基于磷脂的药物制剂及其生产和使用方法

专利名称：：基于磷脂的药物制剂及其生产和使用方法
技术领域：
：本发明总的涉及药物制剂及其生产和使用方法；更具体地，本发明涉及安沙霉素的磷脂制剂，其中基本上不含中链和长链甘油三酯；更具体地涉及17-烯丙基氨基-17-脱甲基-格尔德霉素(17-AAG)的磷脂制剂。
背景技术：
：下面的描述包含可能有助于理解本发明的信息。既不是承认此处所提供的任何信息是现有技术或是与发明相关，也不是承认任何明示或暗示参考的出版物是现有技术。"安沙霉素"是以"袢(ansa)"结构为特征的抗生素分子，该袢结构包括通过长链桥接的苯醌、苯氢醌、萘醌或萘氢醌部分中的任一个。格尔德霉素(GDM)及其合成半合成类似物17-烯丙基氨基-17-脱甲基-格尔德霉素(17-AAG)属于安沙霉素的苯醌类别。GDM首先从孩i生物吸水链霉菌(S/"/^omyc^/zygmco/"'c"s)中分离出来，最初被确定为是某些激酶的有效抑制剂，后来表明它们的作用是通过促进激酶降解，特别是靶向"分子侣伴"，例如热休克蛋白卯(HSP90)。后来，各种其他的安沙霉素也被证明有或多或少的这种活性，其中17-AAG是最有希望的之一，目前正由国家癌症研究院(NCI)进行的深入的临床研究已经将它作为研究对象。参见，例如，FederalRegister,66(129):35443-35444;Erlichman等，Proc.AACR2001，42,摘要4474。HSP90是普遍存在的伴侣蛋白，其参与多种蛋白质的折叠、活化和装配，这些蛋白质包括参与信号转导、细胞周期控制和转录调节的主要蛋白质。研究人员已经报导HSP90伴侣蛋白与重要的信号蛋白结合，后者例如是类固醇激素受体和蛋白激酶，包括例如Raf-l、EGFR、v-Src家族激酶、Cdk4和ErbB-2(BuchnerJ.TIBS1999，24,136-141;Stepanova,L.等，GenesDev.1996，10,1491-502;Dai，K.等，J.Biol.Chem.1966,271，22030-4)。研究进一步表明某些辅伴侣蛋白，例如HSP70、p60/Hop/Stil、Hip、Bagl、HSP40/Hdj2/Hsj1、抑免蛋白、p23和p50,可能辅助HSP90的功能(参见，例如Caplan,A.TrendsinCellBiol.1999，9,262-68)。现在认为，安沙霉素抗生素，如除莠霉素A(HA)、格尔德霉素和17-AAG,是通过与HSP90的N-末端结合袋紧密结合而发挥其抗癌作用的(Stebbins,C.等人，Cell,1997,89:239-250)。该结合袋是高度保守的，且与DNA促旋酶的ATP结合位点具有弱的同源性(Stebbins,C.等人,同上；Grenert，J.P.等人,J.Biol.Chem.1997，272:23843-50)。而且研究发现ATP和ADP都可以与该结合袋以低亲和力结合，并且具有弱的ATP酶活性(Proromou，C.等人，Cell,1997,90:65-75;Panaretou,B.等人，EMBOJ.，1998,17:482936)。体外和体内研究表明安沙霉素类和其他HSP90抑制剂占据了该N-末端结合袋后改变了HSP90的功能并抑制了蛋白质折叠。研究发现，在高浓度条件下，安沙霉素类以及其他HSP90抑制剂可以阻止蛋白质底物与HSP90的结合(Scheibel,T.,H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1999,96:1297-302;Schulte，T.W.等人，J.Biol.Chem.1995,270:24585-8;Whitesell,L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1994，91:8324-8328)。研究还发现，安沙霉素可以抑制与侣伴蛋白结合的蛋白质底物依赖于ATP的释放(Schneider,C.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1996，93:14536-41;Sepp-Lorenzino等人，丄Biol.Chem.1995,270:16580-16587)。在任一情况下，在蛋白酶体中通过泛蛋白依赖性过程降解底物(Schneider，C.L.同上；Sepp-Lorenzino,L.等人，J.Biol.Chem.，1995，270:16580-16587;Whitesell,L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994,91:8324-8328)。这种底物去稳定作用在肿瘤和未转化的细胞中同样地发生，并且显示出对信号调节剂的亚类特别有效，所述信号调节剂亚类例如为Raf(Schulte，T.W.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.1997，239，655-9;Schulte,T.W.等，J.Biol.Chem.1995,270,24585-8)、核类固醇受体(Segnitz，B.和U.GehringJ.Biol.Chem.1997，272，18694-18701;Smith,D.F.等，Mol.Cell.Biol.1995，15,6804-12)、v-Src(Whitesell,L.等，Proc,Natl.Acad.Sci.USA1994,91,8324-8328)和某些跨膜酪氨酸激酶(Sepp-Lorenzino,L.等，J.Biol.Chem.1995，270，16580-16587),侈寸嗦口EGF受体(EGFR)、Her2/Neu(Hartmann，F.等，Int.J.Cancer.1997，70，221-9;Miller,P.等，CancerRes.1994，54,2724-2730;Mimnaugh,E.G.等，J.Biol.Chem.1996，271,22796-801;Sch證，R.等,J.Med.Chem.1995,38,3806-3812)、CDK4和突变p53(Erlichman等，Proc.AACR2001，42，摘要4474)。安沙霉素诱导的这些蛋白质的损失导致某些调节途径的选择性中断，并导致经如此处理的细胞在细胞周期的特定阶段发生生长停滞(Muise-Heimericks，R.C.等，J.Biol.Chem.1998，273,29864-72)以及凋亡，和/或分化(Vasilevskaya,A.等，CancerRes.,1999，59,3935-40)。除了抗癌和抗肺瘤活性外，HSP90抑制剂还可以用在多种其它用途中，包括用作抗炎药、抗传染性疾病的药物、用于治疗自身免疫病的药物、用于治疗中风、局部缺血、心脏病的药物、和可用于促进神经再生的药物(参见，例如Rosen等，PCT申请WO02/09696(PCT/US01/23640);Degmnco等,WO99/51223(PCT/US99/07242);Gold,美国专利6，210，974B1;DeFranco等，美国专利6,174,875)。与以上所述有部分重叠，文献中报导了还可以治疗纤维化疾病，包括但不限于硬皮病、多肌炎、系统性狼掩、类风湿性关节炎、肝硬化、瘢痕疙瘪形成、间质性肾炎和肺纤维化。(Strehlow，WO02/02123(PCT/US01/20578))。更进一步地，HSP90调节作用、调节剂及其用途也在国际申请No.PCT/US03/04283、PCT/US02/35938、PCT/US02/16287、PCT/US02/06518、PCT/US98/09805、PCT/US00/09512、PCT/US01/09512、PCT/US01/23640、PCT/US01/46303、PCT/US01/46304、PCT/US02/06518、PCT/US02/29715、PCT/US02/35069、PCT/US02/35938、PCT/US02/39993、PCT/US03/10533、PCT/US03/02686和美国临时申请60/293,246、60/371,668、60/331/893、60/335,391、60/128,593、60/337,919、60/340,762和60/359,484中进行了报导。因此，安沙霉素在治疗和/或预防多种疾病方面具有很大希望。然而，如同许多其他的亲脂性药物一样，它们难以制备用于药物应用，特别是可注射的静脉制剂。迄今为止，已经尝试使用脂质嚢泡和水包油型乳剂，但是它们包括复杂的处理步骤，使用较差的或临床上不可接受的溶剂，制剂不稳定，和/或在注射部位有刺激作用。一般地参见，Vemuri，S,和Rhodes,C.T.,Preparationandcharacterizationofliposomesastherapeuticdeliverysystems:areview,PharmaceuticaActaHelvetiae1995,70,pp.95-111;参见PCT/US99/30631,于2000年6月29日公开为WO00/37050。因此需要能够改善或克服一种或多种这样的缺陷的替代配制方法和产物，本发明满足了这需要。
