油性基质为辅料制备的，其制剂的药物载药量较低，也不容易被人体吸收，使得蛇床子素的药效得不到充分发挥。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提高蛇床子素在制剂中的溶解度和稳定性，进而提高其制剂的载药量以及药物靶向性。
本发明解决上述技术问题的技术方案是一种蛇床子素乳剂，该乳剂为一种水包油型乳剂，含有质量百分比为0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化剂，0.01～1.0％的助乳化剂，10～30％的油相分散介质，1～3％的渗透压调节剂，其余为水。
所述的乳化剂可以是阿拉伯胶、明胶、胆固醇、西黄耆胶、吐温、司盘、平平加、壬烷基酚聚氧乙烯醚、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、甲基纤维素、高岭土、硬脂酸镁、甘油三硬脂酸酯中的一种或两种以上任意组合的复合乳化剂；所述的乳化剂还可以是天然磷脂、天然磷脂氢化物或合成磷脂。
所述的助乳化剂可以是油酸钠、油酸、丙二醇、PEG或PVP。
所述的渗透压调节剂可以是甘油。
所述的pH值调节剂可以是氢氧化钠、磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。
所述的油相分散介质可以是植物油如大豆油、橄榄油、红花油、玉米油或中链甘油三脂，还可以是乙醇、液体石蜡或人工合成的甘油三酸酯。
上述的乳化剂和油相分散介质是制备本发明乳剂可以选择的种类，但由于不同的剂型对乳化剂和油相分散介质有不同的要求，本领域技术人员可根据所制备的剂型加以选择，如制备成注射乳剂，油相分散质可选植物油或乙醇。
本发明所述的蛇床子素乳剂可以是普通乳、亚微乳或复乳，其中所述的蛇床子素普通乳的制备方法是取配方量的乳化剂、助乳化剂加入到适量水中，搅拌均匀，形成水相，取配方量的蛇床子素溶解在油相分散介质中形成油相；将油相滴加入水相中，滴加过程不断搅拌，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml。
所述的蛇床子素亚微乳的制备方法是将配方量的助乳化剂、渗透压调节剂和水搅拌成均匀的混合物，形成水相。蛇床子素和0.5～15％磷脂类乳化剂、10-30％油相分散介质在氮气流(0.1-2MPa)保护下形成油相，加热至60℃，油相和水相混合制备成粗乳，加入pH值调节剂调节乳剂的pH值为6.0-9.0，将粗乳转入高压乳匀机中循环数次至乳粒符合规定，过滤，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml。
所述的蛇床子素复乳的制备方法是取0.1～1.0％乳化剂，配方量的助乳化剂和水混合形成水相，取蛇床子素、0.2～1.0％乳化剂加入油相分散介质中形成油相；在搅拌下将水相滴入油相中，高速搅拌，得初乳；另取0.2～1.0％乳化剂和水混合形成外水相，将上述初乳在搅拌下缓缓滴入外水相，经高速搅拌至质量符合规定，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml。
蛇床子素难溶于水，但在大豆油、中链油、橄榄油等脂肪油中有良好的溶解性，每100克上述脂肪油可溶解蛇床子素最高达20～50克，而本发明乳剂每亳升乳剂含蛇床子素可达6～100mg，在用药剂量方面有较大的选择范围；本发明乳剂不需引入有机溶剂(如乙醇或聚乙二醇)即可大大提高载药量并实现静脉注射，同时也可避免有机溶剂的副作用；蛇床子素属内酯结构，易水解和氧化，制备成含药脂肪乳剂后，大部分药物分布在油相或油水界面，避免与水直接接触，这种隔离作用大大提高了药物稳定性。
本发明蛇床子素乳剂可用于制备治疗恶性肿瘤疾病的各种制剂，如口服液、片剂、胶囊剂，亚微乳型蛇床子素乳剂可用于制备注射剂。
下面将通过动物实验和实施例来证明本发明具有的效果。
以下实验所用的蛇床子素乳剂均为制备例3所述的乳剂。
