Pyy的增强粘膜递送的制剂的制作方法

专利名称：：Pyy的增强粘膜递送的制剂的制作方法剂发明背景肥胖及其相关病症在美国及全世界都是普遍和非常严重的公共卫生问题。已经显示当对哺乳动物外周给予某些结合Y2受体的肽时，其诱导体重下降。所述Y2受体结合肽是结合Y2受体的神经肽。这些Y2受体结合肽属于包括肽YY(PYY)、神经肽Y(NPY)和力夷多肽(PP)的肽家族。这些长约36个氨基酸的肽在该肽的中部具有包括"PP-折叠"的紧密的螺旋结构。具体特征包括位于残基1至8的多聚脯氨酸螺旋、位于残基9至14的/3转角、位于残基15至30的a螺旋、位于残基30至36的向外突出的C末端以及羧基末端酰胺，该羧基末端酰胺对于生物活性似乎是关键的。已经显示当通过注射被外周给药至个体时，称为肽YY(l-36)[PYY(1陽36)][YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY,(SEQIDNO:l)]的36氨基酸肽造成体重下降且因此能够被用作治疗肥胖和相关疾病的药物，Morley,J.，A^/ra;w_yc/io&o/ogy21:22-30(1989)。后来发现为产生此效果PYY与Y2受体结合，并且Y2激动剂与Y2受体的结合造成碳水化合物、蛋白质和餐量摄取的下降，Leibowitz，S.F.etal.,U:1251-1260(1991)。PYY的另一分子形式是PYY(3-36)IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY(SEQIDNO:1的残基3-36),Eberlein,Eysseleinetal.,/0..797-803，1989)。下文中术语PYY指全长PYY和结合Y2受体的任何PYY片段。已知能够通过静脉输注或注射给予PYY以治疗在休克特别是内毒素造成的休克中遇到的致命的低血压(美国专利号4,839,343)，通过灌注、肠胃外、静脉或皮下给药及通过植入以抑制哺乳动物中胰腺肿瘤的增殖(美国专利号5,574，010),以及治疗肥胖(Morley(1989)和美国专利申请号20020141985)。还声明能够通过肠胃外、口服、鼻腔、直肠和局部途径对家畜或人以有效提高所述个体的体重增加的量给予PYY，该提高通过增加钠依赖的共转运营养物的胃肠吸收(美国专利号5,912,227)。然而，对于治疗肥胖和相关疾病，包括糖尿病，给药方式被限制为静脉IV输注，没有优化用于PYY的其它给药的有效制剂。这些现有技术教导均未提供含有与设计用来增强粘膜(即鼻腔、含服、口服)递送的赋形剂混合的PYY或PYY(3-36)的制剂，它们也未教导不含内毒素的Y2受体结合肽制剂对于非输注给药的价值。以前，用于PYY鼻内给药的制剂在专利申请中有所描述，包括专利申请开WO040563142、US2004/0115135、US2004/0157777、US2004/0209807和US2005/0002927，通过参考的方式并入本文。这些申请公开了适合在0.1ml中含有20船至200將剂量，即0.2mg/ml至2.0mg/mlPYY浓度的制剂。在包含10mM柠檬酸盐和100mMNaCl的制剂中、在40°C持续5天、在不同pH值下测试了0.3mg/mlPYY的剂型的稳定性。发现最佳pH值为4.9,其中在孵育5天后超过80%的肽保留。然而，随后发现PYY稳定性受到PYY浓度的显著影响在4交高浓度下，PYY稳定性下降。此外，以前描述和测试的用于鼻内给药的制剂包括诸如甲基—p-环糊精和L-a-二癸酰磷脂酰胆碱的赋形剂，它们不是公认安全的(GRAS)赋形剂。因此，为了提供在药物的通常条件下具有普遍效用的剂型和制剂，亟需开发具有提高的稳定性的替代制剂组合物。此外，亟需开发包含GRAS(公认安全)赋形剂的制剂和剂型作为使用非药典赋形剂的不同选择。附图简要说明图1在实施例1中测试的制剂的PYY3-36讀l透。图2在实施例2中测试的制剂的PYY3-36讀嗜。图3在实施例3中测试的制剂的PYY3-36讀卜透。图4在实施例4中测试的制剂的PYY3-36讀卜透。图5相对时间的肽回收(A)25。C储存；(B)40。C储存；和(C)50。C储存。图6:相对时间的肽回收，40。C储存(A)基于柠檬酸盐的制剂；(B)基于乙酸盐的制剂；(C)基于谷氨酸盐的制剂；和(D)未緩沖的制剂。图7:在升高的温度和每日3次喷雾的雾化应力下在实施例8中测试的样品的PYY3-36稳定性。图8:在升高的温度和每日3次喷雾的雾化应力下在实施例9中测试的样品的PYY3-36稳定性。图9:在升高的温度和每日3次喷雾的雾化应力下的PYY3-36稳定性，在实施例10中测试(A)样品5-l、5-2和5-3;(B)样品5-4、5-5、5陽6和5-7;(C)样品5-8、5-9、5-10和5-11;(D)样品5-12、5-13和5-14。发明的详细描述为了更好地理解本发明，提供以下定义和详细描述Y2受体结合肽用于本发明的粘膜制剂中的Y2受体结合肽包括3个天然存在的生物活性肽家族，PP、NPY和PYY。Y2受体结合肽的实例及其用途在美国专利号5,026,685;美国专利号5,574,010;美国专利号5,604,203;美国专利号5,696,093;美国专利号6,046,167;Gehlertetal.,尸rac.編.Afe/.218:7-22(1998);Sheikhetal.，爿m.乂尸Ajwo/,261:701-15(1991);Fo画ieretal.,M>/.泡削,/.45:93-101(1994);Ki勿etal,,MedCA流38:4579-4586(1995);Ristetal.，历oc/^附.247:1019-1028(1997);Kirbyetal.,C/ze附.36:3802-3808(1993);Grundemaretal.,iegw/ato^y尸e^Ww62:131-136(1996);美国专利号5,696,093(PYY激动剂的实例)、美国专利号6,046,167中有描述。根据本发明，Y2受体结合肽包括游离碱，酸加成盐或金属盐，例如钾盐或钠盐，或肽，通过例如酰胺化、糖基化、酰化、^fb酸化、^畴酸化、乙酰化和环化的过程(美国专利号6,093,692、美国专利号6,225,445和聚乙二醇化)被修饰的Y2受体结合肽。肽YY激动剂如本文所用，"PYY"指天然序列或变体形式的PYY(1-36)(SEQIDNO:1)，以及任何来源的PYY衍生物、片段和类似物，不论是天然的、合成的或重组的。该PYY由PYY序列的至少最后15个氨基酸残基PYY(22-36)或其类似物组成。其它可以使用的PYY肽为PYY(l-36)(SEQIDNO:1)、PYY(3-36)、PYY(4-36)、PYY(5-36)、PYY(6画36)、PYY(7-36)、PYY(8隱36)、PYY(9-36)、PYY(10-36)、PYY(ll-36)、PYY(12-36)、PYY(13-36)、PYY(14-36)、PYY(15-36)、PYY(16-36)、PYY(17-36)、PYY(18-36)、PYY(19-36)、PYY(20-36)和PYY(21-36)。这些肽通常结合脑和别处的Y受体，尤其是Y2和/或Y5受体。通常，这些肽以不含内毒素或无热原的形式合成，尽管这并不总是必需的。其它PYY肽包括其中进行了保守氨基酸残基改变的那些PYY肽，例如PYY肽的位点特异突变包括[Asp15]PYY(15-36)(SEQIDNO:2)、[Thr13]PYY(13-36)(SEQIDNO:3)、[Val12]PYY(12-36)(SEQIDNO:4)、[Glu11]PYY(l1-36)(SEQIDNO:5)、[Asp10]PYY(10-36)(SEQIDNO:6)、[Val7]PYY(7-36)(SEQIDNO:7)、[Asp6]PYY(6-36)(SEQIDNO:8)、[Gin4]PYY(4陽36)(SEQIDNO:9)、[Arg4]PYY(4-36)(SEQIDNO:10)、[Asn4]PYY(4-36)(SEQIDNO:11)、[Val3]PYY(3-36)(SEQIDNO:12)和[Leu3]PYY(3-36)(SEQIDNO:13)。其它PYY肽包括其中进行了至少两个保守氨基酸残基改变的那些PYY肽，包括[Asp1Asp15]PYY(10-36)(SEQIDNO:14)、[Asp6,Thr13]PYY(6-36)(SEQIDNO:15)、[Asn4,Asp15]PYY(4-36)(SEQIDNO:16)和[Leu3，Asp10]PYY(3-36)(SEQIDNO:17)。还包括PYY的类似物，例如美国专利号5,604,203和号5,574,010中^^开的那些。这些包括下列肽通式1AR2X-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36R4对于通式1A,能够创造下列PYY(22-36)肽类似物，其中X是Cys或缺失；和R2中的每一个均键合到N末端氨基酸的ce-氨基的氮原子上；R,是H,d-C12烷基，C6-C,s芳基,d-C,2酰基，C7-C18芳烷基，或C7-C,s烷芳基；R2是H,d-C,2烷基，C6-C18芳基，G-C12酰基,C7-Cs芳烷基，或C7-C18烷芳基；A22是芳香氨基酸，Ala,Aib,Anb,N-Me-Ala或缺失；A23是Ser、Thr、Ala,Aib，N-Me-Ser,N-Me-Thr，N-Me-Ala,D陽Trp,或缺失；AM是Leu，Gly，lie,Val，Trp，Me,Nva,Aib,AnbN-Me誦Leu,或缺失；A25是Arg,Lys，同源(homo)-Arg，二乙基-同源画Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链C,-C,o烷基，或芳基)，Om,或缺失；A26是Ala,His,Thr,3-Me-His,l-Me-His，)3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H，支链或直链d誦d。烷基，或芳基)，Om,或缺失；A"是Nal，Bip,Pcp，Tic,Trp,Bth,TW,或Dip;A"是Leu,Val，Tip,Nle，Nva，Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly，Trp,或N-Me-Asn;A"是Leu，lie,Val,Trp，Nle，Nva,Aib，Anb,或N-Me-Leu;A31是Val，Leu,lie,Trp，Nle，Nva,Aib,Anb,或N-Me-Val;A"是Thr,Ser,N-Me-Ser，N-Me-Thr，或D画Trp;A"是Cys,Arg，Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链Q《10烷基，或C6-C,s芳基)，或Om;A34ACys,Gln，Asn,Ala,Gly，N-Me-Gin,Aib,或Anb;A35是Cys，Arg，Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H，支链或直链d-do烷基，或(:6-(318芳基)，或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H,Q-C!2烷基，Q-Qs芳基,d《12酰基，C7-Cu芳烷基，或C7-C,s烷芳基；R4是H,d《12烷基,C6-C18芳基，-Cu酰基，C7-C,s芳烷基，或C7-C,8烷芳基，或其药学上可接受盐。PYY(22-36)通式1A肽类似物的实例包括N-a-Ac-Ala-Ser-Leu國Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:18);N-a-Ac画Ala-Ser-Leu-Arg-His隱Thi-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:19)，或其药学上可接受盐。可以使用的另外的通式IA类似物包括其中残基八28和八29、八29和八30、A3o和A31、A"和A32、A33和A34、A34和A35或A35和A36之间的--CO—NH—键被CH2—NH、CH2--S、CH2--CH2或CH2-O取代，或者其中残基A35和A36之间的CO-NH键被CH2—NH取代。对于通式1B，能够创造下列PYY(22-36)肽类似物，其中X是Cys或缺失；和R2键合到N末端氨基酸；&是H,d-C12烷基，C6-C!s芳基，C,-Cu酰基,C7-Qs芳烷基，或C7-C!s烷芳基；R2是H,Q-(:12烷基，(^6-(:18芳基，(:1-(:2酰基，(:7-(:18芳烷基，或(:7-(318烷芳基；A22是芳香氨基酸或缺失；A"是Ser、Thr、Ala,Aib,N-Me-Ser，N-Me-Thr,Me-Ala,D-Trp,或缺失；A"是Leu,Gly,Ile，Val,Trp,Nle，Nva，Aib，Anb,N-Me-Leu，或缺失；A25是Arg,Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H，支链或直链C,-Qo烷基，或芳基)，Om,或缺失；A加是Ala,His,Thr，3-Me-His,l-Me-His,)3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys，同源-Arg，二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链d-C,。烷基，或芳基)，或Om;A"是除Tyr之外的芳香氨基酸；A28是Leu,Val，Trp,Nle,Nva,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly，Trp,或N-Me-Asn;A3。