发明内容本发明涉及药物制剂及其生产和使用方法。该制剂是由磷脂和一种或多种药物活性化合物或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物组成的复合物的分散体。在许多实施方案中，药物活性化合物是安沙霉素，并且总制剂基本上不含中链和长链甘油三酯。该制剂可以过滤除菌、冻干和/或冷冻，并且根据使用的化合物的特定亲水性/疏水性，与使用已知方法如乳化的非复合形式相比，具有每生理学单位水体积提供较高浓度的亲水化合物的优点。本发明的制剂和方法也提高了稀释能力，以及在使用时受体静脉注射部位的耐受性。不受理论所限制，申请人认为后者是由于磷脂的较高的生理相容性及其在本发明制剂中使用的相对较大的比例。本发明第一方面涉及药物制剂。每种药物制剂含有药物有效量的安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物，和药学上可接受的磷脂，以形成水分散颗粒，其中该制剂基本不含中链和长链甘油三酯，并且磷脂的浓度至少为所述制剂的5%W/W。在一些实施方案中，中链和长链甘油三酯的组合浓度为大约P/。w/v或更低。任何药物活性安沙霉素可以在本发明的药物制剂中使用。在一些实施方案中，安沙霉素选自以下化合物在一些实施方案中，所述安沙霉素是17-AAG。在另外一些实施方案中，17-AAG为盐酸盐或磷酸盐形式。在另外一些实施方案中，17-AAG为高熔点型或多晶型物、低熔点型、无定形型、或上述形式的任意组合。在一些实施方案中，低熔点型17-AAG的特征为DSC熔解温度低于175。C,并且X-射线粉末衍射图包括位于5.85度、4.35度和7.90度2e角的峰。在另外一些实施方案中，低熔点型17-AAG的特征为DSC熔解温度为大约156°C，并且X-射线粉末衍射图包括位于5.85度、4.35度和7.90度2e角的峰。在另外一些实施方案中，低熔点多晶型17-AAG的特征为DSC熔解温度为大约172°C。另外，安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在本发明的药物制剂中的浓度可以为大约0.5mg/mL、大约5.0mg/mL、大约50mg/mL或更高。在本发明药物制剂的一些实施方案中的磷脂可以包括一种或多种选自磷脂酰胆碱、缩醛磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、缩醛磷脂酰乙醇胺和Phospholipon90G的成员。在一些特定实施方案中，磷脂包括Phospholipon90G。水分散颗粒的大小可以用超声处理、高剪切力匀浆化、微流化、通过控制孔径滤器挤出中的一种或多种方法来降低。水分散颗粒的颗粒大小为大约200nm或更低。在一些实施方案中，颗粒大小为大约100nm到200nm。在另夕l、一些实施方案中，颗粒大小为大约50nm到200nm,在另外一些实施方案中，颗粒大小为胶体。此外，本发明的药物制剂的一些实施方案包含一种或多种赋形剂，该赋形剂可以作为冷冻保护剂、张力调节剂和填充剂中的一种或多种。本发明的第二方面涉及制备安沙霉素药物制剂的方法。所述制备方法包括以下步骤(a)形成分散颗粒，该分散颗粒包含安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物；和药学上可接受的磷脂；(b)任选地减小所述分散颗粒的大小；(c)任选地冷冻步骤(a)或(b)的产物；(d)任选地融化步骤(c)的产物；(e)任选地冻干步骤(a)-(d)中任一步的产物；和(f)任选地再水合步骤(e)的产物；并且其中所述制剂基本上不含中链和长链甘油三酯。在某些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括添加一种或多种赋形剂，该赋形剂作为冷冻保护剂、张力调节剂和填充剂中的一种或多种。所述方法用于制备安沙霉素、特别是格尔德霉素、17-AAG、DMAG、化合物563、化合物237、化合物956、化合物1236或其组合的药物制剂。在一些实施方案中，所述方法用于制备17-AAG、格尔德霉素或DMAG的药物制剂。在特定实施方案中，所述方法用于制备17-AAG的药物制剂。在另外一些实施方案中，所述方法用于制备高熔点型、低熔点型、无定形型17-AAG或其任意组合的药物制剂。在一些特定实施方案中，所述方法用于制备低熔点型17-AAG的药物制剂。安沙霉素、其药学上可接受的盐或其前体药物在按照本发明的方法制备的药物制剂中的浓度在一些实施方案中至少为大约0.5mg/mL,在另外一些实施方案中至少为大约5.0mg/mL,在又一些实施方案中至少为大约50mg/mL或更高。在本发明的方法中使用的磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、Phospholipon90G或其任意组合。在一些实施方案中，使用的磷脂包括磷脂酰胆石成、Phospholipon90G、Phospholipon90G或其任意组合。在另外一些实施方案中，使用的磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、Phospholipon90G或其任意组合。在一些特定实施方案中，使用的磷脂包括Phospholipon90G。制备药物制剂的方法可以包括减小分散颗粒的颗粒大小的步骤。在一些实施方案中，颗粒大小的减小使用超声处理、高剪切力匀浆化、微流化、通过控制孔径滤器挤出中的一种或多种方法来实现。在一些实施方案中，使用高剪切力匀浆化和/或微流化来实现减小。在另外一些实施方案中，使用高剪切力匀浆化和/或通过控制孔径滤器挤出来实现减小。在一些实施方案中，所述方法产生颗粒大小为胶体的分散颗粒，其颗粒大小为大约50nm到200nm,大约100nm到200nm,或大约200nm或更小。在一些实施方案中，颗粒大小为大约100nm到200nm。在另外一些实施方案中，颗粒大小为大约200nm或更小。在另外一些实施方案中，颗粒大小为胶体。本发明第三方面涉及治疗或预防哺乳动物的疾病的方法，包括给所述哺乳动物施用药物有效量的任一本发明第一方面的药物制剂或通过任一制备方法制备的药物制剂。所述治疗方法可以用于治疗局部缺血、增生性疾病、感染、神经性疾病、胂瘤、白血病、l曼性'淋巴细月包白血病、肿瘤、癌症、癌、获得性免疫缺陷综合征和恶性疾病。所述方法适用的增生性疾病包括肿瘤、炎性疾病、真菌感染、酵母感染和病毒感染。在本发明治疗方法的一些实施方案中，安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、S旨、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物以在药物制剂中大约1-1.5%(w/w)的浓度或大约0.5-50mg/ml的浓度给药。在本发明治疗方法的一些实施方案中，药物制剂中的安沙霉素选自格尔德霉素、DMAG、17-AAG、化合物563、化合物237、化合物956和化合物1236。在一些实施方案中，安沙霉素是17-AAG。在另夕l、一些实施方案中，17-AAG选自高熔点型、低熔点型、无定形型17-AAG或其任意组合。在另外一些实施方案中，安沙霉素包括低熔点型17_AAG。本发明的第四方面是本发明的磷脂制剂在制备药物中的用途。本发明的再另一方面是本发明的磷脂制剂在制备用于治疗和预防上述HSP90介导的疾病和病症的药物中的用途。应当理解，在可行的条件下，可以将本发明的上述任何方面和实施方案以任意方式进行组合；本领域技术人员应当理解各种实施方案在本发明精神范围内可以有效组合的方式。引用参考本说明书中提到的所有出版物和专利申请都引入本文作为参考，如同每一出版物或专利申请具体且分别地？I入作为参考。本发明的新特征在所附的权利要求书中具体描述。参照下面用来说明应用本发明原理的示例性实施方案的详细描述以及附图，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，在附图中图1显示高熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图，在7.40、6.08和11.842e角处显示峰。图2显示低熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图，在5.85、4.35和7.902e角处显示峰。图3显示高熔点型17-AAG的差示扫描量热法(DSC)扫描。图4显示低熔点型17-AAG的DSC扫描。图5显示低熔点型和高熔点型17-AAG在乙醇中相对于时间(分钟)的固有溶出率(mg/cm2)。发明详述尽管本文中已经表示和描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员应当明白这些实施方案只是作为实例提供。本领域技术人员在不背离本发明的情况下会想到大量变化、改变和置换。应当理解，在实施本发明中可以使用本文描述的本发明实施方案的各种替代方案。下面的权利要求书限定了本发明的范围，由此也包括这些权利要求范围内的方法和结构及其等同方案。本发明涉及基于磷脂的安沙霉素的药物制剂及其生产和使用方法。申请人已经发现水溶性或微水溶性安沙霉素或水不溶性安沙霉素的水溶性盐可以配制为药学上可接受的磷脂的分散体。申请人进一步发现结晶安沙霉素的不同多晶型具有不同的溶出特征，例如，17-AAG的低熔点型表现出明显高于高熔点型的溶出率。