专利名称：：纤溶酶用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变的进展率和治疗其他眼部病症的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生性糖尿病视网膜病变的进展率的非手术方法，以及用于治疗其他眼部病症如视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、黄斑裂孔、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血和牵拉性黄斑病变的非手术方法，所述方法通过向患者玻璃体内给药足以不经过手术而产生玻璃体后脱离的有效量的丝氨酸蛋白酶进行。
背景技术：
：丝氨酸蛋白酶是已知且熟知的，其包括纤溶酶、微纤溶酶(microplasmin)禾卩小纤溶酶(miniplasmin)。美国专利2,624,691和3,234,106公开了从血液中纯化纤溶酶的方法。美国专利4,774,087公开了高pH下通过纤溶酶/纤溶酶原作用产生的微纤溶酶和微纤溶酶原。美国专利5,304,118公开了一种用于对眼睛进行玻璃体切割术的方法，其通过将纤溶酶引入玻璃体液中，从而导致玻璃体后脱离，之后除去玻璃体，并用无菌生理盐水代替。美国专利5,637,299公开了用去糖基化形式的纤溶酶增强溶栓治疗。美国专利5,722,428公开了一种用于产生玻璃体后脱离的方法，其采用特异性切割IV型胶原和纤连蛋白的酶，促使玻璃体部分或完全后脱离。美国专利6，355，243公开了溶栓治疗的方法，其通过导管向凝块部位直接给药活性纤溶酶。美国专利6,585,972公开了用于使眼睛玻璃体中的胶原交联并导致玻璃体后界膜与视网膜分离的方法。美国专利6,733,750公开了通过将包含纤溶酶原和纤溶酶原激活剂酶的组合物引入眼腔中引起玻璃体后脱离以溶解玻璃体中的血凝块的方法。有报道前述组合物引起玻璃体与视网膜的基本完全后脱离，而不引起难以控制或严重的视网膜炎症，并溶解玻璃体中的血凝块。美国专利6，787，135公开了将足以引起玻璃体后脱离的量的纤溶酶引入玻璃体中，将玻璃体从眼中机械分离，将替代液引入眼中，并将足以降低玻璃体中总金属蛋白酶活性的量的纤溶酶引入眼中。己公布的美国专利申请2002/0042652公开了一种用于抑制血管增生的方法，其通过在眼中引入组合物诱导玻璃体后脱离进行。该组合包含纤溶酶原、胶原交联剂以及至少一种纤溶酶原激活剂。所述组合物以有效引起玻璃体交联并引起玻璃体与视网膜基本上完全或部分脱离而不引起视网膜炎症的量引入玻璃体中。己公布的美国专利申请2002/0139378公开了一种用于使得玻璃体后皮质与眼视网膜分离的方法。该方法包括在眼的玻璃体液中引入纤溶酶的步骤。纤溶酶的引入可以通过注射或通过缓释装置进行。已公布的美国专利申请2002/0192794公开了用于生产可逆的灭活酸化纤溶酶的方法，所述可逆的灭活酸化纤溶酶可用于溶栓治疗的给药中。已公布的美国专利申请2003/0026798公开了溶栓的方法，其使得可以使用一种包含可逆的灭活酸化纤溶酶的纤维溶解组合物并将纤溶酶定位递送至血管栓塞部位。已公布的美国专利申请2003/0113313公开了一种用于抑制血管增生的方法，其通过在眼中单独引入各成分，以在眼中产生引起玻璃体完全后脱离的量的纤溶酶，其中玻璃体视网膜交界面没有任何玻璃体皮质残留物。该方法给药赖氨酸-纤溶酶原、至少一种重组纤溶酶原激活剂和嗜热菌蛋白酶以及用于在玻璃体中形成腔的气体辅剂的组合。已公布的美国专利申请2003/0147877公幵了一种用于液化眼中玻璃体液的方法。所述方法包括将纤溶酶递送入眼中玻璃体内并使玻璃体和纤溶酶共同温育一段时间的步骤。纤溶酶可以通过注射或缓释装置引入，并可以用于治疗眼部病症如糖尿病视网膜病变、黄斑裂孔、黄斑皱褶、眼内感染、眼内异物以及视网膜脱离。已公开的美国专利申请2003/0175263('263)公开了调节眼玻璃体中总基质金属蛋白酶(MMP)活性的方法。还公开了酶辅助的玻璃体切割术方法，其包括将足以引起玻璃体后脱离的量的纤溶酶引入玻璃体中，将玻璃体从眼中机械分离，将替代液引入眼中，并将足以降低玻璃体中总基质金属蛋白酶活性的量的纤溶酶加入眼中的替代液中。已公布的美国专利申请'263第0006段提到一单位纤溶酶活性通过生色底物S-2251的水解进行测定，其引用Friberger的出版物，优选地，用于抑制玻璃体切割术后玻璃体中的MMP活性的纤溶酶的量小于一个单位。'263的摘要指出该发明提供了抑制多种疾病病症进展的方法，所述病症包括增生性糖尿病视网膜病变。使用高浓度的纤溶酶产生PVD后，在短时间(0.5-2小时)内跟着进行手术去除内界膜后，使用少于一个单位的纤溶酶抑制增生性糖尿病视网膜病变的进展。因此，在这种情况下，该浓度的纤溶酶不会导致玻璃体后脱离(PVD)，因为PVD已经通过药理学和手术介入完成。'263的第0020段指出，在其实施美国专利5,304,118中所描述的玻璃体切割术方法中，在手术切割玻璃体前产生玻璃体后脱离所需要的纤溶酶的量为1至3个单位的纤溶酶。令人惊奇地，申请人已发现，当将纤溶酶注射入玻璃体中并使得保持在其中时，不用进一步的手术，少得多的量的纤溶酶就能够产生PVD。申请人使用等价于约0.5至约1000pig的纤溶酶注射入玻璃体内，优选约1.0至500pg的纤溶酶注射入玻璃体内，更优选约10至400pg的纤溶酶注射入玻璃体内，最优选约50至200pg的纤溶酶注射入玻璃体内，通过不进行手术而产生PVD来预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生性糖尿病视网膜病变的进展率。