是Leu，lie,Val,Trp，Nle,Nva,Aib，Anb，或N-Me-Leu;A31是Val,Leu,Ile，Trp,Nle,Nva，Aib，Anb,或N-Me-Val;A32是Thr,Ser，N-Me-Ser，N-Me-Thr,或D-Trp;A33是Cys，Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链d-C,o烷基,或C6-C18芳基)，或Orn;A"是Cys,Gin,Asn,Ala,Gly,N-Me-Gin，Aib，或Anb;A"是Cys,Arg，Lys，同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链d-C)o烷基，或C6-(318芳基)，或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H，d-C^烷基，C6-Qs芳基，d-Cu酰基,C7-C18芳烷基，或C7-C18烷芳基；R4是H,d-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12酰基,C7-ds芳烷基，或CVd8烷芳基，或其药学上可接受盐。PYY(22-36)通式1B肽类似物的实例包括N-a-Ac-Tyr-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:20),或其药学上可接受盐。能够使用另外的通式IB类似物，其中A27是Phe,Nal,Bip,Pep,Tic,Trp,Bth,Thi,或Dip。PYY(22-36)通式IB肽类似物的另一实例包括N-oAc-Phe-Ser陽Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:21)。通式2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>对于通式2，能够创造下列PYY(25-36)肽类似物，其中Rj和R2键合到N末端氨基酸的a-氨基的氮原子上；R,是H,d-C12烷基，C6-C18芳基，d-C2酰基，C7-C18芳烷基，或C7-C,s烷芳基；112是H,C,-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12酰基，C7-C1S芳烷基，或C7-C18烷芳基;A25是Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链d-do烷基，或芳基)，Om,或缺失；八26是Ala，His,Thr，3-Me-His,/3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链d-C,o烷基，或芳基)，或Om;八27是芳香氨基酸；A"是Leu,Val,Trp,Me,Nva,Aib,Aib，Anb,或N-Me画Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly,Trp,或N-Me-Asn;A3。ALeu,lie,Val:Trp,Nle，Nva,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A31是Val，Leu，lie,Trp，Me,Nva，Aib,Anb,或N陽Me-Val;A32是Thr,Ser,N-Me-Ser,N-Me-Thr,或D画Trp;A33是Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支链或直链C,-C,o烷基，或Ce-ds芳基)，Cys,或Om;AM是Cys,Gin,Asn,Ala,Gly,N-Me-Gin,Aib,或Anb;A35是Arg,Lys,同源-Arg,二乙基陽同源-Arg,Lys-f-NH—R(其中R是H,支链或直链Q-C,o烷基，或C6-Qs芳基)，Cys,或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H,d-Cu烷基，C6-C!s芳基，d-d2酰基，C7-d8芳烷基，或(:7-(318烷芳基；以及R4是H,d-C,2烷基，C6-C,8芳基，C,-d2酰基，C7-ds芳烷基，或CVd8烷芳基，或其药学上可接受盐。能够使用另外的类似物，其中通式2的A"是Phe，Nal，Bip，Pcp，Tic，Trp,Bth,Thi,或Dip。PYY(22-36)通式2类似物的实例包括N-a-Ac-Arg國His-Phe-LeU-Asn-LeU-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-TYr-NH2(SEQ.ID.NO:22)，或其药学上可接受盐。可以使用的另外的通式2类似物包括其中残基A2、A29、A,口A30、A3、A31、A"和A32、A33和A34、A34和A35或A35和A36之间的--CO--NH—键被CH2--NH、CH2—S、CH2-CH2或CH2-0取代。此外，类似物可以包括二聚物化合物，该二聚物化合物包含通式1A的两个肽、通式IB的两个肽或通式2的两个肽，或者通式1A的1个肽和通式1B的1个肽、或通式1A的1个肽和通式2的1个肽、或通式1B的1个肽和通式2的1个肽；其中所述二聚物通过所述两个肽之间的酰胺键或二碌b桥形成。缩写包括Asp二D-天冬氨酸；Ala二A^丙氨酸；Arg-R—青氨酸；Asn=N=天冬酰胺；Cys-O半胱氨酸；G1尸G^甘氨酸；Gh^E二谷氨酸；Gh^Q二谷氨酰胺；His^H^组氨酸；1^=1=异亮氨酸；Leu二L^亮氨酸；Lys^K^赖氨酸;MetHV^蛋氨酸；Phe^F^苯丙氨酸；Pro^P^脯氨酸；Ser二S二丝氨酸；Thr=T=苏氨酸；Trp-W^色氨S臾；Ty^Y二酪氨酸；Val^V^缬氨酸；On^鸟氨酸;Nal二2-萘基丙氨酸；Nva二正缬氨酸；Nle^正亮氨酸；Thi二2-噻吩丙氨酸;Pcp4-氯苯丙氨酸；Bth-3-苯并噻吩丙氨酸；Bip二4，4'-二苯基丙氨酸；Tic二四氢异喹啉-3-羧酸；Aib-氨基异丁酸；Anb-.a,氨基正丁酸；Dip^2,2-二苯基丙氨酸；以及Thz二4-噻唑丙氨酸(美国专利号5,604,203)。美国专利5，574，010号中描述的类似物包括以下通式3/R2—X-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-Y—R4通式3的类似物，其中X是0-5个氨基酸的链，包括的，其N末端的氨基酸与R,和R2键合；Y是0-4个氨基酸的链，包括的，其C末端的氨基酸与R3和R4键合；R!是H，d-C、2烷基(例如甲基)，C6-C,s芳基(例如苯基、萘乙酰基)，Q《12酰基(例如曱酰基、乙酰基和肉豆蔻酰基)，C7《18芳烷基(例如苄基)，或C7-ds烷芳基(例如p-曱基苯基)；R2是H,d《12烷基(例如曱基)，C6《18芳基(例如苯基、萘乙酰基)，d-(312酰基(例如曱酰基、乙酰基和肉豆蔻酰基)，C7-ds芳烷基(例如千基)，或C7-C!8烷芳基(例如p-曱基苯基)；A"是芳香氨基酸，Ala,Aib,Anb,N-Me-Ala或缺失；A"是Ser、Thr、Ala，N-Me画Ser,N-Me-Thr,N-Me-Ala,或缺失；A24是Leu,lie，Vat，Trp,Gly,Aib,Anb,N-Me画Leu,或缺失；A25是Arg，Lys，同源-Arg:二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H,支链或直链Q-Qo烷基，或芳基)，Om，或缺失；A26是His,Thr,3-Me-His，l-Me-His，/3-吡唑基丙氨酸,N-Me曙His,Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源陽Arg,Lys陽e-NH-R(其中R是H,支链或直链d-Cw烷基，或芳基)，Orn,或缺失；A"是除Tyr之外的芳香氨基酸；A"是Leu，lie,Vat,Trp,Aib,Aib,Anb，或N-Me-Leu;A"是Asn，Ala,Gln，Gly,Trp,或N-Me-Asn;A^是Leu,lie,Val,Trp,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A31是Vat，lie,Trp,Aib,Anb,或N-Me-Val;A"是Thr,Ser，N-Me-Set,或N-Me-Thr;R3是H,C广Cu烷基(例如曱基)，C6-C18芳基(例如苯基、萘乙酰基)，d-C!2酰基(例如曱酰基、乙酰基和肉豆蔻酰基),C7-ds芳烷基(例如千基)，或C7-C"烷芳基(例如p-曱基苯基);R4是H，d《12烷基(例如曱基)，C6-ds芳基(例如苯基、萘乙酰基)，d七12酰基(例如甲酰基、乙酰基和肉豆蔻酰基)，C7-Ci8芳烷基(例如节基)，或C7-ds烷芳基(例如p-曱基苯基)，或其药学上可接受盐。通式3的特别优选的类似物包括N-.ce.-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO:23)。通式4R，R3/R2—A25HA2、A29-A30-A31-A32-Y-_R4另一肽YY类似物是通式4，其中N末端氨基酸与R,和R2键合；Y是0-4个氨基酸的链，包括的，其C末端的氨基酸与113和R4键合；是H，C,-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12酰基，C7-C18芳烷基，或C7-C18烷芳基；R2是H,d《12烷基，C6-Cw芳基，d-d2酰基，C7-ds芳烷基，或C7-C18烷芳基；A25是Arg，Lys,同源-Arg，二乙基-同源Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H,支链或直链C-C川烷基，或芳基)，Om，或缺失；A"是Ala，His,Thr,3-Me-His，l-Me-His，/5-吡唑基丙氨酸，N-Me-His，Arg,Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H，支链或直链G《10烷基，或芳基)，Om,或缺失；A"是芳香氨基酸；A28是Leu，Ile,Val,Trp,Aib,Anb，或N-Me-Leu;A29是Asn,Ala,Gin,Gly,Trp，或N-Me-Asn;A3°ALeu,lie,Val，Trp,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Val,lie,Tip,Aib,Anb,或N-Me-Val;A32是Thr,Set,N-Me画Set，或N-Me-Thr或D画Trp;R3是H,C广C,2烷基，CVd8芳基，d《12酰基，(:7-018芳烷基，或C7-Qs烷芳基；以及R4是H,Q-C,2烷基，C6-C!s芳基，C-Cu酰基,C7-ds芳烷基，或C广d8烷芳基，或其药学上可接受盐。应注意，除非另外指明，对于本文描述的所有肽YY激动剂，每一氨基酸残基，例如Leu和A)，代表NH--C(R)H--CO--的结构，其中R为侧链。氨基酸残基之间的线代表连接氨基酸的肽键。同样，当氨基酸残基是光学活性的时，旨在指L型构象，除非清楚地指明D型。缩写Aib二氨基异丁酸；Anb=.a-氨基正丁酸；Bip二4,4'-二苯基丙氨酸；Btl^3-苯并噻吩丙氨酸；Dip二2,2-二苯基丙氨酸；Nat;萘基丙氨酸；Om二鸟氨酸；Pcp二4-氯苯丙氨酸；Thi二2-噻吩丙氨酸；Tic二四氢异喹啉隱3画羧酸。(美国专利号5,574,010)。另外的PYY合成类似物的实例包括[im-DNP-His26]PYY:YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLR[im-DNP-His26]YLNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.24);[Ala32]PYY:ASLRHYLNLV[Ala]RQRY-NH2(SEQ.IDNo.25);[Ala23'32]PYY:A[Ala]LRHYLNLV[Ala]RQRY-NN2(SEQ.IDNo.26);[Glu28]PYY(22-36):ASLRHY[Glu]NLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.27);N普Ac-PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.28);N-o;-Ac[p.CL.Phe.sup.26]PYY:N-a-Ac画ASLR[p.Cl.Phe26]YLNLVTRQR(SEQ.IDNo.29);N-a-Ac[Glu28]PYY:N-a-Ac-ASLRHY[GIu]NLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.30);N-a-Ac[Phe27]PYY:N-a-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-Me陽Tyr]-NH2(SEQ.IDNo.31);N-a-Ac]8N-Me-Tyr]PYY:N-ce誦Ac-ASLRHYENLVTRQR[N—Me—Tyr]—NH2(SEQ.IDNo.32);N隱o;-肉豆蔻酰-PYY(22-36):N-a-肉豆蔻酰-ASLRHYLNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo,33);N-a-萘乙酰基-PYY(22-36):N-ce-萘乙酰基-ASLRHYLNLVTRQR(SEQ.IDNo.34);N会Ac[Phe27]PYY:N-a-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-陽Me-画Tyr]--NH2(SEQ.IDNo.35);N陽o:-Ac-PYY(22-36):N-o;-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.36);N-a-Ac-[Bth27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.37);N-a-Ac國[Bip27]PYY(22-36):N会Ac-ASLRH[Bip]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.38);N-a-Ac-[Nal27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[NaL]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.39);N-a-Ac-[Trp27]PYY(22-36):N-a-Ac隱ASLRH[Trp]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.40);N-a-Ac-[Thi27]PYY(22-36):N-o;-Ac-ASLRN[Thi]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.41);N-ce-Ac-[Tic27]PYY(22國36):N-a-Ac-ASLRH[Tic]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.42);N-a-Ac-[Phe27]PYY(25-36):N-a-Ac-H[Phe]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.43);N-a-Ac-[Phe27,Thi36]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH(phelLNLVTRQR[Thi]-NH2(SEQ.IDNo.44);N陽a-Ac誦[Thz26，Phe27]PYY(22-36):N陽a-Ac-ASLR[Thz][Phe]LNLVTRqRY—NH2(SEQ.IDNo.45);N-ce-Ac.