专利名称：：钙结合肽的制作方法钙结合肽相关申请的交叉参考本申请要求2005年9月28日提交的美国临时申请号60/722,071的优先权，以其全文纳入本文作参考。技术背景特异性结合钙化表面的化合物包括小荧光分子，如四环素、钙黄绿素和茜素和大钙结合蛋白，如牙质磷蛋白(DPP，常指磷蛋白)和牙釉蛋白。DPP是在牙质胞外基质中发现的主要非胶原蛋白之一，长时间认为它与牙质矿化时羟磷灰石(HA)成核有关(Lee1980;Lussi1988;Veis1998;Hao2004)。人DPP衍生自牙质唾液磷蛋白的蛋白水解性裂解(DSPP)。人DPP是主要由大量Asp-Ser-Ser氨基酸重复组成的高度易弯曲的(Cross2005)、高度磷酸化的(Lee1980)蛋白质(Gu2000)。已经广泛研究了DPP的生化特性。这些研究揭示了固定化DPP能显著增加羟磷灰石成核速率，而该作用在DPP溶液或去磷酸化DPP中未曾见到。此外，据显示，高浓度DPP能抑制HA晶体生长(Lussi1988;Veisl998;Saito2000)。发明概述在某些实施方式中，提供了一种包含一种或多种l丐结合肽的组合物。这些钙结合肽含有三氨基酸重复序列(X-Y-Z)n，其中X是天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丙氨酸或谷氨酰胺，Y和Z是丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸，n是从1到40的数，其中所述钙结合肽结合磷酸钙。在某些实施方式中，所述该结合肽含有约l-40个三氨基酸重复(即，n=l-40)，长度约为3-120个氨基酸。在某些此类实施方式中，n是从2到8的数。在某些实施方式中，X是天冬氨酸，Y和Z是丝氨酸。在某些实施方式中，所述钙结合肽可以具有SEQIDNO:12-15中任一所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，本文提供的所述钙结合肽可以连接一种或多种结合配体(conjugate)或基团(moiety)。在某些实施方式中，所述结合配体或基团是可检测标记，例如荧光团、生色团、亲和标签、抗原标签、放射性标记或自旋标记。在另一些实施方式中，所述结合配体或基团是肽、蛋白质、糖、核酸、脂类、有机化合物、无机化合物或有机金属化合物。在另一些实施方式中，所述结合配体或基团是治疗剂，例如抗癌或抗菌的药剂或化合物。在所述结合配体或基团是抗菌剂的某些实施方式中，所述抗菌剂可以是抗菌肽序列。在某些实施方式中，所述结合配体或基团可以经由氨基酸接头与钙结合肽相连。在某些实施方式中，提供了通过施用含有本文公开的钙结合肽的组合物来治疗对象中以牙齿去矿化为特征的牙齿缺损的方法。如本文所述，施用这些钙结合肽能够诱导牙齿表面再矿化。在某些实施方式中，提供了通过施用含有本文公开的钙结合肽的组合物来治疗对象中以骨去矿化或骨密度降低为特征的骨缺损的方法。如本文所述，施用这些钙结合肽能够诱导骨表面再矿化和提高骨密度。在某些实施方式中，提供了确定以牙齿去矿化为特征的牙齿缺损的方法，包括施用含有本文公开的钙结合肽的组合物，其中所述肽与可检测标记结合，然后用肉眼或检测设备检测所述标记物。如本文所述，这些钙结合肽能够选择性或优先结合呈现去矿化的牙齿部位。在某些实施方式中，提供了确定对象中以骨去矿化为特征的骨缺损的方法，包括施用含有本文公开的钙结合肽的组合物，其中所述肽与可检测标记合，然后用肉眼或检测设备检测所述标记物。如本文所述，这些钙结合肽能够选择性或优先结合呈现去矿化的骨部位。在某些实施方式中，提供了确定对象中除骨或牙齿以外的其它组织中钙化的方法，包括施用含有本文公开的钙结合肽的组合物，其中所述肽与可检测标记结合，然后用肉眼或检测设备检测所述标记物。如本文所述，这些钙结合肽能够结合钙和草酸钙。可以采用所述方法确定的钙化包括，例如，动脉斑块、肾结石和籽骨。在某些实施方式中，所述肽可用来治疗这些不当钙化，这可以通过例如将所述肽与治疗部分结合并利用所述肽将治疗部分靶向所述钙化部位。在某些实施方式中，提供了含有本文公开的所述钙结合肽的组合物，用来治疗以牙齿去矿化为特征的牙齿缺损或以骨去矿化为特征的骨缺损。在某些实施方式中，这些组合物可用于检测或诊断以去矿化为特征的牙齿或骨缺损。在某些实施方式中，提供了包括含有本文公开的所述钙结合肽的组合物的试剂盒。在某些实施方式中，所述试剂盒包括使用或施用说明。在某些实施方式中，这些试剂盒可用来治疗以牙齿去矿化为特征的牙齿缺损或以骨去矿化为特征的骨缺损。在某些实施方式中，这些组合物可用于检测或诊断以去矿化为特征的牙齿或骨缺损。附图简要说明图1:DSS和DSS变体肽与羟磷灰石和牙齿表面的结合亲和力。A-C:浓度范围为0-100)iM的荧光素标记肽与0.3mg羟磷灰石纳晶(比表面积二100m々g)共培育10分钟，接着离心除去羟磷灰石。根据AbS48。确定除去羟磷灰石前后混合物中肽的量。作等温线图，根据兰格缪尔方程式(Langmuir叫uation)进行拟合，得到反映肽对羟磷灰石表面亲和力的常数，Ka僮。D:人牙齿的矢状切片与12.5pM5(6)羧基荧光素标记6DSS肽共培育10分钟，接着漂清。通过采用蓝激光(A二488nm)和FITC发射滤光镜的共焦激光扫描显微镜(ConfocalLaserScanningMicroscopy,CLSM)观察牙齿表面结合的肽。左侧，浅色区牙质。右侧，深色区釉质。图2:6DSS肽结合矿化小鼠骨髓结节(MBMN)。使小鼠骨髓培养物生长到铺满，然后用2.5|iM错义对照肽或2.5)LiM6DSS处理3周。通过采用FITC滤镜组的荧光显微镜进行培养物造影。A:6DSS处理培养物的矿化MBMN的亮视野图像。B是(A)中所示视野的荧光图像。中央结节块的强染色(浅染)表明被荧光标记6DSS肽结合。C是错义对照肽处理培养物的矿化MBMN的亮视野图像。D是(C)中所示视野的荧光图像，显示对照肽未结合MBMN，样品中也没有自发荧光。图3:固定化8DSS肽与CaHP04的相互作用。将链霉亲和素包被的聚苯乙烯珠子与结合有生物素的8DSS(A和C)或未结合生物素(B)和(D)共培育。