专利名称：：用于毛发生长的外用组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种促进毛发生长的外用组合物，尤其涉及一种含有4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物和一种或多种选自由金钟柏种子、维生素B5衍生物(泛酰醇衍生物)、獐牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、腺苷、甘油十五垸酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二烷基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯所组成的组中的物质的促进毛发生长的外用组合物。所述组合物通过毛囊附近的血管舒张作用平稳地供给毛发生长所必需的营养物质，以促进毛发生命周期中的毛发生长终期向毛发生长初期转变以及使毛发生长初期维持很长时间。
背景技术：
：在当今社会，由于遗传和环境因素导致对赋予美感具有重要意义的毛发减少而使一些男性和女性经历着精神痛苦，因此，关于治疗这些男性和女性的毛发的减少和促进毛发生长的各种研究在世界范围内很活跃。人的毛发约为100,000-150,000根，每个人的毛发生长并在经历多轮毛发生长周期后脱落。毛发的生长经历三个不同的时期毛发生长初期、毛发生长中期和毛发生长终期。所述毛发生长初期是毛发的毛发生长初期，随后就是毛发结构被维持并且代谢过程变慢的毛发生长中期。在毛发生长中期后的毛发生长终期是毛发乳头变小及毛囊退化从而导致毛干易于脱落的时期。毛发的生命周期因多种因素的变化而变化，所述因素包括营养状况、药物史、遗传、体格、激素分泌和衰老。在现有的预防毛发减少的治疗试剂中，据报道由美国食品和药品管理局(USAFDA)批准的外用药米诺地尔(minoxidil)除了作为典型的钾通道开放剂(opener)具有血管舒张功能外，它还具有使毛发从毛发生命周期的毛发生长终期诱导到毛发生长初期并继续保持诱导的毛发生长初期的活性(BritishJournalofDermatology.2004;150:186-194)。此外，一种由美国食品和药品管理局批准的称为非那雄胺(Finasteride)(Propecia;MSD)的口服药能抑制5-ot-还原酶以抑制作为潜在的雄性激素的二氢睾酮的生成并作为毛发生长刺激物上市。然而，由于该药品昂贵并且具有某些副作用，因而其使用己受到限制。因此，仍然需要一种与现有技术开发的两种主要药物相比具有毛发生长促进效果但没有副作用的药品。作为嘧啶衍生物的米诺地尔(2,4-二氨基-6-哌啶基-吡啶-3-氧化物)促进毛发生长的机制还不清楚。仅仅知道所述化合物的促进毛发生长的效果是由于钾通道开放的效果导致的血管舒张导致的，所述钾通道开放的效果在开发该药时被发现。从那时开始，报道了各种嘧啶衍生物和新的化合物具有一般的钾通道开放效果及由此导致的毛发生长效果(JInvestDermatol2005124(4):686-94)，并且提交了涉及各种嘧啶氧化物的衍生物的毛发生长效果的技术(如，US5，034，387和US4,945,093)。以前的关于嘧啶氧化物衍生物的毛发生长效果的专利包括很宽范围的衍生物结构，其中包括已知的米诺地尔药物的结构，这些衍生物的毛发生长效果被认为一般。而且，以前的专利没有公开米诺地尔的毛发生长效果(如血管舒张效果)的数据。
发明内容因此，本发明的发明人发现在嘧啶氧化物衍生物中，在国际化妆品成分字典(InternationalCosmeticIngredientDictionary)中描述的具有连接到嘧啶氧化物的基本化学结构的位置6上的吡咯烷的化合物除了具有巻曲和拉直毛发的功能外，还具有钾通道开放效果和促进控制毛发生命周期的重要的皮肤乳突细胞的增殖。因此，本发明的发明人将该化合物应用到小鼠，以检验该化合物对毛发生长的影响，结果发现4-吡咯垸-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物通过对钾通道开放抑制药物的拮抗作用而显示钾通道开放效果，并具有促进皮肤乳突细胞增殖的效果和促进在具有毛发生长终期的小鼠的毛发生命周期从毛发生长终期转到毛发生长初期，从而实现本发明。本发明提供了一种外用组合物，该组合物含有以4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物作为活性成分从而抑制普通的男性式或女性式毛发减少并促进毛发的生长。本发明的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物用作外用制剂的活性成分并促进毛发的生长。因此，本发明的外用组合物含有4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物作为活性组分，因此具有钾通道开发效果，从而产生预防毛发减少并促进毛发生长的效果。