[Pcp27]PYY(22陽36):N-a-Ac-ASLRH[Pep]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.46);N-a-Ac-[Ph22'27]PYY(22-36):N-a-Ac-[Phe]SLRN[Phe]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.47);N-a-Ac-[Tyr22，Phe27]PYY(22陽36):N-a-Ac陽[Tyr]SLRH[Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.48);N-ce-Ac-[Trp28]PYY(22-36):N扁a-Ac-ASLRHY[Trp]NLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.49);N-0!-Ac-[Trpz。]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRHYLN[Tip]VTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.50);N-a-Ac-[Ala.sup.26，Phe27]PYY(22-36):N-ce-Ac-ASLR[Ala][Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.51);N-a-Ac-[Bth27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.52);N-a-Ac-[Phe27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.53);N-ce-Ac-[Phe27'36]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR[Phe]-NH2(SEQ.IDNo.54);N-ce画Ac-[Phe27,D-Trp32]PYV(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLV[D-Trp]RQRY--NH2(SEQ.IDNo.55)。另夕卜的类4以物4苗述在Balasubramaniam，etal.，i&searcA(1988);日本专利申i貪2,225,497(1990);Balasubmmaniam,etal.,14:1011,1993;Grandt,etal.,"5/:151(1994);PCT国际申请公开94/03380中。Balasubramaniam,etal.描述了类似物PYY(l-28)、PYY(l-22)、PYY(22-28)、PYY(22隱36)和PYY(27隱36)。Grandt,etal.讨论了PYY(l-36)(SEQIDNO:1)和PYY(3-36)。上述的肽通常结合脑和别处的Y受体，尤其是Y2和/或Y5受体。通常，这些肽以不含内毒素或无热原的形式合成，尽管这并不总是必需的。PYY激动剂包括大鼠PYY:TyrProAlaLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuSerArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:56)和与人相对应的氨基末端截短形式；猪PYY:TyrProAlaLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuSerArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:57)和与人相对应的氨基末端截短形式；以及月豕鼠PYY:TyrProSerLysProGluAlaProGlySerAspAlaSerProGluGluLeuAlaArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:58)和与人相对应的氨基末端截短形式。根据本发明，PYY肽还包括游离碱，酸加成盐或金属盐，例如该肽的钾盐或钠盐，或通过例如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化和环化的过程和其它公知的共价修饰方法被修饰的PYY肽。这些肽通常结合脑和别处的Y受体，尤其是Y2和/或Y5受体。通常，这些肽以不含内毒素或无热原的形式合成，尽管这并不总是必需的。神经肽Y激动剂NPY是另一种Y2受体结合肽。NPY肽包括全长人NPY(l-36):TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:59)以及NPY(l-36)的片段，其在氨基末端已经;故截短。为有效结合Y2受体，NPY激动剂应至少具有羧基末端的最后11个氨基酸，即包含NPY(26-36)。结合Y2受体的NPY激动剂的其它实例为NPY(3-36)、NPY(4-36)、NPY(5-36)、NPY(6-36)、NPY(7-36)、NPY(8-36)、NPY(9-36)、NPY(10-36)、NPY(ll-36)、NPY(12隱36)、NPY(13-36)、NPY(14-36)、NPY(15誦36)、NPY(16-36)、NPY(17-36)、NPY(18-36)、NPY(19-36)、NPY(20-36)、NPY(21-36)、NPY(22-36)、NPY(23陽36)、NPY(24-36)和NPY(25-36)。其它NPY激动剂包括大鼠NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:60)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；兔NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:61)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；犬NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:62)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；猪NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:63)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；牛NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:64)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；绵羊NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyAspAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGin的氨基末端截短形式；以及豚鼠NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:66)以及如人形式中的从NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式。根据本发明，PYY肽还包括游离碱，酸加成盐或金属盐，例如该肽的钾盐或钠盐，以及通过例如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化和环化的过程和其它公知的共价修饰方法被修饰的NPY肽。这些肽通常结合脑和别处的Y受体，尤其是Y2和/或Y5受体。通常，这些肽以不含内毒素或无热原的形式合成，尽管这并不总是必需的。胰多肽胰多肽(PP)和PP激动剂也结合Y2受体。PP激动剂的实例是全长人PP(l-36):AlaSerLeuGluProGluTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:67)以及许多PP片段，其在氨基末端截短。为结合Y2受体，PP激动剂必须具有羧基末端的最后11个氨基酸残基，PP(26-36)。结合Y2受体的其它PP的实例为PP(3-36)、PP(4-36)、PP(5-36)、PP(6-36)、PP(7-36)、PP(8-36)、PP(9-36)、PP(10國36)、PP(ll-36)、PP(12-36)、PP(13画36)、PP(14-36)、PP(15陽36)、PP(16-36)、PP(17-36)、PP(18-36)、PP(19-36)、PP(20陽36)、PP(21-36)、PP(22-36)、PP(23-36)、PP(24-36)和PP(25陽36)。其它PP激动剂包括绵羊PP:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaAspLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:68)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；猪PP:AlaProLeuGluProValAspAlaThrProGluMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:69)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；犬PP:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAspAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr短形式；牛PP:AlaProLeuGluProGluTyrProGlyAspAspAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:72)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；大鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrHisGluGinArgAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:73)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；小鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrHisGluGinArgAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:74)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；以及豚鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:75)以及如人形式中的从PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式。根据本发明，PP肽还包括游离碱，酸加成盐或金属盐，例如该肽的钾盐或钠盐，以及通过例如酰胺化、糖基化、酰化、硫酸化、磷酸化、乙酰化和环化的过程和其它已知的共价修饰方法被修饰的PP肽。这些肽通常结合脑和别处的Y受体，尤其是Y2和/或Y5受体。通常，这些肽以不含内毒素或无热原的形式合成，尽管这并不总是必需的。肽和蛋白类似物和^f莫拟物(SEQIDNO:勺氨基末端包括在用于本发明的生物活性肽和蛋白的定义中的为天然或合成的、治疗活性或预防活性的肽(包含2个或更多个共价连接的氨基酸)、蛋白、肽或蛋白片段、肽或蛋白类似物以及活性肽或蛋白的化学修饰的衍生物或盐。预期Y2受体结合肽的多种有用的类似物和模拟物用于本发明中，并且能够根据已知方法产生并测试其生物活性。经常，用于本发明的Y2受体结合肽的肽或蛋白或其它生物活性肽或蛋白为容易得到的突变体蛋白(mutein)，该得到是通过天然存在的或天然的(例如野生型、天然存在的突变体或等位变体)肽或蛋白序列中的氨基酸的部分替代、添加或缺失。