专利名称：胚胎细胞的活性蛋白制备方法及其在皮肤护理品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种依据生物工程技术，结合超临界技术开发出的系列活性蛋白滋养护肤品，特别是一种胚胎细胞的活性蛋白制备方法及其在皮肤护理品中的应用。
背景技术：
现有美容化妆品的生产工艺大多为膏霜剂产品，其主要的成分基本是1、油脂和蜡；2、保湿成分，一般为多元醇；3、乳化剂；4、膏霜增稠剂；5、添加剂，如一般润肤霜和乳液的基本组成都是DC-200、白油、凡士林、蜂蜡、硬脂酸、十六十八醇、羊毛脂、单甘脂、IPP、BHA、硼砂、K12、三乙醇胺、CPK、丙二醇、甘油、山梨醇、防腐剂、水。所述添加剂主要是一些植物提取物或是动物提取物成分；这种产品主要是对皮肤具有护理作用，而不能起到调节的作用。
人们对没有污染，绿色环保的产品近两年的需求呈大幅度上升趋势，表明了人们对皮肤的护理不再局限于外在的护理，而更加注重皮肤本质上的改变。现有的化妆品原料基本是化学品，在一般的保护皮肤的同时也在无情的伤害着皮肤，所以近年来许多化妆品生产企业开始在化妆品的配方和工艺上进行着大幅度的改革，但这种改革只是在调配好的化学基质上添加一种或两种对身体及环境没有损害的物质，基质并没有改变，仍然是化学制剂在起主导作用，添加的原料在常温及化学品的环境中已经不具备生物活性。
中国专利CN1259341A公开了一种纯羊胚胎素护肤液，它是用下述制备方法得到的提取羊胚胎，经热压，灭菌过滤后酸沉，碱沉，取离心分离后的上清液，用蒸馏水调配后，装瓶。本发明根据人体皮肤细胞的特征和本质，从动物脏器羊胚胎细胞中提取脱氧核糖核酸，积极主动地使皮肤在三至五分钟左右增白变嫩达到，美容护肤的目的，它不加任何防腐剂添加剂，香精，区别于其它复合型美容护肤品。这种不是通过对胚胎细胞的培养而直接从动物胚胎提取脱氧核糖核酸，很难形成工业化生产，而且往往不能获得高纯度提取物，及在提取过程中还容易混入对皮肤有害的化学物质。
目前市场上并没有同类的产品，只有一些细胞或基因工程的某一单纯提取物添加到油水混合的基液里作为皮肤护理和保养的产品在市场上销售，主要的销售场所为美容中心或提供皮肤护理、修复的医疗机构，在使用上也需要由医师或美容师的指导，方能达到一定的美容效果。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种利用蛋白之间的生物功能键相结合的机理，通过活性蛋白对其生理功能进行有效的调节，促进皮肤的更新速度，焕发肌肤，且具有高功效和高安全性特性、并适宜于工业化生产的胚胎细胞的活性蛋白制备方法及其在皮肤护理品中的应用。
为了达到上述目的，本发明提供的一种胚胎细胞的活性蛋白制备方法是1)胚胎细胞的培养方式培养基采用5％至20％胎牛或小牛血清的DMEM培养基，199培养基、MEM培养基、RPMI-1640培养基；无血清培养基；培养条件37℃二氧化碳培养箱，5％的二氧化碳浓度；传代根据细胞生长的情况，一般为细胞的已经铺满瓶底，细胞的形状也逐渐转向圆形，对细胞进行传代培育，传代时间一般间隔期在三至四天左右；2)当细胞达到6×10的6次方的浓度后(如达不到上述的浓度可以对细胞液进行2000r/m离心30min，弃上清液并进行计数)进行接种扩大培养，采用微载体灌流式生物反应器进行大规模的连续培养；3)对连续培养的细胞收集，同时注入与收集细胞等量的培养液继续培养；4)将收集的细胞，离心，弃去培养液后用生理盐水清洗，清洗3至4次，应用超声波破碎或是低温冻融的方式对细胞进行破碎；5)对破壁后的细胞采用微孔膜过滤，将细胞溶液内的细胞碎片、大细胞器等内容过滤掉；6)采用凝胶色谱方法分离细胞活性蛋白液中的核酸成分；7)采用高效离子色谱将细胞活性蛋白液中的抗体成分分离，使得提取液更加的纯化；8)超滤除菌，低温储存备用。