利用这些性质，申请人发明了适合给患者给药的水不溶性药物如安沙霉素的制剂。这种制剂的制备相对简单、通常使用临床上可接受的试剂，并且产生具有贮存稳定性的产品。本发明与PCT/US03/10533所述的乳化制剂的不同之处在于本发明的制剂含有较低水平的中链甘油三酯(MCT)和长链甘油三酯。MCT可以导致代谢形成辛酸盐，辛酸盐可以导致中枢神经系统效应，如嗜睡、恶心、瞌睡和EEG改变。参见，Cotter等，Am.J.Clin.Nutr.09050:794-800;Miles等，JournalofParenteralandEnteralNutrition199115:37-41;Traul等，FoodChem.Toxicol.200038:79-98。另外，申请人请求保护的制剂在静脉内给药过程中良好耐受。尽管在此使用安沙霉素、17-AAG对本发明进行说明，但是应当理解，本文所述的药物配制新方法适用于其他亲脂性低水溶性药物。也应当理解，该方法进一步适用于许多其他安沙霉素，包括但不限于实施例部分实施例1-12中举例说明的那些，如格尔德霉素、17-N,N-二甲基氨基乙氨基格尔德霉素(DMAG)和17-AAG。进一步应当理解，本文所述的药物配制新方法适用于高熔点型和低熔点型17-AAG。另外，所述配制还适用于公开的化合物的多晶型物、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐和前体药物。I.定义下述术语释义如下，未特别指出的术语其释义与本领域中的常见含义相同术语"前体药物"或"药学上可接受的前体药物"是与载体共价结合的药学活性药物，其中在给哺乳动物施用前体药物时，在体内发生药学活性药物的释放。本发明化合物的前体药物的制备方法是通过修饰化合物中存在的官能团，使得修饰的官能团通过常规操作或在体内切除，从而获得目标化合物。前体药物包括其中羟基、胺或巯基基团与任一基团键合的化合物，当对哺乳动物给药后，该任一基团被切除，分别形成自由的羟基、氨基、或巯基基团。前体药物的实例包括但并不仅限于本发明化合物中的醇或胺官能团的醋酸酯、甲酸酯或苯曱酸酯衍生物；本发明化合物中的醇或苯酚官能团的磷酸酯、二曱基甘氨酸酯、氨基烷基节基酯、氨基烷基酯或羧基烷基酯；等等。前体药物可使纟会药具有许多优点，如REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES,20thEdition,Ch.47,pp.913-914所述。"药学上可接受的盐"包括药学上可接受的无机和有机酸和碱的衍生物。适宜的酸的例子包括盐酸、氢溴酸、疏酸、硝酸、高氯酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、磷酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对曱苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、曱^^黄酸、甲酸、苯曱酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、1，2-乙烷二磺酸(乙二磺酸盐)、半乳糖基-d-葡萄糖酸等。其他的酸，如草酸，尽管其本身并不是药学盐，及其药学上可接受的酸加成盐。来源于适宜碱的盐包括碱金属(如，钠)、碱土金属(如，镁)、铵和N-(C,-C4烷基)4+盐等。这些碱的某些示例性实例包括氢氧化钠、氢氧化钾、胆碱氢氧化物、碳酸钠等。当权利要求中提到"化合物(如，化合物'x')或其药学上可接受的盐"，并且只给出该化合物时，这些权利要求应解释为可替代地或结合地包括该化合物的药学上可以接受的盐或盐类。"药物有效量"指能够提供治疗或预防效果的药物量。为获得治疗和/或预防效果而依照本发明施用的化合物的具体剂量当然依据病例的具体情况而定，包括，如所施用的具体化合物、给药途径、所治疗的疾病、以及接受治疗的个体。典型的每日剂量(单次或分次给药)涵盖从约0.01mg/kg至约50mg/kg-100mg/kg体重的本发明活性化合物的剂量水平。优选的每日剂量一^:为从约0.05mg/kg至约20mg/kg,理想地为从约0.1mg/kg至约10mg/kg。诸如清除率、半衰期和最大耐受剂量(MTD)等因素有待于确定，但是本领域技术人员可以使用标准方法确定这些因素。本发明的一些化合物可能含有一个或多个手性中心，因此可能存在对映异构和非对映异构形式。本发明的范围意图覆盖其所有异构体，以及顺式和反式异构体的混合物、非对映异构体的混合物、和对映异构体(光学异构体)的外消旋混合物。此外，还可以使用公知的方法分离各种形式，而且本发明的一些实施方案可能涉及特定对映异构体或非对映异构体的纯化或富集种类。另外，本发明的一些化合物可以作为互变异构体存在，互变异构体是在质子位置和双键的相应位置方面不同的异构体。本发明的范围意在覆盖所有互变异构体形式。此外，本文描述的化合物可以作为溶剂化物存在，溶剂化物是指所述化合物或所述化合物的离子与一种或多种溶剂分子的组合。本发明的范围意在覆盖本文描述的化合物的所有溶剂化物形式。术语"分散体"、"胶体"和"乳剂"具有与Remington'sTheScienceandPracticeofPharmacy,20thEdition,Gennaro,A.R.Ed.，(2000)—致的含义，是指由彼此不完全互溶的两种或多种成分组成的多相系统。分散体根据分散颗粒大小可以分类为不同的类别。胶体分散体的特征在于分散的颗粒的范围大约为1nm至0.5^im。粗分散体的特征是颗粒大小大于0.5idm，并且包括悬浮液和乳液。通常，不同类型的分散体可以通过光学散射和/或显微技术(包括电子显微镜方法)来检测。"冻干，，是从样本中将液体除去或基本上除去，例如通过升化。溶剂/水相的除去可以使用任何方法完成，但是通常在低压下，即真空下，在任何合理的温度和压力下，包括在室温和氮气流下进行，只要适合保持药学活性药物的功能完整性。术语"冻干"和"冻干的，，并不意味着必须100%除去溶剂和/或溶液，可能只是除去较少的比例。基本上除去一般是除去大约95%。"惰性气体条件，，是指与标准大气条件中的气体相比具有相对较低反应性的气体条件。这种惰性气体条件的一个例子是在配制过程中使用纯的或基本上纯的氮气。本领域技术人员对于其他的情况也都是熟^口的。术语"水合"或"再水合"是指加入水溶液，如水或生理上相容的缓沖液，例如汉克斯液、林格液、生理盐水緩沖液或5%右旋糖水溶液。术语"生理学上可接受的载体"指的是不会对生物体造成显著性的刺激、而且不会消除所施用化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。术语"赋形剂"指的是向药物组合物中添加的药学上可接受的非毒性物质，目的是促进化合物的加工、给药以及物理特性。赋形剂的例子可能包括，但并不限于碳酸钙，磷酸钙，各种糖，包括甘露醇、蔗糖和/或右旋糖，和各种类型的淀粉，纤维素衍生物，明胶，各种緩冲剂，如乙酸钠、磷酸盐、乳酸盐、酒石酸盐和/或马来酸盐，氨基酸，糖酸(例如糖皮质酸盐和/或葡糖酸盐)，和触变剂，如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和/或泊洛沙姆(共聚物)。术语"稳定剂"可以与"填充剂"或"冷冻千燥剂"同义，反之亦然，尽管不一定这样。"填充剂"是通常通过使干燥制剂基质保持其构象而对亲液制剂提供机械支持的一类赋形剂。典型地，填充剂是糖。本文使用的糖包括但不限于单糖、二糖、寡糖和聚糖。具体的例子包括但不限于果糖、葡萄糖、甘露糖、海藻糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、右旋糖和葡聚糖。糖还包括糖醇，如甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、卫矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。按照本发明也可以使用糖的混合物。各种填充剂，例如甘油、糖类、糖醇和单糖和二糖，也可以起等渗剂的作用。用于本发明的填充剂仅仅受物理化学因素的限制，如溶解度，在冷冻、干燥、]^存和再水合过程中保持微滴大小和乳液完整性的能力，以及与活性药物/化合物的反应性的缺乏，还受给药途径的限制。通常，填充剂在化学上对药物是惰性的，在使用条件下没有或者只有极其有限的有害副作用或毒性。除了填充剂载体以外，可能用于或者可能不用于填充剂目的的其他载体包括，例如，本领域公知的并且易于获得的佐剂、赋形剂和稀释剂。用于本发明的填充剂的一个例子是蔗糖。不受理论的束绰，一般认为蔗糖在冷冻及随后的冻千后形成非晶态玻璃，从而通过形成其中药物-磷脂复合物包含在刚性玻璃中的分散体而潜在地提高制剂的稳定性。也可以利用代替冻干时水分损失的糖提高稳定性。糖分子，而不是水分子，通过氢键与界面上的磷脂键合。具有这些特征并且可以代替的其他填充剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和甘露醇。术语"安沙霉素"是一个宽泛的术语，表征具有"袢"结构的化合物，所述"袢"结构包含通过长脂肪链桥接的苯醌、苯并氢醌、萘醌或萘并氢醌部分之一。萘醌或萘并氢醌类化合物的例子分别是在临床上重要的药物利福平和利福霉素。