此外，包括天然肽或蛋白的生物活性片段。这样的突变体衍生物和片段基本上保留天然肽或蛋白的所需生物活性。在肽或蛋白具有碳水化合物链的情况下，由这些碳水化合物种类的变化标志的生物活性变体也包括在本发明之内。如本文所用，术语"保守氨基酸替代"指具有相似侧链的氨基酸残基的通常可互换性。例如，一组通常可互换的具有脂肪族侧链的氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂肪族-羟基侧链的氨基酸为丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰胺侧链的氨基酸为天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳香侧链的氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；一组具有碱性侧链的氨基酸为赖氨酸、精氨酸和组氨酸；以及一组具有含碌u侧链的氨基酸为半胱氨酸和蛋氨酸。保守替代的实例包括诸如异亮氨酸,缬氨酸，亮氨酸或蛋氨酸的非极性(疏水)残基替代另一个。同样，本发明预期极性(亲水)残基的替代，例如精氨酸和赖氨酸之间、谷氨酰胺和天冬酰胺之间、以及苏氨酸和丝氨酸之间。此外，还预期诸如赖氨酸、精氨酸或组氨酸的碱性残基替代另一个，或诸如天冬氨酸或谷氨酸的酸性氨基酸替代另一个。保守氨基酸替代组的实例为缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、以及天冬酰胺-谷氨酰胺。通过将肽或蛋白类似物与相应的天然肽或蛋白最佳比对，且通过使用确定选定生物活性的适合测定，例如粘附蛋白或受体结合测定，能够容易地鉴定用于本发明方法和组合物的可行的肽和蛋白类似物。可行的肽和蛋白类似物通常与针对相应天然肽或蛋白产生的抗体特异免疫反应。药代动力学(TK)参数如本文所用，"Y2受体结合肽的血浆峰浓度(CmJ"、"Y2受体结合肽的血浆浓度时间曲线(AUC)下面积"、"在血浆中达到Y2受体结合肽的最大血浆浓度的时间(tn^)，，是本领域技术人员已知的药代动力学参数。Laursenetal.，Ewr./Emfocn'朋fogy735:309-315,1996。"浓度时间曲线"测量在通过鼻内、肌内、皮下或其它肠胃外给药途径对个体给予Y2受体结合肽剂量后，相对于时间该个体的血清中Y2受体结合肽的浓度。"Cmax，，是在对个体给予单次剂量的Y2受体结合肽后，该个体的血清中Y2受体结合肽的最大浓度。"t皿"是在对个体给予单次剂量的Y2受体结合肽后，在该个体的血清中达到Y2受体结合肽的最大浓度的时间。如本文所用，根据线性梯形法则加上剩余面积计算"Y2受体结合肽的血浆浓度时间曲线(AUC)下面积"。使用90%概率(第二类误差8=10%)会检测到23%的减少或30%的增加。通过达到最大浓度(CmJ与时间(tmax)的对照，估计"递送速率"或"吸收速率"。Cm^和tn^均使用非参数方法分析。肌内、皮下、静脉和鼻内Y2受体结合肽给药的药代动力学的比较通过方差分析(ANOVA)进行。对于两两比较，使用Bonferroni-Holmes顺序方法评价显著性。通过回归分析评估3次鼻腔给药之间的剂量效应关系。P<0.05被认为显著。结果以平均值+A标准误给出。尽管吸收促进的机制可以根据本发明的不同粘膜递送增强剂变化，但是在此情况下有用的试剂基本上不有害地影响粘膜组织且将根据特定Y2受体结合肽或其它活性或递送增强剂的物化特征而选择。在此情况下，提高粘膜组织的穿透或渗透性的递送增强剂将经常导致粘膜的保护性渗透屏障的某些改变。为了使这样的递送增强剂对本发明有价值，通常期望粘膜渗透性的任何显著改变在对于药物递送的期望持续时间适合的时限内是可逆的。此外，长期使用应当没有显著的、积累的毒性，也不诱导粘膜屏障特性的永久性有害改变。稳定性稳定本发明的固体蛋白制剂的一种方法是提高诸如冻干的纯化蛋白的物理稳定性。这将抑制通过疏水相互作用以及共价途径的聚集，该聚集随着蛋白去折叠而增加。在此情况下稳定制剂经常包括基于聚合物的制剂，例如可生物降解的水凝胶制剂/递送系统。如上所述，公知水在蛋白结构、功能和稳定性中的关键作用。通常，蛋白在除去大量水的固体状态下相对稳定。然而，固体治疗蛋白制剂可能因为在高湿度下储存而水合或在从緩释组合物或装置递送期间水合。蛋白的稳定性通常随着水合的增加而下降。水能够在固体蛋白聚集中起显著作用，例如，通过增加蛋白柔性导致反应性基团的增加的可接近性，通过为反应物提供可移动相，以及通过在诸如/5清除和水解的若干破坏性过程中作为反应物。含有约6%至28%水的蛋白制剂是最不稳定的。低于此水平，结合的水的活动性和蛋白的内部运动低。高于此水平，水活动性和蛋白运动接近完全水合的那些。高至某点时，已在若干系统中观察到了随着水合增加而增加的固相聚集易感性。然而，在更高水分含量时，由于稀释作用观察到较少的聚集。根据这些原则，用于粘膜递送的对抗固态聚集的稳定肽和蛋白的有效方法是控制固体制剂中的水分含量和将制剂中的水活性保持在最佳水平。该水平依赖于蛋白的性质，但通常，保持在其"单层"水覆盖之下的蛋白显示4支高的固态稳定性。在本发明内提供多种有效控制水分含量以提高蛋白稳定性的添加剂、稀释剂、.基质和递送载体。在此意义中有效作为抗聚集剂的这些试剂和载体材料包括，例如，具有多种功能性的聚合物，例如聚乙二醇、右旋糖酐、二乙胺基乙基葡聚糖和羧曱基纤维素，其显著提高稳定性且减少与其混合或连接的肽和蛋白的固相聚集。某些添加剂还赋予诸如冻干的干燥蛋白显著的物理稳定性。这些添加剂也能够用于本发明以不仅在冻干期间还在干燥状态储存期间保护所述蛋白对抗聚集。本文提供多种另外的制备组分和方法以及具体的制剂添加剂，其生产用于有聚集倾向的肽和蛋白的粘膜递送的制剂，其中使用稳定剂将所述肽或蛋白稳定在基本上纯的、未聚集形式中。涉及一系列组分和添加剂用于这些方法和制剂。这些稳定剂的实例为环糊精(CDs),其选择性结合多肽的疏水侧链。已经发现这些CDS以显著抑制聚集的方式结合蛋白的疏水片。该抑制对于涉及的CD和蛋白均是选择性的。蛋白聚集的这样的选择性抑制在本发明的鼻内递送方法和组合物内提供另外的优势。用于此情况的另外的试剂包括具有由特异阻止肽和蛋白聚集的连接物控制的不同几何学的CD二聚物、三聚物和四聚物。但是包括在本发明内的稳定剂和方法包括使用肽和肽模拟物选择性阻止蛋白-蛋白相互作用。一方面，对CD多聚物报道的特异结合疏水侧链通过使用类似地阻止蛋白聚集的肽和肽模拟物被扩大到蛋白。可得到用于包括在本发明的组合物和方法内的多种适合的方法和抗聚集剂。蛋白酶抑制剂可以包括在透粘膜制剂中的另一赋形剂为降解性酶抑制剂。可用于本发明的粘膜制剂和方法的示例性粘膜粘附聚合物-酶抑制剂复合物包括但不限于羧曱基纤维素-胃酶抑制剂(具有抗胃蛋白酶活性)、聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制剂(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-胰凝乳蛋白酶抑制剂(chymostatin)(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-弹性蛋白酶抑制剂(elastatinal)(抗弹性蛋白酶)、羧曱基纤维素-弹性蛋白酶抑制剂(抗弹性蛋白酶)、聚卡波非-弹性蛋白酶抑制剂(抗弹性蛋白酶)、壳聚糖-抗蛋白酶(antipam)(抗胰蛋白酶)、聚(丙烯酸)-杆菌肽(抗氨肽酶N)、壳聚糖-EDTA(抗氨肽酶N,抗羧肽酶A)、壳聚糖-EDTA-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗弹性蛋白酶)。如下文更详细描述的，本发明的某些实施方案将任选地包括新的壳聚糖衍生物或壳聚糖的化学修饰形式。一种用于本发明的这样的新的衍生物被表示为4]-2-胍基-2-脱氧-D-葡萄糖聚合物(聚-GuD)。合物和方法。可用于保护生物活性蛋白和肽的酶抑制剂包括，例如，大豆胰蛋白酶抑制剂、胰胰蛋白酶抑制剂、从马铃薯(solanumtuberosumL.)块茎分离的胰凝乳蛋白酶抑制剂以及胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制剂。可以使用抑制剂的组合或混合物。用于本发明的另外的蛋白水解酶抑制剂包括卵类粘蛋白-酶、贝酯、cd-抗胰蛋白酶、抑酶肽、amastatin、乌苯美司、嘌呤霉素、杆菌肽、亮抑蛋白酶肽、Q2-巨球蛋白、胃酶抑制剂和卵清或大豆胰蛋白酶抑制剂。这些和其它抑制剂能够单独或联合使用。所述一种或多种抑制剂可以被并入或结合到例如亲水聚合物的载体中，该载体被包被在将接触鼻腔粘膜的剂型的表面，或被并入到所述表面的表面相中，与生物活性剂联合或在分别给药(例如预给药的)制剂中。诸如任选并入本发明组合物中的蛋白水解酶抑制剂的所述抑制剂的量将根据下列因素变化(a)具体抑制剂的特性，(b)分子中存在的官能团的数目(可以与其反应以诱导形成水凝胶的单体的共聚所需的乙烯型去饱和)，以及(c)存在于抑制剂分子中的诸如糖苷类的外源凝集素基团的数目。其还可以依赖于要给药的具体治疗剂。一般而言，酶抑制剂的有用量为制剂(即分开的蛋白酶抑制剂制剂或含有抑制剂和生物活性剂的联合制剂)的约0.1mg/ml至约50mg/ml，经常从约0.2mg/ml至约25mg/ml，且更经常从约0.5mg/ml至5mg/ml。在胰蛋白酶抑制的情况下，适合的抑制剂可以选自例如抑酶肽、BBI、大豆胰蛋白酶抑制剂、鸡卵类粘蛋、鸡卵类粘蛋白抑制剂、人胰胰蛋白酶抑制剂、曱磺酸卡莫他特(camostatmesilate)、黄酮类化合物抑制剂、抗蛋白酶、亮抑蛋白酶肽、对氨基苯脒盐、AEBSF、TLCK(曱苯磺酰赖氨酰氯曱酮)、APMSF、DFP、PMSF和聚丙烯酸酯衍生物。在胰凝乳蛋白酶抑制的情况下，适合的抑制剂可以选自，例如抑酶肽、BBI、大豆胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂、千氧羰基-Pro-Phe-CHO、FK-448、鸡卵类粘蛋白抑制剂、糖联苯硼酸复合物、DFP、PMSF、/5-苯丙酸酯和聚丙烯酸酯衍生物。在弹性蛋白酶抑制的情况下，适合的抑制剂可以选自例如弹性蛋白酶抑制剂、曱氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-氯曱基酮(SEQIDNO.76)(MPCMK)、BBI、大豆胰蛋白酶抑制剂、鸡卵类粘蛋白抑制剂、DFP斗口PMSF。用于本发明的另外的酶抑制剂选自在效能和毒性水平上不同的广泛的非蛋白抑制剂。如下文中更详细描述的，可以容易地实施将这些辅助试剂固定到基质或其它递送载体上，或开发化学修饰的类似物，以当遇到它们时减小或者甚至消除毒性作用。在用于本发明的候选酶抑制剂的这个广泛的群中有有机磷抑制剂，例如二异丙基氟磷酸酯(DFP)和苯曱基石黄酰氟(PMSF),其为丝氨酸蛋白酶(例如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)的有效的、不可逆的抑制剂。这些化合物对乙酰胆碱酯酶的额外抑制使得它们在不受控制的递送设定中有高毒性。另一候选抑制剂，4-(2-氨乙基)-苯石黄酰氟(AEBSF),具有与DFP和PMSF相当的抑制活性，但毒性显著较低。(4-氨基笨基)-曱烷磺酰氟盐酸盐(APMSF)是另一种有效的胰蛋白酶抑制剂，但在不受控制的设定中有毒。与这些抑制剂相反，4-(4-异丙基胡椒吸附羰基(isopropylpiperadinocarbonyl)苯基1,2,3,4,-四氢-1-萘酸曱磺酸酯(FK448)是低毒性物质，代表有效和特异的胰凝乳蛋白酶抑制剂。抑制剂候选物的这类非蛋白组群的其它代表且还显示低毒性风险的为曱磺酸卡莫他特(N,N'-二曱基氨曱酰曱基-p-(p'-胍基-苯曱酰氧基)苯乙酸曱磺酸酯)。用在本发明的方法和组合物中的另一类型的酶抑制剂是干扰具体治疗性化合物的酶促降解的氨基酸和经修饰的氨基酸。为在此情况中使用，氨基酸和经修饰的氨基酸基本上是无毒的且能够以低成本生产。然而，由于其低分子大小和良好的溶解性，它们能够在粘膜环境中被容易地稀释和吸收。然而，在适当条件下，氨基酸能够作为蛋白酶的可逆竟争性抑制剂。某些经修饰的氨基酸能够显示强得多的抑制活性。在此情况下期望的经修饰的氨基酸被称为"过渡态"抑制剂。这些化合物的强抑制活性基于它们在其过渡态几何排列中与底物的结构相似性，而它们通常净皮选择以对于酶的活性位点具有比底物本身高得多的亲和性。过渡态抑制剂是可逆的、竟争性抑制剂。这类抑制剂的实例为ce-氨基硼酸衍生物，例如硼-亮氨酸、硼-缬氨酸和硼-丙氨酸。这些衍生物中的硼原子能够形成四面体硼酸盐(boronate)离子，其被认为模拟了肽在其被氨肽酶水解期间的过渡态。这些氨基酸衍生物是有效的和可逆的氨肽酶抑制剂，且报道了在酶抑制中硼-亮氨酸比乌苯美司更有效超过100倍且比嘌呤霉素更有效超过1000倍。其强蛋白酶抑制活性已被报道的另一经修饰的氨基酸为N-乙酰半胱氨酸，其抑制氨肽酶N的酶活性。该辅助试剂还显示溶解粘液的特性，该特性能够被用在本发明的方法和组合物中以减'j、粘液扩散屏障的作用。其它用于本发明的并列给药方法和组合物的有用的酶抑制剂可以选自肽和经修饰的肽酶抑制剂。这类抑制剂的重要的代表是从地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)得到的环十二肽，杆菌肽。除了这些类型的肽之外，某些二肽和三肽显示对某些蛋白酶的弱的、非特异性的抑制活性。根据氨基酸类推，能够通过化学修饰提高它们的抑制活性。例如，膦酸二肽类似物也是对氨肽酶具有强抑制活性的"过渡态"抑制剂。已经报导其被用于稳定鼻腔给药的亮啡肽。过渡态类似物的另一实例是经修饰的五肽胃酶抑制剂(pepstatin)，其是非常有效的胃蛋白酶抑制剂。通过测试若干合成类似物的抑制活性，胃酶抑制剂的结构分析说明了负责所述抑制活性的分子主要结构-功能特征。另一特殊类型的经修饰的肽包括在其结构中具有位于末端的醛官能的抑制剂。例如，满足胰凝乳蛋白酶的已知主要和次要特异性要求的序列千氧羰基-Pro-Phe-CHO被发现是该靶蛋白酶的有效的可逆抑制剂。