1、体外抗肿瘤细胞(HepG2、LOVO、MCF-7、A549、K562、SGC-7901)试验采用RPMI-1640培养液，加15％新生小牛血清(FCS，56℃灭活30min)，用Hepes缓冲液调pH至约7.2，HepG2(人肝癌细胞)、LOVO(人结肠癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、A549(人肺腺癌细胞)、K562(人白血病细胞)、SGC-7901(人胃癌细胞)细胞株分别配成单个细胞悬液，在37℃饱和湿度、5％CO2培养箱中培养，待用。取对数生长期的以上各种细胞分别以0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA消化后，用上述培养液稀释至浓度4～5×104/ml，接种于96孔板，每孔加入190μl。同时设溶剂对照及空白对照，每个剂量设3个平行孔，常规培养24h后，加入不同剂量的受试药物10μl，在37℃饱和湿度、5％CO2培养箱中培养72h后，每孔加入MTT溶液(用生理盐水配制，0.2μm微孔滤膜滤过)10μl(5mg/ml)，振荡混匀后，培养箱中继续培养4h。弃去上清液，每孔加入150μl二甲基亚砜，微量振荡器振荡，约1h后，用酶标仪在570nm波长处测其OD值，计算抑制率，求IC50，测定时减去空白对照。按下列公式计算细胞毒性细胞毒性＝(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100％。
结果见表1。如表1所示，本发明所述乳剂对多种肿瘤细胞均有抑制作用。
表1本发明药物对不同肿瘤细胞株的抑制作用(％)
注与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
2、体内抗肿瘤作用取接种于昆明小鼠腹腔约7～10天的S180肿瘤细胞腹水，无菌条件下操作，根据细胞浓度加入等量的生理盐水，配制成瘤细胞悬液(最佳细胞数为1～2×107/ml)，接种于同种异体小鼠左后肢液皮下，雄性体重18～22g，雌性17～21g，每次实验均用同一性别，每只小鼠注射0.2ml或灌胃0.3ml/10g。瘤细胞接种第2天，将小鼠称重，并随机分组，10只小鼠一组，开始给试验用药、阴性对照溶剂(ip生理盐水0.2ml/d)、阳性对照药(10mg氟尿嘧啶/Kg小鼠体重)，连续给药10天。至第11天，动物称重，并剖取各组动物的肿瘤，称重，最后统计各组动物的抑瘤率。实验结果及统计结果见表2。如表2所示，本发明所述乳剂具有较好的体内抗肿瘤作用。
瘤重抑制率＝(1-治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％表2本发明药物对S180荷瘤小鼠瘤重及体重的影响
具体实施方式
制备例例1普通乳型
将处方量的豆磷脂、甘油与预热至80℃的适量注射用水进行混合，转入组织搅碎机内，以每分钟20000转搅拌3分钟，反复3次，直至豆磷脂均匀分散，成初乳；(2)将处方量的蛇床子素与平平加溶解于精制豆油中，加热至80℃，然后加至上述分散液中，转入组织搅碎机内，以每分钟20000转搅拌3min，反复3次，直至油相均匀分散；(3)取上述初乳加入预热至80℃的注射用水使达全量，转移至高压乳匀机内，匀化3次，即得蛇床子素浓乳，粒径在1～100μm范围内，所得乳剂蛇床子素含量为100mg/ml。
例2亚微乳型
将处方量的卵磷脂放入高速组织搅碎机内，加甘油及30ml注射用水，在在氮气流下作成均匀的磷脂分散液，将此分散液转入二步高压乳匀机内，再加入溶有处方量蛇床子素和吐温80的花生油，在氮气流下用4号垂熔玻砂漏斗过滤，在氮气流下装瓶、扎盖。经90℃预热，再经121℃灭菌15分钟，冲60℃热水降温。得粒径在1μm以下的乳白色蛇床子素亚微乳，所得乳剂蛇床子素含量为50mg/ml。
例3复乳型
取处方量蛇床子素、单脂酸甘油酯、Tween80加入液体石蜡中，加热熔融，作为油相；取明胶溶液作为水相，在搅拌下将水相滴入油相中，高速搅拌数小时即得W/O型初乳；将单脂酸甘油酯、Tween80和PVP溶液加入蒸馏水作为外水相，将新制初乳在搅拌下缓缓滴入外水相，经数小时高速搅拌(20000r/min)，即得W/O/W型蛇床子素复乳，粒径在50μm以下，所得乳剂蛇床子素含量为10mg/ml。
应用例例1口服液取制备例1所述的蛇床子素乳剂(1000ml)，灌装成100支，灭菌，每支10ml，每支中含蛇床子素为1.0克。
例2片剂取制备例1所述的蛇床子素乳剂(1000ml)，取1000g糊精和4000g淀粉混匀，然后加入蛇床子素乳剂，混合均匀，制粒，于60～80℃烘干，过五号筛，混匀，压片，共制成10000片，每片含蛇床子素10mg。
