纽兰格林突变体及其筛选方法与应用的制作方法

专利名称：：纽兰格林突变体及其筛选方法与应用的制作方法纽兰格林突变体及其筛选方法与应用相关申请的交叉引用本申请是2005年12月2日提出的序列号为11/293,879的美国专利申请的部分延续并要求该专利申请的优先权，该专利申请通过引用而完整地合并于此。发明领域本发明是主要涉及选择性激活ErbB受体的纽兰格林突变体。本发明提供了纽兰格林突变体以及筛选与使用这些突变体的方法。发明背景包含EGFR、ErbB2、ErbB3和ErbB4四个成员的表皮生长因子受体家族己被证明在包括细胞生长、分化和存活在内的多种细胞功能中发挥重要作用。这些受体为蛋白酪氨酸激酶受体，由细胞外配体结合结构域、跨膜结构域以及细胞质酪氨酸激酶结构域构成。多个受体配体己被发现，这些配体通过与受体结合而介导受体形成同源或异源二聚体。特定的受体组合导致不同方式的磷酸化、复杂的信号传递链和多种生物学功能，包括细胞增殖、凋亡防止以及对肿瘤细胞运动、黏附和侵入的促进。纽兰格林-1是ErbB3和ErbB4受体的配体。超过15种不同的纽兰格林-1异构体已被发现。根据其基本的表皮生长因子(EGF)类似区结构的差异，纽兰格林-1异构体可被分为两大类，即ct-类和卩-类。已经发现长度在50到64个氨基酸范围的纽兰格林-1的表皮生长因子类似区足以结合并激活这些受体。以前的研究表明纽兰格林-l卩(NRG-1(3)能以高亲和力直接与ErbB3和ErbB4结合。孤儿受体ErbB2具有预活化的构象从而有利于同ErbB3或ErbB4形成异源二聚体，而且比ErbB3或ErbB4形成同源二聚体的亲和力要高约100倍。异源二聚体受体在不同的细胞类型中起作用ErbB2/ErbB3在外周神经系统而ErbB2/ErbB4在心脏中起作用。神经发育中的研究显示交感神经系统的形成需要完整的NRG-1|3、ErbB2和ErbB3信号传递系统。靶向破坏NRG-1(3、ErbB2或ErbB4会引起心脏发育缺陷进而而导致胚胎死亡。最近的研究也突显了NRG-1(3、ErbB2和ErbB4在心血管发育以及成人正常心脏功能维持中的重要作用。NRG-1P己被证明能增强成人心肌细胞的肌小节的有序排列。在三种不同的心衰动物模型中短期使用重组NRG-1(3EGF类似区能显著改善或防止心肌功能的退化。更重要的是，NRG-ip显著地延长了心衰动物的生存时间。这些效果使NRG-1(3有望成为应对多种普通疾病导致的心衰的广谱治疗剂或先导化合物。但是，仍然需要NRG-lj3与其受体复合物的详细结构信息以设计用于治疗的NRG-ip突变体。利用同源建模、分子动力学模拟以及自由能计算的多种计算机分析被用来在原子水平揭示配体-蛋白和蛋白-蛋白相互作用。在基于结构的药物设计等广泛的生物物理课题中预测纯粹的配体-受体结合自由能是必要的。最近，一种新的计算机方法，分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法，被用来研究蛋白-蛋白相互作用。MM-PBSA法直接计算末态自由能以避免耗时的中间态模拟。这一方法结合了溶质的分子动力能量法和溶剂连续介质法以及估算总自由能的普通模式分析法。计算机丙氨酸扫描法也被用于研究蛋白-蛋白相互作用。发明概述在一种情况下，本发明提供了含有氨基酸序列如SEQIDNO:1所示肽段的纽兰格林-ip的一种多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l序列中不同的氨基酸，其中多肽突变体相对SEQIDNO:l肽段与ErbB3有更强的亲和力；其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第35位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第46位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些具体例子中，多肽突变体具有SEQIDNO:l所示氨基酸序列，其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第35位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第46位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在多肽突变体的一些例子中，在第25位残基所述不同的氨基酸为A;在第35位残基所述不同的氨基酸为A;和/或在第46位残基所述不同的氨基酸为A。在某些例子中，多肽突变体相对SEQIDNO:l的多肽与ErbB4减弱或相近的结合亲和力。在某些多肽突变体的例子中，在第25位残基所述氨基酸为A。在某些多肽突变体的例子中，在第35位残基所述氨基酸为A。在某些多肽突变体的例子中，在第46位残基所述氨基酸为A。本发明还提供了包含SEQNO:1的1-52位氨基酸残基的纽兰格林-lp的多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中的氨基酸不同的氨基酸，其中多肽突变体相对由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基组成的多肽与ErbB3有增强的结合亲和力，在第25位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第35位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第46位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在某些多肽突变体的例子中，在第25位残基所述不同的氨基酸是A;在第35位残基所述不同的氨基酸是A;和/或在第46位残基所述不同的氨基酸是A。在一些例子中，多肽突变体与ErbB4结合的亲和力与SEQIDNO:l中的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比有所减弱或相同。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第35位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第46位残基为A。本发明还提供了一种寡核苷酸，其包含的核苷酸序列编码的所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽或由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基组成的多肽相比，与ErbB3有较强的结合亲和力。本发明还提供了一种包含有效量的所述多肽突变体或编码该多肽突变体的寡核苷酸和药学上可接受的赋型剂的药物合剂，所述多肽突变体与SEQIDNO:1对应的多肽或由SEQIDNO:1中的1-52位氨基酸残基组成的多肽相比有更强的ErbB3结合亲和力。本发明还提供了一种包含该药物合剂的试剂盒。在一些例子中，该试剂盒还包含用该药物合剂通过激活ErbB2/ErbB3受体来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。本发明还提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物精神分裂症发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物使用包含有效量所述药物合剂的药物制剂。在一些例子中，所述哺乳动物是人另一种情况下，本发明提供了包含SEQIDNO:l所示氨基酸序列的纽兰格林-l卩的多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中不同的氨基酸；其中多肽突变体相对于SEQIDNO:l多肽有较低的ErbB4结合亲和力，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体具有SEQIDNO:l所示的氨基酸序列，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在多肽突变体的一些例子中，在第3位残基所述氨基酸是A。在一些例子中，多肽突变体相对于SEQIDNO:l对应的多肽有增强或减弱的ErbB3结合亲和力。在多肽突变体的一些例子中，在第3位残基所述不同的氨基酸是A。本发明还提供了包含SEQNO:l中l-52位氨基酸残基的纽兰格林-ip的多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸；其中多肽突变体相对于由SEQIDNO:l中1-52位氨基酸残基组成的多肽有较弱的ErbB4结合亲和力，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在多肽突变体的一些例子中，第3位残基为A。在一些例子中，多肽突变体相对于由SEQIDNO:l的1-52位氨基酸残基组成的多肽有较强或相同的ErbB3结合亲和力。在多肽突变体的一些例子中，第3位残基为A。本发明还提供了一种寡核苷酸，包含的核酸序列编码的所述多肽突变体相对于SEQIDNO:l对应的多肽或由SEQIDNO:l中1-52位氨基酸残基组成的多肽与ErbB4有较弱的结合亲和力。本发明还提供了一种包含有效量的所述多肽突变体或编码该多肽突变体的寡核苷酸和药学上可接受的赋型剂的药物合剂，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽或由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基组成的多肽相比有较弱的ErbB4结合亲和力。本发明还提供了一种包含该药物合剂的试剂盒。在一些例子中，该试剂盒还包含用该药物合剂经激活ErbB2/ErbB3来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。本发明还提供了一种预防、治疗或延迟哺乳动物精神分裂症发展的方法，包括给需要预防、治疗或延迟的哺乳动物含有有效量药物合剂的药物制剂。