根据'263方法的1个单位相当于4.7个国际单位(不同底物)。因此，<1个"单位"将等于小于4.7IU。申请人的纤溶酶为22.5)ig/IU，因此申请人的0.5至1000ng的范围相当于0.02IU至(大约)44.4IU或'263单位为0.005-9.45RJ。申请人通过引起PVD而不是通过灭活玻璃/丄i^4"tAA、n^4"="、4^Z"^L7TETO_/rr*"U丄iAl丄、ki"^=1、r^z:Amrrrtn廿tr^=rtiV^上l、_tLf^iy+TM于住twMMr术近i丁了贝叨现pnK4t^菅土'i土鹏乂水，内个xra月吴讷艾tfj进;皮率。根据美国专利5,304,118('11S)，其需要1至3个单位的纤溶酶来引起PVD。根据'263，注射入眼中的替代液中的纤溶酶小于1个单位抑制玻璃体切割手术后增生性糖尿病视网膜病变的进展。在'263中，申请人采用小于1个单位的纤溶酶来预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变的进展率，其通过引起PVD而不进行手术来进行。已公布的美国专利申请2004/0081643公开了一种用于抑制血管增生的方法，其通过在眼内引入组合物以引起玻璃体后脱离来进行。所述组合物包含至少两种选自特别是纤溶酶和嗜热菌蛋白酶的化合物，其量足以引起玻璃体从视网膜基本完全或部分后脱离而不引起视网膜炎症并且溶解玻璃体中的血凝块。
发明内容本发明提供一种用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生形式的糖尿病视网膜病变的进展率的非手术方法，其通过向患有非增生性糖尿病视网膜病变的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶，所述有效量的丝氨酸蛋白酶足以不经过手术而导致玻璃体后脱离。优选地，所述丝氨酸蛋白酶选自纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶。更优选地，所述丝氨酸蛋白酶是纤溶酶，且该纤溶酶从由人血液分级分离得到的纤溶酶原获得。所述丝氨酸蛋白酶以等价于约0.5至约1000吗的纤溶酶的量玻璃体内给药注射入玻璃体内，优选约1.0至500pg的纤溶酶注射入玻璃体内，更优选约10至400pg的纤溶酶注射入玻璃体内，最优选约50至200pg的纤溶酶注射入玻璃体内。该方法的实施既不用去除玻璃体(例如玻璃体切割术)也不需要MMP的灭活。本发明还提供了一种用于治疗视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、黄斑裂孔、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血以及牵拉性黄斑病变的非手术方法，其通过向患有这些眼部病症中的一种或多种的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶以降低视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、黄斑裂孔、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血以及牵拉性黄斑病变。更优选地，所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶。最优选地，所述丝氨酸蛋白酶为从人血液分级分离得到的纤溶酶原获得的纤溶酶。所述方法中采用的丝氨酸蛋白酶浓度以及给药途径与糖尿病视网膜病变病例中的一样。具体实施例方式本发明可用于非手术性预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生形式的糖尿病视网膜病变，其通过向患有非增生性糖尿病视网膜病变的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶，所述有效量的丝氨酸蛋白酶足以不经过手术而产生玻璃体后脱离。本发明中采用的丝氨酸蛋白酶可以是纤溶酶、微纤溶酶或小纤溶酶或任何形式的可能在眼玻璃体中导致活性纤溶酶、微纤溶酶或小纤溶酶释放的纤溶酶，其单独给药或与除组织型纤溶酶原激活剂(tpa)之外的激活剂组合。更优选地，所述纤溶酶、微纤溶酶或小纤溶酶应该来自人纤溶酶、微纤溶酶或小纤溶酶或在结构和功能上与人纤溶酶、微纤溶酶或小纤溶酶相同。最优选地，本发明中使用的丝氨酸蛋白酶应该是来自人血或通过在经遗传修饰使得产生人纤溶酶或天然灭活前体纤溶酶原的酵母、细菌或单细胞植物或哺乳动物细胞中表达人纤溶酶而得到的人纤溶酶。在优选的方法中，所述丝氨酸蛋白酶应该以约0.5至约1000|Lig的纤溶酶的量给药注射入玻璃体内，优选约1.0至500pg的纤溶酶注射入玻璃体内，更优选约10至400)ig的纤溶酶注射入玻璃体内，最优选约50至200ng的纤溶酶注射入玻璃体内，从而产生PVD。所述方法可以通过注射或插管经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行。优选的玻璃体内给药方式为玻璃体腔内的多位点注射。更优选的玻璃体内给药方式为在接近靶组织的部位注射。最优选的玻璃体内给药形式为当患者的头部面向上时注射入中部玻璃体内。