洗漆珠子，在PBS+lmMCaCl2+lmMNaHP04溶液中培育12天，然后成像。A是积累在包裹有DSS的珠子周围的非晶磷酸钙聚集体的亮视野显微照片。大的磷酸钙聚集全部与一个或多个珠子相关联。B是有代表性的生物素封闭珠子(无DSS肽)的亮视野图像。没有明显的沉淀与这些珠子相关联。C是相差显微照片，显示DSS包被珠子的外围更多有序排列的磷酸钙累积(请注意观察对象的球形中央)。如(D)中所示，在对照样品(生物素封闭，无DSS肽)中看不到这些现象。定标线条二4pm。图4:用DSS肽使牙齿表面再矿化。对取出的人牙齿进行矢状切片，用19%EDTA凝胶去矿化1小时，接着浸入去离子水中，超声处理除去多余碎屑。如以下所述处理样品，然后通过扫描电子显微镜(ScanningElectronMicroscopy)成像。定标线条=50pm。A是去矿化的对照样品。B:用8DSS处理1小时，漂清，用夸尔脱敏剂(QuellDesensitizer)再矿化。C:仅用缓冲液处理，用夸尔脱敏剂再矿化。D:不做处理，用夸尔脱敏剂再矿化。图5:羟磷灰石在釉质(上组图)和牙质(下组图)面上的成核。如实施例6所述并如图中所标明的制备和处理各表面，接着采用扫描电子显微镜成像。上组(上两行)表示釉质样品，而下组(下两行)表示牙质样品。各组中上面那行表示处理前未去矿化的样品，下面那行表示经磷酸处理去矿化的样品。显示的是扫描电子显微照片，定标线条二10pM。左栏成核和晶体生长前未经任何处理的样品。中栏成核和晶体生长前只接触缓冲液的样品。右栏成核和晶体生长前接触12.5pM8DSS肽的样品。晶体生长反映早期成核作用。图6:8DSS肽结合的组织特异性和它对矿化状况的依赖性。如实施例9所述，将去矿化和非矿化人牙齿样品与12.5pM5(6)-羧基荧光素标记8DSS肽共培育，漂洗各切片，通过CLSM成像。左分图显示8DSS肽与去矿化组织的结合模式。该肽主要结合去矿化釉质(E)，鲜有结合牙质(D)。在非去矿化样品中观察到的模式正相反，即该肽主要结合牙质(D)而鲜有或完全不结合釉质(E)。两种情况下，标记为DEJ的牙质-釉质交界线均很清晰。图7:骨矿化。在共享组织实验方案(sharedtissueprotocol)下，观察死后取得的大鼠股骨。将样品去矿化、漂洗和超声降解除去碎屑。用8DSS肽处理试验样品1小时，清洗，如实施例8所述用夸尔脱敏剂(QudlDesensitizer)再矿化，然后通过扫描电子显微镜(ScanningElectronMicroscopy)成像。所示为SEM图像。上未处理样品，显示出骨表面完全被矿物质覆盖。中去矿化样品，显示出失去矿物质层后暴露出的哈弗斯骨管(Haversiancanal)。下经8DSS和夸尔脱敏剂(QuellDesensitizer，一种CaCyK2HP04水溶液)处理的骨，显示矿质层重建。图8:显示DSS肽和变体结合的组织特异性的荧光显微照片。未去矿化，成人牙齿接触12.5pM5(6)-羧基荧光素-标记肽，彻底漂洗，CLSM成像。对每一切片采集多次扫描，自动组合成反映一个13X13mm区域的组图，大多数情况下这足以涵盖整个切片。每个切片所用的肽标示于分图下方，各分图中，牙齿的方向是根部朝向图像上方，冠部朝下。组织层标示如下RTD二根尖牙质；CPD二髓周牙质；MD=外层牙质；P二髓腔壁；DEJ二牙质-釉质交界；E二釉质；BE二基部釉质；CE二外层釉质；CL二龋损伤；PB二牙周骨。图9:显示DSS肽和变体特异性结合牙齿中的龋损伤的荧光显微照片。未去矿化，成人牙齿接触12.5pM5(6)-羧基荧光素标记肽，彻底漂洗，CLSM成像。分别对每个切片优化显微镜和照相机机的配置。每幅分图显示齿切片上包括龋损伤在内的一个区域。每幅分图右侧的白线表示牙齿表面的位置，箭头指示被染色的损伤位置。图10:结合各类无机磷酸盐沉淀的8DSS肽的相对水平。100mM磷酸钠(pH7.5)分别与100mM的MgCl2、CaCl2、MnCl2、CoCl2、NiS04、CuS04和SrCV溶液组合。制成每种磷酸盐的浓度约为0.5。/。(w/v)的含有12.5pM5(6)-羧基荧光素标记8DSS肽的悬液。室温下培育IO分钟后，洗涤样品和通过荧光显微镜成像。如实施例11中所述，用GIMP(www.gimp.org)测量象素强度值来估计各样品中无机磷酸盐颗粒的荧光染色强度。用归一化的荧光值在此作图。X轴上所示为各种无机磷酸盐沉淀。Y轴上所示为相对荧光强度值。图11:8DSS肽结合草酸钙。如实施例12所述，使草酸钙晶体接触12.5pM8DSS肽，洗涤和通过荧光显微镜成像。左侧图显示未染色的草酸钙晶体。亮视野图(上)证实存在晶体，而同一区域的荧光图(下)证实在这些条件下草酸钙不发生可见荧光。右侧图显示用5(6)-羧基荧光素标记的8DSS肽染色的草酸钙晶体。亮视野图(上)证实存在晶体，同一区域的荧光图(下)显示标记肽造成晶体的明亮染色。发明详述本发明以下描述的目的仅是说明本发明的各类实施方式。同样地，不能认为所讨论的具体变型是对本发明范围的限制。本领域技术人员明显可知，在不超出本发明范围时，可以进行各种等价替换、改变和变型，和应该理解这类等价实施方式也包括在本文中。縮写本文采用了以下縮写BE，基部釉质；CE,外层釉质；CL，龋损伤；CLSM，共焦激光扫描显微镜；CPD，髓周牙质；D，牙质；DEL牙质-釉质交界；DPP，牙质磷蛋白；E，釉质；DSPP，牙质唾液磷蛋白；HA，羟磷灰石；MD，外层牙质；MIC，最小抑制浓度；P，髓腔壁；PB，牙周骨；SEM，扫描电子显微镜；RTD，根尖牙质；X，激发波长。采用下列标准系统对氨基酸进行縮写。氨基酸单字母縮写三字母縮写丙氨酸AAla精氨酸RArg天冬酰胺NAsn天冬氨酸DAsp半胱氨酸CCys谷氨酸EGlu谷氨酰胺QGin甘氨酸GGly组氨酸HHis异亮氨酸IHe亮氨酸Leu赖氨酸KLys甲硫氨酸MMet苯丙氨酸FPhe磷酸丝氨酸SPSep脯氨酸PPro丝氨酸sSer苏氨酸TThr色氨酸WTrp酪氨酸YTyr缬氨酸VVal除非另外标示有前缀"D"，如，D-Ala，本文中所述肽内氨基酸和氨酰残基的a碳原子的立体化学是天然或"L"构型。钙结合肽目前所提供的使脱钙组织直接再矿化的化合物主要由各种游离的或与蛋白质结合的磷酸钙和/或氟化钠制剂所构成。