在一些例子中，哺乳动物是人类。另一情况下，本发明提供了含有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的纽兰格林-ip的多肽突变体，其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中该多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽相比有增强的ErbB4结合亲和力，而其中在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第29位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;禾口/或在第47位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，该多肽突变体具有SEQIDNO:l所示的氨基酸序列，且在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第29位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在该多肽突变体的一些例子中，其第16位残基为A;第29位残基为A;第31位残基为A;第43位残基为A;或第47位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有较弱或相似的ErbB3结合亲和力。在该多肽突变体的一些例子中，第31位残基为A。在该多肽突变体的一些例子中，第43位残基为A。在该多肽突变体的一些例子中，第47位残基为A。本发明还提供了由SEQNO:l中1-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-ip的多肽突变体，其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中该多肽突变体与由SEQNO:l的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比有增强的ErbB4结合亲和力；其中在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第29位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在该多肽突变体的一些例子中，第16位残基为A;第29位残基为A;第31位残基为A;第43位残基为A;和/或第47位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽相比有减弱或相似的ErbB3结合亲和力。在一些该多肽突变体的例子中，第31位残基为A。在一些该多肽突变体的例子中，第43位残基为A。在一些该多肽突变体的例子中，第47位残基为A。本发明还提供了包含氨基酸序列SEQIDNO:1的纽兰格林-1(3的多肽突变体，其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸；其中该多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有减弱的ErbB3结合亲和力但有相似的ErbB4结合亲和力，并且其中第33位残基为A。本发明还提供了由SEQNO:l中1-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-1(3的多肽突变体，其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸；其中该多肽突变体与由SEQNO:l中l-52位氨基酸残基构成的多肽相比有减弱的ErbB3结合亲和力但有相似的ErbB4结合亲和力，其中第33位残基为A。本发明还提供了一种包含编码所述多肽突变体的核酸序列的多核苷酸，该多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽或由SEQIDNO:l中1-52位氨基酸残基构成的多肽相比有增强的ErbB4结合亲和力。本发明还提供了一种包含有效量的所述多肽突变体或编码该多肽突变体的寡核苷酸和药学上可接受的赋型剂的药物合剂，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽或由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基组成的多肽相比有增强的ErbB4结合亲和力。本发明还提供了一种包含该药物合剂的试剂盒。在一些例子中，该试剂盒还包含用该药物合剂通过激活ErbB2/ErbB4受体来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。本发明还提供了一种预防、治疗或延迟个体病毒性心肌炎、扩张性(充血性)心肌症、心脏毒性、心衰、心肌梗死发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的个体含有效量的药物合剂的药物制剂。在一些例子中，所述哺乳动物是人类。在另一种情况下，本发明提供了一种筛选有增强的ErbB3结合亲和力的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-lp或其片段、ErbB3以及纽兰格林-1(3或其片段与ErbB3的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-ip或其片段与ErbB3形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l卩或其片段和ErbB3的部分总结合自由能(AGsub,wMtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-lp或其片段的丙氮酸替换突变体和ErbB3的部分总结合自由能(AGsubtotalalaninesubstitutedvariant)，所述丙氨酸替换突变体中纽兰格林-ip或其片段的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsub固=AGsubt。ta,w,peAGsubtotalalaninesubstitutedvariant;以及(f)选择使纽兰格林-ip或其片段和ErbB3的复合物的AAG^t。w为正值的丙氨酸替换突变体；由此发现一个与ErbB3有增强的结合亲和力的纽兰格林-ip的多肽突变体。本发明还提供了一种筛选选择性地与ErbB3有增强结合亲和力的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建建立纽兰格林-lJ3或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-lp或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-l(3或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法建立纽兰格林-lp或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-l(3或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性相关数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(△Gsubtotalwildtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。talalaninesubstitutedvariant)，所述丙氨酸替换突变体中纽兰格林-l卩或其片段的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubtotal=AGsubtotalwildtypeAGsubtotalalaninesubstitutedvariant;以及(f)选择J吏纽兰格林-lf3或其片段与ErbB3的复合物的AAGsubt。w为正值，同时使纽兰格林-1(3或其片段与ErbB4的复合物的AAGsubt。w为负值或零左右的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个选择性地与ErbB3有增强的结合亲和力的纽兰格林-ip多肽突变体。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体使纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物的AAGsubt。ta,为负值，就此发现了一个与ErbB3有增强的结合亲和力而与ErbB4有减弱的结合亲和力的纽兰格林-l(3多肽突变体。在某些例子中，选择的丙氨酸替换突变体使纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物的AAGsubtotal在零左右，就此发现了一个与ErbB3有增强的结合亲和力而与ErbB4结合亲和力不变的纽兰格林-lp多肽突变体。。另一种情况下，本发明提供了一种筛选与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB4以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-1|3或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。talwildtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l卩或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。