其它具有位于末端的醛官能的抑制剂的化学结构也是本领域已知的，例如抗蛋白酶、亮抑蛋白酶肽、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂，如同其它已知的可逆经修饰的肽抑制剂的结构，例如磷酰二肽、乌苯美司、嘌呤霉素和amastatin。由于它们可相比的高分子量，对于在药物-载体基质中浓缩递送，多肽蛋白酶抑制剂比较小的化合物更易于控制。在本发明的制剂和方法中用于蛋白酶抑制的另外的试剂包括使用络合剂。这些试剂通过剥夺(或制备或治疗组合物)二价阳离子的鼻内环境介导酶抑制，该二价阳离子是许多蛋白酶的辅因子。例如，并列给予的络合剂EDTA和DTPA或联合组方的辅助试剂在适当浓度下足以抑制选定的蛋白酶，由此增强本发明生物活性剂的鼻内递送。这类抑制剂的其它代表为EGTA、1,10-菲罗啉和羟基奮啉(hydroxychinoline)。此外，由于其螯合二价阳离子的倾向，这些和其它络合剂在本发明中可用作直接的吸收促进剂。如本文中其它部分更详细描述的，还预期使用各种聚合物尤其是粘膜粘附聚合物作为本发明的并列给药、多次处理和/或联合组方方法和组合物中的酶抑制剂。例如，诸如聚丙烯酸和聚卡波非的聚丙烯酸酯衍生物能够影响多种蛋白酶的活性，包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。这些聚合物的抑制作用也可以基于诸如Ca2+和Zn"的二价阳离子的络合。如上文所述还预期这些聚合物可以作为另外的酶抑制剂的偶联伙伴或载体。例如，已经开发了壳聚糖-EDTA偶联物且可用于本发明，其显示对锌依赖性蛋白酶的酶活性的强抑制作用。预期在此情况下在其它酶抑制剂的共价连接后聚合物的粘膜粘附特性不被显著损害，还预期这些聚合物作为本发明中活性剂的递送载体的一般用途不被减损。相反，由粘膜粘附机制赋予的递送载体和粘膜表面之间的距离减小将最小化活性剂的系统前代谢，而共价结合的酶抑制剂保持集中在药物递送部位，最小化不期望的抑制剂的稀释作用以及由此造成的毒性和其它副作用。以此方式，并列给药的酶抑制剂的有效量由于排除稀释作用而能够被减少。可用于本发明的粘膜制剂和方法的示例性粘膜粘附聚合物-酶抑制剂复合物包括但不限于羧曱基纤维素-胃酶抑制剂(具有抗胃蛋白酶活性)、聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制剂(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-胰凝乳蛋白酶抑制剂(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-弹性蛋白酶抑制剂(抗弹性蛋白酶)、羧曱基纤维素-弹性蛋白酶抑制剂(抗弹性蛋白酶)、聚卡波非-弹性蛋白酶抑制剂(抗弹性蛋白酶)、壳聚糖-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶)、聚丙烯酸-杆菌肽(抗氨肽酶N)、壳聚糖-EDTA(抗氨肽酶N、抗羧肽酶A)、壳聚糖-EDTA-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗弹性蛋白酶)。粘膜递送本发明的粘膜递送制剂包含Y2受体结合肽、类似物及模拟物，它们通常与一种或多种药学上可接受的载体以及任选的其他治疗组分一起组合。所述载体必须是"药学上可接受的"，意思是与所述制剂的其他组分相容且不引起受治疗者的不可接受的有害作用。所述载体在本文上文有所描述，或者为药理学领域的技术人员公知。期望地，所述制剂不应包含诸如酶或氧化剂的物质，已知待给药的生物活性剂与这些物质不相容。所述制剂可通过药剂学领域公知的任何方法来制备。在本发明的组合物和方法中，本文所公开的Y2受体结合肽蛋白、类似物和模拟物以及其他生物活性剂可通过多种粘膜给药方式给药于受试者，包括通过口腔、直肠、阴道、鼻内、肺内或经皮肤递送，或通过局部递送至眼睛、耳朵、皮肤或其他粘膜表面。任选地，本文所^^开的Y2受体结合肽蛋白、类似物和模拟物以及其他生物活性剂可通过非粘膜途径协同地或辅助地给药，包括通过肌内、皮下、静脉内、心房内、关节内、腹膜内或胃肠外途径。在其他可选的实施方案中，所述生物活性剂可作为例如于合适的液体或固体载体中含有所述生物活性剂的体外组织或器官治疗制剂的组分，通过直接暴露于源于哺乳动物受试者的细胞、组织或器官来进行体外给药。通常以鼻或肺喷雾剂的液体溶液给予本发明组合物，可通过本领域技术人员已知的多种方法以喷雾剂形式配药。第4,511,069号美国专利公开了优选的鼻喷雾剂的配药液体。所述制剂可于多剂量容器中提供，例如第4,511,069号美国专利公开的密封配药系统中。其他的气雾剂给药形式包括例如压缩空气喷雾器、喷射喷雾器、超声喷雾器、以及压电喷雾器，其递送溶解或悬浮于药物溶剂例如水、乙醇或它们的混合物中的生物活性剂。本发明的鼻和肺喷雾剂溶液通常包含所述药物或待递送的药物，其任选地与诸如非离子型表面活性剂(例如聚山梨醇酯-80)的表面活性剂和一种或多种緩冲液一起配制。在本发明的某些些实施方案中，所述鼻喷雾溶液还包括抛射剂。所述鼻喷雾溶液的pH任选在约pH3.0至6.0，优选4.5±0.5。用于这些组合物的适合緩沖液如上所述或或为本领域已知。可添加其他组分以增强或维持化学稳定性，包括防腐剂、表面活性剂、分散剂或气体。适合的防腐剂包括但不限于苯酚、对羟基苯曱酸曱酯、对羟基苯曱酸酯、间曱酚、硫柳汞、氯丁醇、苯扎氯铵(benzylalkonimumchloride)等。适合的表面活性剂包括但不限于油酸、去水山梨糖醇三油酸酯、聚山醇酯、卵磷脂、磷脂酰胆碱，以及各种长链甘油二酯和磷脂。适合的分散剂包括但不限于乙二胺四醋酸等。适合的气体包括但不限于氮气、氦气、氯氟碳(CFCs)、氢氟碳(HFCs)、二氧化碳、空气等。在可选的实施方案中，粘膜制剂作为用于鼻内给药的干粉制剂给药，所述干粉制剂包含具有合适粒度或在合适粒度范围内的干燥、通常低压冻干形式的生物活性剂。适于在鼻或肺通道内沉积的最小粒度常为约0.5M质量中值当量空气动力学直径(MMEAD),通常约1/xMMEAD,更典型约2/xMMEAD。适于在鼻道内沉积的最大粒度通常为约10pMMEAD,通常约8jLtMMEAD，更典型约4MMEAD。在这些大小范围内的鼻内可吸收的粉末可通过多种常规技术产生，例如气流动力磨、喷雾干燥、溶剂沉淀、超临界液体凝缩等。这些合适MMEAD的干粉可经常规干粉吸入器(DPI)给药于患者，所述干粉吸入器依赖于肺或鼻吸入时患者的呼吸而将粉末分散成气雾量。可选地，干粉可经气助式装置给药，所述装置使用外部能源来将粉末分散成气雾量，例如活塞泵。为了配制本发明中用于粘膜递送的组合物，可将所述生物活性剂与各种药学上可接受的添加剂以及用于分散所述活性剂的基质或载体组合在一起。所需添加剂包括但不限于pH控制剂，例如精氨酸、氢氧化钠、甘氨酸、盐酸、柠檬酸等。另外，可包括局部麻醉药(例如苯甲醇)、等渗剂(例如氯化钠、甘露醇、山梨糖醇)，吸附抑制剂(例如吐温-80(Tween80))、增溶剂(例如环糊精及其衍生物)、稳定剂(例如血清白蛋白)以及还原剂(例如谷光甘肽)。当用于粘膜递送的组合物为液体时，通常将制剂的张力(如参照作为单位的0.9%(w/v)生理盐水溶液的张力所测量的)调节至鼻粘膜中给药部位没有诱导显著、不可逆的组织破坏的数值。通常，将溶液的张力调节至约1/3至3、更典型1/2至2且最常用的3/4至1.7的数值。所述生物活性剂可分散于基质或媒介物中，所述基质或媒介物可包含具有分散所述活性剂和任何所需添加剂的能力的亲水化合物。所述基质可选自宽范围的合适的载体，包括但不限于，多聚羧酸或其盐、羧酸酐(例如马来酸酐)与其他单体(例如甲基丙烯酸(曱)酯、丙烯酸等)的共聚物，亲水乙烯聚合物例如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮，纤维素衍生物例如羟曱基纤维素、羟丙基纤维素等，以及天然聚合物例如壳聚糖、胶原、海藻酸钠、明胶、透明质酸及其无毒性金属盐。通常，可生物降解的聚合物被选作基质或载体，例如聚乳酸、聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物、聚羟丁酸、聚(幾丁酸-羟基乙酸)共聚物及其混合物。可选地或另外，合成的脂肪酸酯例如聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等可用作载体。亲水聚合物和其他载体可单独或组合使用，且可通过部分结晶、离子键合、交联等等赋予载体增强的结构完整性。载体可以以多种形式提供，包括，用于直接应用于鼻粘膜的液体或粘性溶液、凝胶、糊剂、粉吸收。本发明的组合物可选地可含有接近生理条件所需的药学上可接受的载体物质，例如pH调节剂和緩沖液，张力调节剂、湿润剂等等。例如，醋酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、去水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。对于固体组合物，可使用常规的无毒性药学上可接受的载体，其包括例如药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、碳酸镁等等。用于进行所述生物活性剂给药的治疗组合物还可配制成适于高浓度活性组分的溶液、微乳化液或其他有序的结构。所述载体可为溶剂或分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。可通过例如使用包被物例如卵磷脂、通过维持在可分散制剂情况的所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持溶液的适当;危动寸生。在本发明的某些实施方案中，所述生物活性剂于时间释^:制剂中进行给药，例如于包括緩慢释放聚合物的组合物中。所述活性剂可与防止快速释放的载体一起配制，例如像聚合物、微嚢包埋的给药系统或生物粘附凝胶的控释媒介物。本发明各种组合物中的所述活性剂的延长递送可通过在组合物制剂中包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝水凝胶和明胶来实现。当需要所述生物活性剂的控释制剂时，适用于本发明的控释结合剂包括对于所述活性剂为惰性并能够掺入所述生物活性剂的任何生物相容的控释材料。许多种这样的材料为本领域已知。有用的控释结合剂为在其鼻内递送之后于生理条件下(例如经粘膜给药之后在鼻粘膜表面或在体液存在的情况下)緩慢代谢的材料。适合的结合剂包括但不限于先前在本领域中用于持续释放制剂的生物相容的聚合物和共聚物。这些生物相容化合物对周围组织无毒性并具有惰性，且不引起显著的不良副作用，例如鼻刺激、免疫反应、炎症等。它们被代谢为也为生物相容且容易从机体消除的代谢产物。无菌溶液可通过于合适的溶剂中将需要量的所述活性化合物与上文列举的一种或组合的组分掺合在一起而制备，如需要，之后过滤灭菌。通常，分散剂通过将所述活性化合物掺入含有基础分散介质和来自上文所列的那些的所需其他组分的无菌媒介物而制备。在无菌粉末的情况中，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其产生所述活性组分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需组分的粉末。微生物作用的预防可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来实现，例如对羟苯曱酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。根据本发明的粘膜给药允许患者的有效的自我给药治疗，条件是设有足够的安全措施以控制和监控剂量和副作用。粘膜给药还克服了其他给药形式的某些缺点，例如注射，它们令人疼痛且使患者暴露于可能的感染并可带来药物生物利用度的问题。对于鼻和肺递送，用于为喷雾剂的治疗液体的控释气雾剂配药的系统是公知的。在一个实施方案中，计量剂量的活性剂通过特别构建的机械泵阀的方式递送(美国专利号4,511,069)。剂量药或以重复给药方案给药于受试者(例如通过每小时、每天或每周的重复给药方案)。在本申请的上下文中，PYY的治疗有效剂量可包括在延长的预防或治疗方案中重复的剂量，其产生緩解与上文所述的目标疾病或状态相关联的一种或多种症状或可检测的状态的临床显著结果。本申请上下文中有效剂量的确定通常基于动物模型研究之后是人类临床试验，并通过确定显著减轻受试者的目标疾病症状或状态的发生或严重性的有效剂量和给药方案而得以指导。在该方面的适合模型包括例如小鼠、大鼠、猪、猫科动物、非人类灵长类动物以及本领域已知的其他可接受的动物模型对象。可选地，有效剂量可使用体外模型来确定(例如免疫和组织病理测定)。使用这些模型，通常仅需要一般的计算和调节以确定合适的浓度和剂量来给予治疗有效量的所述生物活性剂(例如引发所需反应的鼻内有效、经皮有效、静脉内有效或肌内有效的量)。生物活性剂的实际剂量当然才艮据下述因素而不同例如疾病适应症和受试者的特定情况(例如受试者的年龄、尺寸、症状的程度、易感因素等)，给药时间和途径，同时给予的其他药物或治疗，以及用于引发受试者的所需活性或生物反应的所述生物活性剂的具体药理学。可调整给药方案以提供最佳的预防或治疗反应。治疗有效量还是这样一种量即在临床方面所述生物活性剂的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。本发明方法和制剂中的治疗有效量的非限制性范围为0.7)Ltg/kg至约25/ig/kg。为了促进体重减轻，鼻内剂量以高达足以促进饱食感但低至足以不会诱导任何非期望的副作用例如恶心的剂量给药。PYY3—36的优选鼻内剂量为约1/xg-10Mg/kg患者重量，最优选约1.5/xg/kg至约6/ig/kg患者重量。在标准剂量中，患者接受40/^g至2000/ig，更优选约50至600pg之间，最优选100/ig至400/ig。