苯醌类化合物的实例有格尔德霉素(包括其合成衍生物，17-烯丙基氨基-17-脱曱氧基格尔德霉素(17-AAG)和17-N,N-二曱基氨基乙氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素(DMAG))、二氢格尔德霉素及除莠霉素。苯并氢醌类的实例有麦克菌素。本文使用的术语"安沙霉素，，也可以包括安沙霉素的药学上可接受的盐，以及安沙霉素前体药物，其在施用于个体后代谢为或多或少的药理学活性化合物。前体药物一般用来增强药理学化合物的溶解度、递送和/或在受试患者中的生物学存在和持久性中的一项或多项。术语"磷脂，，包括任何含有磷酸的脂质，如单酯或二酯。本发明的磷脂可以是合成的、天然的或半合成的，并且可以(但不是必须)与已知的细胞膜磷脂如磷酸甘油酯和鞘磷脂具有同一性。本文使用的术语"磷酸甘油酯"是指由甘油、三碳醇衍生的化合物，其具有一个甘油骨架，该甘油骨架通过两个甘油羟基与两条脂肪酸链酯化，并且通过其余的羟基与磷酸酯化，形成中间体磷脂酸盐。脂肪酸链一般含有14-24个碳原子，最常见的是16和18个碳原子。该链可以是饱和或不饱和的。磷酸酯基团本身然后可以与几种不同醇之一的羟基酯化，最常见的所述醇是丝氨酸、乙醇胺、胆碱、甘油和肌醇。磷酸甘油酯的例子包括但不限于磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)。鞘磷脂衍生自鞘氨醇，即一种含有长链不饱和烃链的氨基醇。在鞘磷脂中，鞘氨醇骨架的氨基与脂肪酸通过酰胺键连接。另外，鞘氨醇的伯醇鞋基与磷酰胆碱酯化。参见，例^口,Stryer，Biochemistry,SecondEdition,pp.206-211(1981)。另夕卜，磷酸甘油酯也包括卯磷脂。"卯磷脂，，是天然形成的硬脂酸、棕榈酸和油酸与磷酸的胆碱酯连接的甘油二酯的混合物。用于本发明的优选的磷脂是大豆卵磷脂，例如AmericanLecithenCompany(Oxford,CT，USA)供应的Phospholipon90G。其他商业来源和制备方法是本领域技术人员已知的。例如，TWEEN80(聚氧乙烯去水山梨i瞎醇单油酸酯)和Poloxamer188(泊洛沙姆188)是可以使用的另外的商品j式剂o本发明的磷脂的浓度一般为大约0.5-20%w/v，以溶解表面活性剂的水和/或其他成分的含量计。通常，磷脂的浓度为大约0.5-10%w/v,—4殳大约1-8%w/v。为了防止氧化降解或脂质过氧化或使其减至最小，除了不供氧(例如，在惰性气体如氮气和氩气存在下配制，和/或使用避光容器)以外，或者作为其替代，可以包含抗氧化剂例如a-生育酚和丁酸化羟基甲苯。本文使用的术语"甘油三酯，，是指甘油(HO-CH(CH20H)2)的三酯。三个酯基团可以相同，可以三个中的两个相同而第三个不同，或者可以所有三个都不同。本文使用的术语"短链甘油三酯，，是指含有含少于8个直链碳原子的酯基团的甘油三酯。本文使用的术语"中链甘油三酯"是指含有含8-12个直链碳原子的酯基团的甘油三酯。本文使用的术语"长链甘油三酯"是指含有含多于12个直链碳原子的酯基团的甘油三酯。术语"大约"指包括和超出指定的特定端点值最高20%。因此，其范围被加宽。术语"任选地"表示这一术语后的步骤或组分可以是、但不是必须是方法或制剂的一部分。术语"基本上不含"当与中链和长链甘油三酯连用时是指这些项目中的一个占整个制剂的5%w/v(总计10%w/v)或更少。因此，大约0-5%的中链或长链甘油三酯种类的任何范围为"基本上不含"。II.制剂的制备A.安沙霉素的制备本发明的安沙霉素可以是合成的、天然形成的、或两种形式的组合，亦即"半合成的"，其可包括二聚体以及偶联的变体和前体药物形式。在本发明各种实施方案中采用的一些示例性的苯醌安沙霉素及其制备方法包括但并不仅限于如下文献所述例如美国专利3,595,955(描述格尔德霉素的制备)、4,261,989、5,387,584、和5,932,566,以及在下面的"实施例"章节(实施例1-12)中所述。^^尔德霉素书于生物4,5-二氢格尔德霉素及其氢醌从吸水链霉菌(ATCC55256)培养物中的生物化学纯化在Cullen等的W093/14215中描述；通过冲各尔德霉素的催化氢化来合成4,5-二氢格尔德霉素的替代方法也是已知的。参见，例^口,"ProgressintheChemistryofOrganicNaturalProducts"，ChemistryoftheAnsamycinAntibiotics,197633:278。可以在本发明的各种实施方案中使用的其他安沙霉素在上述"
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"部分所引用的文献中有描述。另外，格尔德霉素和DMAG也可经商业途径购得，例如，分别购自CNBiosciences(这是MerckKGaA,Darmstadt,Germany的一家关联公司，其总部在美国加利福尼亚州圣地亚哥市)(目录号345805)，和EMD/Calbiochem,>司(这是MerckKGaA,Darmstadt,Germany的一家关联7>司)。在氮气环境下，在干THF中，可通过格尔德霉素与烯丙胺反应制备17-AAG。粗制品的纯化可通过在H2O:EtOH(90:10)中制成浆液，根据毛细管熔点技术测量，获得的洗涂后的晶体的熔点为206-212°C。通过将粗制品于2-丙醇(异丙醇)中溶解和重结晶，获得第二种17-AAG产物。通过毛细管熔点纟支术测得该第二种17-AAG产物的熔点为147-153°C。分别将这两种17-AAG产物称为"高熔点型或多晶型"和"低熔点型"。可以通过将晶体在用于纯化高熔点型的溶剂(H20:EtOH(90:10))中制成浆液来检测低熔点型的稳定性，结果未观察到其向高熔点型的转化。制备两种多晶型17-AAG的细节参见实施例1-2。除了高熔点型和低熔点型以外，众所周知17-AAG还有无定形型。不同多晶型的存在可以通过X-射线粉末衍射和差示扫描量热法(DSC)来估计。明显不同的X-射线粉末衍射图表示材料具有不同的晶体结构。图1显示高熔点型的X-射线粉末衍射图，其在7.40度、6.08度和11.84度2Q角处包括峰。图2显示低熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图，其在5.85度、4.35度和7.90度2e角处包括峰。由于X-射线粉末衍射图明显不同，高熔点型和低熔点型17-AAG含有不同的17-AAG晶体形式。高熔点型和低熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图上峰的位置和强度分别总结在表1和表2中。表1.高熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图表2.低熔点型17-AAG的X-射线粉末衍射图<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>17-AAG的DSC扫描，其显示一个在204。C的吸热。图4是低熔点型17-AAG的DSC扫描，其显示两个特征性的吸热，主要的一个中心在156°C,次要的一个中心在172°C。每个吸热都指示存在至少一种多晶型。因此，存在两个吸热指示低熔点型17-AAG可能由至少两种多晶型组成。此外，吸热事件终止于大约176°C,这标志着低熔点型多晶型的熔解温度的上限。除了DSC以外，还可以使用其他热分析技术测量多晶型物的熔解温度；热解重量分析(TGA)和毛细管熔点技术是常用的其他方法。高熔点型和低熔点型17-AAG的热分析数据(即DSC和TGA)总结在以下表3中。高熔点型和低熔点型的熔解温度也可以通过毛细管熔点法分析，其结果在实施例1-3中报告。注意到在将通过毛细管熔点法获得的熔解温度与通过DSC获得的结果进行比较时，在每组数据中都有几度的偏差。这种偏差可能是由于使用的分析技术31起的。毛细管熔点测量法依赖于对熔解循环的开始和结束的目测确定，颜色极暗的17-AAG晶体使其精确测量比较困难。表3.高熔点型及低熔点型17-AAG的热分析<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>多晶型状态可以影响活性药物成分的溶出率。高熔点型和低熔点型17-AAG的固有溶出率在可溶解17-AAG的乙醇中测量。低熔点型17-AAG的固有溶出率(0,885mg/cm2/min)比高熔点型17-AAG的固有溶出率(0.550mg/cm2/min)高60%。见图5。低熔点型的较高溶出率可以提供更有效的制备方法。另外，更快的溶出可以提高化合物在口服时的生物利用率，因为化合物在胃肠道中从溶液中吸收，低熔点型具有可以快速溶解、因此饱和溶解度可以保持并且可以吸收的优点。本发明涉及在制剂的制备中使用多晶型混合物或单一多晶型或无定形型形式的安沙霉素的所有多晶型，特别是，17-AAG的所有多晶型。B.剂量制剂的制备本发明的制剂可以按照本领域中制备药物组合物的任何方法来制备。通常，药物活性化合物溶解在粗磷脂水分散体中，然后减小分散体的颗粒大小。这些分散体可以通过过滤容易地除菌，并且对于反复冻融循环稳定，并且也可以作为冻干物保存。本发明制剂的pH可以用合适的酸和石成例如盐酸和氢氧化钠来调节。