walaninesubstitutedvariant乂，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-1|3或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsub她,=AGsubt。talwildtype—△Gsubt。talalaninesubstitutedvaant;以及(f)选择使纽兰格林-1(3或其片段与ErbB4的复合物之AAG^t。w为正值的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-ip的多肽突变体。本发明还提供了一种筛选选择性的与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-l卩突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-1(3或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。ta^dtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l(3或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。t^画esubsti歐dvari加t)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-l卩或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubtotal=△Gsubtotaiwildtype—△Gsubtotalalaninesubstitutedvariant;(f)选择使纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物之A△Gsubtotal为正值，而纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物之AAGsubtotal为负值或零左右的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个选择性的与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-lp的多肽突变体。在一些例子中，选择了使纽兰格林-lp或其片段与ErbB3的复合物之AAG^t。w为负值的丙氨酸替换突变体，就此发现了与ErbB4的结合亲和力增强而与ErbB3的结合亲和力减弱的纽兰格林-lp的多肽突变体。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体使纽兰格林-1|3或其片段与ErbB3的复合物之AAG^t。w在零左右，就此发现了与ErbB4的结合亲和力增强而与ErbB3的结合亲和力不变的纽兰格林-1(3的多肽突变体。本发明还提供了一种筛选与ErbB4结合亲和力不变但与ErbB3结合亲和力降低的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-1(3或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段与ErbB3或EltB4的部分总结合自由能(AGsub她,w她ype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGs油t。^alaninesubstituted，iant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-l卩或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubt。tal=△Gsubt。talwildtype—△Gsubtotalalaninesubstitutedvariant;(f)选择使纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物之AAG^t。^在零左右，而纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物之AAGsubt。ta,为负值的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个与ErbB4结合亲和力不变但与ErbB3结合亲和力降低的纽兰格林-l(3突变体。本发明还提供了用此处所描述的方法发现的一种纽兰格林-1P的多肽突变体。图片简要说明本专利或申请文件含有至少一张彩色图片。提出申请并付必要费用后专利局可提供有彩色图片的专利或专利申请公开文本复本。图1显示的是用于同源模建的(A)ErbB3和EGFR，以及(B)ErbB4和EFGR的一对一序列比对。序列中的"*"指相同的残基；":"指保守性替换；"."指半保守性替换。框起来的部分表明结构上保守的区域。图2显示的是重叠于EGFR(红色)X-射线晶体结构上的受体(A)ErbB3(蓝色)和(B)ErbB4(蓝色)的Ca轨迹之精确的立体图示。图3显示的是(A)NRG-lJ3/ErbB3和(B)NRG-l(VErbB4模型的条带示意图。复合物中的NRG-ip链为红色。受体的I、II、III及IV结构域分别显示为蓝色、绿色、橙色和灰色。接触面的三个结合位点用圆圈标出。本图是用MOLSCRIPT程序生成。图4显示的是(A)最小化的NRG-1卩对应物(蓝色)与EGF(红色)的Ca原子的最佳拟合叠加立体图示和(B)这些蛋白的氨基酸序列比对。图5显示的是ErbB3(虚线)禾nErbB4(实线)与NRG-1卩复合物的动力学模拟过程中Cci原子的均方根偏差。图6显示的是ErbB3与NRG-1卩在三个结合位点的相互作用，(A)结合位点l的接触面；(B)结合位点2的接触面；(C)结合位点3的接触面。仅显示了相互作用的残基的侧链。点画线表示氢键。图7显示的是ErbB4与NRG-ip在三个结合位点的相互作用情况，(A)结合位点l的接触面；(B)结合位点2的接触面；(C)结合位点3的接触面。仅显示了相互作用的残基的侧链。点画线表示氢键。图8显示的是(A)对ErbB3与NRG-ip复合物进行计算机模拟丙氨酸扫描突变实验的结合能变化情况；(B)对ErbB4与NRG-1(3复合物进行计算机模拟丙氨酸扫描突变实验的结合能变化情况。△△Gsubtotal为负值时表示高度不利的替换。AAG^t。w为正值时表示该残基适于丙氨酸突变。图9显示的是用纽兰格林或其突变体(D43A)处理ErbB2&ErbB4以及ErbB2&ErbB3共表达的COS7细胞后AKT的磷酸化情况。图中的Con表示纽兰格林的浓度，P-AKT表示磷酸化的AKT。图10显示的是用纽兰格林或其突变体(L3A)处理ErbB2&ErbB4以及ErbB2&ErbB3共表达的COS7细胞后AKT的磷酸化情况。GAPDH作为蛋白总量对照而显示。图11显示的是用纽兰格林或其双突变体(8A47A)处理ErbB2&ErbB4以及ErbB2&ErbB3共表达的COS7细胞后AKT的磷酸化情况。GAPDH作为蛋白总量对照而显示。发明详述为了简洁，而非限制，本发明的详述分成下面几个部分。A.定义除非另外定义，此处所使用的所有技术及科学术语的含义与本发明所属领域里的普通技术人员通常所理解的含义相同。此处所提到的所有专利、申请、公开的申请以及其他出版物均通过引用而整体合并于此。如果本部分所陈述的定义与通过引用合并于此的专利、申请、公开的申请以及其他出版物中陈述的定义相反或不一致时，则以本部分陈述的定义为准。此处所用的"一个"或"某一个"的意思是"至少一个"或"一个或多个"。此处所用的"纽兰格林"或"NRG"是指能结合并活化ErbB2/ErbB4或ErbB2/ErbB3异二聚体蛋白激酶的蛋白质或多肽，比如所有的纽兰格林异构体、单独的纽兰格林EGF结构域、纽兰格林突变体、以及也能活化上述受体的任何类型的纽兰格林样基因产物。纽兰格林也包括NRG-1、NRG-2、NRG-3禾nNRG-4。这些蛋白和多肽能活化上述ErbB受体并调节其生物反应，例如，刺激乳腺癌细胞的分化以及乳蛋白的分泌；诱导神经嵴细胞分化为雪旺细胞(Schwanncell);剌激骨骼肌细胞中乙酰胆碱的合成；以及改善心肌细胞的存活与DNA合成。纽兰格林还包括那些带有保守性氨基酸替换而未显著改变其生物活性的突变体。适宜的保守性氨基酸替换对那些本领域的技术人员来说是尽人皆知的并且可以在不改变最终所得分子的生物活性的情况下普遍实施。那些本领域的技术人员知道，一般说来，对一个多肽的非必需区域的单个氨基酸进行替换不会显著改变其生物活性(参见，如Watson等所著的《基因的分子生物学》，第224页，1987年第4版，Bejacmin/Cummings出版公司)。纽兰格林蛋白包括纽兰格林蛋白和多肽。纽兰格林核酸包括纽兰格林核酸以及纽兰格林寡核苷酸。此处所用的"表皮生长因子样结构域"或"EGF样结构域"是指由纽兰格林基因编码的一个多肽结构区域，该结构域能结合并活化ErbB2、ErbB3、ErbB4或其组合，并与下列专利或出版物中所揭示的EGF受体-结合区有相似的结构WO00/6400、Holmesetal.,Science,256:1205-1210(1992);美国专利号5,530,109和5,716,930;Hijazietal.，Nature,387:512-516(1997);Higashiyamaetal.，J.Biochem.,122:675-680(1997);以及WO97/09425。EGF样结构域可来源于NRG-l、NRG-2、NRG-3、或NRG-4。EGF样结构域可以是a或p亚型。此处所用的纽兰格林的"功能性衍生物或片段"是指仍然充分保留了其抗病毒性心肌炎、抗DCM、抗心脏毒性、或抗心肌梗死活性的纽兰格林蛋白或其编码核酸的衍生物或片段。正常情况下，这些衍生物或片段保留至少50%的抗病毒性心肌炎、抗DCM、抗心脏毒性、或抗心肌梗死活性。更好的情况下，这些衍生物或片段保留至少60%、70%、80%、90%、禾卩100%的抗病毒性心肌炎、抗DCM、抗心脏毒性、或抗心肌梗死活性。此处所用的"erb"是指与骨髓成红血细胞增多症病毒(一种急性转化逆转录病毒)相关联的两个癌基因erbA和erbB。