可选地，本发明方法和制剂中生物活性剂的治疗有效量的非限制性范围在每kg体重约0.001pmol至约100pmol,每kg体重约0.01pmol至约10pmol，每kg体重约0.1pmol至约5pmol,或每kg体重约0.5pmol至约1.0pmol。在该范围内的剂量可通过单次或多次给药获得，包括例如每天多次给药，每天一次或每周一次给药。按照给药之间约0.1至24小时、优选给药之间0.5和24.0小时之间的时间安排，本发明制剂的重复性鼻内给药维持正常、持续治疗水平的Y2受体结合肽以最大化临床利益而最小化过度暴露和副作用的危险。可每天几次给予该剂量以促进饱食感，优选在餐前半小时或当产生饥饿时给予该剂量。目的是粘膜递送Y2受体结合肽的这样一种量即足以提高在个体血浆中的Y2受体结合肽的浓度以模拟正常情况下在餐后(即在个体完成进食之后)产生的Y2受体结合肽的浓度的量。如果自我进行非处方药剂型给药以维持靶部位的所需浓度，Y2激动剂例如PYY的剂量可根据主治医师或患者而不同。在可选的实施方案中，本发明提供了用于Y2受体结合肽的鼻内给药的组合物和方法，其中所述Y2受体结合肽化合物通过鼻内有效给药方案重复给药，该给药方案涉及在每天或每周时间中将Y2受体结合肽多次给予受试者以在延长的给药过程中维持Y2受体结合肽的治疗有效的增高或降低的脉动水平。所述组合物和方法提供了这样Y2受体结合肽化合物即其由受试者在每天1和6次之间以鼻制剂自我给药以维持在8小时至24小时的延长的给药期间Y2受体结合肽的增高和降低的脉动水平。本发明还包括含有用于预防和治疗哺乳动物受治疗者的疾病或其他病症的上述药物组合物、活性组分和/或进行上述药物组合物、活性组分39给药的方法的试剂盒、包装和多个容器单元。简言之，这些试剂盒包括这样的容器或制剂即其含有本发明公开的配制成用于粘膜给药的药物制剂的与粘膜给药增强剂组合的一种或多种Y2受体结合肽蛋白、类似物或模拟物和/或其他生物活性剂。本发明的鼻内制剂可使用任何喷雾瓶或注射器进行给药。鼻喷雾剂瓶的一个实例为"具有安全夹的鼻喷雾泵"(PfeifferSAP#60548)，其递送O.lml/喷的剂量并具有36.05mm的浸管长度。其可购自美国新泽西州普林斯顿的Pfeiffer。例如PYY的Y2受体结合肽鼻内剂量可为0.1/xg/kg至约1500/xg/kg。当作为鼻内喷雾剂给药时，优选喷雾剂的粒度为10-100gm(微米)大小，优选20-100/mi大小。为了促进体重减轻，Y2受体结合肽PYY以高达足以促进饱食感但低至足以不会诱导诸如恶心的非期望的副作用剂量进行给药。诸如PYY(3-36)的Y2受体结合肽优选鼻内剂量为约3/xg-10/xg/kg患者体重，最优选约6/xg/kg患者体重。在标准剂量，患者接受50iLig至800Aig,更优选约100gg至400Mg，最优选150gg至约200/ig。诸如PYY(3-36)的Y2受体结合肽优选在进食前至少IO分钟至1小时但不超过进食前约12至24小时进行给药以防止恶心。优选每天至少一次每餐前给药于患者，直到患者减轻所需量的体重。然后患者接受至少每周一次优选每天一次的维持剂量以维持体重减轻。如从下述实施例的数据所显示的，当使用本发明的Y2受体结合肽制剂鼻内给药于人时，发现PYY(3-36)降低食欲。实施例还显示了可使用本发明PY2受体结合肽制剂通过鼻内给药途径达到PYY肽的首次餐后生理水平，其中PYY(3-36)是Y2受体结合肽。PYY的气雾剂鼻给药我们发现在上述制剂中的PYY可使用鼻喷雾剂或气雾剂进行鼻内给药。这是令人惊讶的，因为在制备喷雾剂或气雾剂的过程中许多蛋白质和肽显示由于致动器产生的机械力而被剪切或变性，在本领域中，下述定义是有用的。气雾剂——在压力下包装并含有当适合的阀系统激活时释放的治疗活性剂的制品。计量气雾剂——包括计量剂量阀的加压剂型，其允许当每次激活时进行均一量喷雾剂的递送。粉末气雾剂——在压力下包装并含有当适合的阀系统激活时释放的粉末形式的治疗活性剂的制品。喷雾气雾剂——利用压缩气体作为抛射剂来提供排出作为湿喷雾剂的制品所需的力的气雾剂制品，其通常可适用于于水溶剂中的药剂的溶液。喷雾剂——由空气或气流喷射而细化的液体。鼻喷雾药物制品含有在非加压分散剂中的赋形剂溶液或混合物中溶解或悬浮的治疗有效组分。计量喷雾剂——非加压剂型，其包括允许当每次激活时分配特定量喷雾剂的阀。悬浮喷雾剂——含有分散于液体媒介物中且以小滴形式或作为细化的固体的固体颗粒的液体制剂。由计量鼻喷雾泵作为药物递送装置("DDD")喷放的喷雾剂的流体动力学特征。喷雾特征是食品和药品管理局("FDA")批准的对新型和现有的鼻喷雾泵的研究和开发、质量保证以及稳定性检测规程所必需的法规要求的一个不可或在夹的部分。已发现喷雾剂几何学的所有特征是鼻喷雾泵总性能最好的指示。特别地，已发现当喷雾剂从所述装置喷出时的分散角(烟流(plume)几何学)的测量；喷雾剂的横截面椭圆率、均匀度以及颗粒/小滴分布(喷流模式(spraypattern));以及所发展喷雾的时间进展是喷雾泵的特征中最具代表性的性能分量。在质量保证和稳定性的检测中，烟流几何学和喷流模式测量是用于证实与鼻喷雾泵的批准数据标准的一致性和相符性的关键鉴定标识。下列定义用于喷雾的性质。烟流高度——从致动器顶端至烟流角因为线流的破坏而变得非线性的点的测量值。基于对数字图像的目测，且为了建立与喷流模式的最远测量点一致的宽度测量点，为该研究限定了30mm的高度。主轴-能在越过COMw的拟合喷流模式中以基本单位(mm)画出的最长带。短轴-能在越过COMw的拟合喷流模式中以基本单位(mm)画出的最小带。椭圓率-主轴对短轴的比例。D10-样品总液体体积的10%由较小直径(ium)的小滴组成的小滴直径，。D50-样品总液体体积的50%由较小直径(jLim)的小滴组成的小滴直径，也称作质量中值直径。D90_样品总液体体积的90。/。由较小直径()Lim)的小滴组成的小滴直径。跨距_分布宽度的测量，值越小，分布越窄。如下计算跨距(D9°D5。D1。)。%RSD-相对标准差百分数(标准差除以系列平均值并乘以100),也称作。/。CV。鼻喷雾装置包括放置PYY制剂的瓶和致动器，所述致导器当致动或工作时驱使PYY的喷雾烟流通过所述致动器从喷雾剂瓶喷出。所述瓶可为包含I型硼硅玻璃的光滑玻璃瓶。所述瓶可具有螺紋顶部和凹底。瓶帽可为三叶紋(trifoil-lined)的聚丙烯。三叶(Tri-Foil)WP包括由0.00067"白色LDPE结合至0.0035"铝箔然后结合LDPE膜/泡沫/膜共挤出物的0.0005"的透明聚脂。该内衬的所有组分为GRAS。瓶帽可包含聚丙烯并带合适的螺紋用于所需的小瓶。实施例实施例1:各种PYY3-36制剂的体外组织模型评价评价在各种赋形剂(EDTA、聚山梨醇酯80(吐温80)、油酸、山梨糖醇以及乙醇)存在情况下PYY3—36的体外渗透性。使用10mM柠檬酸盐緩冲液(柠檬酸/柠檬酸钠)将制剂调节至pH4。所检测的多种制剂示于表1。所有样品透明且无色。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>滤器上汇合生长的嵌入物提供。当收集时，在使用前将薄膜在lml基础培养基(无苯酚红和无氢化皮质酮的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM))中于37。C/5%002培养24-48小时。给嵌入物提供养分以进行每天的收集。将各组织嵌入物放入含有lmlMatTek基础培养基的各孔中。在嵌入物的顶面，根据表l中的研究设计应用50/xl的检测制剂，并将样品放于37。C振动器(100rpm)上1小时。将下面的培养基样品储存于4°C达48小时以进行乳酸脱氬酶(LDH,细胞毒性)和样品渗透性(酶免疫测定(EIA)评价。在1小时的温育之前和之后测量经上皮电阻(TER)。在温育之后，经线粒体脱氢酶(MDH)测定分析细胞嵌入物的细胞活力。1.跨单细胞层的电阻使用利用电极导线连接于带有EVOM上皮伏欧表(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)的Endohm-12组织电阻测量腔实施TER的测量。在检查校准之前于断电的MatTek培养基中平衡电极和组织培养空白嵌入物至少20分钟。使用于Endohm组织腔中的1.5ml培养基和空白嵌入物中的300pd培养基测量背景电阻。调整顶部电极使得其接近但不接触嵌入膜的顶面。空白嵌入物的背景电阻为约5-20欧姆。对于各TER测定，将300^1MatTek培养基添加至嵌入物，接着放入Endohm腔。电阻表示为(所测量的电阻-空白)X0.6cm2。结果显示阴性对照和培养基对照在1小时暴露之后不表现TER的任何显著变化。Triton对照显示TER基本上完全降低。含有EDTA和乙醇的样品表现TER降低，这与紧密连接的开放一致。2.细胞活力使用MTT测定(MTT-IOO，MatTek试剂盒)评价细胞活力。将融化和稀释的MTT浓缩液用移液管(300Ad)移至24孔培养板。轻柔地干燥组织嵌入物，将其放入培养板孔中，并于37。C温育3小时。在温育之后，从培养板取出各嵌入物，轻柔吸印，并放入24孔提取培养板。然后将细胞培嵌入物浸于每孔2.0ml的提取剂溶液中(完全覆盖样品)。覆盖并密封提取培养板以减轻提取剂的蒸发。室温黑暗中过夜温育之后，将各嵌入物中的液体倒回至从中取出它的孔，并丟弃嵌入物。将提耳又剂溶液(200All,以至少双份)连同提取空白用移液管移至96孔微量滴定板。在读板机上于550nm测量样品的光密度。所有样品和阴性对照和培养基对照表现可接受的细胞活力，即与培养基对照相比至少80%。如预期的，TritonX对照显著降低细胞活力。3.细力包毒性通过使用CytoTox96纟田月包毒性测定试剂盒(PromegaCorp.,Madison,WT)测量乳酸脱氬酶(LDH)从细胞的丧失来测定细胞死亡的数量(细胞毒性)。评价顶部培养基的LDH分析。考虑到初始的样品装载体积，将合适量的培养基顺序添加至顶面至总共300AtL。振动嵌入物5分钟，然后取出150/xL顶部培养基，并将其分配至eppendorf管中，且在10000rpm离心3分钟。取出2/xL体积的上清液，并将其添加至96孔培养板中。48/^L体积的培养基用于稀释上清液以制备25x稀释液。对于基底外侧培养基的LDH分析，将50/xL样品装入96孔测定培养板中。新鲜的无细胞培养基用作空白。将50/xL基质溶液添加至各孔并于室温黑暗中温育培养板30分钟。在温育之后，将50/xL终止液添加至各孔并在光密度读板机上于490nm读板。通过基底外侧LDH测定，所有样品和阴性对照以及培养基对照均具有较低的细胞毒性，即与培养基对照相比不超过20%。如预期的，TritonX对照具有4交高的细胞毒性。4.细胞渗透性PYY3.36EIA^式剂盒购自PhoenixPharmaceuticals,Inc.(Belmont,CA),并按照所提供的说明书进行测定。渗透性结果(图l)显示10mMEDTA或1-2%乙醇提供显著的％渗透性，即在1小时后渗透约1.5-2%的药物。相比之下，观察到阴性对照(等渗的，非渗透性增强剂)极低的％渗透性，例如<0.3%。观察到样品ll(lmg/mLEDTA,1%乙醇)和12(10mg/mLEDTA,2%乙醇)具有最大的％渗透性。EDTA和乙醇组合提供了与紧密连接的开放一致的TER的降低并增加PYY3—36渗透性，具有可接受的低细胞毒性和高细胞活力。实施例2各种PYY3-36制剂的体外评价目的是为了进一步检测乙醇、EDTA以及吐温80作为PYY3.36的渗透性增强剂的作用。使用10mM柠檬酸盐緩冲液(柠檬酸/柠檬酸钠)将制剂调节至pH4。实施例2中检测的各种制剂示于表2。除了这些样品外，还包括阴性等渗对照、细胞培养基对照以及Triton-X对照。表2:实施例2中检测的制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>盐水等渗盐水检测了表2中的各样品的TER、MTT、LDH以及PYY3_36渗透性，如实施例1所述实施各种测定方法。在1小时的暴露之后，阴性对照和培养基对照不表现TER的任何显著变化。Triton对照显示TER基本上完全降低。所有纟企测的样品显示TER降低。这些数据说明EDTA、乙醇、吐温80以及这些赋形剂的组合物降低TER，这与紧密连接的开放一致。通过基底外侧LDH测定，所有样品和阴性对照以及培养基对照具有较低的细胞毒性，即与培养基对照相比不超过20%毒性。TritonX对照具有较高的细胞毒性。百分比渗透性的数据示于图2。阴性对照具有极低的渗透性，这与实施例1一致。这三种GRAS样品均表现在检测条件下显著高的渗透性。这些数据还证实EDTA、乙醇、吐温80以及这些赋形剂的组合物降低TER并提高PYY3-36渗透性，具有可接受的低细胞毒性。实施例3:各种PYY3-36制剂的体外组织模型评价该研究的目的是为了进一步检测乙醇、EDTA以及吐温80作为PYY3.36的潜在渗透性增强剂的作用。评价在各种赋形剂(EDTA、乙醇、吐温80、DDPC以及曱基-j8-环糊精)存在情况下PYY3.36的体外渗透性。使用10mM柠檬酸盐緩沖液(柠檬酸/柠檬酸钠)将制剂调节至pH4.2-4.3。实施例3中检测的各种制剂示于表3。除了这些样品外，还包括阴性等渗对照、细胞培养基对照以及Triton-X对照。样品3-1含有曱基-Z5-环糊精(M-)3-CD)、DDPC和EDTA的组合物，先前显示该组合物提供PYY3_36增强的渗透性(第10/768,288号美国专利申请[公布号20040209807])。检测了表3中各样品的TER、MTT、LDH以及PYY3-36渗透性，如实施例1所述实施各测定的方法。表3:实施例3中所检测的制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>所有样品透明且无色。在1小时的暴露之后，培养基和阴性对照对照不表现TER的任何显著变化。样品3-1至3-13均表现相对于培养基对照的TER的显著降低，表明EDTA、乙醇、吐温80以及这些赋形剂的组合物降低TER。数据还显示含有曱基-/3-环糊精、EDTA以及DDPC的制剂降低TER。百分比渗透性的数据(图3)显示3-1至3-13的所有样品表现较高的％渗透性。阴性对照具有极低的％渗透性，这与实施例l一致。这些数据进一步证实EDTA、乙醇、吐温80及其组合物提供了TER的降低，与紧密连接的开放一致且增加PYYw6渗透性。