在制备过程中不使用有毒害的化学试剂，保持细胞活性蛋白液不受外界或是化学物质的污染。
根据上述胚胎细胞的活性蛋白制备方法所获得的胚胎细胞活性蛋白提取物应用于皮肤护理品中，所提供的化妆品基本组成可以是胚胎细胞活性蛋白提取液、植物萃取物、磷脂、香料。其配比是15至50份胚胎细胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
胚胎细胞活性蛋白液的性状为不含有核酸的纯粹细胞活性蛋白液，透明、有一定黏附力，需要在低温下储存，以保存其生物活性在制备、使用中不丧失。
胚胎细胞活性蛋白液有各种蛋白分子、无机盐、糖类、脂类、酶与生物催化剂组成，通过活性蛋白分子与皮肤相结合，对已经退化或是衰老的细胞进行调节，使用中可激活细胞的生物活力，同时促进真皮层的干细胞增加活性，增加皮肤的代谢速度，增强分泌透明质酸和糖蛋白的能力，滋润和营养皮肤，达到嫩肤、护肤、缓和紫外线损伤的作用，对色斑、黑头、疤痕、粉刺等有一定的预防、护理作用。
2.植物萃取物可以是菊花、山茶、人参、绿茶、红花、月见草、葡萄籽、黄瓜、丝瓜、柠檬等植物萃取物组合。采用超临界技术萃取的新鲜植物，将有效成分，溶于水。
选用菊花萃取物时，选用性状为外观为乳黄或是淡黄色的粉状制剂，水份在3％以内，不溶物质小于25％。
植物萃取物主要的作用为抑制细菌的入侵，能够抵御、阻隔外部环境的污染和侵袭。
3.磷脂采用固态磷脂，产品纯度97％以上，以重量计磷脂通常的含量为每100份产品中约为0.5至5份，优选为1至3.5份，更优选为1.5至2.5份。
磷脂作为悬浮剂，稳定产品内的各个结构。
4.香料根据不同产品调配各种香型，以重量计香料通常的含量每100份中不超过0.5份。增加产品的气味，覆盖产品的不良味道。
按本发明所提供的胚胎细胞的活性蛋白提取方法所得到的皮肤护理品，由于直接提取胚胎细胞中的活性蛋白成分使其与肌肤细胞相互融合，其各种蛋白质与人体细胞内的蛋白质属于同源，结合细胞的各种受体促进肌肤组织细胞的再生能力；同时含有很多种营养成分和微量元素，并表现出极高的极性，与皮肤有很好的亲和力，具有较强的皮肤组织渗透性，极易与皮肤细胞的受体结合，真正被皮肤吸收，参与或调节细胞的代谢和生理周期；对某些顽固性的皮肤疾病，如色斑、黑头、疤痕、粉刺等，能起到预防、护理的作用。在使用中可激活细胞的生物活力，增强分泌透明质酸和糖蛋白的能力，滋润和营养皮肤，达到嫩肤、护肤、缓和紫外线损伤的作用。添加天然植物成分兼有防护作用，能够抵御、阻隔外部环境的污染和侵袭，所含的生物活性蛋白成分可以更好的解决面部皮肤问题。
本发明提供的皮肤护理品的主要功能是促进皮肤生理机能，加强自我调节，在生物层面的基础上达到美化皮肤的目的，并减少不必要的污染和损伤，具体作用体现在如下几方面1、具备生物活性，调节肌肤细胞的生理功能、增强细胞自身活力，延缓皱纹的产生。
2、增强肌肤自我修复、保湿功能，深层滋养肌肤。
3、促进新陈代谢系统。
4、全面营养。
本发明应用生物技术和超临界技术使我们的产品更加具备竞争力，增强了细胞在美容化妆领域中应用效果，使消费者的皮肤在保养时直接受益于生物活性成分的调节；我们在市场已经形成需求的情况下应用高科技生物技术生产出活力滋养蛋白原液产品，并保持其有效的生物活性成分及与人体同源、亲和性等特点投放市场，可以直接的对皮肤进行功能性的调节，使其达到正常的生理状态，恢复肌肤的本真特性。