图1是表示4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物的钾通道开放效果的示意图2是表示4-吡咯垸-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物具有促进皮肤乳突细胞增殖的效果的示意图3显示4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物具有促进小鼠毛发生长效果。具体实施例方式本发明涉及促进毛发生长的外用组合物，该组合物含有4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物作为活性组分，因此具有钾通道开放效果和促进毛囊细胞增殖的效果。在下文中将详细地描述本发明。本发明中使用的4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物由下式1表示，属于嘧啶氧化物衍生物，用作化妆品成分，其在体内的效果不清楚。[式1]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>当本发明的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物用于促进毛发生长时，4-吡咯垸-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物的用量取决于使用目的和其制剂，以所述组合物的总重量为基准，4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物的用量为0.001-10重量％。考虑到4-吡咯院-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物的溶解性和其制剂的稳定性，其用量优选为0.001-5重量％。通常，如果4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-1-氧化物在特定制剂中不溶解或具有稳定性问题时，它可能聚集成晶体或者可能被修饰，因此导致变色或者变味。本发明的外用组合物除含有所述的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物外，还可以含有一种或多种选自由金钟柏种子(T7z^aesemen)、维生素B5衍生物(泛酰醇衍生物)、獐牙菜提取物extract)、薏苡仁(Cw'dsemen)、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、腺苷、甘油十五烷酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈(sawpalmetto)、二垸基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯所组成的组中的物质。以该组合物的总重量为基准，该选择性的成分在组合物中的含量优选为0.005-5重量％。可用在本发明的泛酰醇衍生物通常是泛酸衍生物，泛酸被发现是酵母的必需生长因子，在中性溶液中是稳定的，其不利之处在于，在酸性或碱性溶液中泛酸会被破坏，尤其不耐热。由于这些原因，在本发明中使用作为维生素前体的并转化为维生素B5的D-泛酰醇、D-乙基泛酰醇或者D-泛酸钙，因为它们具有更稳定的结构。维生素B5的效果通常归结为基于D-泛酰醇，据报道它在皮肤和毛发中的多种效果来自于以下三方面的效果l)能渗透到皮肤和毛发相对较深的部位；2)能与皮肤结合；和3)在皮肤和毛发中转变成泛酸以产生维生素B5的效果。在化妆品领域中，当0-泛酰醇以0.1-5%的量使用时，由于它的高渗透能力将被深深地送入到真皮层，又由于它的吸湿能力，它将通过影响真皮层中水的状况和分布而具有保湿效果。在1943年，H.Pfeltz间接发现泛酰醇被吸收并转化为泛酸，他还报道用10%的D-泛酰醇以药膏的形式各处理大鼠和小鼠6周，结果发现与口服的情况相比，血红蛋白和毛发减少的现象得到更有效的改善(PfaltzH.，Vitaminforschung,1943,13:236-249)。此外，还报道了泛酰醇对处于外伤和烧伤的愈合中皮肤表皮细胞的影响(GartnerF.,Dtsch.Zahnarztl.Z,1955,10，813-5，CortesseJ.,G.M.deFrance,1968,75,4171-4)。当将泛酰醇应用到毛发时，它将渗透到毛干和毛发根部，从而以弹性膜的形式存在于毛发中以及以薄层的形式包围在毛发周围以保持毛发中的水分并保护毛发不受外界干燥环境的影响。可用在本发明的金钟柏种子是东方(西方)金钟柏(T7^'aon'e"to/^(occWe"to&))(柏科(CV^ace"e))的种子，长卵形或长圆柱体形，长为3-5mm和直径为2-3mm。金钟柏种子具有平静情绪和使情绪高昂的功效，它还能平缓肠的运动(东方研究绪论(IntroductiontoOrientalStudies))。已知它含有大量的脂肪油。据Dong-Eui-Bo-Gam(韩国传统药物教科书)毛发部分的描述，乌头(JcomYwwcaw7/c/2ae/0、蔓荆子(P"c^Fn^"附J和金钟柏种子的混合物已知能使长出新的胡须和毛发。