通常，磷脂颗粒分散在緩沖的水性介质例如乙酸钠緩冲液中。除了使用乙酸钠以外，或者作为其替代，可以使用其他緩冲液，例如组氨酸(不超过5mM;大约pH5)、乳酸(大约10-20mM;大约pH4)、缬氨酸(大约10-50mM;大约pH3)等。分散和颗粒大小的减小可以通过多种公知技术来实现，例如机如戈混合、匀浆化(例如使用polytron或Gaulin高能型设备)、涡旋和超声处理。超声处理可以用水浴型或探针型仪器来实现。微流化仪可以在商业上获自例如MicrofluidicsCorp.,Newton，Mass.,并且在美国专利4,533,254中进一步描述，它利用压力辅助通过窄孔，例如，各种商业可获得的聚碳酸酯膜上所包含的孔。也可以使用低压装置。这些高压和低压装置可以用来选择和/或调节嚢泡大小。微通道过滤器在高压下过滤通过，可以根据分散颗粒大小的特定直径进行选择。热、摇动和/或超声处理也可以用来减小颗粒大小。液体分散体的除菌可以通过各种过滤技术来实现。过滤可以包括通过较大直径的过滤器例如0.45微米过滤器(German小型嚢式过滤器.PallCorp.,EastHills,N.Y.，USA)预过滤，然后通过4交小的过滤器例如0.2微米过滤器过滤。通常，过滤介质是乙酸纤维素(例如Sartobran,SartoriusAG,Goettingen,Germany)。可以施力口请争压力，以叶呆持顺畅和连续的流动。此外，制剂也可以直接通过0.2微米或更小的过滤器挤出。在任一事件中，通过0.2微米或更小孔径的微通道过滤器挤出可以有效地过滤除菌，使得不必要进行额外的过滤除菌。本发明制剂和方法的某些实施方案可以包括在适当的时间冻千和再水合。冻干产生相对稳定并且便于保存、运输和处理的产物。商业上可获得旋转蒸发装置用来实现溶剂的去除。其他装置和方法是本领域技术人员已知的。冻干条件的例子可见实施例15,但是本领域技术人员知道其他条件。在水合并调节为适当的浓度后，可以方便地给患者静脉内给药或以其他途径给药。在一个实施方案中，活性药物成分，例如17-AAG，配制为1%(Ww)的磷脂水分散体。该制剂的制备是通过用高剪切力混合机将17-AAG在磷脂的水分散体中短时间混合，然后缓慢搅拌以除去含有的空气。可以使用前述任何磷脂如Phospholipon90G、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺。在配制过程中，可以添加其他赋形剂如緩沖液、张力调节剂和操作助剂。可以将17-AAG分散体微流化，以减小分散体的颗粒大小，一般减至小于200nm(平均颗粒大小)。分散体可以使用0.2微米的无菌SartoriusSartobranP嚢式过滤器(500cm2)(SartoriusAG,Goettingen，Germany)来过滤除菌，使用最高60psi的压力保持流畅和连续的流动。可以4吏用本领域已知的标准4支术将滤液立即加工成其卩也制剂如可注射的、口服溶液、片剂或胶嚢。滤液也可以收集、冷冻或冻干以备以后使用。此外，也可以通过首先制备磷脂分散体，然后加入如下的药物活性成分来制备制剂。在无菌水中混合1-20%(w/v)磷脂，将混合物匀浆化，以为接下来的微流化提供更均匀的分散体。表面活性剂分散体可以通过微流化仪进行微流化，以获得通常小于200nm、一般为100-200nm的颗粒大小。然后加入活性药物成分和其他赋形剂，用稀氢氧化钠和/或盐酸和10mM三水合乙酸钠、磷酸盐或等同的緩沖液将pH调节为大约5-8。具体制剂的制备在实施例13和14中描述。III.药物制剂的表;f正和评价A.使用HPLC对活性成分稳定性的测定活性药物成分如17-AAG的化学稳定性也可以通过高效液相色语(HPLC)来进行评估。可以发展特别的测定方法，以将药物活性安沙霉素与它的降解产物分离。降解的程度可以根据与药物活性安沙霉素有关的HPLC峰信号的减少和/或根据与降解产物有关的HPLC峰信号的增加来估计。与制剂中的其他组分相比，安沙霉素在345nm的最大吸光度处很容易且特异性地检测到。B.磷脂的化学和物理稳定性的表征和评价二维薄层色谱(TLC)系统或HPLC系统分离该脂质混合物。在TLC中，可以取相应于单个组分的斑点测定磷的含量。样品中磷的总量可以定量测定，如用分光光度计测量在825nm处形成的蓝色相对于水的强度。在HPLC中，可以分离磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰甘油(PG)并且精确定量。脂类可以在203-205nm的区域;险测到。在紫外光谱的200nm波长区域，不饱和脂肪酸显示较高的吸光度最大值，而饱和脂肪酸显示较低的吸光度最大值。作为一个例子，Vemuri和Rhodes(同上)描述了利用LicrosorbDiol和LicrosorbSl-60分离蛋黄PC和PG。分离采用的流动相是乙腈-甲醇，其含有1%的己烷-水(74:l6:10v/v/v)。8分钟后，观察PG与PC的分离。保留时间分别大约为1.1和3.2分钟。C.分散体的评价分散体的外观、平均微滴大小、及大小分布是所要观察和保持的重要参数。有许多方法用来评价这些参数。例如，可以采用动态光散射牙口电子显孩i4竟4支术。参见，例^口，Szoka禾口Papahadjopoulos,Annu.Rev.Biophys.Bioeng.,19809:467-508。特别地，可以采用冷冻断裂电子显樣l镜检查进行形态学表征。也可以选用较低方文大倍数的光学显微镜。结晶固体的存在可以用偏振光光学显微镜技术来测量。这些显微镜技术在本领域中众所周知。乳剂微滴大小分布例如可以采用颗粒大小分布分析器来确定，例如HoribaLimited(AnnArbor,MI，USA)制造的CAPA画500、Nanatrac(Mierotrac,Largo,FL,USA)、库尔对争冲立度4义(BeckmanCoulterInc.,Brea，CA,USA),或Zetasizer(MalvernInstruments,Southborough,MA,USA)。IV.其他的制剂和给药模式A.其他制剂尽管在本发明的各个方面和实施方案中描述了静脉内给药，但是本领域普通技术人员应当理解可以修改或容易地改变这些方法，以适应其他给药模式，例如口服、气雾剂、肠胃外、皮下、肌肉内、腹膜内、直肠、阴道、肺瘤内或瘤周给药。下面的论述是技术人员所知的，但是作为背景提供用来说明本发明的其他可能性。应当理解下面的论述与本文包括的前面的论述有部分重复。药物组合物可以应用常规的混合、溶解、颗粒化、制锭、研磨、乳化、胶嚢化、包封或冻干方法制备。药学上可接受的组合物可以按照常规方法使用一种或多种生理学可接受的载体来配制，所述载体包括有利于将活性化合物加工为可以作为药物使用的制剂的赋形剂和辅剂。合适的制剂依赖于选择的给药途径。已经描述了一些赋形剂和它们在制备制剂中的用途。其他一些在本领域中乂^知，例如，如PCT/US99/30631、REMINGTON'SPHARMACEUTICALSCIENCES,MeadePublishingCo.,Easton，PA(最新版)以及Goodman和Gilman,ThePharmaceuticalBasisofTherapeutics,PergamonPress,NewYork,N.Y.(最新版)所述。为了注射，药物可以配制在水溶液中，通常配制在生理学相容的緩冲液中，如汉克斯液和林格液或生理盐水缓沖液。为了透粘膜给药，在制剂中使用适合于所要穿透的屏障的渗透剂。这些渗透剂是本领域公知的。如前所述的本发明的制剂，在冻干饼水合后，非常适合通过注射例如弹丸注射或连续输注来直接或接近直接地肠胃外给药。用于注射的制剂可以为单位剂量形式，例如在添加防腐剂的安瓿或多剂量容器中。如前所述，冻干产物是本发明的实施方案；(任选地避光的)安瓿或其他包装可以含有这种冻干产物，然后在给患者给药之前可以方便地(再)水合。B.剂量范围在晚期实体瘤成年患者中进行的17-AAG的I期药理学研究确定，当每天输注l小时、每3周给药5天时，最大耐受剂量(MTD)为40mg/m2。Wilson等人，2001Am.Soc.Clin.Oncol,摘要，PhaseIPharmacologicStudyof17-(Allylamino)-17-Demethoxygeldanamycin(AAG)inAdultPatientswithAdvancedSolidTumors。在此项研究中，终末半衰期、清除率、以及稳态容积的均值士SD分别为2.5±0.5小时，41.0±13.5L/小日t，和86.6±34.6L/m2。纟合药剂量为40和56mg/m2时，其血浆C隨值分别是1860士660nM和3170±1310nM。基于这些数值，可以预测，本发明制剂的有用的患者给药剂量范围包括约0.40mg/m"至4,000mg/m2的有效成分，其中012表示表面积。有标准算法用于将mg/r^换算为mg药物/kg体重。实施例实施例1:17-AAG的制备在干燥的2L烧瓶中，向1.45L干THF中的45.0g(80.4mmol)格尔德霉素中滴加在50mL干THF中的36.0mL(470mmol)烯丙胺，时间30分钟。在氮气条件下，反应混合液在室温下搅拌4小时，此时TLC分析提示反应完全[(GDM:嫩黄:RfK).40;(5%MeOH-95%CHC13);17-AAG:紫色:RiM).42(5%MeOH-95%CHC13)]。