生物组织中钙化的增强通常是通过操控骨和牙齿前体细胞的细胞信号传导，或采用钙强化食品、膳食补充剂或其它富含游离的或结合蛋白质的钙的处理来提高整体钙浓度。之前的研究描述一种通过使得在牙齿表面重聚磷酸钙来加强再矿化的制剂(参见美国专利号6,780,844)。然而，尚未证明过通过直接或特异性地将钙靶向到表面来增强钙化。本发明揭示了一系列由DPP中的Asp-Ser-Ser基序演变而成的小分子结合肽。据显示，这些肽能紧密和特异性结合到磷酸钙表面。此外，据显示，这些肽能使磷酸钙向这些表面聚集，还可充当结合配体使得荧光标记物与钙化表面结合而不计较这些表面的磷酸化状态。本发明公开的肽，通称为DSS肽，由不同数目和/或不同组合的DPP的三氨基酸Asp-Ser-Ser基序或其变体构成。可以采用的三氨基酸重复的例子包括但不限于Asp-Ser-Ser(DSS，SEQ.IDNO.1)、Glu-Ser-Ser(ESS，SEQ.IDNO.2)、Asp-Thr-Thr(DTT，SEQ.IDNO.3)、Glu-Thr-Thr(ETT，SEQ.IDNO.4)、Asn-Ser-Ser(NSS，SEQ.IDNO.5)、Asn-Thr-Thr(NTT，SEQ.IDNO.6)、Gln-Ser-Ser(QSS，SEQ.IDNO.7)、Gln-Thr-Thr(QTT，SEQ.IDNO.8)，和它们的变体。与上述重复序列不同，或在其之外，本发明公开的肽可以或还可以包含这些重复的一些小改变，包括但不限于Asp-Ser-Thr(DST，SEQ.IDNO.9)、Asp-Ala-Ala(DAA，SEQ.IDNO.IO)或Ala-Ser-Thr(AST，SEQ.IDNO.11)。可以化学修饰三氨基酸重复中的一个或多个氨基酸残基。例如，所述肽可以含有一个或多个羟基被通过引入磷酸基团而修饰的Ser或Thr残基。所述肽的长度可以从3到50个氨基酸以上不等。可以通过改变所述重复的组成和数目来控制本发明所述肽的钙化表面结合亲和力。例如，因为Asp-Ser-Ser(SEQ.IDNO.1)是所有受试重复中亲和力最高的，加入一个或多个该序列的重复能提高肽的结合亲和力。还可以通过增加三氨基酸重复的数目来提高肽的结合亲和力。含有超过6次重复的肽通常比那些重复较少的肽表现出更高的亲和力。在某些实施方式中，本发明所述的肽对羟磷灰石的结合亲和力(Ka)可以大于15，000M'1。在某些实施方式中，该结合亲和力可以大于50,000M"，在其它实施方式中，大于100，000M—、在其它实施方式中，大于200,000M—1和在其它实施方式中，大于300,000IVf1。在某些实施方式中，所述肽可以含有一个或多个并非三氨基酸重复序列组份的其他氨基酸。例如，在某些实施方式中，肽的重复部分可以结合具有其它功能的氨基酸序列，例如抗菌肽序列，如2c-4、PL135或b-34肽序列。在某些实施方式中，肽的重复部分可以经接头序列(例如三甘氨酸序列)结合其它氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明所述肽含有序列(X-Y-Z)n，其中X是选自天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丙氨酸和谷氨酰胺的氨基酸，Y和Z是选自丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸和它们的衍生物的氨基酸，n是l-20之间的数。在某些实施方式中，n是l-15之间的数，在其它实施方式中，n是l-10之间的数和在某些实施方式中n是3-8之间的数。据显示，取决于不同处理条件，本发明所述钙结合肽能在去矿化釉质上以及去矿化和非去矿化牙质上诱导磷酸钙晶体的生长。同样，据显示，所述肽能引起骨再矿化。因此，在某些实施方式中，含有本发明所述钙结合肽的组合物可用于通过使浮游磷酸钙颗粒向钙化表面聚集来增强矿化。这些肽可结合钙化表面和/或浮游磷酸钙团粒。同时结合钙化表面和浮游团粒提高了钙化表面附近的磷酸转浓度，由此增强了所述表面的再矿化。通过调节所述肽的大小和结合亲和力，可以改变结合到所述表面的钙的数量。在某些实施方式中，牙齿的再矿化引起牙质小管完全或部分闭塞。含有本发明所述钙结合肽的组合物可用来再矿化牙齿，预防或减缓牙齿去矿化，治疗牙齿损伤、缺陷、疾病或异常，在牙齿表面或表面以下形成矿物质层，改变牙齿的矿物质密度，例如提高或降低矿物质密度，或封闭牙齿的某个位点。同样，可以用这些组合物来治疗骨缺陷、损伤、肿瘤、异常生长、疾病或骨损失，促成骨表面或表面以下形成矿物质层，或改变(例如提高或降低)骨密度。在这些实施方式中，将含有一种或多种前述钙结合肽的组合物用于一个或多个侵袭骨位点或其附近。在某些实施方式中，可以采用本文所述含有钙结合肽的组合物来治疗骨以外组织和器官中的钙化、石灰损伤，或矿化缺陷，包括动脉斑块。本文采用的疾病的"治疗"或"处理"可以指预防或修复某种状况、延迟或延缓所述状况的的发生或发展速率、降低发展成为所述状况的风险、预防或延缓发展产生所述状况的相关症状、减少或消除所述中止的相关症状、使所述状况完全或部分消退，或以上所述的组合。在某些实施方式中，含有本文所述钙结合肽的组合物可用来将所需化学基团或颗粒特异性附着到钙化表面如骨或牙齿的那些表面。与目前再矿化牙齿表面的方式令口腔充满了含有游离或与蛋白质结合的钙的制剂不同，这些化合物使磷酸钙团粒特异性粘附到牙齿表面，因此提高了局部钙和磷酸盐浓度，提高了磷酸钙结合到牙齿去矿化区域的概率。目前对钙化组织损伤或疾病的药物治疗依赖于将感兴趣的治疗化合物的游离溶液直接(局部)或通过全身给药施用到目标表面区域周围，希望其中部分可以与钙化表面相互作用。在某些实施方式中，含有本文所述钙结合肽的组合物可用于针对不当钙化的原位或体内试验。例如，这些组合物可用来诊断、鉴别、定位或治疗非骨组织和器官中的钙化、石灰损伤或矿化缺陷，包括例如动脉斑块、肾结石或籽骨中的。目前用来检测钙化的试验包括染料结合方法、放射性同位素掺入、x-射线透射分析和定量化学分析。这些方法都有某些缺点。染料结合方法中，样品要接触钙螯合荧光染料，如四环素、钙黄绿素或茜素，然后观察染料向感兴趣的组织内掺入。