尤其是，Dong-Eui-Bo-Gam公开了将所述混合物用到光秃的部分使光秃的部分长出了新的毛发，所述混合物是通过将各20g的乌头、蔓荆子和金钟柏种子粉碎，并将这些粉末与韩国乌鸡油(Koreanblack(Ogol)chickenoil)混合，将混合物干燥并密封保存在陶瓷器中100天，从陶瓷器中取出保存的混合物(Dong-Eui-Bo-Gam,HairSection,NamsandangPublishingCo.)。此外，金钟柏种子在两种动物模型中表现出5a-还原酶抑制活性，并显示出高的毛发生长活性，因此，可以通过控制雄性激素的转变有效地用于治疗毛发减少(JournalofDermatologicalScience(2003)31,91-98)。此外，可用在本发明的獐牙菜提取物是日本獐牙菜(Swwtoyopom'caM^'"oJ提取物，在日本被称之为"森部里提取物(Senburiextract)"。在韩国，可用在本发明的獐牙菜提取物的药名为"丹-雅克(Dang-yak)"，科学名为曰本獐牙菜提取物的"森普洱(sseun-pul)"。这种提取物是一种传统药，在日本广泛用于治疗腹部疼痛、皮肤感染、昆虫(insects)和感冒。獐牙菜提取物通常含有2-4%的獐牙菜苦甙(swertiamarin)、当药醇甙(swertianolin)、红白金花内酯(erythrocentaurin)、当药醇(swertianol)、石竹素和龙胆碱(gentianine)。已知獐牙菜提取物含有包括獐牙菜苦甙在内的配糖作为主要成分，据报道獐牙菜提取物与来源于动物和植物的斑蝥(cantharide)和辣椒酊(capsicumtincture)—样能提高皮肤温度并促进毛发生长。类胆碱能药物提高皮肤温度的生理效果或者血管舒张效果能刺激维持皮肤功能的血液流动。ShujiIwao的文章("关于毛发生长刺激剂的前景(aboutprospectofhairgrowthstimulants)"，FragranceJournal(1996))描述了獐牙菜提取物是血液循环促进剂，血液循环促进剂是商业毛发生长刺激剂的主要成分。可以含在本发明组合物中的其它成分包括薏苡仁、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、8腺苷、甘油十五垸酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二烷基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯。只要这些组分没有安全问题，其使用没有任何特定的限制。此外，它们的作用机制没有任何问题。然而，这些成分用作商业毛发生长刺激剂以发挥血管舒张功能并激活毛囊细胞时，它们可以采用可商购的原材料按照已知的方法制备。含有4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物作为活性成分的外用组合物可以制成润发露(hairtonic)、去屑护发素(scalptreatment)、洗发香波、润发乳(haircream)、通用软膏(generalointment)、润肤露(skinlotion)、牛奶润肤露、眼霜、营养霜、按摩霜(massagecream)、清洁霜(cleansingcream)、清洁泡沫或者清洁粉，但本发明的范围不局限于这些。为了获得由于上述的血管舒张作用而产生的毛发生长促进效果，本领域的技术人员没有特殊的困难就可以适当地选择并使用所述的4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物。在下文中将参考实施例和测试例更详细地描述本发明。然而应当理解的是这些实施例只用于说明的目的而不限制本发明的范围。实施例1:4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物的钾通道开放效果将5。％的胎牛血清和100IU青霉素加入到含有酚红的DMEM培养基中，并将培养基加入到24孔多孔培养板中。将小鼠源成纤维细胞NIH3T3细胞系以浓度为10000细胞/孔悬浮到24孔多孔培养板中。将钾通道拮抗剂l-丁基-3-对甲苯磺酰基脲加入到培养基中，使其终浓度为2.5mM，将4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-1-氧化物(？1"0(16筋3,Italy)稀释100倍后加入到培养基中，使其浓度为lpM、50iliM和100pM，并将培养基在37。C下孵育3天。孵育后，向微滴定板的每孔中加入200|al的0.2%的MTT((3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物))溶液，将培养基在37'C下继续培养3天。然后将生成的甲臜(formazane)溶解在DMSO(二甲亚砜)中。用微孔板读数器在570nm测量溶解的甲臜的吸光度。