除了用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变的进展率外，所述丝氨酸蛋白酶还可用于非手术性治疗视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、黄斑裂孔、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血以及牵拉性黄斑病变，其通过向患有这些眼部病症中的一种或多种的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶来进行，以治疗特定的眼部病症。在用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变的进展率的方法中，丝氨酸蛋白酶、浓度以及给药方法可以以这些疾病病症的治疗类似的方式变化。所述方法可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶注射含有该酶的溶液；注射含有该酶和用于控制pH的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和用于控制重量克分子渗透浓度的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和用于控制pH、离子强度和重量克分子渗透浓度的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和在Jensen(US3，950,513)教导的pH变化中提供给该酶稳定性的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和提供丝氨酸蛋白酶最佳冻干的额外赋形剂的溶液，所述最佳冻干包括冻干饼的外观，用水、水与非水溶剂的混合物、单独非水溶剂的复制(reconstitution)时间，以及酶活性的保持。所述方法可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶之前30分钟至2小时玻璃体内注射铺展剂(即Vitrase⑧、透明质酸酶(hylauronidase)等)注射含有该酶的溶液；注射含有该酶和用于控制pH的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和用于控制重量克分子渗透浓度的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和用于控制pH、离子强度和重量克分子渗透浓度的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和在Jensen(US3，950，513)教导的pH变化中提供给该酶稳定性的额外赋形剂的溶液；注射含有该酶和提供丝氨酸蛋白酶最佳冻干的额外赋形剂的溶液，所述最佳冻干包括冻干饼的外观，用水、水与非水溶剂的混合物、单独非水溶剂的复制时间，以及酶活性的保持。所述方法还可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行-注射含有所需酶的胶束溶液；注射含有所需酶和用于控制pH和离子强度的赋形剂的胶束溶液；注射含有所需酶和在Jensen(US3,950，513)教导的pH变化中稳定该酶的额外赋形剂的胶束溶液；注射含有所需酶的胶束溶液，其中所述胶束的表面活性剂成分优选得到带正电的胶束，更优选得到带负电的胶束，最优选得到不带电(中性)的胶束；注射含有所需酶的胶束溶液，其中所述胶束的表面活性剂成分主要是单体表面活性分子；注射含有所需酶的胶束溶液，其中所述胶束的成分主要为一种或多种非离子型聚合物表面活性剂(例如，吐温类、司盘类、普流罗尼类、Tetronics、Myj、Brij以及聚乙二醇(PEG))。所述方法还可以通过以下方式经玻璃体内注射丝氨酸蛋白酶进行注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或存在于在颗粒悬浮液的液相中的溶液中；注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或与控制悬浮液液相pH的赋形剂一起存在于在颗粒悬浮液的液相中的溶液中；注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或与控制悬浮液液相重量克分子渗透浓度的赋形剂一起存在于在颗粒悬浮液的液相中的溶液中；注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或与控制悬浮液液相的pH、离子强度和重量克分子渗透浓度的赋形剂一起存在于在液相中的溶液中；注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或存在于在液相和在Jensen(US3，950,513)教导的pH变化中稳定该酶的额外赋形剂中的溶液中；注射包含该酶或仅包含该酶的悬浮液，其中所述酶可以为固体悬浮颗粒或与提供丝氨酸蛋白酶最佳冻干的额外赋形剂一起存在于在颗粒悬浮液的液相中的溶液中，所述最佳冻干包括冻干饼的外观，用水、水与非水溶剂的混合物、单独非水溶剂的复制时间，以及酶活性的保持。另外要理解，通过悬浮剂，意在描述在连续液相中的固体颗粒分散体。另外，要理解这些分散体需要特定的添加剂以对悬浮液提供物理稳定性和粒径控制，如本领域所公知的，所述添加剂如表面活性剂和聚合物。用于这些悬浮剂的生产方法对于本领域技术人员来说是熟知的，其在多种教科书(即Remington、Martindale)、规章指南(例如USP、EP、JP)和包括专利和出版物在内的文献均有描述，所有这些都包括在本公开中。