通过旋转蒸发去除溶剂，粗制品在25。C条件下在H2O:EtOH(90:10)中制成浆状，过滤，45。C干燥8小时，得到40.9g(66.4mmol)17-AAG紫色结晶(产率82.6%,经HPLC于254nm测得纯度>98%)。m.p.206-212°C。'HNMR和HPLC结果与目标产物一致。实施例2:低熔点型17-AAG的制备在80。C条件下，将来源于实施例1的粗制17-AAG溶解在800mL2-丙醇(异丙醇)中，然后冷却至室温。过滤后，在45°C下干燥8小时，得到44.6g(72.36mmol)17-AAG紫色结晶(产率90%,经HPLC于254nm下测得纯度〉99%)。m.p.=147-153°C。NMR和HPLC结果与目标产物一致。实施例3:低熔点型17-AAG的溶剂稳定性在25。C条件下，将来源于实施例2的17-AAG产物溶解在400mLII2():EtOH(90:10)中。过滤后，在45。C下老化8小时，得到42.4g(68.6mmol)17-AAG紫色结晶(产率95%,经HPLC于254nm下测得纯度>99%)。m.p.=147-175°C。！HNMR和HPLC结果与目标产物一致。实施例4:化合物237(二聚体)的制备在烘干的烧瓶中，在氮气条件下，将3，3-二氨基-二丙胺(1.32g，9.1mmol)滴加入格尔德霉素(10g，17.83mmol)的DMSO(200mL)溶液中，并于室温中搅拌。在12小时后，用水稀释反应混合液。产生沉淀物，过滤后得到粗制品。通过硅层析(5%CH3OH/CH2Cl2)对粗制品进行层析，从而获得为紫色固体的目标二聚体。在急骤(硅胶)层析后，获得纯紫色产物；产率93%;m.p.165°C;'HNMR(CDCb)0.97(d，J=6.6Hz，6H，2CH3),1.0(d,J=6.6Hz,6H，2CH3)，1.72(m,4H,2CH2),1.78(m，4H,2CH2)，1.80(s,6H,2CH3),1.85(m,2H，2CH)，2.0(s，6H，2CH3)，2.4(dd，J=11Hz，2H,2CH)，2.67(d，J=15Hz，2H,2CH),2.63(t,J=10HZ,2BL,2CH)，2.78(t，J=6.5Hz，4H,2CH2),3.26(s,6H，20CH3)，3.38(s，6H，20CH3),3.40(m,2H,2CH)，3.60(m,4H，2CH2)，3.75(m，2H，2CH),4.60(d，J=10Hz,2H，2CH)，4.65(Bs，2H,20H),4.80(bs，4H,2NH2)，5.19(s，2H,2CH),5.83(t，J=15Hz，2H,2CH=)，5.89(d，J=10Hz，2H，2CH=)，6.58(t,J=15Hz，2H,2CH=)，6.94(d，J=10Hz,2H,2CH=),7.17(m，2H,2NH),7.24(s,2H，2CH=),9.20(s,2H，2N-H);MS(m/z)1189(M+H)。通过下述方法制备相应的盐酸盐在室温条件下，将盐酸在EtOH中的溶液(5ml，0.123N)力卩至化合物237(1g，如上所述制备)的THF(15ml)和EtOH(50ml)溶液中。将反应混合液才觉拌10分钟。沉淀出盐，过滤，并用大量EtOH进行冲洗，真空千燥。作为选择，可以用曱磺酸代替盐酸制备"甲磺酸"盐。实施例5:化合物914的制备在室温条件下，向含格尔德霉素(500mg,0.89mmo1)的10mL二噁烷中添加二氧化石西(IV)(198mg,1.78mmo1)。将反应混合液加热至100。C并搅拌3小时。将其冷却至室温后，采用乙酸乙酯稀释该反应溶液，用水和盐水进行冲洗，在硫酸镁上千燥，过滤并真空蒸发。在(硅胶)柱层析后，获得最终纯黄色产物；产率75。/。；'HNMR(CDC13)50.97(d，J=7.0Hz，3H，CH3)，1.01(d，J=7.0Hz,3H，CH3)，1.75(m，3H，CH2+CH),2.04(s,3H,CH3)，2.41(d，J=9.9Hz,1H，CH2),2.53(t,J=9.9Hz,1H,CH2),2.95(m，1H，CH)，3.30(m，2H,CH+OH)，3.34(s,6H，2CH3)，3.55(m,1H,CH)，4.09(m，1H，CH2),4.15(s，3H，CH3)，4.25(m，1H，CH2)，4.41(d，J=9.8Hz,1H，CH),4.80(bs,2H，CONH2)，5.32(s,1H，CH),5.88(t,J=10.4Hz，1H，CH二)，6.04(d，J=9.7Hz，1H，CH=)，6.65(t,J=11.5Hz，1H，CH=),6.95(d,J=11.5Hz,1H，CH二)，7.32(s，1H，CH-Ar),8.69(s,1H，NH);MS(m/z)575.6(M画l)。实施例6:化合物967的制备向3mL含有化合物914(50mg,0.05mmol)的THF中力口入烯丙胺(3.5mg，0.06mmol)。反应混合液于室温条件下搅拌24小时。通过旋转蒸发去除溶剂。在(硅胶)柱层析后，获得纯紫色产物；产率90%;}HNMR(CDC13)S0.89(d，J=6.6Hz，3H,CH3)，.03(d,J=6.9Hz,3H,CH3),L78(m，1H,CH),1.82(m,2H,CH2)，2.04(s，3H,CH3),2.37(dd,H3.7Hz,1H，CH2)，2.65(d，J=13.7Hz，1H,CH2),2.90(m，1H，CH),3.33(s,3H,CH3),3.34(s，3H，CH3),3.45(m，2H,CH+OH),3.58(m,1H，CH),4.14(m,3H,CH2+CH2)，4.16(m,1H，CH2)，4,42(s，IH,OH),4.43(d，J=10Hz,IH,CH),4.75(bs,2H,CONH2)，5.33(m，2H,CHb二)，5.35(s,1H，CH),5.91(m，2H,CH=+CH=),6'09(d，J=9.9Hz，IH,CH=)，6.46(t，J=5.8Hz，IH,NH),6,66(t,J=11.6Hz,IH,CH=)，6.97(d,J=11.6Hz,1H，CH=)，7.30(s，1H，CH),9.15(s，IH,NH)。实施例7:化合物956的制备化合物956的制备方法与化合物967相同，不同之处为采用吖丁啶代替歸丙胺。在(硅胶)柱层析后，获得最终纯紫色产物；产率89%;'HNMR(CDC13)50.99(d,J=6.8Hz,3H,CH3)，1.04(d,J=6.8Hz，3H,CH3),1.77(m，IH,CH)，1.80(m,2H，CH2)，2.06(s，3H，CH3)，2.26(m，1H，CH2),2.50(m，2H,CH2),2.67(d，IH,CH2),2.90(m，IH,CH)，3.34(s,3H,CH3)，3.36(s,3H，CH3),3.48(m,2H,OH+CH),3.60(t，J二6.8Hz,IH,CH),4.11(dd,J=12Hz,J=4.5Hz,IH,CH2),4.30(dd,J=12Hz，J=4.5Hz，IH,CH2)，4.45(d，J=10.0Hz,1H，CH)，4.72(m，5H，2CH2+OH)，4.78(bs，2H,NH2)，5.37(s，IH,CH),5.89(t,J=10.5Hz,IH,CH=),6.10(d，J=10Hz,1H，CH=),6,66(t，J=12Hz,1H,CH=)，7.00(d，J=12Hz,1H，CH=),7.17(s，1H，CH=),9.20(s，1H，CONH);MS(m/z〕602(M十l)。实施例8:化合物529的制备室温条件下，将17-氨基格尔德霉素(lmmol)的EtOAc溶液用Na2S204(0,1M,300ml)处理。2小时后，采用EtOAc对水层提取2次，合并的有机层在Na2S04上千燥，减压浓缩获得18，21-二氢-17-氨基格尔德霉素，其为黄色固体。该固体溶解于无水的THF中，并经过导管转移至皮考啉基氯化物(l.lmmol)与MS4A(1.2g)的混合物中。2小时后,进一步将EtN(i-Pr)2(2.5mmol)加入到反应混合液中。搅拌过夜后，过滤反应混合液，并减压浓缩。然后向残余物中加入水，此混合物经EtOAc提取三次；合并的有机层在Na2S04上千燥，并减压浓缩获得粗制品，其通过急骤层析法进行纯化，从而获得17-皮考啉基-氨基格尔德霉素，即化合物529，其为黄色固体。Rf=0.52,在80:15:5的C，H2Cl2:EtOAc:MeOH中,,m.p.=195-197°C。'HNMR(CDC13)S0.91(d，3H),0.96(d，3H),1.71-1.73(m，2H),1.75-1.79(m,4H),2.04(s,3H),2.70-2.72(m,2H)，2.74-2.80(m,11),3.33-3.35(ni，7H),3.46-3.49(m,III),4.33(d，H)，5.18(s,1H),5.77(d，111)，5.91(t,1H),6.57(t,川)，6.94(d,1H),7.51-7.56(m,2H),7.91(dt,川)，8.23(d,8.69-8.70(m,1H),8.75(s,1H),10.51(s,JH)。实施例9:化合物1046的制备化合物1046的制备方法参照所述制备化合物529的方法，其中采用4-氯曱基-苯曱酰氯代替皮考啉基氯化物。