此处所用的"用于治疗某种特定疾病的复合物的有效剂量"是指足以改善、或以某种方式减少与该疾病相关症状的剂量。只要有效，这一剂量可以作为单次剂量予以施用或根据某一疗程规定予以施用。这一剂量也许能治愈疾病，但典型的情况下是用来改善疾病的症状。为了达到改善症状的预期效果有时需要重复用药。此处所用的"治疗"或"处理"是指可以使某一不适、机能失调或疾病的症状得以改善或向好的方向改变的任何处置方式。治疗还包括将此处所述的复合物作为药物应用。此处所用的通过施用某一特定的药物组分而使某种特定疾病的症状"改善"是指任何减轻，无论是永久的或暂时的、持续的或瞬时的减轻，只要这一减轻能归因于或与关联于该药物组分的使用。此处所用的"经重组方式生产"是指使用重组核酸方法进行的生产，这依靠于众所周知的分子生物学方法来表达克隆的核酸编码的蛋白。当指两个核酸分子"互补"时，此处所用的"互补"是指两个核苷酸序列能够杂交，相反的核苷酸之间的错配在适宜的情况是少于25%、更适宜的情况是少于15%、更进一步适宜的情况是少于5%、最适宜的情况是没有错配。适宜的情况是两个分子能在高严谨性条件下进行杂交。此处所用的用来测定错配百分比的"杂交的严谨性"是指下列条件1)高严谨性O.IXSSPE，0.1%SDS，65°C;2)中度严谨性0.2XSSPE，0.1%SDS，50°C(也称为适度严谨性)；以及3)低严谨性O.IXSSPE，0.1%SDS，50°C。应该指出的是相应的严谨性也可以通过使用不同的缓冲液、盐和温度而获得。此处所用的"载体(或质粒)"是指用来将异源DNA引入细胞并在其中进行表达或复制的分离元件。选择并使用这些媒介物对技术人员来说是非常熟悉的。一个表达载体包含能表达的DNA，通过可操作性连接将该DNA与调节性序列相连接，比如启动子区，这些调节区能影响DNA片段的表达。因此，一个表达载体是指一个重组的DNA或RNA构建体，比如一个质粒、一个噬菌体、一个重组病毒或其他载体当将其引入某一适当的宿主细胞后可以表达克隆的DNA。对于该领域的技术人员而言他们都知道哪些载体是适宜的，包括那些能在真核细胞和/或原核细胞复制的载体以及那些保持游离形式或那些整合到宿主细胞基因组的载体。此处所用的"启动子区或启动子元件"是指某一DNA或RNA200680052155.3说明书第15/48页片段，该片段能控制与其相连的DNA或RNA的转录。启动子区包含特定的序列，该序列足以进行RNA聚合酶的识别、结合并起始转录。启动子区的这一部分被称为启动子。此外，启动子区还包含一些序列，这些序列能调节RNA聚合酶的识别、结合以及转录起始活性。这些序列可以顺式作用方式发挥作用或对反式作用因子进行应答而发挥作用。取决于调控性质，启动子可以是组成型的或调节型的。用于原核的典型的启动子包括噬菌体T7和T3启动子等等。此处所用的"可操作性连接或可运作性连接"是指调节性和效应性核苷酸序列，如启动子、增强子、转录和翻译终止位点、以及其他的信号序列和DNA的功能关系。例如，将DNA可操作性连接至一个启动子是指该DNA与该启动子之间的物理上及功能上的关系，这样该DNA的转录就是由某一个能特异性识别、结合并转录该DNA的RNA聚合酶从该启动子处起始转录。为了优化表达和/或体外转录，有时需要去除、添加或改变克隆的5'端非翻译区以消除多余的、潜在的不适当的可选的翻译起始(即开始)密码子或其他无论是在转录水平还是翻译水平可能干扰或减少表达的序列。作为可选项，一致性的核糖体结合位点(参见，例如Kozak，J.Biol.Chem.,266:19867-19870(1991))可以插入到起始密码子的5'端从而有可能增强表达。是否需要进行这些修改可以通过经验而定。此处所说的"心肌梗死"是指严重而持续的缺血引起冠状动脉阻断或血流中断导致的部分心肌病灶性坏死。B.NRG-1(3突变体以及药物合剂本发明提供NRG-1多肽突变体与编码这些多肽突变体的多核苷酸以及药物合剂。—个功能性人NRG-1片段具有如下氨基酸序列SerHisLeuValLysCysAlaGluLysGluLysThrPheCysValAsnGlyGlyGluCysPheMetValLysAspLeuSerAsnProSerArgTyrLeuCysLysCysProAsnGluPheThrGlyAspArgCysGinAsnTyrValMetAlaSerPheTyrLysAlaGluGluLeuTyrGin(SEQIDNO:1)对应于人NRG-1第177-237位氨基酸。编码该片段的人的核酸序列为agccatcttgtaaaatgtgcggagaaggagaaaactttctgtgtgaatggagggagtgcttcatggtgaaagacctttcaaacccctcgagatacttgtgcaagtgcccaaatgagtttactggtgatcgctgccaaaactacgtaatggcgagcttctacaaggcggaggagctgtaccag(SEQIDNO:2)本发明提供纽兰格林1P突变体，其包含的氨基酸序列如SEQIDNO:1，以及与SEQIDNO:l相比在第3、8、16、25、29、31、33、35、43、46或47位残基为不同的氨基酸的序列。在一些例子中，本发明的纽兰格林IP突变体在SEQIDNO:l的第3、8、16、25、29、31、33、35、43、46或47位残基有单个氨基酸替换。在一些例子中，本发明的纽兰格林ie突变体在SEQIDNO:l的第3、8、16、25、29、31、33、35、43、46或47位残基有多个氨基酸替换。在一些例子中，本发明的纽兰格林ie突变体在SEQIDNO:l的第3、8、16、25、29、31、33、35、43、46或47位残基有2个、3个、4个、5个或6个氨基酸替换。—种情况下，本发明提供了纽兰格林-ip的一种多肽突变体，纽兰格林-lp的氨基酸序列显示于SEQIDNO:1，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力更高；以及其中第25位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第35位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第46位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体所含的氨基酸序列同SEQIDNO:l所示，并且其中第25位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第35位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第46位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A;第35位残基为A;和/或第46位残基为A。在一些例子中，多肽突变体与ErbB4结合的亲和力与SEQIDNO:l中的多肽相比有所减弱或相同。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第35位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第46位残基为A。.本发明还提供了由SEQNO:l中的l-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-l卩的一种多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比，结合ErbB3的亲和力更高；以及其中第25位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第35位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第46位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A;第35位残基为A;和/或第46位残基为A。在一些例子中，多肽突变体与ErbB4结合的亲和力与SEQIDNO:l中的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比有所减弱或相同。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第35位残基为A。在一些例子中，多肽突变体第46位残基为A。另一方面，本发明提供了纽兰格林-1|3的一种多肽突变体，纽兰格林-l(3的氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB4的亲和力有所减弱；以及其中第3位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体所含的氨基酸序列同SEQIDNO:l所示，并且其中第3位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第3位残基为A。在一些例子中，多肽突变体与ErbB3结合的亲和力与SEQIDNO:l中的多肽相比有所增强或相同。在一些例子中，多肽突变体第3位残基为A。本发明还提供了由SEQNO:1中的1-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-1|3的一种多肽突变体，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比，结合ErbB4的亲和力有所减弱；以及其中第3位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第3位残基为A。在一些例子中，多肽突变体与ErbB3结合的亲和力与SEQIDNO:l中的多肽相比有所增强或相同。在一些例子中，多肽突变体第3位残基为A。本发明还提供了一种多核苷酸，其包含的核酸序列编码此处所述的多肽突变体，该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比、或与由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的多肽相比，其结合ErbB4的亲和力有所减弱。