所述方法还可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行注射含有活性酶的脂质体溶液，其来自含有该酶的冷冻脂质体溶液或含有该酶的冻干脂质体溶液；注射含有活性酶的脂质体，其来自含有该酶以及赋形剂的冷冻脂质体溶液或含有该酶以及赋形剂的冻干脂质体溶液，所述赋形剂控制脂质体溶液水相的pH，其中内部水相的pH可以不同于外部连续溶液相的pH;注射含有活性酶的脂质体，其来自含有该酶以及赋形剂的冷冻脂质体溶液或含有该酶以及赋形剂的冻干脂质体溶液，所述赋形剂控制脂质体溶液的重量克分子渗透浓度；注射含有活性酶的脂质体，其来自含有该酶以及赋形剂的冷冻脂质体溶液或含有该酶以及赋形剂的冻干脂质体溶液，所述赋形剂提供丝氨酸蛋白酶脂质体溶液的最佳冻干，所述最佳冻干包括冻干饼的外观，用水、水与非水溶剂的混合物、单独非水溶剂的复溶时间，以及酶活性的保持；注射含有活性酶的脂质体，其来自含有该酶以及赋形剂的冷冻脂质体溶液或含有该酶以及赋形剂的冻干脂质体溶液，所述赋形剂稳定酶对Jensen(US3,950,513)教导的pH变化、离子强度和重量克分子渗透浓度；以及注射含有灭活的活性丝氨酸蛋白酶前体的脂质体。理解，在每种情况下，所述酶可以位于脂质体内、脂质体的己占体积(excludedvolume)之外或在脂质体双层内外同时存在，另外，术语"脂质体"可以代表单层囊泡、多层囊泡、chocleates以及"noisome"囊泡，其中niosome己为本领域熟知，为由单层磷脂而非传统的双层磷脂稳定的非水核心。还理解，脂质体溶液中的双层成分在将这些丝氨酸蛋白酶递送至玻璃体中也被请求保护。另外，理解，脂质体溶液的单个粒径可以从小于80nm至大于1000nm变化。最后，还注意，本申请的脂质体表面可以是带正电、带负电或相对中性的。可以理解，在带电脂质体的情况下单个磷脂部分可以与酶很好地复合，从而对于注射入玻璃体内稳定纤溶酶pH、重量克分子渗透浓度和/或张力的改变。所述方法还可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行注射含有所需酶的水包油型乳液；注射含有所需酶和控制pH、离子强度和重量克分子渗透浓度的赋形剂的水包油型乳液；注射含有所需酶和稳定酶对Jensen(US3，950，513)教导的pH变化和离子强度变化的赋形剂的水包油型乳液；注射含有所需酶的水包油型乳液，其中油相使所需酶对pH的变化稳定。理解，酶最可能位于这些水包油型乳液的连续水相中。然而，本领域技术人员将意识到，所述酶还可以以油包水型乳液的形式给药，其中其将位于悬浮于连续非水相中的水泡中。在该情况下，本文还公开了水泡中和连续非水相中的多种赋形剂的存在。所述方法还可以通过以下方式经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行将含有所需酶的速溶片加入玻璃体中；将含有所需酶和赋形剂的速溶片加入玻璃体中，所述赋形剂对片剂制备提供重要的性质，所述性质包括可压性、光滑度、硬度和密度；将含有所需酶和赋形剂的速溶片加入玻璃体中，所述赋形剂使酶对pH和离子强度变化稳定；将含有所需酶和赋形剂的速溶片加入玻璃体中，所述赋形剂在几分钟到几小时内控制活性酶的释放。这些片剂为本领域中己知的，包括小片(MiniTablet),其大小为0.5mnK直径〈4mm，更优选为1.0mm〈直径〈2mm，最优选为1.25mnK直径〈.75mm，长度由片剂混合物的剂量(酶浓度)决定。通常其长度为^0mm，更优选为〈5mm,最优选为〈2mm。所述方法还可以通过经玻璃体内给药丝氨酸蛋白酶进行所述丝氨酸蛋白酶作为粉末；作为与赋形剂混合的粉末，所述赋形剂控制pH和离子强度；作为与赋形剂混合并悬浮于非水溶剂(例如矿物油、维生素e、硅油、全氟碳油、植物油、花生油、红花油、甘油)中的粉末；作为与赋形剂混合并制粒成颗粒用于给药于眼的粉末；作为与赋形剂混合并制粒和筛分用于经气雾剂给药于眼或悬浮于以上给出的溶剂中的粉末。任何以上的实施方法都可以是优选的实施方法。更优选的实施方法为向眼中注射澄清溶液，最优选的实施方法为向眼中注射含有使酶对pH稳定的赋形剂的澄清溶液。这些赋形剂包括但不限于e氨基己酸、赖氨酸、精氨酸、白蛋白、人血清白蛋白、碳酸铵以及Jensen(US3,950,513)教导的其他赋形剂。上述制剂的一个引人注意的补充为密相制剂(denseformulation)的使用，其提供注射后对视网膜的靶向。例如，给仰卧患者注射于上述任何制剂中的所需丝氨酸蛋白酶后，如果溶液的密度显著高于周围的玻璃体液，则注射液将向视网膜沉积。能促进该密度增加的试剂包括可溶性X射线造影剂(例如，碘海醇、碘克沙醇、碘美普尔、碘佛醇等)、浓糖溶液(例如蔗糖)和已知对注射人体安全的重金属络合物(例如MRI造影剂)。这些试剂能够提高注射制剂的密度，本文的公开内容并不限于它们的使用，而是包括所有这样的密度增加物质。上述制剂的另一个有趣的补充为粘性制剂的使用，其提供注射后向视网膜的延迟扩散。例如，给仰卧患者注射于上述任何制剂中的丝氨酸蛋白酶后，如果溶液的粘度显著高于周围的玻璃体液，则注射液将延迟扩散。能促进该粘度增加的试剂包括可溶性X射线造影剂(例如碘海醇、碘克沙醇、碘美普尔、碘佛醇等)、浓縮糖溶液(例如蔗糖)和可溶性聚合物(例如PVP、PVA、PEG等)以及聚合物表面活性剂如Tetronics和Pluronics。这些试剂能够提高注射制剂的粘度，本文的公开内容并不限于它们的使用，而是包括所有这样的粘度增加物质。在聚合物表面活性剂的特定情况下，已知高浓度的这些材料能够诱导反向温度凝胶效应。因此，当注射入玻璃体内和温度由室温变为体温(例如37。C)时，制剂将凝胶化，从而更抑制玻璃体内的所述酶的扩散。