(3.1g，81%)。Rf二0.45,在80:15:5的CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。'HNMRCDC1350.89(d,3H)，0.93(d,3H),1.70(brs,2H)，1.79(brs,4H),2.04(s,3H),2.52-2.58(m，2H),2.62-2.63(m,1H)，2.76-2.79(m，1H),3.33(brs，7H)，3.43-3.45(m,1H)，4.33(d,1H),4.64(s，2H)，5.17(s，1H),5.76(d，1H)，5.92(t,1H)，6.57(t,1H)，6.94(d,1H)，7.49(s,1H),7.55(d，2H),7.91(d，2H)，8.46(s，1H),8.77(s，1H)。实施例10:化合物1059的制备向4t合物1046(O.Mg,0.2mmo1)的THF(5ml)5容液中力口入石典4匕钠(30mg,0.2mmo1)牙口吗口林(35pL，0.4mmol)。所形成的'混合物回流加热10小时，然后将其冷却至室温，减压浓缩。将残余物再溶解于EtOAc(30ml)，用水(10ml)沖洗，在Na2S04上干燥并再次浓缩。然后将残余物在EtOH(10ml)中重结晶，从而获得化合物1059(100mg,66%),其为黄色固体。Rf=0.10,在80:15:5的CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。NMRCDC1350.93(s,3H)，0.95(d,3H)，1.70(brs，2H),1.78(brs，4H),2.03(s，3H)，2.48(brs，4H)，2.55-2.62(m，3H),2.74-2.79(m,1H),3.32(brs,7H),3.45(m,1H)，3.590，2H)，3.72-3.74(m,4H),4.32(d，1H),5.15(s，1H)，5.76(d，1H),5.91(t,1H).6.56(t，1H),6.94(d，1H)，7.48(s，1H),7.50(d,2H),7.87(d,2H),8.47(s，1H),8.77(s，1H)。实施例11:化合物1236的制备化合物1236的制备方法参照所述制备化合物1059的方法，其中采用节基乙胺代替吗啉。Rf=0.43,在80:15:5的CH2Cl2:EtOAc:MeOH中。'HNMRCDC1350.925(s,3H)，0.95(d,3H)，1.09(t，3H),1.70(brs,2H)，1.79(brs，4H)，2.04(s，3H),2.50-2.62(m，5H),2.75-2.79(m,1H),3.32(brs,7H),3.46(m，1H)，3.59(s,2H),3.63(s,2H),4.33(d,1H),5.16(s，1H)，5.78(d，1H)，5.91(t,1H),6.57(t,1H),6.94(d，1H)，7.25-7.27(m,1H)，7.32-7.38(m,4H),7.48(s,1H)，7.53(d，2H)，7.85(d，2H)，8.47(s，1H),8.77(s，1H)。实施例12:化合物563的制备17-(苯曱酰基)-氨基格尔德霉素室温条件下，将17-氨基格尔德霉素(lmmol)的EtOAc溶液用Na2S204(0.1M,300ml)处理。2小时后，采用EtOAc对水层提取两次，合并的有机层在Na2S04上干燥，减压浓缩获得18,21-二氢-17-氨基格尔德霉素，其为黄色固体。将该固体溶解于无水THF中，并经过导管转移至苯曱酰氯(l.lmmol)与MS4A(1.2g)的混合物中。2小时后，进一步将EtN(i-Pr)2(2.5mmol)加入到反应混合液中。搅拌过夜后，过滤反应混合液，并减压浓缩。然后向残余物中加入水，此混合物经EtOAc提耳又三次；合并的有机层在Na2S04上干燥，并减压浓缩获得粗制品，其通过急骤层析法进行纯化，从而获得17-(苯甲酰基)-氨基格尔德霉素。Rf二0.50，在80:15:5的CH2C12:EtOAc:MeOH中。m.p.=218-220°C。力NMR(CDC13)0.94(t,6H),1.70(brs,2H),1.79(brs，4H),2.03(s,3H),2.56(dd，1H)，2.64(dd,1H),2.76-2.79(m,1H),3.33(brs，7H),3.44-3.46(m，1H)，4.325(d，1H),5.16(s，1H)，5.77(d,1H),5.91(t,1H),6.57(t,1H)，6.94(d,1H)，7.48(s,1H),7.52(t，2H)，7.62(t,1H)，7.91(d,2H),8.47(s，1H),8.77(s，1H)。实施例13:特定制剂实施方案在无菌注射用水中制备1-20%(w/v)磷脂-表面活性剂/水溶液。将磷脂/水溶液匀浆化，以为接下来的微流化提供更均匀的分散体。然后使表面活性剂分散体通过以大约110psi的静压力(60-95psi的操作压力)运行的1IOS型孩i流化4义(MicrofluidicsInc.,Newton,MA,USA)进行微流化。药物以1:1至l:20(药物:磷脂溶液)的摩尔比溶解在该磷月旨/水溶液中(1-20mg/mL)。使用的药物是化合物237、化合物956和化合物1236及其药学上可接受的盐和前体药物。以110%w/v的范围加入蔗糖、甘露醇和/或右旋糖，用稀氢氧化钠和/或盐酸、10mM三水合乙酸钠、磷酸盐或等同的緩冲液将pH调节为大约5-8。通过激光散射技术测量，药物:磷脂复合物的平均颗粒大小为大约20-150nm。使分散体通过0.45微米的Gelman小型嚢式过滤器(PallCorp.,EastHills,NY，USA),然后通过无菌的0.2樣t米SartoriusSartobranP嚢式过滤器(500cm2)(SartoriusAG,Goettingen,Germany)。4吏用高达60psi的压力保持流畅和持续的流动。在这些实施方案参数内制备的具体制剂包括含有约2-8mg/mL药物和10%蔗糖的6.2%磷脂-表面活性剂(Phospholipon90)分散溶液(药物磷脂的摩尔比为1:8至1:20),用10mM三水合乙酸钠緩沖液和/或稀氲氧化钠緩沖为pH5或7。含有约2mg/mL药物和1%甘露醇、5%右旋糖的1.2%磷脂-表面活性剂(Phospholipon90)分散溶液(药物磷脂的摩尔比为1:10),用lOmM三水合乙酸钠緩沖液和稀盐酸緩冲为pH5。药物以1:5至1:20的药物TWEEN80摩尔比溶解在TWEEN80表面活性剂中的2-4mg/mL溶液，调节为7.0或用10mM石粦酸盐緩冲液缓冲为pH7.2。制备13.2%w/v的Poloxamer188溶液，药物Poloxomer摩尔比为1:5(药物的终浓度约为4mg/mL),用lOmM磷酸盐緩冲液緩沖为pH7。实施例14:17-AAG磷脂水分散体的制备将17-AAG配制为P/o(w/v)的磷脂水分散体。将L-组氨酸和蔗糖溶解在水中。加入磷脂，用高剪切力混合机以大约3500rpm分散磷脂5分钟。向磷脂分散体中加入17-AAG,用高剪切力混合机混合，以在磷脂中混合/分散17-AAG。从高剪切力混合机中取出产物，然后緩慢混合(不进行涡旋)，以使带有的大多数空气排出。然后向搅拌中的17-AAG分散体中加入0.7g50/50(w/w)乙醇和TWEEN80的混合物，并混合1小时，以使更多带有的空气排出。将17-AAG分散体在16-19,000psi下微流化，以将分散体的颗粒大小从大约5jum减小为0.1-0.5jum(平均颗粒大小)。制剂组成如下<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>乙醇0.5操作助剂Tween800.5才喿作助剂水71.5稀释剂实施例15:冻干可以采用的说明性的冻干方案包括下表所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>在大约0.9atm的N2下塞住并瓦子实施例16:静脉注射和耐受性当水溶性较差的安沙霉素的水溶性盐(例如化合物237-曱磺酸盐)在水溶液中配制时，发现其在静脉输注时刺激大鼠尾静脉。当给药剂量和输注间隔与溶液制剂相同时，上述化合物237-曱磺酸盐的分散制剂没有发生静脉刺激的迹象。溶液制剂和分散制剂的药代动力学非常相似。还利用了本发明的方法用化合物237的盐酸盐和磷酸盐制备分散制剂。这些制剂也比化合物237的水溶液更好地耐受。还用格尔德霉素的水溶性和微水溶性衍生物制备了分散制剂。特别是，类似地配制含有DMAG的类似分散体，在经尾静脉注射到小鼠和大鼠体内时良好地耐受。前述实施例的目的不是限制本发明，而只是本发明各种实施方案的代表。对于本领域技术人员而言显而易见的是，可以在不违背本发明的范围和精神的条件下对本发明做各种置换和改变。因此，这些另外的实施方案仍属本发明以及下述权利要求书的范围以内。此处所述试剂或是购得的，如购自Sigma-Aldrich,或是采用本领域一关殳4支术人员已知的和/方法不需过度试验即可容易制备的权利要求1.一种含有水分散颗粒的药物制剂，其包含安沙霉素，或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物；和药学上可接受的磷脂；其中所述制剂基本上不含中链和长链甘油三酯，并且所述磷脂的浓度至少为所述制剂的5％w/w。