尽管染料可体内引入，但对信号进行观察仍然需要切取感兴趣的组织。用银离子(来自Kossa染色法)处理固定的组织可用来确定钙化位点，但是这个方法不能体内应用，还受到显著背景染色的干扰。放射性同位素如"Ca掺入为测定体内钙化位点和速率提供了精确和定量的信息，但缺点在于使实验对象受到高水平电离辐射的作用。X-射线透射分析能提供高空间分辨率，可以用于活动物，但不能在X-射线图像中可见的各种其它要素中特异性地鉴别出钙沉淀。体外定量化学分析钙沉淀能有效确定存在的矿物质的类型和数量，但这些方法非常费力，并会丢失有关组织的位置和结构的信息。在某些实施方式中，含有本发明所述钙结合肽的组合物可以用荧光或者其它方法标记，用作观察感兴趣组织中钙化区域的改良手段。这些肽合成方便且产量高，相比目前所用的方法，它们更安全、毒性更低和更易于使用。可以改变肽的序列或组成来改变肽对具体组织或类型表面的相对亲和力。这能使所述肽区分牙质、釉质、骨和其它钙化组织或表面，并区分健康和患病组织。这使这些化合物可以用作检测钙化组织中的损害或病理损伤的探针。这些可以单独使用，也可与其它检测钙化的已知方法联用。目前的药结合荧光团仅限于能在螯合药离子的同时保留其荧光的那些，相比之下，本文所述肽可与任何荧光团相连。这大大扩展了可用来标记钙化表面的颜色，由此能够针对每个实验精确制定发射波长和检测技术。通过将所述肽与荧光、比色、放射性、NMR活性或其它染料或指示剂结合，再用这些结合物处理生物样品，无需固定或对样品造成严重干扰就可以定量观察原位和体内的钙化程度。由于它们的高度特异性和快速结合，这类结合物的背景染色低于Kossa/银离子染色方法。可与钙结合肽相连的标记种类繁多，这提供了极其灵活的结合条件和检测方法，从而简化了生物、生物医药、生物技术、环境和其它研究，并提高了质量。本文所述肽极有前景用作诊断剂，因为，与目前主要依赖于目测或放射性观察的确定钙化组织损伤、感染、肿瘤或其它损害的方法不同，本文所述肽可不依赖于人眼地检测这类事件。据显示，本文所述DSS肽能特异性靶向去矿化釉质和非去矿化牙质。具体说，这些肽表现出优先结合龋齿损伤的能力。此外，各种DSS肽变体表现出精确靶向牙齿结构分部例如根尖牙质、基部釉质、外层牙质、外层釉质和釉表面的能力。可以给予对象含有与各种可检测部分例如荧光、比色、放射性、NMR活性或其它染料或指示剂结合的f丐结合肽的组合物，从而靶向牙齿的特定部位，并确定那些表现出去矿化或其它损伤的牙齿部位。可以选择肽的氨基酸组成从而靶向特定的组织或组织损伤类型。利用这些肽能够特异性确定损伤部位，包括那些曾因太小而看不见或者因为其它原因而模糊不清的部位，大大增加了诊断这些部位的便利性和精确性。同样，在某些实施方式中，含有本文所述钙结合肽的组合物可以用作X-射线、计算机断层摄影术或磁共振成像的造影剂。在某些实施方式中，含有本文所述钙结合肽的组合物可用将治疗化合物靶向骨、牙齿或其它钙化组织的表面。例如，肽可以与抗菌化合物、骨和牙齿发育调节剂或任何其它可以与肽结合的化合物结合。治疗化合物与这些肽之一的结合物可用来使治疗化合物集中到钙化表面，从而提高化合物的局部浓度和增强效力。通过使所述化合物集中到感兴趣的组织，这些肽能够降低达到目标效果所需的化合物浓度。增强效力之外，将治疗化合物特异性靶向感兴趣的组织能使非靶点组织免遭化合物可能造成的损害。可以调节所述肽的组成或长度使它能特异性靶向组织的受损或患病部位。在某些实施方式中，含有本文所述钙结合肽的组合物可用来治疗微生物感染，例如细菌感染。在这些实施方式中，所述肽可以与抗菌肽，例如2c-4、b-34或PL-135肽(SEQIDNO分别是26、30和32)相连。基于本文公开的钙结合肽选择性结合钙或磷酸钙的能力，含有这些肽的组合物可以组合成探测器来检测饮用水、废水、工业溶液、食品、饮料、研究用品或任何需要确定钙存在的溶液中的钙。同样，这些组合物可在例如工业、制造业、医药业、研究、家庭生活或个人应用中用来控制矿物质钙沉淀。此外，可以采用这些组合物在例如细胞培养物、组织、实验动物、实验人对象或其它研究性应用中用来确定各种钙类矿物质的存在或其数量。本文公开的钙结合肽可以直接或间接地与一种或多种结合配体或基团共价或非共价地相连。这类结合配体包括但不限于其它肽、多肽、蛋白质、糖、核酸、脂质、有机物、无机物、有机金属化合物、治疗部分，例如抗癌或抗菌剂。可以与本文公开的钙结合肽相连的结合配体或基团的其它例子包括可检测标记，例如荧光团、生色团、亲和标签、放射性标记或自旋标记。此外，可以用放射性或NMR活性同位素代替钙结合肽内或与之相连的结合配体或基团内的一个或多个原子。钙结合肽和结合配体或基团之间的连接可以发生在所述肽的氨基末端，所述肽的羧基末端或肽的内部位点。在某些实施方式中，所述肽可以经由氨基酸接头例如三甘氨酸接头序列与结合配体或基团相连。可以经由本领域任何已知方法施用含有本文所述钙结合肽的组合物。这类方法包括但不限于口服、胃肠道外、透皮、气雾给药或经肠。可以采用牙膏、凝胶、漱口水(mouthwash)、漱口水(mouthrinse)、药丸、药片、胶囊、凝胶或粉末来实现"口服"给药。或者，可以将所述组合物掺入食物、口香糖、糖果或饮料中。"胃肠道外"通常与注射相关联，包括眶下、输注、动脉内、囊内、心内、皮内、肌肉内、腹膜内、肺内、脊柱内、胸骨内、膜内、子宫内、静脉内、蛛网膜下、囊下、皮下、透粘膜或透气管注射。可以采用局部乳膏、软膏或药膏，或利用透皮贴实现"透皮"施用。在那些采用所述组合物治疗牙病或改变牙齿特性如矿物质密度的实施方式中，可以将它施用到受侵袭或靶点牙齿位点或其附近。同样，在釆用所述组合物来治疗骨的某种状况或用来改变骨特性的那些实施方式中，可以将它施用到受侵袭或靶点骨位点或其附近。提供以下实施例更好地说明所提出的发明，不应该解释成限制本发明的范围。就具体材料的提及而言，仅是出于说明的目的，而不是限制本发明。不运用本发明能力和不背离本发明范围时，本领域技术人员还可以开发等效手段或试剂。应该理解在本文所述的过程中可以造出许多仍然术语本发明范围内的变体。本发明人的意图是这类变体也包括在本发明范围内。