延迟扩散对于确保所述酶在扩散到视网膜和眼内其他表面之前停留在注射处而不是从注射部位播散(即沿注射针迹上行)可能是重要的。作为上述实施方法的实例，丝氨酸蛋白酶可以如下表所示配制表l.注射用丝氨酸蛋白酶<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表2成分量/mL%组成丝氨酸蛋白酶2.0mg0.2海藻糖20mg2乙酸盐(钠)2.4mg0.24e氨基己酸3.0mg0.3精氨酸34.8mg3.48生理盐水足量至1mL93.78表3<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表7<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表8<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表9<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表10<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表13<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>用固体片剂的制剂也能够用来实施本发明，以下表表示:表16<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表19<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>以上表16-表20中代表的片剂为速溶片剂，其在给药于眼玻璃体内后30分钟内释放活性酶。实施例下述实施例例示了可以如何使用本发明用于非手术预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变的进展率和用于治疗其他眼部病症。实施例1采用27号针将3.0<pH<8.0的制剂通过平坦部注射入患有非增生性糖尿病视网膜病变患者的玻璃体，所述制剂含有5%的糖类(例如海藻糖、甘露糖(manose)、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖)、少量的缓冲剂(如乙酸盐、柠檬酸盐)、等价于约2.0mg/ml的量的纤溶酶(该量取决于眼体积而变化)并任选地含有纤溶酶稳定剂(例如二元氨基酸或其衍生物如e氨基己酸)。纤溶酶的浓度一次注射而不经过手术足以产生玻璃体后脱离(PVD)。PVD通过单独地常规眼部检查、光学相干断层成像、B型超声扫描或其任意组合进行确认。如果不能确认PVD，可以再进行一次或多次注射。PVD的产生预防或降低了非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生性糖尿病视网膜病变的风险。实施例2在白内障手术之前，采用27号针将3.0<pH<8.0的制剂通过平坦部注射入玻璃体内，以引起PVD，作为针对糖尿病患者术后黄斑水肿的预防，所述制剂含有5%的糖类(例如海藻糖、甘露糖、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖)、少量的缓冲剂(如乙酸盐、柠檬酸盐)、等价于约2.0mg/ml的量的纤溶酶(该量取决于眼体积而变化)并任选地含有纤溶酶稳定剂(例如二元氨基酸或其衍生物如e氨基己酸)。该预防方法将适用于手术前具有临床显著黄斑水肿的糖尿病患者或通常约定接受白内障手术的糖尿病患者。纤溶酶的浓度一次注射而不经过手术足以产生玻璃体后脱离(PVD)。PVD通过单独地常规眼部检查、光学相干断层成像、B型超声扫描或其任意组合进行确认。如果不能确认PVD，可以再进行一次或多次注射。PVD的产生预防或降低了接受白内障手术的患者的术后黄斑水肿的风险。纤溶酶注射以在白内障手术前导致预防性PVD也适用于需要进行白内障手术的高度近视患者、透明晶状体置换患者或任何其他眼内屈光手术的患者。实施例3患者诊断为具有视网膜脱离风险(例如出现临床显著的玻璃体视网膜膜牵拉或出现玻璃体视网膜变性病症，另一只眼睛己出现视网膜脱离)后，采用实施例1中所述的制剂和方法将纤溶酶经玻璃体内注射入玻璃体内，其剂量不经手术足以依次酶促切割玻璃体视网膜膜和引起玻璃体剥离，从而预防了视网膜脱离。实施例4诊断为玻璃体视网膜牵拉引起黄斑病变或视网膜病变后，采用实施例1中所述的制剂和方法将纤溶酶经玻璃体内注射入玻璃体后部，其剂量不经手术足以引起玻璃体后剥离，从而治疗牵拉性黄斑病变或牵拉性视网膜病变。实施例5如实施例1所述的制剂，其中将该制剂在本领域公知的条件下冻干，获得稳定的固体饼，其可以用注射用水、生理盐水或磷酸盐缓冲盐水复溶，以提供供玻璃体内注射用的澄清溶液。复溶体积取决于治疗本文所述疾病的最终需要的浓度以及要治疗的眼睛的大小；然而，对于含有25mg纤溶酶的饼，优选加入足够的溶剂以复溶成5mg/ml浓度的纤溶酶，更优选加入足够的溶剂以复溶成2mg/ml浓度的纤溶酶。尽管多种不同溶剂均可以用来复溶冻干饼，不过优选注射用水、生理盐水和磷酸盐缓冲盐水。更优选注射用水和生理盐水，最优选生理盐水。同样清楚，纤溶酶的稳定剂可以存在于冻干饼中或溶剂中，用于保护当注射入玻璃体内时纤溶酶对于pH的变化稳定。实施例6玻璃体内注射化学铺展剂例如Vitras^或透明质酸酶后，采用实施例1中所述的制剂和方法将纤溶酶经玻璃体内注射入玻璃体后部，其剂量不经过手术足以引起玻璃体后剥离，从而治疗牵拉性黄斑病变或牵拉性视网膜病变。