这些制剂获得了相当于或优于先前所述含有EDTA、DDPC以及曱基-iS-环糊精的制剂的渗透性(第10/768,288号美国专利申请)。实施例4:各种PYY3-36制剂的体外组织模型评价该研究的目的是为了进一步检测乙醇、EDTA以及吐温80作为PYY3.36的潜在渗透性增强剂的作用。在该实施例中，对不同的緩冲液(柠檬酸盐緩冲液、乙酸盐緩冲液以及谷氨酸盐緩冲液)，以及不同的防腐剂(氯丁醇和苯扎氯铵)进行了试验。将所有制剂的数据与含有曱基-P-环糊精、DDPC以及EDTA的制剂进行比较。评价在各种赋形剂(EDTA、乙醇、吐温80、DDPC以及曱基-/3-环糊精)存在情况下PYY3—36的体外渗透性。使用lOmM柠檬酸盐緩冲液(柠檬酸/柠檬酸钠)将制剂调节至pH4。所;险测的各种制剂示于表4。除了这些样品外，还包括阴性等渗对照、细胞培养基对照以及Triton-X对照。样品4-1包含曱基-JS-环糊精(M-/3-CD)、DDPC以及EDTA的制剂，先前显示提供PYYw6增强的渗透性(美国专利申请第10/768,288号)。表4:实施例4中所检测的制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>检测了表4中的各种样品的TER、MTT、LDH以及PYY3-36渗透性，如实施例1所述实施各测定的方法。在表4中，"BZK"=0.2mg/mL苯扎氯铵，"CB"-5mg/mL氯丁醇。TritonX对照显示TER基本上完全的降低。阴性对照和培养基对照显示TER无变化。所有检测样品表现相对于阴性对照的TER的显著降低。数据显示在PYY3.36制剂中乙酸盐和谷氨酸盐緩冲液可取代柠檬酸盐緩沖液。数据还支持可将防腐剂例如氯化苯曱烃铵和氯丁醇添加至PYY3-36制剂。渗透性数据(图4)显示所有样品较高的％渗透性，且4-4、4-6以及4-9表现最高的％渗透性。这些数据进一步证实EDTA、乙醇、吐温80及其组合物的渗透性增强作用。乙酸盐和谷氨酸盐緩冲液取代柠檬酸盐緩沖液而不丧失渗透性。另外，将苯扎氯铵和氯丁醇成功地作为防腐剂添加。这些数据证实EDTA、乙醇以及吐温80制剂可实现相当于或优于先前所述含有EDTA、DDPC以及曱基-/3-环糊精的制剂的渗透性。在PYY3-36制剂中，乙酸盐和谷氨酸盐緩沖液可取代柠檬酸盐緩沖液，且可将防腐剂例如苯扎氯铵和氯丁醇添加至PYY3.36制剂中。实施例5包含乙酸盐緩冲液、乙醇和EDTA的鼻内PYYn制剂的药代动力学试验在哺乳动物中进行不同鼻内制剂的PYY3—36的药代动力学试验。所述制剂包括作为渗透增强剂的EDTA和乙醇(乙酸盐緩冲液；pH4.0)。为进行对比，还在鼻内给药包含作为渗透增强剂的曱基-/3-环糊精、DDPC和EDTA的制剂(先前显示赋形剂的这种组合造成PYY3.36渗透的增强(美国专利申请号10/768,288)。此外，给药不含增强剂的制剂，以便阐明渗透增强剂改进药物输送的效能。实施例5中检测的不同制剂描述于表5。样品5-l包含作为增强剂的甲基-i3-环糊精、DDPC和EDTA和作为防腐剂的CB，鼻内给药5-l用于对比。样品5-2,5-3和5-4包含1或者10mg/mLEDTA和0、10或者20mg/mL乙醇，并且包含BZK作为防腐剂。在緩沖液中配制样品5-5，不含渗透增强剂。表5:实施例5中检测制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>新西兰白兔中进行的药代动力学(PK)鉴定遵守实验动物管理原则(NIH出版86-23,1985年修订)。在给药前和鼻内给药后2.5、5、10、15、30、45、60和120分钟，/人边缘耳,争脉提取血液样品。通过EIA测定血浆中PYY3.36的浓度(FoerderC.，等人，gw朋故a〃veZ)e^7w'"加'owyyj-36尸Ax附aWai//o/wmi/w6>awa_y,AAPS2004NationalBiotechnologyConference,Boston,MA，May2004)。采用非房室才莫型方法利用WinNonlin库i^牛(PharsightCorporation,4.0片反本，MountainView,CA)进行PK计算。数据表示为平均值土标准误差。PK结果概述于表6。对所有样品来说，鼻内途径的T^x在大约26-43之间。样品5-l具有最高的C,和AUC，相对于没有增强剂的情况(样品5-5),后者增加27倍。与样品5-1相比，样品5-2和5-3的Q^显示更低的标准差。并且，与样品5-1相比，样品5-2的Aucto显示更低的标准差。样品5-2显示与样品5-1几乎相同的Auclast。表6:实施例5中检测制剂的PK概述<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>与无增强剂相比，所有包含EDTA和/或乙醇组合(样品5-2，5-3和5-4)的组显示基本上增强的渗透，达到大约20-到25-倍。实施例6:在无任何其他赋形剂存在的条件下，不同緩冲液对PYY;i热应力稳定性的影响按表7所列制备制剂。被测緩沖液包括柠檬酸盐、酒石酸盐、乙酸盐和谷氨酸盐。在所有情况下，PYYw6为1mg/mL,pH为5.0。l-cc棕色非硅烷化小瓶装满待测制剂，每瓶装lmL,小瓶用三叶紋(trifoil-lined)盖封口。小瓶购自SGDGlassInc.(NewYork,NY)。这些小瓶具有螺-菱盖和凹底(U-形结构)。小并瓦由I型硼^圭玻璃组成。盖子购自O'BerkCompany(Union,NJ)，由聚丙烯组成，被合适的螺紋化用于预定的小瓶。盖子是三叶紋的。Tri-FoilWP由0.0005"透明聚酯组成，所述聚酯由0.00067"白色LDPE结合到0.0035"铝箔然后结合到LDPE膜/泡沫/膜共挤塑物。所有衬垫的组件都是GRAS(公认为安全的)。小瓶储存于25、40和50°C,在不同时间点通过HPLC检测化学稳定性，表现为肽回收率(相对于1=0时数据测定的％肽)。在45。C，HPLC方法使用5-/miC18柱(Supelco,BIOWide-pore，250x4.6匪)，使用流动相组分为0.1Q/。三氟乙酸(A)和溶于乙腈的0.08。/。三氟乙酸(B),在27%A/73%B中等度洗脱。在21Onm利用UV进行片企测。通过外标法进行定量。表7:实施例6中评价的制剂组#PYY3-36(mg/mL)柠檬酸盐緩沖液(mM)酒石酸盐緩沖液(mM)乙酸盐緩沖液(mM)谷氨酸盐緩冲液(mM)pH1-1110一-—5.0l画21一10——5.01-31-一10一5.01-41一-一105.0HPLC数据显示利用乙酸盐和谷氨酸盐緩沖液达到最佳稳定性(不同条件保存后最高的回收率)。肽回收率结果显示于图5A、5B和5C,分别对应于25、40和5(TC。本实验的结果是启示性的，因为那些保存PYY3—36稳定性最好的緩冲液是一价緩冲液，而那些未提高PYY3-36稳定性的是多价緩冲液。一价緩冲液可能在热应力条件下增强PYY3—36稳定性。实施例7:在作为张力剂(Tonicifier)的山梨醇存在条件下，緩冲液类型和pH对热应力稳定性的影响按表8所列制备制剂。被测緩沖液是柠檬酸盐、乙酸盐和谷氨酸盐。在所有情况下，PYY3—36为2mg/mL，存在的山梨醇^是供225mOsm的重量克分子渗透压浓度。pH从3.5到5.0。然后将这些制剂装入l-cc棕色非硅烷化小瓶，每瓶装lmL,小瓶用三叶紋盖封口。保存样品，按实施例6所述测定回收率。表8:实施例7中评1介的制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>HPLC数据显示鉴定的对于温度最佳热稳定性的制剂是乙酸盐和谷氨酸盐緩冲液以及无緩沖液的制剂。肽回收率结果如图6A,6B,6C和6D所示，其緩冲液分别是柠檬酸盐、乙酸盐、谷氨酸盐或者无缓沖液。和实施例6相同，最佳性能制剂是那些包含一价緩沖液(即，乙酸盐或者谷氨酸盐)或者不包含超过鉴定的pH范围和温度的緩冲液的制剂。那些包含多价緩沖液(即，柠檬酸盐)的制剂未达到最佳性能。此外，维持PYY3-36最适稳定性的pH表现为pH3.5-pH4.5,与使用的緩沖液无关。实施例8:不同PYYw6制剂的热稳定性和雾化应力稳定性本研究的目标是检验PYY3—36制剂的热和雾化应力的稳定性，所述PYY3.36制剂包含作为PYY3.36潜在渗透增强剂的乙醇、EDTA和Tween-80(吐温80)。在该实施例中，添加不同的緩沖液(乙酸盐缓冲液和谷氨酸盐緩沖液)，以及用于多次使用制剂的防腐剂(苯扎氯铵)。在3mL非硅烷化棕色玻璃瓶装入溶液约3.9mL。小瓶加接lOOjiiL致动器。致动器购自PfeifferofAmerica(Princeton,NJ)。'J、瓶通过致动亏1发直到实现第一次完全喷雾。在观察到第一次完全喷雾后，进行另外两次致动以确认完全的引发。在引发完成后，下一次喷射被认作本研究的第一次喷射。所有致动都是手动进行。在全部喷雾间小瓶保存于30。C/65。/。相对湿度(在白天以及夜间)。从容器取出后，小瓶进行喷射(5分钟内)，然后放回容器。在全部喷雾间间隔最少1小时。小瓶每天喷射3次(TID)，共10天。按实施例1所述进行HPLC方法。肽稳定性的数据表示为百分比回收(相对于最初t=0时天然肽的浓度)和百分比纯度(天然肽的峰面积除以所有肽相关的峰面积)。在暴露于升高温度和每日3次喷雾的雾化应力的第0天、5天和10天，测定肽含量的HPLC数据。实施例8中检测的不同制剂描述于表9。所有样品包含6mg/mLPYY3-36。样品包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，苯扎氯铵(BZK)(作为用于多次使用的代表性防腐剂)，和0或者1mg/mLTween80。样品3-1和3-2包含pH4.3的10mM乙酸盐缓冲液(乙酸/乙酸钠緩沖系统)。样品3-3包含pH4.3的10mM谷氨酸盐缓沖液(谷氨酸/谷氨酸钠緩沖系54统)。表9:实施例8中被测制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在暴露于升高温度和每日3次喷雾的雾化应力的第0天、5天和10天的肽含量的HPLC数据显示于图7。数据显示在含有10mg/mLEDTA和20mg/mL乙醇的制剂中，1mg/mLTween-80(3-1，实心三角形)的存在相对于不含Tween-80(3-2,空心正方形)的相同制剂具有稳定效应。相对于乙酸盐緩冲液(3-2，空心正方形)，谷氨酸盐緩沖液(3-3，空心菱形)提供更高的稳定性。PYY3.36纯度的数据显示溶液中残留的主要种类具有与天然PYY3—36相同的HPLC保留时间，与聚集导致的肽损失一致。沉淀主要由PYY3—36单体组成，显示热和雾化应力下的PYY3—36损失源于疏水性(例如，非共价的)聚集。当暴露于高温和每日3次喷射的应力的组合时，PYY3—36制剂可能遭受疏水性的，例如，非共价的，聚集。在一定条件下，Tween-80的存在改善这种状况。同时，数据显示对于稳定性来说，谷氨酸盐相对于乙酸盐可能是优选的緩沖系统。实施例9:不同PYYw、制剂的热稳定性和雾化应力稳定性本研究的目标是检验PYY3—36制剂抗热和雾化应力的稳定性，所述PYY3.36制剂包含作为PYYw6潜在渗透增强剂的乙醇、EDTA和Tween80。在该实施例中，；险测从pH3.8到4.4的乙酸盐緩冲液，氯丁醇用作多次使用的防腐剂。该实施例中使用的方法与上面实施例8所述的相同。与实施例8相同，此处所有喷射之间小瓶保存于30。C/65。/。相对湿度(在白天及夜间)，小瓶每天喷雾3次(TID),共10天，在喷雾的第0、5和10天使用HPLC确定喷雾(当天的最后喷射)中的PYY3—36含量。该实施例中4企测的不同制剂描述于表10。所有样品包含6mg/mLPYY3—36，10mM乙酸盐緩沖液(乙酸/乙酸钠緩冲系统)和5mg/mL氯代丁醇(CB)。样品4-1到4-8包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，和0或者1mg/mLTween80，pH在3.8到4.4之间。为进行对比，最后的样品，4-9，包含45mg/mL曱基-|3-环糊精，1mg/mLDDPC，和1mg/mLEDTA，pH4.0。后一制剂先前已有记载(US专利申请号10/768288，Quay等人."CompositionsandmethodsforenhancedmucosaldeliveryofY2receptor-bindingpeptidesandmethodsfortreatingandpreventingobesity")。表io:实施例9中被测制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>缩写Me-/5-CD=曱基-/3-环糊精EDTA=乙二胺四乙酸二钠DDPC二L-o;-双姿酰磷脂酰胆碱(L-a-phosphatidylcholinedidecanoyl)。在暴露于升高温度和每日3次喷射的雾化应力的第0天、5天和10天的肽含量的HPLC数据显示于图8。数据显示在组合的热和雾化应力后，1mg/mLTween-80的存在提高PYYw6的稳定性(比较样品4-1和4-2(分别是实心和空心菱形)；比较样品4_3和4_4(分别是实心和空心正方形)；比较样品4-5和4-6(分别是实心和空心圓)；和比较样品4-7和4-8(分别是实心和空心三角形))。当pH从4.4降低到3.8时，还存在稳定性升高的趋势。pH3.8的包含1mg/mLTween-80(4-l)的样品，显示与样品4-9几乎相同的稳定性。1mg/mLTween-80的存在提供PYYw6制剂对于热和喷雾应力的稳定性，所述PYY3.36制剂包含10mg/mLEDTA和20mg/mL乙醇。当pH从4.4降低到3.8时，稳定性升高。实施例10:PYY^制剂的热稳定性和雾化应力稳定性本研究的目标是检验PYY3.36制剂抗热和雾化应力的稳定性，所述PYY3.36制剂包含作为PYY3.36潜在渗透增强剂的乙醇、EDTA和Tween80。在该实施例中，緩冲液是乙酸盐或谷氨酸盐，pH为4.0,并且Tween-80的水平从0到50mg/mL。添加氯丁醇作为防腐剂。该实施例使用的方法描述于实施例8。