实施例实施例l:DSS肽与羟磯灰石钙的结合产生含有二重(2DSS，SEQIDNO:12)、四重(4DSS，SEQIDNO:13)、六重(6DSS，SEQIDNO:14)或八重(8DSS，SEQIDNO:15)Asp-Ser-Ser(DSS)重复的四种DSS肽。用荧光素标记，将各种浓度的标记肽(0-100nM)与定量(0.3mg)的比表面积为100m2/g羟磷灰石纳晶(伯克利先进生物材料公司(BerkeleyAdvancedBiomaterials，Inc.))混合。培育样品IO分钟，接着离心除去羟磷灰石。根据480nm(荧光素标记的吸收峰)处的光谱吸收来测定除去羟磷灰石前后混合物中的肽量。通过将终吸收(Af)和初(Aj)吸收与初浓度(Po)的比值进行比较[P结合二(Af/Aj)Po]来计算肽结合量。生成图表说明平衡时，每1112羟磷灰石表面积的肽结合量和未结合肽的浓度。得到的等温线根据兰格缪尔等温线(Langmuirisotherm,x/m=(KAN最高C叫)/(1+KACeq))(Calis1995)进行拟合，用结合亲和力(KA)和亲合力(N^)共同描述分子的结合活性。KA表示肽对羟磷灰石表面的亲和力常数。该方程式中，x/m表示每单位羟磷灰石表面积结合的肽的摩尔量，N船表示最高表面浓度(摩尔/m2)，Ceq表示平衡时未结合肽的摩尔浓度。兰格繆尔等温线描述符合以下条件时分子与表面的结合情况1)所有结合位点对肽具有相同的亲和力；和2)肽将在表面上形成单层但不能积累更多层数。兰格缪尔等温线与实验数据拟合良好说明上述条件成立，可以用这些亲和力常数比较各肽。如图1A所示，各种肽对羟磷灰石的结合亲和力随着DSS重复次数的增加而增加(2DSS，KA=57,000M";4DSS，KA=94,000Nf';8DSS，KA=300,000M—1)。对多种变体DSS肽进行试验来确定各种氨基酸改变对结合亲和力的影响。这些变体肽包括1位含有较长侧链的四重复肽(4ESS，SEQ.IDNO.16)、2位和3位含有更多空间位阻羟基的3种四重复肽(4DTT，SEQ.IDNO.17;4NTT，SEQ.IDNO.18禾口4ETT，SEQ.IDNO.19)、I位缺少带电基团的四重复肽(4NSS，SEQ.IDNO.20)、1位缺少带电基团的八重复肽(8ASS，SEQ.IDNO.21)和两种2位和3位缺少羟基的八重复肽(8DAA，SEQ.IDNO.22;8NAA，SEQ.IDNO.23)。通过将这些变体中每一种的结合等温线与同样大小的含DSS肽的等温线比较，确定除去负电荷残基(4NSS，KA=4I,000M";4NTT，KA=18，000M-；8ASS，K^nO'OOONT1)(图1B、1C)或用苏氨酸或丙氨酸代替丝氨酸残基(4DTT,Ka-161,000M";4ETT，Ka二61,000M";8DAA，KA^300,000M")(图1B、1C)显著降低结合活性。同时换掉1位酸性残基和丝氨酸导致结合亲和力几乎完全丧失(4NTT;8NAA，KA=20，000M")(图1B、1C)。用谷氨酸残基代替天冬氨酸残基仅略微降低结合亲和力(4ESS，ka-81,000M力(图1B)。这些数据表明，酸性残基和丝氨酸重复对这些肽对羟磷灰石表面的亲合力至关重要。DSS被认为是产生羟磷灰石结合活性的优选重复序列，而所有变体肽在体外均显示出显著降低的羟磷灰石结合活性。还试验了一种部分磷酸化的四重复DSS肽(4DSPS，SEQIDNO:25)，结果显示其具有与4DSS相似的羟磷灰石结合亲和力(ka-83，000M"，比4DSS的Kf94,000M—1)。然而，所述4DSpS肽在HA表面上的结合位点明显更多(4DSpS的NjM二1.2xlO—7摩尔/m2，4DSS的则为5.8xl()-8摩尔/m2)。实施例2:DSS肽与牙齿的结合-为了证明DSS肽能结合生物组织，将人牙齿矢状切片在pH7.0的含有10mMNaCl和50mMHEPES的12.5|iM5(6)羧基荧光素标记6DSS肽溶液中培育10分钟。对照样品的制备不用肽。洗涤经处理的样品，采用蓝色激光(激发波长(A)^488nm)和FITC发射滤光镜的共焦激光扫描显微镜(CLSM)成像。强荧光染色表明6DSS结合到牙齿表面(图1D)。假处理的对照切片未呈现荧光。肽结合仅限于牙质(图1D，左侧浅色区)，在釉质区未见到结合(图1D，右侧深色区)。实施例3:DSS肽与矿化的小鼠骨髓结节的结合将小鼠骨髓培养物在DMEM+10°/。FBS中培养至铺满，然后用含有50pg/mL抗坏血酸和4mM3-磷酸甘油的2.5|iM5(6)-羧基荧光素标记6DSS或2.5hM5(6)-羧基荧光素标记肽#3-1(错义对照肽，SEQ.IDNO.24)的aMEM+10%FBS溶液连续处理3周。通过采用FITC激发/发射滤光镜组的荧光显微镜进行培养物成像，获得亮视野图像和荧光图像。在DSS处理样品中观察到强染色，如图2B中中央结节块中浅色所表示。对照样品中未观察到染色(图2C、2D)，表明，在小鼠骨髓培养物中，6DSS肽特异性结合矿化结节。实施例4:固定化DSS肽引起的磷酸钙(CaHPCXt)聚积将链霉亲和素包被的平均直径为4pm的聚苯乙烯珠子(球技术公司(SpherotechP丄.C.))与结合有生物素的8DSS肽或无结合生物素共培育。用PBS洗涤珠子除去未结合肽(对照珠上未结合的生物素)，在PBS+lmMCaCl2+lmMNaHP04溶液中培育12天，然后成像。如图3A所示，几乎所有DSS肽包被的珠子均结合成非晶磷酸钙沉淀的大聚集体。所有磷酸钙大聚集体均与一个或多个珠子相关联。比较可见，生物素封闭的对照样品中，几乎所有珠子均未聚集也未与沉淀相关联(图3B)。实验期间，多个肽包被珠子被更多有序排列的矿物质层所覆盖(代表性地如图3C所示)，而无包裹/生物素封闭的对照珠子均没有积累矿物质(图3D)。实施例5:用DSS肽使降解的牙质表面再矿化用摘取的人牙齿制作矢状切片(Accutom-50，CA-231钻石刀刃)，用19°/。乙二胺四乙酸(EDTA)凝胶去矿化1小时，接着浸入去离子水中超声破碎除去多余碎屑。用含有12.5pM8DSS肽的50mMHEPES缓冲液(pH7.0)溶液、仅缓冲液(不含肽)处理样品，或不处理。