尽管本发明结合不同的优选实施例进行了描述，但是对本领域技术人员而言清楚，在不偏离本发明的精神和所附的权利要求的范围内可以有很多变化。例如，在将本发明用于不同的眼部病症或将本发明用于不同制剂中时，对优选实施方案的修改将是明显的。权利要求1.一种用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生性糖尿病视网膜病进展率的非手术方法，其包括向患有非增生性糖尿病视网膜病变的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶，所述有效量的丝氨酸蛋白酶足以不经过手术而产生玻璃体后脱离，以预防或降低所述患者的增生性糖尿病视网膜病变的进展率。2.根据权利要求1的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶选自基本上由纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶组成的组，所述纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶从人血浆或由重组技术得到。3.根据权利要求1的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶。4.根据权利要求3的方法，其中所述纤溶酶从由人血液分级分离得到的纤溶酶原获得。5.根据权利要求1和3的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约0.5至约1000pg纤溶酶。6.根据权利要求1和3的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约1至500pg纤溶酶。7.根据权利要求1和3的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约10至400纤溶酶。8.根据权利要求1和3的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约20至300jig纤溶酶。9.根据权利要求1和3的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约50至200吗纤溶酶。10.根据权利要求l的方法，其中所述玻璃体内给药为注射入玻璃体内。11.根据权利要求l的方法，其中所述玻璃体内给药为采用型号25或更大的针注射入玻璃体内。12.根据权利要求l的方法，其中所述玻璃体内给药为采用型号25或更大的针注射以给药10至200pL的体积。13.根据权利要求12的方法，其中所述玻璃体内给药为采用型号25或更大的针注射以给药50至100pL的体积。14.根据权利要求l的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶，所述有效量为约50至200吗纤溶酶，且所述纤溶酶通过注射入玻璃体内给药。15.—种用于治疗视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、牵拉性视网膜脱离、黄斑裂孔、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血或牵拉性黄斑病变的非手术方法，其包括向患有这些眼部病症中的一种或多种的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶，所述有效量的丝氨酸蛋白酶足以不经过手术而产生玻璃体后脱离，以预防或降低视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血和牵拉性黄斑病变。16.根据权利要求15的方法，其中所述玻璃体后脱离之后进行不同的手术方法。17.根据权利要求15的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶选自基本上由纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶组成的组。18.根据权利要求15的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶。19.根据权利要求18的方法，其中所述纤溶酶从由人血液分级分离得到的纤溶酶原获得。20.根据权利要求15和18的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约0.5至1000pg纤溶酶。21.根据权利要求15和18的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约1至500ng纤溶酶。22.根据权利要求15和18的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约10至400pg纤溶酶。23.根据权利要求15和18的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约20至300jag纤溶酶。24.根据权利要求15和18的方法，其中注射入玻璃体内的所述有效量的丝氨酸蛋白酶等价于约50至200pg纤溶酶。25.根据权利要求15的方法，其中所述玻璃体内给药为注射入玻璃体内。26.根据权利要求15的方法，其中所述玻璃体内给药为采用型号25或更大的针注射入玻璃体内。27.根据权利要求15的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶，所述有效量为约50至约200pg纤溶酶，且所述纤溶酶通过注射入玻璃体内给药。