4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物在每一个浓度都抑制了l-丁基-3-对甲苯磺酰基脲的钾通道拮抗作用，以促进NIH3T3的增殖。化合物的与对照组(100。^)相比的促进结果表示在图1中。在图1中，对照组是没有用钾通道拮抗剂l-丁基-3-对甲苯磺酰基脲处理的组，负对照组是只用l-丁基-3-对甲苯磺酰基脲处理的组。从图1中可以看出，4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物没有因为具有钾通道开发效果而表现出与对照组相同水平的毛发生长促进效果，但表现出高于仅用l-丁基-3-对甲苯磺酰基脲处理的负对照组的生长促进效果。实施例2:对皮肤乳突细胞的促进效果的试验将培养在含有2%的胎牛血清的DMEM(Dulbecco，sModifiedEagle'sMedia)的大鼠源皮肤乳突细胞以浓度为1000细胞/孔悬浮在96孔多孔培养板中，将各10|ag/ml的作为正对照组的米诺地尔和4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物加入到培养基中。此外，将各10(ag/ml的金钟柏种子、维生素B5衍生物(泛酰醇衍生物)、獐牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、腺苷、甘油十五烷酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二垸基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯与所述4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-1-氧化物一起加入到培养基中。然后将培养基在37t:下孵育48小时。孵育后，向微滴定板的每孔中以50)iil的密度加入0.2X的MTT((3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑溴化物))溶液，将培养基在37。C下继续培养4小时。然后将生成的甲臜溶解在DMSO(二甲亚砜)中。用微孔板读数器在570nm测量溶解的甲臜的吸光度。将测试组的检测结果与只用DMSO溶液处理的对照组相比，以测定含有4-吡咯垸-2，6-二氨基嘧啶-l-氧<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>从上表1中可以看出，本发明的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物对乳突细胞增殖的能力与米偌地尔对乳突细胞增殖的能力相同。在用4-吡咯垸-2,6-二氨基嘧啶-1-氧化物与十六种中的每一种物质共同处理的细胞组中，促进细胞增值的能力高于单独用4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物处理的组的促进细胞增值的能力。此外，按照与上述相同的方式还检测了以0.1、l和10ppm不同的浓度的本发明的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物对乳突细胞增殖的能力，将检测结果与只用DMSO溶液处理的对照组相比，以确定吸光度的相对差异。检测结果如表2所示。从表2可以看出，4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物对乳突细胞增殖的能力以剂量依赖方式增加。实施例3:4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物在小鼠中的毛发生长效果的试验除去47-53天的小鼠(C57BL/6)背部的毛发，并从这些小鼠中选出具有干净背部的小鼠。将选择的小鼠分成18组，每组由8只组成。小鼠组每天各供用150|_U的下述物质，持续21天，以测试这些物质的毛发生长效果负对照组由水/乙醇/l,3-丁二醇(5/3/2)组成；由通过将4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物以0.5重量％的浓度溶解于负对照载体中获得的组合物；和由通过将每一种下述物质以1重量％的浓度溶解于所述含4-吡咯垸-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物的组合物中所获得的组合物，所述下述物质分别是金钟柏种子、维生素B5衍生物(泛酰醇衍生物)、獐牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、腺苷、甘油十五垸酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二烷基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯。21天后，给小鼠拍照以观察小鼠的毛发生长状况，称量试验组的新长出的毛发的重量，并与负对照组的新长出的毛发进行比较。测得的结果列在表2和图3中。