本发明还提供了一种包含有效量的所述多肽突变体或编码多肽突变体的多核苷酸和药学上可接受的赋型剂的药物合剂，该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽或由SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的多肽相比有减弱的ErbB4结合亲和力。本发明还提供了一种由该药物合剂构成的试剂盒。在一些例子中，该试剂盒进一步包含了使用该药物合剂通过活化ErbB2/ErbB3来预防、治疗或延迟个体所患疾病的指导说明。本发明提供了纽兰格林-l卩的一种多肽突变体，纽兰格林-ip的氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB4的亲和力有所增强；以及其中第16位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第29位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;第31位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;第43位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第47位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，该多肽突变体所含的氨基酸序列同SEQIDNO:l所示，并且其中第16位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第29位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;第31位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;第43位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第47位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，该多肽突变体第16位残基为A;第29位残基为A;第31位残基为A;第43位残基为A;或第47位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力有所减弱或相同。在一些例子中，该多肽突变体第31位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体第43位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体第47位残基为A。本发明还提供了由SEQNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-ip的一种多肽突变体；其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中该多肽突变体与由SEQN0:1中的l-52位氨基酸残基构成多肽相比，结合ErbB4的亲和力有所增强;以及其中第16位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第29位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;第31位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;第43位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第47位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，该多肽突变体第16位残基为A;第29位残基为A;第31位残基为A;第43位残基为A;和/或第47位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力有所减弱或相同。在一些例子中，该多肽突变体第31位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体第43位残基为A。在一些例子中，该多肽突变体第47位残基为A。本发明还提供了纽兰格林-ip的一种多肽突变体，纽兰格林-IP的氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中该多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力有所减弱；但结合ErbB4的亲和力与SEQIDNO:l中的多肽相比差不多；并且其中第33位残基为A。本发明还提供了由SEQNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的纽兰格林-lp的一种多肽突变体；其中该多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中该多肽突变体与由SEQNO:l中的l-52位氨基酸残基构成多肽相比，结合ErbB3的亲和力有所减弱；但结合ErbB4的亲和力与由SEQNO:l中的1-52位氨基酸残基构成多肽相比差不多；以及其中第33位残基为A。本发明中提到的多肽可用化学合成或重组的方法来生产。化学合成多肽的方法在该领域已是广为人知。用重组的方法来合成多肽在该领域也是众所周知并在此进一步阐述。产生的多肽应该用该领域公知的方法来检测其结合受体的亲和力以及活化受体的情况。本发明还提供了一种包含编码此处所述任一多肽突变体的核酸序列的多核苷酸。与这些序列中任何一个互补的多核苷酸也包括在本发明之内。多核苷酸可以是单链的(编码链或反义链)或双链的，并且可以是DNA(基因组、cDNA或合成物)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，这些HnRNA分子含有内含子并且与某一DNA分子以一对一的方式相对应；以及不含内含子的mRNA分子。本发明中的某一多核苷酸可以含有额外的编码或非编码序列，但并非必须；某一多核苷酸可以与其他的分子和/或支持介质相连，但并非必须。本发明中的这些多核苷酸可以用化学合成、重组方法、或PCR获得。本领域的普通技术人员都会意识到，由于遗传密码的简并性，存在多个核苷酸序列编码此处提及的某一个多肽。由于密码子使用的不同而引起的多核苷酸差异在本发明中作为特殊情况考虑。此处述及的多核苷酸可以克隆到载体上(比如表达载体)并转染进宿主细胞以生产多肽。选择克隆载体时应根据采用的宿主细胞的情况而变，好用的载体一般具有自我复制能力、含有某一特定的限制性内切酶的单一靶点、和/或携带某种标记基因能用于选择含有该载体的克隆。适宜的例子包括质粒及细菌病毒，如pUC18、pUC19、Bluescript(如pBSSK+)及其衍生物mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、Co正l、pCRl、RP4、噬菌体DNAs、以及穿梭载体比如pSA3和pAT28。这些以及许多其他的克隆载体可以从诸如BioRad、Strategen和Invitrogen等商家购买。表达载体通常是含有本发明中某一多核苷酸的可复制多核苷酸构建物。一个表达载体必须能在宿主细胞中以游离基因或作为染色体DNA的一个整合部分进行复制。适宜的表达载体包括(但并不局限于这些)质粒、病毒载体包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒、以及PCT公告号为WO87/04462中提出的表达载体。载体一般可以包括(但并不局限于这些)一个或多个下列组件一个信号序列、一个复制起点、一个或多个标记基因、适宜的转录控制元件(比如启动子、增强子和终止子)。对表达(即翻译)而言，一个或多个翻译控制元件通常也是需要的，比如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。含有目标多核苷酸的载体可以采用很多种适宜方法中的任何一种将其引入宿主细胞，这些方法包括电穿孔、用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-右旋糖苷或其他物质进行转染、显微放射枪轰击、脂质体转染、以及感染(例如当载体是某种感染性材料比如痘病毒)。引入载体或多核苷酸方法的选择常常取决于宿主细胞的特性。本发明还提供了含有此处提及的任何多核苷酸的宿主细胞。哺乳动物宿主细胞的例子包括(但并不局限于此)COS、HeLa、和CHO。还可以参见PCT公告号为WO87/04462的专利。适宜的非哺乳动物宿主细胞包括原核生物(比如E.coli或B.subtillis)以及酵母(比如S.cerevisae,S.pombe;或K.lactis)。本发明还提供了由此处提及的任何NRG-1多肽突变体或编码这些多肽突变体的多核苷酸组成的药物合剂以及一种在医药上可以接受的赋形剂或载体。此处所说的"医药上可以接受的赋形剂或载体"包括任何材料只要当将其与某种活性成分合并时能保留该活性成分的生物学活性并且不与受者的免疫系统发生反应。实例包括，但并不局限于此，任何标准的医用载体比如磷酸缓冲盐溶液，水，乳剂如油/水乳剂，以及多种润湿剂。优选的喷射或注射用稀释液是磷酸缓冲盐或生理(0.9%)盐水。包含这类载体的药物合剂可以用已知的成熟的传统方法来合成(参见，如由A.Gennaro编辑的由位于Easton，PA的Mack出版公司于1990年出版的第18版Remington'sPharmaceuticalScience;以及Mack出版公司2000年出版的第20版Remington,TheScienceandPracticeofPharmacy)。典型的情况是，添加一定量的某一医药上可接受的盐以便使合剂呈等渗状态。这类载体的例子包括盐水、林格液(Ringer'ssolution)以及葡萄糖液(dextrosesolution)。这些溶液的适宜的pH值为约5至约8，而更适宜的是约7至约7.5。更进一步的载体包括缓释制剂比如含有抗体的半透性固相疏水多聚物基质，其基质是呈一定形状的颗粒物，比如膜状、脂质体或微粒形。