所有喷雾之间小瓶保存于30。C/65。/。相对湿度，小瓶喷雾TID，共10天，在喷雾的第0、5和10天4吏用HPLC确定喷雾(当天的最后喷雾)中的PYY3-36含量。该实施例中^^测的不同制剂描述于表11。所有样品包含6mg/mLPYY3.36和5mg/mL氯丁醇(CB)。样品5-1到5-13包含1-10mg/mLEDTA,10-20mg/mL乙醇，0-50mg/mLTween-80,还包含10mM乙酸盐緩冲液/pH5或者10mM谷氨酸盐緩冲液/pH4。为进行对比，最后的样品，5-14，包含45mg/mL曱基-/3-环糊精，1mg/mLDDPC,和1mg/mLEDTA,pH4.0。57表11:实施例10中被测制剂的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>图9A显示样品5-1，5-2和5-3的稳定性数据。5-1和5-2的比较显示1mg/mLTween80的添加不具有改进效应，因为在试验条件下(例如，1mg/mLEDTA和10mg/mL乙醇，pH4)，两个样品均获得优良的稳定性。样品5-2相对5-3的比较显示在试验条件下，观察到谷氨酸盐緩沖液相对乙酸盐緩沖液的稍微更低的稳定性。图9B显示5-4,5-5，5-6和5-7的稳定性数据。所有这些样品包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，和10mM乙酸盐緩冲液/pH4.0。该系列样品具有不同水平的Tween80,即从0到50mg/mL。通常，与图9A中的样品相比，图9B条件下观察到的稳定性稍微更低。样品5-7观察到最高的稳定性，所述样品5-7包含该系列中最高水平的Tween80(50mg/mL)。图9C显示热和雾化应力对4f品5-4,5-5,5-6和5-7的影响。所有这些样品包含10mg/mLEDTA,20mg/mL乙醇，和10mM谷氨酸盐緩冲液/pH4.0。该系列样品具有不同水平的Tween80,即从0到50mg/mL。通常，与图9A和图9B中的样品相比，图9C条件下观察到的稳定性稍微更低。样品5-11观察到最高的稳定性，所述样品5-11包含该系列中最高水平的Tween80(50mg/mL)。最后，样品5-12,5-13和5-14的稳定性数据显示于9D。所有3个样品均显示优良的稳定性，即，在暴露于热和雾化应力IO天后基本上没有肽回收率的变化。权利要求1.用于增强向哺乳动物粘膜递送PYY的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的PYY、能与水混溶的极性有机溶剂和阳离子螯合剂。2.根据权利要求1所述的制剂，其中PYY是PYY(3-36),所述能与水混溶的极性有机溶剂是乙醇且所述阳离子螯合剂是EDTA。3.根据权利要求2所述的制剂，其中乙醇的配方浓度为约l%(v/v)或更高。4.根据权利要求2所述的制剂，其中乙醇的配方浓度为约2%(v/v)或更高。5.根据权利要求2所述的制剂，其中乙醇的配方浓度为约10%(v/v)或更高。6.根据权利要求2所述的制剂，其中EDTA在所述制剂中的浓度为至少约1mg/mL。7.根据权利要求2所述的制剂，其中EDTA在所述制剂中的浓度为至少约2mg/mL。8.根据权利要求2所述的制剂，其中EDTA在所述制剂中的浓度为至少约10mg/mL。9.根据权利要求2所述的制剂，其还包括表面活性剂。10.根据权利要求9所述的制剂，其中所述表面活性剂为吐温-80。11.根据权利要求IO所述的制剂，其中吐温-80在所述制剂中以50mg/mL或更〗氐存在。12.根据权利要求IO所述的制剂，其中吐温-80在所述制剂中以10mg/mL或更低存在。13.根据权利要求IO所述的制剂，其中吐温-80在所述制剂中以1mg/mL或更低存在。14.根据权利要求2所述的制剂，其还包括緩沖盐。15.根据权利要求9所述的制剂，其还包括緩冲盐。16.根据权利要求14所述的制剂，其中所述緩冲盐是乙酸盐或谷氨酸盐。17.根据权利要求15所述的制剂，其中所述緩冲盐是乙酸盐或谷氨酸盐。18.根据权利要求16所述的制剂，其中所述緩沖盐是谷氨酸盐。19.根据权利要求17所述的制剂，其中所述緩冲盐是谷氨酸盐。20.根据权利要求2所述的制剂，其中所述pH为约5.0或更低。21.根据权利要求2所述的制剂，其中所述pH为约4.4或更低。22.根据权利要求2所述的制剂，其中所述pH为约4.0或更低。23.根据权利要求2所述的制剂，其中所述pH为约3.8或更低。24.根据权利要求2所述的制剂，其还包括防腐剂。25.根据权利要求24所述的制剂，其中所述防腐剂为氯丁醇或苯扎氯铵。26.根据权利要求2所述的制剂，其中通过接触单层粘膜细胞给予所述制剂导致与在不含渗透增强剂的等渗溶液中测量的Papp相比，测量的P，约为其2倍或更高。27.根据权利要求2所述的制剂，其中通过接触单层粘膜细胞给予所述制剂导致与在不含渗透增强剂的等渗溶液中测量的Papp相比，测量的Papp约为其5倍或更高。28.根据权利要求2所述的制剂，其中通过接触单层粘膜细胞给予所述制剂导致与在不含渗透增强剂的等渗溶液中测量的Papp相比，测量的P叩p约为其IO倍或更高。29.根据权利要求2所述的制剂，其中通过接触单层粘膜细胞给予所述制剂导致与在不含渗透增强剂的等渗溶液中测量的Papp相比，所测量的P，约为其IO倍或更高。30.根据权利要求26、27、28或29所述的制剂，其中所述粘膜细胞为支气管上皮细胞。31.根据权利要求2所述的制剂，其中在哺乳动物中鼻内给予所述制剂导致与对于鼻内给予不含渗透增强剂的等渗盐水溶液所测量的AUC^t相比，测量的AUQast约为其2倍或更高。32.根据权利要求2所述的制剂，其中在哺乳动物中鼻内给予所述制剂导致与对于鼻内给予不含渗透增强剂的等渗盐水溶液所测量的AUClast相比，所测量的AUClast约为其5倍或更高。33.根据权利要求2所述的制剂，其中在哺乳动物中鼻内给予所述制剂导致与对于鼻内给予不含渗透增强剂的等渗盐水溶液所测量的AUC^相比，测量的AUC^t约为其IO倍或更高。34.根据权利要求2所述的制剂，其中在哺乳动物中鼻内给予所述制剂导致与对于鼻内给予不含渗透增强剂的等渗盐水溶液所测量的AUClast相比，测量的AUClast约为其20倍或更高。35.用于增强向哺乳动物粘膜递送PYY的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的PYY、约2%(v/v)乙醇、约10mMEDTA、约1%吐温-80,且pH约4.0。36.根据权利要求35所述的制剂，其还包括防腐剂，其中所述防腐剂为氯丁醇或苯扎氯铵。37.根据权利要求36所述的制剂，其还包括緩冲盐，其中所述緩沖盐为乙酸盐或谷氨酸盐。38.根据权利要求37所述的制剂，其还包括緩冲盐，其中所述緩冲盐为谷氨酸盐。39.适合用于多次使用的PYY剂型，包含含有水性药物制剂的密封瓶子，其中所述制剂包含治疗有效量的PYY、能与水混溶的极性有机溶剂和阳离子螯合剂，并且其中这样的PYY剂型在5°C下储存至少10天后显示至少90%的PYY回收率。40.根据权利要求39所述的PYY剂型，在5。C下储存至少6个月后具有高于90%的PYY回收率。41.根据权利要求39所述的PYY剂型，在5。C下储存至少1年后具有高于90%的PYY回收率。42.根据权利要求39所述的PYY剂型，在5°C下储存至少2年后具有高于90%的PYY回收率。43.适合多次使用的PYY剂型，其包含含有水性药物制剂的瓶子和有效鼻内给予所述制剂的致动器，其中所述制剂包含治疗有效量的PYY、能与水混溶的极性有机溶剂和阳离子螯合剂，并且其中这样的剂型在储存长于约5天后显示至少90%的PYY回收率。44.根据权利要求43所述的PYY剂型，其中所述给药为每天3次。45.根据权利要求44所述的PYY剂型，在所有喷雾之间在30。C/65。/。相对湿度下具有高于约90%的PYY回收率。46.根据权利要求39和43所述的PYY剂型，其还包含具有净单个离子化部分的pH緩冲剂，所述离子化部分具有所述制剂的pH的2个pH单位内的pKa。47.根据权利要求46所述的PYY剂型，其中所述緩沖剂具有净单个具有所述制剂的pH的1个pH单位内的pKa的离子化部分。48.根据权利要求47所述的PYY剂型，其中所述制剂选自谷氨酸盐、乙酸盐、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、乳酸盐、甲酸盐和乙醇酸盐。49.根据权利要求48所述的PYY剂型，其还包括谷氨酸盐或乙酸盐缓冲剂。50.根据权利要求48所述的PYY剂型，其中所述pH为约5.0或更低。51.根据权利要求48所述的PYY剂型，其中所述pH为约4.4或更低。52.根据权利要求48所述的PYY剂型，其中所述pH为约4.0或更低。53.根据权利要求48所述的PYY剂型，其中所述pH为约3.8或更低。54.才艮据权利要求40和45所述的PYY剂型，其中PYY为PYY(3-36)。55.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约20/xg/ml。56.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约100jng/ml。57.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约200/xg/ml。58.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约1mg/ml或更高。59.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约2mg/ml或更高。60.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约6mg/ml或更高。61.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中PYY的浓度为至少约10mg/ml或更高。62.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中所述剂型适合鼻内给药以达到约2/xg至约1000所述PYY的剂量。63.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中所述剂型适合鼻内给药以达到约100Mg至约600/xg所述PYY的剂量。64.根据权利要求54所述的PYY剂型，其中所述能与水混溶的极性有机溶剂是乙醇且所述阳离子螯合剂是EDTA。65.根据权利要求64所述的PYY剂型，其中乙醇的配方浓度为至少约0.1%(v/v)。66.根据权利要求64所述的PYY剂型，其中乙醇的配方浓度为至少约l%(v/v)。67.根据权利要求64所述的PYY剂型，其中乙醇的配方浓度为至少约10%(v/v)。68.根据权利要求64所述的PYY剂型，EDTA在所述制剂中的浓度为至少约1mg/mL。69.70.71.72.73.根据权利要求72所述的PYY剂型，其中吐温-80在所述制剂中以至少约1mg/mL存在。74.根据权利要求72所述的PYY剂型，其中吐温-80在所述制剂中以至少约10mg/mL存在。75.根据权利要求72所述的PYY剂型，其中吐温-80在所述制剂中以至少约50mg/mL存在。76.根据权利要求64所述的PYY剂型，其还包含防腐剂。77.根据权利要求76所述的PYY剂型，其中所述防腐剂是氯丁醇或苯扎氯铵。78.用于增强对哺乳动物的Y2受体结合肽粘膜递送的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的所述肽、能与水混溶的极性有机溶剂和阳离子螯合剂。79.用于增强对哺乳动物的PYY功能类似物粘膜递送的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的所述类似物、能与水混溶的极性有机溶剂和阳离子螯合剂。80.根据权利要求78或79所述的制剂，其中所述能与水混溶的极性有机溶剂是乙醇且所述阳离子螯合剂是EDTA。81.根据权利要求80所述的制剂，其中乙醇的配方浓度为约1%(v/v)或更高。82.根据权利要求80所述的制剂，EDTA在所述制剂中的浓度为至少约1mg/mL。83.根据权利要求80所述的制剂，其还包括表面活性剂。84.根据权利要求83所述的制剂，其中所述表面活性剂是吐温-80。85.根据权利要求84所述的制剂，其中吐温-80在所述制剂中以50mg/mL或更低存在。86.根据权利要求80所述的制剂，其还包括緩冲盐。87.根据权利要求80所述的制剂，其中所述pH为约5.0或更低。88.根据权利要求80所述的制剂，其还包含防腐剂。89.根据权利要求88所述的制剂，其中所述防腐剂是氯丁醇或苯扎氯铵。90.用于增强对哺乳动物的Y2受体结合肽粘膜递送的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的所述肽、约2%(v/v)乙醇、约10mMEDTA、约1%吐温-80,且pH约4.0。91.用于增强对哺乳动物的PYY功能类似物粘膜递送的药物制剂，其中所述制剂包含治疗有效量的所述类似物、约2。/。(v/v)乙醇、约10mMEDTA、约1%吐温-80，且pH约4.0。92.根据权利要求90或91所述的制剂，其还包含防腐剂，其中所述防腐剂是氯丁醇或苯扎氯铵。93.根据权利要求92所述的制剂，其还包括緩冲盐，其中所述緩沖盐为乙酸盐或谷氨酸盐。全文摘要本发明描述了用于增强对哺乳动物的肽YY(PYY)的粘膜递送的药物制剂。描述了适合用于多次使用的PYY剂型。该PYY剂型包含含有水性药物制剂的瓶子和有效鼻内给予该制剂的致动器。所述制剂包含治疗有效量的PYY、控制pH的缓冲剂、能与水混溶的有机溶剂以及阳离子螯合剂。所述PYY剂型在储存多于约5天后显示至少90％的PYY回收率。文档编号A61K47/16GK101262888SQ200680033237公开日2008年9月10日申请日期2006年7月10日优先权日2005年7月11日发明者亨利·R·康斯坦丁诺,安东尼·P·西莱诺,安玛丽·斯陶德·科恩,玛丽·S·科勒佩申请人:纳斯泰克制药公司