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>从上表2可以看出，与使用负对照组(水/乙醇/l,3-丁二醇)的组相比，本发明的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物使毛发增加约29mg。此外，还可以观察到，与单独使用4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物的处理组相比，将4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-l-氧化物分别与16种可以选择性地用于本发明的成分一起施用的组显示更高的毛发生长效果。从表2的结果可以看出，本发明的4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物作用于小鼠的毛发生长终期以刺激向毛发生命周期的毛发生长初期转变，从而促进了小鼠毛发的生长。在下文中，将根据所述的测试实施例给出各种制剂实施例。然而，对于本领域的技术人员来说，很显然，给出的制剂实施例用于说明本发明而不是为了限制本发明的范围。制剂实施例1:润发露表3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>制剂实施例3:毛发营养露(Hairnourishinglotion)表5<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>制剂实施例6:营养霜表8<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>制剂实施例7:按摩霜表9<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>制剂实施例8:润发头油(pack)表10<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>权利要求1、一种促进毛发生长的外用组合物，该组合物含有作为活性成分的4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-1-氧化物和一种或多种选自由金钟柏种子、维生素B5衍生物、獐牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物、尼克酰胺、维生素E衍生物、腺苷、甘油十五烷酯、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二烷基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯所组成的组中的物质。2、根据权利要求1所述的组合物，该组合物是一种能在细胞内水平舒张血管并促进血液循环的钾通道开放组合物。3、根据权利要求1所述的组合物，该组合物是一种能促进毛囊细胞增殖的组合物。4、根据权利要求1所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述4-吡咯烷-2,6-二氨基嘧啶-l-氧化物的含量为0.001-10重量％。5、根据权利要求1所述的组合物，其中，以所述组合物的总重量为基准，所述一种或多种选自由金钟柏种子、维生素B5衍生物、獰牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物、尼克酰胺、维生素E衍生物、腺苷、甘油十五垸酯、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二垸基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸节酯所组成的组中的物质的含量为0.005-5重量％。6、根据权利要求1所述的组合物，该组合物被配制成选自由润发露、去屑护发素、洗发香波、润发乳、通用软膏、润肤露、牛奶润肤露、眼霜、营养霜、按摩霜、清洁霜、清洁泡沫和清洁粉所组成的组中的形式。全文摘要本发明涉及一种促进毛发生长的外用组合物。尤其涉及一种含有以下物质的促进毛发生长的外用组合物，所述以下物质为4-吡咯烷-2，6-二氨基嘧啶-1-氧化物和一种或多种选自由金钟柏种子、维生素B5衍生物(泛酰醇衍生物)、獐牙菜提取物、薏苡仁、甘草提取物(甘草甜和甘草亭酸)、尼克酰胺(烟酰胺)、维生素E衍生物(维生素E乙酸酯等)、腺苷、甘油十五烷酯(PDG)、6-苄基氨基嘌呤、丁子香酚、盖屋棕榈、二烷基单胺衍生物、异黄酮、4-异丙基环庚二烯酚酮和烟酸苄酯所组成的组中的物质。因此，所述组合物通过毛囊附近的血管舒张作用平稳地供给毛发生长所必需的营养物质，以促进毛发生命周期中的毛发生长终期向毛发生长初期转变以及使毛发生长初期维持很长时间。文档编号A61K8/49GK101291651SQ200680038602公开日2008年10月22日申请日期2006年6月22日优先权日2005年10月17日发明者张利燮,朴元锡,朴录贤,白锡润,韩芝淑,黄在晟申请人:株式会社太平洋