2.权利要求1的药物制剂，其中所述中链和长链甘油三酯的组合浓度为大约"/。w/v或更低。3.权利要求l的药物制剂，其中所述的安沙霉素选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(格尔德霉素)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(DMAG)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(17-AAG)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(化合物563)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(化合物237)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(化合物1236)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(化合物956)。4.权利要求1的药物制剂，其中所述的安沙霉素为17-AAG。5.权利要求4的药物制剂，其中所述17-AAG为高熔点型17-AAG、低熔点型17-AAG、无定形型17-AAG、或其任意组合。6.权利要求1的药物制剂，其中所述安沙霉素包括具有以下特征的低熔点型17-AAG:其DSC熔解温度低于175。C，并且X-射线粉末衍射图包括位于5.85度、4.35度和7.90度2e角的峰。7.权利要求1的药物制剂，其中所述安沙霉素包括具有以下特征的低熔点型17-AAG:其DSC熔解温度为大约156。C,并且X-射线粉末衍射图包括位于5.85度、4.35度和7.90度2Q角的峰。8.权利要求1的药物制剂，其中所述安沙霉素是17-AAG的低熔点多晶型物，其特征为DSC熔解温度为大约172。C。9.权利要求1的药物制剂，其中所述安沙霉素是17-AAG的药学上可接受的盐酸盐或磷酸盐。10.权利要求l的药物制剂，其中所述安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在所述制剂中的浓度至少为0.5mg/mL。11.权利要求l的药物制剂，其中所述安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在所述制剂中的浓度至少为5.0mg/mL。12.权利要求l的药物制剂，其中所述安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、S旨、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在所述制剂中的浓度至少为50mg/mL。13.权利要求l的药物制剂，其中所述可分散颗粒已经经受处理以减小颗粒大小，其中所述处理包括超声处理、高剪切力匀浆化、微流化、通过控制孔径滤器挤出、或其任何组合。14.权利要求l的药物制剂，其中所述水分散颗粒的颗粒大小为大约100廳到大约200讓。15.权利要求l的药物制剂，其中所述水分散颗粒的颗粒大小为大约200nm或更小。16.权利要求l的药物制剂，其中所述水分散颗粒为胶体。17.权利要求l的药物制剂，其中所述磷脂包括磷脂酰胆碱、缩醛磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、缩醛磷脂酰乙醇胺、Phospholipon90G或其任意组合。18.权利要求l的药物制剂，其进一步包含一种或多种赋形剂。19.权利要求18的药物制剂，其中所述一种或多种赋形剂包括冷冻保护剂、张力调节剂、填充剂或其任意组合。20.—种治疗或预防哺乳动物的疾病的方法，包4舌给所述哺乳动物施用药物有效量的权利要求1的药物制剂。21.斥又利要求20的方法，其中所述疾病包4舌局部击夹血、增生性疾病、感染、获得性免疫缺陷综合征、神经性疾病、肿瘤、白血病、慢性淋巴细胞白血病、肿瘤、癌症、癌或其他恶性疾病。22.权利要求21的方法，其中所述增生性疾病选自肿瘤、炎性疾病、真菌感染、酵母感染和病毒感染。23.权利要求20的方法，其中所述安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在所述制剂中的浓度为大约1%至大约1.5%(w/w)。24.权利要求20的方法，其中所述安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物在所述制剂中的浓度为大约0.5mg/ml至大约50mg/ml。25.权利要求20的方法，其中所述安沙霉素选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(格尔德霉素)(DMAG)(17-AAG)(化合物563)(化合物237)(化合物1236)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(化合物956)。26.权利要求20的方法，其中所述安沙霉素为17-AAG。27.权利要求26的方法，其中所述17-AAG为高熔点型17-AAG、低熔点型17-AAG、无定形型17-AAG、或其^壬意组合。28.权利要求26的方法，其中所述17-AAG包括低熔点型17-AAG。29.权利要求1的药物制剂在制备药物中的用途。30.权利要求29的用途，其中所述药物用于治疗或预防HSP90介导的疾病。31.—种制备药物制剂的方法，包括(a)形成分散颗粒，该分散颗粒包含安沙霉素或其多晶型物、溶剂化物、酯、互变异构体、对映异构体、药学上可接受的盐或前体药物；和药学上可接受的磷脂；(b)任选地减小所述分散颗粒的大小；(c)任选地冷冻步骤(a)或(b)的产物；(d)任选地融化步骤(c)的产物；(e)任选地冻干步骤(a)-(d)中任一步的产物；和(f)任选地再水合步骤(e)的产物；并且其中所述制剂基本上不含中链和长链甘油三酯。32.权利要求31的方法，其中所述中链和长链甘油三酯的组合浓度为大约P/。w/v或更低。33.权利要求31的方法，其中所述安沙霉素选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(格尔德霉素)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(DMAG)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(17-AAG)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(化合物563)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(化合物237)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(化合物1236)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(化合物956)。34.^又利要求31的方法，其中所述安沙霉素为17-AAG。35.权利要求34的方法，其中所述17-AAG为高熔点型17-AAG、低熔点型17-AAG、无定形型17-AAG、或其任意组合。36.权利要求31的方法，其中所述安沙霉素包括低熔点型17-AAG。37.权利要求31的方法，其中所述磷脂包括磷脂酰胆碱、缩醛磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、缩醛磷脂酰乙醇胺、Phospholipon90G或其任意组合。38.权利要求31的方法，其中所述磷脂包括Phospholipon90G。39.权利要求31的方法，其中所述减小步骤存在，并且包括超声处理、高剪切力匀浆化、微流化、通过控制孔径滤器挤出、或其任何组合。40.权利要求31的方法，其中所述分散颗粒的颗粒大小为大约200nm或更小。41.权利要求31的方法，其中所述制剂为胶体分散体。42.权利要求31的方法，其中所述制剂进一步包含一种或多种赋形剂。43.权利要求42的方法，其中所述一种或多种赋形剂包括冷冻保护剂、张力调节剂、填充剂或其任意组合。44.一种治疗或预防哺乳动物的疾病的方法，包4舌给所述哺乳动物施用药物有效量的通过权利要求31的方法制备的药物制剂。45.权利要求44的方法，其中所述安沙霉素选自(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>全文摘要本文描述了并且请求保护药物制剂及其生产和使用方法。该制剂是磷脂和一种或多种药学活性化合物、其药学可接受的盐或其前体药物的分散体。在特定实施方案中，所述药学活性化合物是安沙霉素，并且总制剂基本上不含中链和长链甘油三酯。文档编号A61K31/397GK101189006SQ200680017621公开日2008年5月28日申请日期2006年4月7日优先权日2005年4月7日发明者E·H·厄尔姆,G·A·蒂莫尼,M·F·贝姆,R·K·曼斯菲尔德申请人:康福玛医药公司