本发明的主要功效体现在胚胎活力蛋白敷到皮肤以后，利用蛋白之间的生物功能键相结合的机理在皮肤外部形成一层具有生物活性保护膜，在保护和滋养的同时可以将各种生物活性物质缓缓的输入到皮肤组织内部，对皮肤细胞进行有效的调节和滋养，在此基础上另外的活性成分可以使皮肤有效的防止细菌的感染、油腻的产生，起到清除死皮等作用。同时增强肌肤全面营养的吸收，通过活性蛋白对其生理功能进行有效的调节，促进皮肤的更新速度，焕发肌肤的水嫩白暂。
纯生物制剂的美容化妆品只是近一到两年的新兴产品，市场份额占据较小，甚至可以忽略不记，但只有新兴品种的市场机会才可能更大，但对化妆品行业的影响甚为关键，因其预示着化妆品将来发展的方向，并在逐步地改变人们对化妆品的消费观念。因纯生物化妆品的技术含量、工艺要求及前期的投入较大，风险也较大，所以，此类的企业在化妆品行业还是凤毛麟角。
“爱美之心”人皆有之，人们总是希望皮肤能再细腻些、白嫩一些、光滑一些、皱纹再减少一些，为了让梦想成真，化妆品成了人们日常护理重要的手段，只要能使人们的皮肤看上去年轻又充满光彩的产品，人们往往会不顾一切的去尝试，而不计较价格的高低和产品的安全性，以及由此带来的各种负面效应。但随着时代的进步以及消费心理的逐渐成熟，消费者在购买产品时不仅注重功效，而且越来越强调产品的安全性，一些含有毒害物质的化妆品正在接受来自管理部门和消费者的不断暴光和排斥，有必要对现在的产品进行大幅的改进，增加人们生活的安全性；本发明正是以此作为契机，利用纯生物类美容化妆品高功效和高安全性的特性，在满足人们的爱美的前提下，提供更加安全、可靠的产品，增进人们生活的质量。
图1是本发明皮肤护理品的生产工艺流程图。
具体实施例方式
下面通过实施例结合附图对本发明作进一步的描述。
实施例本实施例提供的胚胎细胞的活性蛋白制备方法是先对胚胎细胞培养采用5％胎牛或小牛血清的1640培养基，培养条件37℃二氧化碳培养箱，5％的二氧化碳浓度；根据细胞生长的情况，一般为细胞的已经铺满瓶底，待细胞的生长形状逐渐转向圆形，对细胞进行传代培育，传代时间一般间隔期在三至四天左右。
当细胞达到6×10的6次方的浓度后(如达不到上述的浓度可以对细胞液进行2000r/m离心30min，弃上清液并进行计数)进行接种扩大培养，采用微载体灌流式生物反应器进行大规模的连续培养。
对连续培养的细胞收集，同时注入与收集细胞等量的培养液继续培养；将收集的细胞，离心，弃去培养液后用生理盐水清洗，清洗3至4次，应用超声波破碎或是低温冻融的方式对细胞进行破碎。
对破壁后的细胞采用微孔膜过滤，将细胞溶液内的细胞碎片、大细胞器等内容过滤掉，采用凝胶色谱方法分离细胞活性蛋白液中的核酸成分，再采用高效离子色谱将细胞活性蛋白液中的抗体成分分离，使得提取液更加的纯化，然后超滤除菌，低温储存备用。
将上述方法制备的胚胎细胞活性蛋白提取液作原料进行皮肤护理品的配置，其生产方法可以按图1所示的工艺流程生产，由于流程中的各分解步骤都是本行业专业技术人员都熟悉的，在此不再详述。
根据上述胚胎细胞的活性蛋白制备方法所获得的胚胎细胞活性蛋白提取物应用于皮肤护理品中，所提供的化妆品基本组成可以是胚胎细胞活性蛋白提取液、植物萃取物、磷脂、香料。其配比是15至50份胚胎细胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
植物萃取物可以是菊花、山茶、人参、绿茶、红花、月见草、葡萄籽、黄瓜、丝瓜、柠檬等植物萃取物组合。采用超临界技术萃取的新鲜植物，将有效成分，溶于水。
本实施例选用菊花萃取物的粉状制剂，水份在3％以内，不溶物质小于25％。
磷脂采用固态磷脂，产品纯度97％以上，以重量计磷脂通常的含量每100份中约为0.5至5份，优选为1至3.5份，更优选为1.5至2.5份。
香料根据不同产品调配各种香型，以重量计香料通常的含量每100份中不超过0.5份。增加产品的气味，覆盖产品的不良味道。