l小时以后，用夸尔脱敏剂(QuellDesensitizer，潘醇技术公司(Pentrontechnologies,LLC))，一种氯化钙和磷酸钾的水溶液构成的再矿化溶液，再矿化样品15分钟。彻底漂洗样品，然后用扫描电子显微镜(SEM)成像。经DSS处理的牙质样品积累了一层连续的磷酸钙沉淀，完全闭塞了牙质小管(图4B)。假处理和未处理的样品呈现出的矿物质沉淀积累水平要低得多，牙质小管仍然完全暴露(图4A、4C、4D)。实施例6:DSS肽引起的羟磷灰石在牙齿釉质和牙质上的成核为了确定将DSS用于各种组织的制备物是否能促进最终引起组织再矿化的HA成核，将矢状切片的成人牙齿(取自普通临床)用Streurs砂轮抛光，为成核实验作准备。半数切片用35%磷酸去矿化15分钟，然后用去离子水彻底漂洗。另一半不做处理。然后对所有样品进行5分钟声处理除去切割和打磨和/或去矿化产生的多余碎屑。用12.5pM8DSS的50mMHEPES缓冲液(pH7.0)溶液、纯缓冲液处理样品，或者不做处理。然后将样品在模拟体液(SBFn)中浸4小时，以促进羟磷灰石(HA)晶体成核。成核步骤后，将样品浸入不含镁和碳酸氢盐的溶液(SBFg)中以允许成核后的HA晶体生长。表l显示了SBFn和SBFg溶液与血浆的组成比较。将两种溶液的pH调节到6.8。培养晶体，放大成核晶体以便通过SEM进行观察。表1:SBFn和SBFg溶液组成:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>非去矿化、未处理和缓冲液处理的釉质表面仍然基本上为非晶态的，表明鲜有或完全没有晶体生长(因此，鲜有或完全没有成核)(图5，上面两行)。然而，在接触8DSS肽的去矿化釉质中观察到显著的晶体生长(表明早期和强势的成核作用)(图5，下面两行)。这表明，DSS肽能特异性识别去矿化釉质并使羟磷灰石在去矿化釉质表面成核和生长。未处理或缓冲液处理样品中，非去矿化牙质表面出现一定程度的晶体生长。然而，最显著的生长，也就是最早期和最强势的成核作用发生于用8DSS肽处理的样品中(图5，下面两行)。虽然实施例5证明了DSS肽的去矿化能力结合现有再矿化方案能在去矿化牙质上使磷酸钙沉积成足以闭塞牙小管的厚层，这些结果表明，釆用稍微不同地处理可以使晶体成核主要发生在非去矿化牙质上。因此，根据采用的具体处理方案，可以用DSS肽在去矿化牙质上沉积磷酸钙层或在完全矿化表面上引起强有效的羟磷灰石晶体生长的成核作用。这意味着DSS肽可用于，例如，治疗由于牙小管暴露所引起的牙齿敏感，再矿化与机械性牙质缺损相关的龋齿，或修复破裂的牙表面。实施例7:DSS肽结合的组织特异性将人牙齿矢状切片与0.5MEDTA共培育15分钟去矿化，或保留非去矿化状态。然后使样品在含有12.5nM5(6)-羧基荧光素标记8DSS、10mMNaCl和50mMHEPES的pH为7.0的溶液中培养10分钟。对照样品在不含肽的情况下培养。然后漂洗切片，通过采用相同激光和照相机设置的CLSM成像。在去矿化样品中，主要在釉质中观察到DSS肽结合(图6，左侧画面，E)，在牙质中观察到极少或完全没有(图6，左侧画面，D)。与实施例1中讨论的结果一致，在非去矿化样品中观察到相反的模式，其中肽主要与牙质结合，而与釉质极少结合或完全不结合(图6，右侧画面，比较D和E)。在去矿化和非去矿化样品中，均显示清晰的牙质-釉质交界线(图6，DEJ)。DSS肽特异性结合去矿化牙齿切片釉质部分而与非去矿化釉质不表现出显著结合的能力与实施例6中DSS肽能特异性识别去矿化釉质和使羟磷灰石在去矿化釉质表面成核生长的发现一致。实施例8:骨的再矿化为了确定在牙齿组织中观察到的再矿化结果是否能推广到骨，在共享组织实验方案下，观察死后大鼠的股骨。用19%EDTA凝胶对实试验样品去矿化1小时，接着浸入去离子水中，超声破裂除去多余碎屑。然后用8DSS肽处理试验样品1小时，进行漂洗，如实施例5所述，一半样品用夸尔脱敏剂(QuellDesensitizera，潘醇临床技术公司(PentronClinicalTechnologies,LLC))再矿化。然后，如实施例5所述为进行SEM准备样品后成像。在未处理大鼠股骨中观察到组织表面覆盖了一层连续的矿物质(图7，上图)。在去矿化样品中清楚地暴露出哈弗斯骨管(图7，中图)。然而，用8DSS和夸尔脱敏剂处理后，矿物质表面被恢复，可以观察到小管闭塞(图7，下图)。因此，DSS肽能够促进骨和牙齿组织的再矿化。实施例9:DSS肽在人牙齿中的组织特异性结合为了研究DSS肽结合牙齿组织的组织特异性，使人牙齿切片接触DSS肽及其变体，然后如实施例2所述CLSM成像。实验所用的肽是8DSS、8ASS、8DAA、8NAA、4DSS、4ESS、4NSS、4DTT、4ETT、4NTT禾H6DSS。对普通临床所得人牙齿矢状切片进行抛光，然后在含有10mMNaCI和50mMHEPES，pH7.0，和相应5(6)羧基荧光素标记肽(12.5pM)溶液中培育10分钟。不含肽情况下制备对照样品。彻底清洗处理后的样品，通过采用蓝激光(入二488nm)和FITC发射滤光镜的CLSM成像，对每份样品采用相同的照相机和显微镜设置。对每个切片，采集多次扫描结果自动组合成反映一个13X13mm区域的组图，大多数情况下这足以涵盖整个切片。与实施例1中的结合亲和力结果所表明的一样，含有序列(DSS、的肽与牙齿表面呈现最高水平的结合，而6DSS和8DSS显示出最高的染色水平。这些实验的结果如图8所示。8DSS、6DSS和4DSS主要结合外层牙质，牙质-釉质交界线清洗锐利，与根尖牙质或基部釉质低水平或不结合，与外层釉质或釉质表面无可测知的结合。在牙髓腔边缘也可以看到显著结合。8ASS、4ESS和4NSS显示类似的模式，但结合水平较低。8DAA呈现出相反的结合模式，其主要结合牙质根尖和外层釉质，以及牙质-釉质交界处和髓腔壁。8DAA呈现与外层牙质、髓周牙质或基部釉质极少或不结合。4DTT和4ETT表现出与4DSS和4ESS类似的结合模式，但水平低得多。8NAA表现出与任何健康组织均极少结合，但确实与样品中存在的龋损伤有些许结合(参见下面的实施例10)。4NTT表现出与样品上的牙周骨片段强结合，但与健康牙齿组织的结合水平非常低。