对于本领域的熟练技术人员而言，下列情况是显而易见的，那就是根据用药途径以及多肽和多核苷酸施用浓度的不同某种载体可能更适宜。C.NRG-ip多肽突变体的筛选方法本发明还提供了NRG-1多肽突变体的筛选方法。例如，由于该配体和受体家族的高度同源性，因此NRG-l|3/ErbB3和NRG-l卩/ErbB4复合体的溶剂平衡模型可以用EGF/EGFR共结晶结构作为起点来进行构建(参见Ogiso,H.etal.,CrystalStructureofthecomplexofhuamanepidermalgrowthfactorandreceptorextracellulardomains.Cell110,775-787(2002)，其内容在此加以引用)。然后对NRG-l(3/ErbB3和NRG-1(3/ErbB4接触面的原子相互作用进行详细的分析。MM-PBSA方法被用来计算ErbB3和ErbB4结合至NRG-1卩的自由能。此外，选择结合位点的残基进行计算机丙氨酸扫描突变来对阐释两个受体与NRG-ip的亲和力。产生的NRG-l(3/ErbB3和NRG-l(3/ErbB4计算机模型应有助于设计NRG-1卩突变体以使其选择性结合ErbB4并且亲和力有所增强，这样可以改进其治疗特性。本发明提供了一种筛选与ErbB3结合亲和力增强的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-1(3或其片段、ErbB3以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB3形成的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3的部分总结合自由能(AGsub磁w她ype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-1(3或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3的部分总结合自由能(AGsubtotalalaninesubstitutedvariant乂，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-1(3或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsub脆,=AGsubt。talWildtype—AGSubtotalalaninesubstitutedvariant;以及(f)选择对纽兰格林-l卩或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAG础t。ta,为正值的丙氨酸替换突变体；这样就意味着找到了一个与ErbB3结合亲和力增强的纽兰格林-l(3的多肽突变体。本发明还提供了一种筛选与ErbB3选择性结合亲和力增强的纽兰格林-l卩突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-ip或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsutotalwildtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubtotalalaninesubstitutedvariant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-1|3或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsub她^AGsub舰wildtypeAGsubtotalalaninesubstitutedvariant;以及(f)选择对纽兰格林-1|3或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAG^t。t^为正值，同时对纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAG^t。w为负值或接近零的丙氨酸替换突变体；这样就意味着找到了一个与ErbB3选择性结合亲和力增强的纽兰格林-1|3的多肽突变体。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体对纽兰格林-lp或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAG^t^为负值，这种情况意味着找到的纽兰格林-lp的多肽突变体与ErbB3的结合亲和力增强而与ErbB4的结合亲和力减弱。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体对纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAG^t^接近零，这种情况意味着找到的纽兰格林-ip的多肽突变体与ErbB3的结合亲和力增强而与ErbB4的结合亲和力不变。另一方面，本发明提供了一种筛选与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-l(3突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-l卩或其片段、ErbB4以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。ta,w她ype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB4的部分总结合自由能(△Gsubtotalalaninesubstitutedvariant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-ip或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubt。ta^AGsubt。ta,wildtypeAGSubtotalalaninesubstitutedvariant^以及(f)选择对纽兰格林-i卩或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAGsubt。w为正值的丙氨酸替换突变体；这样就意味着找到了一个与ErbB4结合亲和力增强的纽兰格林-l卩的多肽突变体。本发明还提供了一种筛选与ErbB4选择性结合亲和力增强的纽兰格林-l卩突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-lf3或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-ll3或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-1(3或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsub福wM加e);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubtotalalaninesubstituted，iant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-l卩或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubt。w-AG^t^wildtypeAGsubtotalalaninesubstitutedvariant;(f)选择对纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAG^t。w为正值，同时对纽兰格林-ip或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAG^t。w为负值或接近零的丙氨酸替换突变体；这样就意味着找到了一个与ErbB4选择性结合亲和力增强的纽兰格林-l卩的多肽突变体。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体对纽兰格林-l卩或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAGsubt福为负值，这种情况意味着找到的纽兰格林-lp的多肽突变体与ErbB4的结合亲和力增强而与ErbB3的结合亲和力减弱。在一些例子中，选择的丙氨酸替换突变体对纽兰格林-ip或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAGsubt。tal接近零，这种情况意味着找到的纽兰格林-1|3的多肽突变体与ErbB4的结合亲和力增强而与ErbB3的结合亲和力不变。本发明还提供了一种筛选与ErbB4结合亲和力不变但与ErbB3结合亲和力降低的纽兰格林-l卩突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-l卩或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-1|3或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-1(3或其片段与ErbB3形成的复合物以及纽兰格林-lp或其片段与ErbB4形成的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-1|3或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsub磁wildtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l卩或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsub編alaninesubstltutedvariant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-1(3或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAG^t。