本实施例提供的具体配方组成可以是配方150份胚胎细胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、0.5份磷脂、0.5份香料、24.5份水。
配方250份胚胎细胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、5份磷脂、0.5份香料、20份水。
配方345份胚胎细胞活性蛋白提取液、40份植物萃取物、4份磷脂、0.3份香料，30份水。
配方445份胚胎细胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、4份磷脂、0.3份香料、30.7份水。
配方535份胚胎细胞活性蛋白提取液、15份植物萃取物、2份磷脂、0.3份香料、41.7份水。
配方625份胚胎细胞活性蛋白提取液、5份植物萃取物、8份磷脂和0.3份香料，51.7份水。
配方715份胚胎细胞活性蛋白提取液、1份植物萃取物、8份磷脂、0.1份香料、63.7份水。
配方815份胚胎细胞活性蛋白提取液、1份植物萃取物、35份磷脂、0.1份香料、70份水。
权利要求
1.一种胚胎细胞的活性蛋白制备方法，其特征是1)胚胎细胞的培养方式培养基采用5％至20％胎牛或小牛血清的DMEM培养基，199培养基、MEM培养基、RPMI-1640培养基；无血清培养基；培养条件37℃二氧化碳培养箱，5％的二氧化碳浓度；传代根据细胞生长的情况，一般为细胞的已经铺满瓶底，细胞的形状也逐渐转向圆形，对细胞进行传代培育，传代时间一般间隔期在三至四天左右；2)当细胞达到6×10的6次方的浓度后进行接种扩大培养，采用微载体灌流式生物反应器进行大规模的连续培养；3)对连续培养的细胞收集，同时注入与收集细胞等量的培养液继续培养；4)将收集的细胞，离心，弃去培养液后用生理盐水清洗，清洗3至4次，应用超声波破碎或是低温冻融的方式对细胞进行破碎；5)对破壁后的细胞采用微孔膜过滤，将细胞溶液内的细胞碎片、大细胞器等内容过滤掉；6)采用凝胶色谱方法分离细胞活性蛋白液中的核酸成分；7)采用高效离子色谱将细胞活性蛋白液中的抗体成分分离，使得提取液更加的纯化；8)超滤除菌，低温储存备用。
2.一种根据权利要求1所述的方法得到的胚胎细胞的活性蛋白提取液应用于皮肤护理品。
3.根据权利要求2所述的一种胚胎细胞的活性蛋白提取液应用于皮肤护理品，其特征是皮肤护理品的配方组成为其配比是15至50份胚胎细胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
4.根据权利要求3所述的一种胚胎细胞的活性蛋白提取液应用于皮肤护理品，其特征是所述皮肤护理品中的植物萃取物是菊花、山茶、人参、绿茶、红花、月见草、葡萄籽、黄瓜、丝瓜、柠檬等植物萃取物组合。
全文摘要
本发明所提供的胚胎细胞的活性蛋白提取方法所得到的皮肤护理品，直接提取胚胎细胞中的活性蛋白成分使其与肌肤细胞相互融合，其各种蛋白质与人体细胞内的蛋白质属于同源，结合细胞的各种受体促进肌肤组织细胞的再生能力；同时含有很多种营养成分和微量元素，并表现出极高的极性，与皮肤有很好的亲和力，具有较强的皮肤组织渗透性，极易与皮肤细胞的受体结合，真正被皮肤吸收，参与或调节细胞的代谢和生理周期。在使用中可激活细胞的生物活力，增强分泌透明质酸和糖蛋白的能力。添加天然植物成分兼有防护作用，能够抵御、阻隔外部环境的污染和侵袭，所含的生物活性蛋白成分可以更好地解决面部皮肤问题。
文档编号A61K8/64GK1995371SQ200610155308
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月19日 优先权日2006年12月19日
发明者王书刚 申请人:王书刚