28.根据权利要求IO的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的溶液。29.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的胶束溶液。30.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的固体颗粒悬浮液或具有该酶作为颗粒的固体颗粒悬浮液。31.根据权利要求IO的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射脂质体溶液，其中所述丝氨酸蛋白酶在所述脂质体的含水核心内、在所述脂质体溶液的已占体积中或两者中都有。32.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射水包油型乳液，其中所述丝氨酸蛋白酶以吸附于油滴上存在或以存在于所述乳液的连续水相中存在。33.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为将分散于非水介质中的粉末注射入玻璃体内，其中所述粉末为丝氨酸蛋白酶。34.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为将含有丝氨酸蛋白酶和相关赋形剂的速溶小片注射入玻璃体内。35.根据权利要求28-34的方法，其中所述玻璃体内给药为将根据UPS指南无菌且无内毒素的制剂注射入玻璃体内。36.根据权利要求28-34的方法，其中所述玻璃体内给药为将根据UPS指南无菌且无内毒素并含有稳定成分的制剂注射入玻璃体内。37.根据权利要求36的方法，其中所述稳定成分选自基本上由e氨基己酸、赖氨酸、精氨酸、血清白蛋白或碳酸氢铵组成的组。38.根据权利要求37的方法，其中所述稳定成分为s氨基己酸。39.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的溶液。40.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的胶束溶液。41.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射含有丝氨酸蛋白酶的固体颗粒悬浮液或具有该酶作为颗粒的固体颗粒悬浮液。42.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射脂质体溶液，其中所述丝氨酸蛋白酶在所述脂质体的含水核心内、所述脂质体溶液的已占体积中或两者中都有。43.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射水包油型乳液，其中所述丝氨酸蛋白酶以吸附于油滴上存在或以存在于所述乳液的连续水相中存在。44.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为将分散于非水介质中的粉末注射入玻璃体内，其中所述粉末为丝氨酸蛋白酶。45.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为将含有丝氨酸蛋白酶和相关赋形剂的速溶小片注射入玻璃体内。46.根据权利要求38-45的方法，其中所述玻璃体内给药为向玻璃体内注射根据UPS指南无菌且无内毒素并含有稳定成分的制剂。47.根据权利要求46的方法，其中所述稳定成分选自基本上由e氨基己酸、赖氨酸、精氨酸、血清白蛋白或碳酸氢铵组成的组。48.根据权利要求10的方法，其中所述玻璃体内给药为注射溶液，所述溶液含有所需丝氨酸蛋白酶和通常可接受的药用赋形剂并加有设计用来增加制剂密度使得注射后当患者仰卧时所述制剂将趋于向患者视网膜沉积的成分。49.根据权利要求47的方法，其中所述稳定成分为e氨基己酸。50.根据权利要求25的方法，其中所述玻璃体内给药为注射溶液，所述溶液含有所需丝氨酸蛋白酶和通常可接受的药用赋形剂并加有设计用来增加制剂密度使得注射后当患者他或/她仰卧时所述制剂将趋于向患者视网膜沉积的成分。51.根据权利要求48的方法，其中提供增加的密度的物质选自基本上由可溶性碘化X射线造影剂组成的组，所述可溶性碘化X射线造影剂包括碘海醇、碘克沙醇、泛影酸、碘帕醇、碘美普尔、碘克沙醇、三碘化苯和碘化油、升高浓度的蔗糖和其他糖类以及已知用于体内是安全的重金属络合物如包括omniscan⑧在内的MRI造影剂。52.根据权利要求49的方法，其中提供增加的密度的物质选自基本上由可溶性碘化X射线造影剂组成的组，所述可溶性碘化X射线造影剂包括碘海醇、碘克沙醇、泛影酸、碘帕醇、碘美普尔、碘克沙醇、三碘苯和碘化油、升高浓度的蔗糖和其他糖类以及已知用于体内安全的重金属络合物如包括omniscar^在内的MRI造影剂。53.—种稳定的眼用纤溶酶制剂，当复溶时其包含a)约0.01mg/ml至约10mg/ml的纤溶酶；b)约0.10mg/ml至约100mg/ml的糖类或糖类衍生物；c)缓冲剂；d)pH为约2至约5;禾口e)有效量的纤溶酶稳定剂，以防止眼用纤溶酶制剂内pH变化中或注射入玻璃体内时纤溶酶物理稳定性的快速改变。54.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶为约0.02mg/ml至约10mg/ml的纤溶酶。55.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶为约0.03mg/ml至约5mg/ml的纤溶酶。