^二AGsubtotalwildtypeAGsubtotalalaninesubstitutedvariant;(f)选择对纽兰格林-ip或其片段与ErbB4形成的复合物而言其AAG^t。w接近零，同时对纽兰格林-l卩或其片段与ErbB3形成的复合物而言其AAG^t^为负值的丙氨酸替换突变体；这样就意味着找到了一个与ErbB4选择性结合亲和力不变但与ErbB3结合亲和力降低的纽兰格林-ip突变体。本发明还提供了用此处所描述的方法鉴定而得的一种纽兰格林-l卩的多肽突变体。D.NRG-ip突变体的使用方法本发明还提供了预防、治疗或延迟个体疾病发展的方法，包括将由此处所述的某种NRG-ip多肽突变体组成的药物合剂给予个体，这些药物合剂是通过活化ErbB2/ErbB3禾卩/或ErbB2/ErbB4受体来发挥作用。可以预防、治疗或延迟其发展的疾病包括发生于下列器官和系统的疾病骨、耳、眼、眼睑、头、颈、心脏、咽喉、下颌、颚骨、上颌、嘴、鼻、鼻咽部、口腔、胰腺、腮腺、脑下垂体、前列腺、视网膜、唾液腺、皮肤、肌肉、骨髓、甲状腺、扁桃腺、神经系统、呼吸系统、消化系统、循环系统、生殖系统、泌尿系统、内分泌系统、心血管系统及造血系统。此处所用的"个体"一词是指哺乳动物，尤其是指人。哺乳动物包括(但并不局限于此)家畜(比如牛、猪、绵羊、山羊)；运动性动物；宠物(比如猫、狗、马)；灵长类；小鼠和大鼠。在一些例子中，用于预防、治疗或延迟某一疾病发展的纽兰格林-1P突变体与ErbB2/ErbB3受体的的亲和力有所增强。在一些例子中，纽兰格林-l(3多肽突变体的组成氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力更高；以及其中第25位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第35位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第46位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，纽兰格林-l卩多肽突变体由SEQIDNO:l中的第1-52位残基构成，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的多肽相比，结合ErbB3的亲和力更高；以及其中第25位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第35位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;禾口/或第46位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第25位残基为A;第35位残基为A;和/或第46位残基为A。可以通过优先活化ErbB2/ErbB3受体而得以预防、治疗或延迟其发展的疾病包括神经系统疾病(比如中枢神经系统，外周神经系统)、精神分裂症、骨髓疾病、膜疾病、神经脱髓鞘疾病、锥体束外系统疾病。在一些例子中，神经系统疾病是精神分裂症。在一些例子中，用于预防、治疗或延迟某一疾病发展的纽兰格林-1P突变体与ErbB2/ErbB4受体的的亲和力有所增强。在一些例子中，纽兰格林-ip多肽突变体的组成氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB4的亲和力更高；以及其中第16位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第29位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;第31位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;第434立残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第47位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，纽兰格林-ip多肽突变体由SEQIDNO:l中的第1-52位残基构成，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:1中的l-52位氨基酸残基构成的多肽相比，结合ErbB4的亲和力更高；以及其中第16位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;第29位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y;第31位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;第43位残基为以下的不同的氨基酸A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或第47位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，该多肽突变体第16位残基为A;第29位残基为A;第31位残基为A;或第47位残基为A。在一些例子中，用于预防、治疗或延迟某一疾病发展的纽兰格林-1P突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比或SEQIDNO:l中的第1-52位残基构成的多肽相比，其结合ErbB2/ErbB4受体的的亲和力差不多，但结合ErbB3受体的的亲和力有所降低。在一些伊ij子中，多肽突变体的组成氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO"中的多肽相比，结合ErbB3的亲和力更弱但结合ErbB4的亲和力差不多；以及其中第33位残基为A。在一些例子中，用于预防、治疗或延迟某一疾病发展的纽兰格林-13突变体与ErbB2/ErbB4受体的的亲和力有所降低。在一些例子中，纽兰格林-ip多肽突变体的组成氨基酸序列显示于SEQIDNO:1;其中多肽突变4本含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的多肽相比，结合ErbB4的亲和力更弱；以及其中第3位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，纽兰格林-ip多肽突变体由SEQIDNO:l中的第l-52位残基构成，其中多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l中序列相比不同的氨基酸；其中多肽突变体与SEQIDNO:l中的1-52位氨基酸残基构成的多肽相比，结合ErbB4的亲和力更高；以及其中第3位残基为以下的不同的氨基酸A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。在一些例子中，多肽突变体第16位残基为A。可以通过优先活化ErbB2/ErbB4受体而得以预防、治疗或延迟其发展的疾病包括(但并不局限于这些)心衰、心肌梗死、扩大性心肌症、以及心肌炎(如，病毒性心肌炎)、心脏毒性。此处所提及的纽兰格林-1e突变体或编码纽兰格林-13多肽突变体的核酸的剂型、剂量与给药途径，尤其是以药物合剂的形式，可以按照本领域己知的方法来决定(参见，Mack出版公司1997年4月出版的AlfonsoR.Gennaro编著的Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy;TherapeuticPeptidesandProteins:Formulation,Processing,andDeliverySystems,Banga1999;Taylor&Francis公司2000年出版的Hovgaard禾卩Frkjr编著的PharmaceuticalFormulationDevelopmentofPeptidesandProteins,ElsevierScience1998年出版的Lasic禾口Papahadjopoulos编著的MedicalApplicationsofLiposomes,Hogrefe&Huber1998年出版的Jain编著的TextbookofGeneTherapy,LandesBioscience1999年出版的Seth编著的第15巻Adenoviruses:BasicBiologytoGeneTherapy,HumanaPress1999年出版的Wu-Pong禾口Rojanasakul编著的BiopharmaceuticalDrugDesignandDevelopment,纽约的Springer-Verlag1999年出版的Dole等编著的第28巻TherapeuticAngiogenesis:FromBasicSciencetotheClinic)。此处所提及的纽兰格林-lP突变体或编码纽兰格林-lP多肽突变体的核酸可以做成口服、直肠给药、局部用药、吸入、口腔用药(例如舌下)、注射(如皮下注射、肌肉注射、皮内注射、静脉注射)、透皮给药或其他任何适宜的用药途径给药。对于任何给定的病例的最佳给药途径将取决于病情的性质及严重程度以及所使用的特定的NRG-ip多肽突变体或编码该多肽突变体的核酸的性质。此处所提及的纽兰格林-lP突变体或编码多肽突变体的核酸可以单独给药。作为可选项而且更偏向于这样做，是将纽兰格林-13突变体或编码多肽突变体的核酸与某种医药上可接受的载体或赋形剂共同给药。任何适宜的医药上可接受的载体或赋形剂均可用于当前的方法(参见，如Mack出版公司1997年4月出版的AlfonsoR.Gennaro编著的Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy)。编码NRG-1P多肽突变体的核酸可以是裸DNA、复合DNA、cDNA、质粒DNA、RNA或与其他作为基因传递系统组分形成混合物的形式使用。