这些结果提示可采用特定的肽高度特异性地靶向牙齿的特定各层。实施例10:DSS肽优先结合牙齿中的龋损伤处.-对含有由去矿化釉质组成的明显龋损伤的人牙齿切片抛光，采用实施例2所述的方法使之接触5(6)-羧基荧光素标记DSS肽及其变体。彻底洗涤所述切片，用蓝激光(入二488nm)和FITC激发滤光镜CLSM成像，根据每种样品调整显微镜和照相机200680035799.1说明书第16/19页设置以获得最佳的信号检测结果。根据图像确定健康组织比龋齿组织中肽结合的相对水平。4ESS、4NSS、8DAA、8NAA、4ETT、4DSS、8ASS、8DSS和6DSS均表现为高度特异性地结合龋损伤，极少或不结合周围健康釉质(图9;其中一些损伤也可以在图8中见到)。未试验其它肽，但根据这些结果可以推定它们也将与龋损伤结合。这些肽中，4ESS、4NAA、8DSS、6DSS、4DSS、8DAA和8ASS在龋损伤处呈格外强烈染色，而与周围釉质的结合相对较弱(通常完全没有)。这些肽能够结合龋损伤部位而极少或不结合完全矿化的健康釉质表面表明，这些肽可用来鉴别龋齿或牙齿损伤。由于它们具有在釉质降解位点再矿化的能力(实施例6)，它们还可以用来在釉质降解位点如龋齿或损伤位点引发再矿化而不会在康组织表面引起不当成核作用。实施例ll:DSS肽选择性结合磷酸钙通过将100mM磷酸钠(pH7.5)与100mM镁、钙、锰、钴、镍、铜和锶的氯化物或硫酸盐溶液(分别是MgCl2、CaCl2、MnCl2、CoCl2、NiS04、CuS04和SrCl2)组合制成上述金属离子的磷酸盐。收集新鲜沉淀，用去离子水洗涤2次，干燥保存。为了分析肽结合，将每种磷酸盐在含有50mMHEPES(pH7.0)、10mMNaCl禾卩12.5jiM5(6)-羧基荧光素标记8DSS肽的溶液中制成浓度约为0.5。/。(w/v)的悬液。室温下每种样品均培育10分钟，然后用含50mMHEPES(pH7.0)和10mMNaCl的溶液洗涤2次，再悬于同样的缓冲液中，通过荧光显微镜成像。对每种样品均采用同样的显微镜和照相机设置，以便样品间的定量比较。每种样品均采集单个视野中的亮视野和荧光图像。如下所述，通过GIMP(http://www.gimp.org)测量像素强度来估测每种样品中无机磷酸盐颗粒的荧光染色强度。根据亮视野图像选取荧光图像中对应于磷酸盐聚集体的区域，记录这些区域的象素强度。将这些与记录下的背景区域(已知不含有任何聚集的区域)强度作比较。然后将这些数据代入以下方程式相对荧光二(I染色/I背景)X(I染色一I背《)，即染色强度(I染色)与背景强度(I背景)之比乘以染色强度和背景强度间之差的绝对值(为了对染色水平非常低的样品中的高噪声水平进行校正)。尽管在NiHP04聚集中可见低水平染色，最高水平的染色见于CaHP04和化学相似的SrHP04的聚集体中(图10)。这表明，DSS肽的结合不是一种非特异性地与无机沉淀发生表面粘附的现象，而是包涵了与磷酸钙的高度选择性相互作用，甚至到了它们能区分磷酸钙和磷酸锶沉淀的程度。实施例12:DSS肽结合草酸钙用之前所述的方法(Wang2006)制备草酸钙。用去离子水洗涤草酸钙晶体，然后再悬于含有50mMHEPES(pH7.0)、10mMNaCl和12.5pM5(6)-羧基荧光素标记8DSS肽的溶液中。室温下培育所述晶体悬液10分钟。然后离心收集所述晶体，用含50mMHEPES(pH7.0)和10mMNaCl的溶液洗涤两次，如实施例11所述用荧光显微镜进行观测。标记肽的存在导致草酸钙聚集体被显著染色(图11)。因为草酸钙是肾结石(肾石病)中最普遍存在的化合物(Coe2005)，这些结果表明DSS肽可在诊断或治疗中用于靶向肾结石，且或许能够可能可以调节肾结石的生长。实施例13:DSS肽-抗菌化合物融合物的抗菌活性为了确定DSS肽是否适合作为靶向部分将治疗化合物递送到矿化表面，合成含有N末端(DSS)4、(DSS)s或(DSS)6肽、三甘氨酸(GGG)接头和2c-4抗菌肽(SEQIDNO:26)的肽(J.He，未出版)的肽。这些融合蛋白的序列分别如SEQIDNO:27-29所示。对之前所述的试验(Qi2005)进行修改后用于确定这些肽的抗厌氧浮游菌(anaerobicplanktonicbacteria)的抗菌活性。简单来讲，将转糖链球菌OS^e/tococcz^/7wtow)菌株UA159细胞在Todd-Hewitt(TH)肉汤培养液中稀释成1X105cfu/mL，与悬浮羟磷灰石纳晶(伯克利先进生物材料公司，0.03%w/v)或等体积去离子水(对照样品)混合。将等分试样转移到96孔板(Fisher)内。然后将所述肽制成梯度稀释液，将它们加入细菌。通过测量细胞悬液在600nm波长处的吸光度确定培育约24小时后能完全抑制细菌生长的肽浓度，由此决定每种肽的最低抑制浓度(MIC)。肽2c-4显示出自身抗浮游转糖链球菌的MIC为2pM。当结合(DSS)4形成肽4DSS-2c4时，它的MIC提高到52.5)LiM，效力显著丧失，且不受加入0.03。/。(w/v)羟磷灰石的影响。然而，据实施例1所示，(DSS)4对羟磷灰石的亲合力比具有更多DSS重复的肽低，可能，2c-4肽的高正电荷与(DSS)4部分的高负电荷相互作用从而造成一定程度的活性抑制。但是，该肽仍保留了一些抗菌活性。与之不同的是，将(DSS)6与b-34抗菌肽(SEQIDNO:30)结合(J.He，未出版)所得肽6DSS-b-34(SEQIDNO:31)的抗菌活性比它的亲本肽高(6DSS-b-34的NCC=3.UiM，b-34的则为5.6nM)。尽管加入0.03%HA会稍微降低6DSS-b-34的抗菌活性，得到的MIC二12.5pM仍反映了可观的抗转糖链球菌活性。另外，肽PL-135(SEQIDNO:32)(R.Lehrer，未出版)单独在培养液中的抗浮游转糖链球菌MIC二21pM。将该肽与(DSS)5结合所得肽5DSS-PL135(SEQIDNO:33)，单独在培养液中时，将其抗转糖链球菌的抗菌活性降低到〉17(^M。往培养液中加入0.03%羟磷灰石悬液使该活性恢复大半，将MIC降低到42.5pM。这显示当与DSS肽结合时，其它化合物可以保留它们的活性。