例3胶囊剂取制备例1所述的蛇床子素乳剂(1000ml)，取1000g糊精和4000g淀粉混匀，然后加入蛇床子素乳剂，混合均匀，制粒，于60～80℃烘干，过七号筛，装胶囊，共制成10000粒，每粒含蛇床子素10mg。
例4注射剂取制备例2所述的蛇床子素乳剂(1000ml)，分装成10瓶，每瓶100ml，灭菌，每瓶蛇床子素乳剂注射液含蛇床子素5.0g。
权利要求
1.一种蛇床子素乳剂，该乳剂为一种水包油型乳剂，含有质量百分比为0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化剂，0.01～1.0％的助乳化剂，10～30％的油相分散介质，1～3％的渗透压调节剂，其余为水。
2.根据权利要求1所述的蛇床子素乳剂，其特征在于所述的乳化剂是阿拉伯胶、明胶、胆固醇、西黄耆胶、吐温、司盘、平平加、壬烷基酚聚氧乙烯醚、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、甲基纤维素、高岭土、硬脂酸镁、甘油三硬脂酸酯中的一种或两种以上任意组合的复合乳化剂；或者是天然磷脂、天然磷脂氢化物或合成磷脂。
3.根据权利要求1所述蛇床子素乳剂，其特征在于所述的助乳化剂是油酸钠、油酸、丙二醇、PEG或PVP。
4.根据权利要求1所述蛇床子素乳剂，其特征在于所述的渗透压调节剂是甘油。
5.根据权利要求1所述蛇床子素乳剂，其特征在于所述的pH值调节剂是氢氧化钠、磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。
6.根据权利要求1所述蛇床子素乳剂，其特征在于所述的油相分散介质是大豆油、橄榄油、红花油、玉米油、中链甘油三脂、乙醇、液体石蜡或人工合成的甘油三酸酯。
7.权利要求1至6之一所述的蛇床子素乳剂的制备方法，该方法由以下步骤组成取配方量的乳化剂、助乳化剂加入到适量水中，搅拌均匀，形成水相，取配方量的蛇床子素溶解在油相分散介质中形成油相；将油相滴加入水相中，滴加过程不断搅拌，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml，得到普通型蛇床子素乳剂。
8.权利要求1至6之一所述的蛇床子素乳剂的制备方法，该方法由以下步骤组成将配方量的助乳化剂、渗透压调节剂和水搅拌成均匀的混合物，形成水相。蛇床子素和0.5～15％磷脂类乳化剂、10-30％油相分散介质在0.1-2MPa氮气流保护下形成油相，加热至60℃，油相和水相混合制备成粗乳，加入pH值调节剂调节乳剂的pH值为6.0-9.0，将粗乳转入高压乳匀机中循环数次至乳粒符合规定，过滤，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml，得到亚微乳型蛇床子素乳剂。
9.权利要求1至6之一所述的蛇床子素乳剂的制备方法，该方法由以下步骤组成取0.1～1.0％乳化剂，配方量的助乳化剂和水混合形成水相，取蛇床子素、0.2～1.0％乳化剂加入油相分散介质中形成油相；在搅拌下将水相滴入油相中，高速搅拌，得初乳；另取0.2～1.0％乳化剂和水混合形成外水相，将上述初乳在搅拌下缓缓滴入外水相，经高速搅拌至质量符合规定，最后加入水至蛇床子素浓度为6～100mg/ml，得到复乳型蛇床子素乳剂。
10.权利要求1至6之一所述的蛇床子素乳剂在制备治疗恶性肿瘤疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种蛇床子素乳剂，其特征是该乳剂为一种水包油型乳剂，含有质量百分比为0.6～10％的蛇床子素，0.5～15％的乳化剂，0.01～1.0％的助乳化剂，10～30％的油相分散介质，1～3％的渗透压调节剂，其余为水。本发明所述的蛇床子乳剂可以通过不同的制备方法制备成普通乳、亚微乳或复乳，每毫升乳剂含蛇床子素可达6～100mg，不需引入有机溶剂即可大大提高载药量并实现静脉注射，同时也可避免有机溶剂的副作用；大部分药物分布在油相或油水界面，避免与水直接接触，大大提高了药物稳定性。本发明所述的蛇床子乳剂可制备成治疗恶性肿瘤的各种制剂。
文档编号A61K47/34GK1985802SQ20061012421
公开日2007年6月27日 申请日期2006年12月14日 优先权日2006年12月14日
发明者赖小平, 黄松, 蒋东旭, 赵爱国, 黄鸣清, 谢友良 申请人:广州中医药大学