56.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶为约0.03mg/ml至约4mg/ml的纤溶酶。57.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶为约2mg/ml的纤溶酶。58.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述糖类选自包括海藻糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖或糖类衍生物的组。59.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述糖类为海藻糖。60.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述糖类衍生物选自包括甘露糖醇、sortitol或木糖醇的组。61.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述缓冲剂选自包括乙酸盐、拧檬酸盐和磷酸盐的组。62.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述缓冲剂为乙酸盐。63.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述pH为约3至5。64.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述pH为约3.5至5。65.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述pH为约3至4。66.根据权利要求53的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶稳定剂的所述有效量为约1mM至约100mM。67.根据权利要求53和66的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶稳定剂为二元氨基酸或其衍生物。68.根据权利要求53和66的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶稳定剂选自包括e氨基己酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酰甘氨酸的组。69.根据权利要求53和66的稳定的眼用纤溶酶制剂，其中所述纤溶酶稳定剂为e氨基己酸。70.—种稳定的眼用纤溶酶制剂，其包含a.约0.01mg/ml至约10mg/ml的纤溶酶；b.约10mg至约50mg的海藻糖；c.乙酸盐或柠檬酸盐缓冲剂；d.pH为约3至约5;和e.约lmM至约lOOmM的二元氨基酸或其衍生物，以防止眼用纤溶酶制剂内pH变化中或注射入玻璃体内时纤溶酶物理稳定性的快速改变。71.—种稳定的眼用纤溶酶制剂，其包含a.约2.0mg/ml的纤溶酶；b.约20mg的海藻糖；c.乙酸盐缓冲剂；d.pH为约3至5;和e.约3mM的e氨基己酸，以防止眼用纤溶酶制剂内pH变化中或注射入玻璃体内时纤溶酶物理稳定性的快速改变。72.—种用于预防或降低视网膜脱离风险的方法，其包括向具有视网膜脱离风险的患者给药足以产生玻璃体后脱离的有效量的丝氨酸蛋白酶。73.根据权利要求72的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶选自基本上由纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶组成的组。74.根据权利要求72的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶为纤溶酶。75.根据权利要求10的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶的注射在化学铺展剂注射后进行，所述化学铺展剂如Vitrase⑧或透明质酸酶。76.根据权利要求25的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶的注射在化学铺展剂注射后进行，所述化学铺展剂如Vitrase⑧或透明质酸酶。77.根据权利要求53、70和71的方法，其中将粘度增强剂加入所述制剂中。全文摘要本发明涉及一种用于预防或降低非增生性糖尿病视网膜病变进展为增生性糖尿病视网膜病变的进展率的非手术方法，其包括向患有非增生性糖尿病视网膜病变的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶，所述有效量的丝氨酸蛋白酶不经过手术足以产生玻璃体后脱离，以预防或降低所述患者的增生性糖尿病视网膜病变的进展。另外，本发明还公开了一种治疗眼部病症的非手术方法，所述眼部病症例如视网膜缺血、视网膜炎症、视网膜水肿、牵拉性视网膜脱离、牵拉性视网膜病变、玻璃体出血，以及牵拉性黄斑病变，所述方法通过向患有这些病症中的一种或多种的患者玻璃体内给药有效量的丝氨酸蛋白酶进行，从而降低或治疗特定的眼部病症。优选的丝氨酸蛋白酶为纤溶酶、微纤溶酶和小纤溶酶，最优选纤溶酶。文档编号A61K38/48GK101171030SQ200680015854公开日2008年4月30日申请日期2006年5月10日优先权日2005年5月11日发明者B·利维,G·L·麦金泰尔,S·P·巴特尔斯,T·L·科姆斯托克申请人:博士伦公司