此外，这证明了可以容易地产生仅在存在DSS肽靶点时才具有显著活性的化合物，提示了一种开发仅对转化(骨、牙齿等)表面有活性而在其它环境中无活性的化合物的简便方法。这类化合物代表了在提高矿化组织疾病治疗方法的安全性和有效性方面的重大进步。综上所述，上述只是以说明本发明的各种实施方式为目的。上面讨论的具体变型不应解释为限制本发明的范围。本领域技术人员明显知道，在不超出本发明范围时可以作出各种等效替换、改变和变型，应该理解这类等效实施方式也为本文所包括。本文引用的所有参考文献均以其全文纳入本文作参考。参考文献1.Calis，S.等1995.PharmRes12:1072-1076.2.Coe，F丄.等2005.JClinInvest115:2598-2608.3.Cross,K丄等2005.JPeptRes66:59-67.4.GulK.等2000.EurJOralSci108:35-42.5.Hao,J.等2004.Bone34:921-932.6.Lee,S.L.等1980.lntJPeptProteinRes16:231-240.7.Lussi，A.等1988.ArchOralBiol33:685-691.8.Qi,F.等2005.FEMSMicrobiolLett251:321-326.9.Sako,T.等2000.JBoneMinerRes15:1615-1619.10.Veis,A.等1998.EurJOralSci106副刊1:234-238.11.Wang,L.等2006.Langmuir22:7279-7285.权利要求1.一种含有一种或多种钙结合肽的组合物，其中，所述钙结合肽各自含有序列(X-Y-Z)n，其中X是选自天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丙氨酸或谷氨酰胺的氨基酸，Y和Z是选自丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的氨基酸，n是1-40的数，其中所述钙结合肽结合磷酸钙。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述一种或多种钙结合肽的长度约为3-100个氨基酸。3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，n是2-8的数。4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，X是天冬氨酸。5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，Y和Z是丝氨酸。6.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述钙结合肽的氨基酸序列示于SEQIDNO:12。7.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述钙结合肽的氨基酸序列示于SEQIDNO:13。8.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述钙结合肽的氨基酸序列示于SEQIDNO:14。9.如权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述钙结合肽的氨基酸序列示于SEQIDNO:15。10.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述钙结合肽还含有结合配体。11.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述结合配体选自荧光团、生色团、亲和标签、抗原标签、放射性标记或自旋标记。12.如权利要求IO所述的组合物，其特征在于，所述结合配体选自肽、蛋白质、糖、核酸、脂类、有机化合物、无机化合物或有机金属化合物。13.如权利要求10所述的组合物，其特征在于，所述结合配体是抗癌或抗菌化合物。14.如权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述抗菌化合物是抗菌肽。15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述抗菌肽经由氨基酸接头序列与所述一种或多种钙结合肽相连。16.—种治疗以对象牙齿去矿化为特征的牙齿缺损的方法，包括给予权利要求1所述的组合物，所述给予能引起牙齿再矿化。17.—种治疗以对象骨密度降低为特征的骨缺损的方法，包括给予权利要求1所述的组合物，所述给予能引起骨密度提高。18.—种确定以牙齿去矿化为特征的牙齿缺损的方法，包括给予权利要求1所述的组合物，所述组合物中的所述钙结合肽与可检测标记相连，所述钙结合肽优先结合去矿化牙齿表面。19.一种确定以骨去矿化为特征的骨缺损的方法，包括给予权利要求1所述的组合物，所述组合物中的所述钙结合肽与可检测标记相连，所述钙结合肽优先结合去矿化骨表面。20.—种包括权利要求1所述组合物的试剂盒。全文摘要本文公开了一类包含肽序列(X-Y-Z)<sub>n</sub>的化合物，其中X是选自天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丙氨酸和谷氨酰胺的氨基酸，Y和Z是选自丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸和它们的衍生物的氨基酸。这些化合物具有特异性地紧密结合钙化表面的特性，使它们适用于各种用途包括使牙齿和骨骼表面再矿化，诊断骨骼和牙齿缺损，治疗骨骼和牙齿缺损和体外和体内分析钙化沉积的存在和部位，和用于需要确定、定位或处理钙化的产业、合成、医学、牙科学和研究用途。文档编号A61K38/00GK101272801SQ200680035799公开日2008年9月24日申请日期2006年9月27日优先权日2005年9月28日发明者B·吴,B·拉瑟福德,D·亚布拉夫,E·哈格曼,R·埃克特,S·特塔迪斯,坚何,施文元,齐凤霞申请人:加利福尼亚大学董事会