在另一种具体情况下，编码纽兰格林-lP多肽突变体的核酸包含在某种病毒载体中。任何适宜于基因治疗的病毒载体都可使用。例如，腺病毒载体(美国专利号5,869,305)、猿病毒载体(美国专利号5,962,274)、条件复制型人免疫缺陷病毒载体(美国专利号5,888,767)、逆转录病毒、SV40、单纯疱疹病毒复制子载体和痘病毒载体都可以使用。此外，还可以用非病毒载体系统比如脂质体来传递基因，其中脂质可以保护DNA或其他生物材料在凝结过程中避免氧化。按照本发明，此处所提及的纽兰格林-lP多肽突变体或编码某一多肽突变体的核酸，可以单独或与其它制剂、载体或赋形剂联合以任何适宜的给药途径而制成，比如，腔内注射、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、皮内注射、口服或局部给药。所用方法可以使用易于注射的剂量配方，比如以单位剂量的形式、安瓿、或多剂量形式，并添加保护剂。其剂型可以采用诸如悬液、溶液、或与油性或水性载体形成的乳液，并且还可以含有剂型制剂比如悬浮、稳定、和/或分散剂。作为可选项，其活性组分可以是粉末形式，在使用前用某种适宜的载体、无菌无热原水或别的溶剂将其溶解。本发明中的局部给药可以采用泡沫、凝胶、面霜、药膏、透皮片或糨糊等剂型。本发明可以使用的医药上可以接受的合剂与给药方法包括(但并不局限于这些)美国专利号为5，736，154、6,197,801Bl、5,741,511、5,886,039、5,941,868、6,258,374Bl和5,686,102这些专利中所述。用于治疗或预防的治疗剂量的大小将随着病情的严重程度以及给药途径而不同。所用剂量以及剂量频率也将随年龄、体重、病情与病人对药物的反应而不同。应该指出的是主治医师应知道由于毒性或副作用而怎样以及何时终止、中断、或调整治疗到一个较低的剂量。反之，主治医师还应该知道如果临床反应不够时(排除毒性副作用)怎样以及何时调整治疗到一个较高的水平。任何适宜的给药途径都可使用。剂型包括片剂、块剂、印剂、分散剂型、悬浮剂型、溶液、胶囊、膜片等等。参见，《雷明顿制药学》(Remington'sPharmaceuticalSciences)。实际应用时，纽兰格林-13多肽突变体或编码某一多肽突变体的核酸，可以单独或与其它制剂一起与某种药物载体或赋形剂比如P-环式糊精和2-羟基-丙基-P-环式糊精按照传统的药物复合技术直接混和形成活性制剂。载体可以采用多种形式制备以满足局部或注射给药。在制备注射剂型合剂时，比如静脉注射或灌注，可以采用相似的制药介质水、甘油、油、缓冲液、糖、保护剂、脂质体以及本领域的技术人员所知道的其他介质等等。这类注射合剂的例子包括(但并不局限于这些)5%(重量/体积，w/V)葡萄糖、生理盐水或其它溶液。单独或与其它制剂一起的纽兰格林-lP多肽突变体或编码某一多肽突变体的核酸的施用总剂量可为约lml到约2000ml，以静脉注射液形式存放于瓶中。稀释液的体积可以根据使用总剂量而变。本发明还提供了用于本发明的治疗方案优化的试剂盒。这类试剂盒包含一个或多个容器，其中含有医药上可接受的形式的有效剂量的单独的纽兰格林-1P多肽突变体或编码某一多肽突变体的核酸或与其它制剂的混合物。优选的药物剂型是与无菌盐水、葡萄糖液、或缓冲液、或其它医药上可接受的无菌溶液混合。作为可选项，药物合剂可以是冻干或干燥品，在这种情况下，试剂盒相应的进一步含有一个装有医药上可接受的无菌溶液，以用来将药物合剂重新溶解形成溶液而用于注射。医药上可接受的溶液是生理盐水和葡萄糖溶液。在另一种具体情况下，本发明的试剂盒进一步包含针头和注射器，优选以无菌形式包装，用于注射药物合剂；和/或酒精垫。由医师或病人注射药物合剂的说明书也包含其中。E.实施例下述实施例仅仅是用来举例说明的，而不是用来限制本发明的范围。例l.选择性活化某一ErbB受体的NRG-1P突变体的筛选方法1.构建蛋白的3D模型从蛋白质数据库(ProteinDataBank)获得人EGF与受体胞外结构域的x-射线晶体结构(PDB记录号为1IVO)以及纽兰格林-a(NRG-a)表皮生长因子(EGF)样结构域的NMR结构(PDB记录号为1HAF)。从Swiss_Prot/TrEMBL数据库获取ErbB3(ERB3HUMAN)、ErbB4(ERB4—HUMAN)、和NRG-1P(NRG1JHUMAN)的氨基酸序列。所有模型都是用InsightII软件(AccelrysCorporation,SanDiego，CA)的同源模建产生的。纽兰格林-a的NMR座标被用来模建纽兰格林-l卩(NRG-l(3177-229)的初始结构。靶序列ErbB3和ErbB4与模板序列EGFR之间的配对序列比对分别进行。半胱氨酸残基之间的二硫键位置根据靶序列中对齐的半胱氨酸残基以及模板序列中相应二硫键的位置来确定。允许序列中插入缺口以获得最佳比对结果，长度独立的缺口罚点为6。ErbB3和ErbB4与EGFR的序列的最后比对结果显示于图1。结构上相似的区域是自动选取的并用于构建模型的框架结构。如果两个对齐的残基相同，则模板侧链的几何构型就原样移植到靶序列。不然，则用靶序列中的相应残基通过CVCp键比对来置换模板序列中的相应侧链。缺口区是通过对蛋白数据库筛选以及内部数据库的搜寻适宜片段而产生的。最终的环形构象是从具有最低的均方根(RMS)值(耙序列与适宜片段之间在几何结构上是相兼容的)的前10个结构中选择一个。用Sybyl中的Bi(3polymer模块将某些缺失的原子添加到每一个模型中的不完整侧链以保证氢和原子电荷的恰当分配。随后用PROCHECK和Profiles-3D对这一初始模型进行评价以检验模型的立体-化学性质以及蛋白结构。通过Profiles-3D来评价模型时，序列中每一个残基都会测定出一个自相容值(S)。ErbB3、ErbB4和NRG-1P的初始模型各自构建好以后，可以通过与EGF/EGFR复合物的叠加来构建NRG-lP/ErbB3和NRG-1ErbB4复合物的结构。所获得的结构可以用Sybyl软件包中的琥珀力场的能量最小化来进行优化。在精细化过程的初始阶段先将所有模型残基的骨架碳原子固定以防止骨架发生剧烈变形。在随后的循环中用于模型的约束数值逐步减小。使用下述参数来达到最小化Kollman-联合-原子力场以及联合原子电荷、距离依赖的电介常数为4.0R、未结合计算的截取值为9.5A、耦合梯度最小化直至能量均方根(RMS)梯度小于0.05kcal/morA。精细化过的结构然后进行分子动力学模拟。2.通过对NRG-1P与相应受体形成的复合物用分子动力学模拟来估计配体结合效率几种分子动力学(MD)模拟方法比如AMBER7.0模拟软件包和Parm99力场被用于蛋白复合物和突变体结构的独立模拟。从与任何蛋白原子相距至少10A处用TIP3P水分子箱体进行延伸来对复合物结构进行溶剂化。NRG-1ErbB3结构用100X96X83A的7976TIP3P水分子箱体进行溶剂化，而NRG-1P/ErbB4的结构用104X102X87A的8075TIP3P水分子箱体进行溶剂化。添加一定数量的带相反电荷的离子来中和该系统。Ewald颗粒网孔法(PME)被用来计算长距离静电相互作用。所有的MD运行都是用相同的步骤。首先，用最速下降法对溶剂复合物进行200步最小化，接着通过耦合梯度来去除范德瓦尔斯(vanderWaals)接触。然后，对完整的蛋白-配体-水复合物进行500步再次最小化。松弛结构随后进行MD模拟。每一个系统在15皮秒内、中间有3次间隔从0K逐渐加热至300K，然后在300K平衡25皮秒，接下来进行数据采集，这样NRG-1P/ErbB3的总的模拟时间为1100皮秒，而NRG-lP/ErbB4的总的模拟时间为900皮秒。未结合的截取值设定为8.0A而未结合配对每25步就进行更新。SHAKE方法被用来对所有含有氢原子的共价键进行约束。通过应用Berendsen算法将每一次模拟耦合至一个大气压下的300K的热浴。温度和压力耦合参数分别设置为0.2皮秒和0.5皮秒。分子动力学计算的整合时间步骤为2飞秒。在能量最小化和分子动力学模拟时，在所有方向应用周期边界条件。MD模拟是在上海药物研究所(ShanghaiInstituteofMateriaMedica)的SGIOrigin3800计算机上运行的。模拟分析主要关注于产生阶段。骨架均方根偏离(RMSDs)的计算是以初始结构作为参照以1皮秒的间隔轨道而进行的。每一个残基的均方根波动都同样地的计算。受体与配体之间的结合相互作用是在完整模型基础上用LIGPLOT程序来进行分析。3.用MM-PBSA方法来计算NRG-1P与相应受体形成复合物的自由能来自动力学轨道的坐标每4皮秒应用一次(400皮秒处理100张快照)，用AMBER7.0程序对其中每一个进行MM-PBSA计算。对模拟过程中采集的每一张快照，用方程(1)计算其配体-蛋白结合自由會g(AGbinding):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>其中Gc。mplex、AGpr。tein和AG,igand分别是复合物、蛋白和配体的自由能。方程式(1)中每一个自由能项是用其对应物(蛋白、配体及其复合物)的气相(Egas)的绝对自由能、溶剂化自由能(AGs。lvati。n)和熵(TAS)用方程式(2)计算而来<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>Egas是内部张力能(Eint)、范德瓦尔斯能(Evdw)和静电能(Eeleetrostatic)的总和(方程式3)。Eint是与共价键振动和共价键角度、以及单键扭转角旋转相关的能量(方程式4)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>溶剂化自由能，AGs。lvati。n，大致是用连续统一体表征溶剂时的极化(GPB)和非极化(G加叩ob)能的和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>溶剂化自由能中的极化能(GPB)部分是用DELPHI程序来计算的，计算时用PARSE原子半径以及标准的Parm94规定的氨基酸所带的电荷。使用的格栅尺寸为0.5A。内部溶质及外部水电介质常数分别设置为1和80。每一个GpB计算时重复IOOO次以获得更好的数据集中效果。非极化能(G,p。&)部分是用一个简单方程来进行估计的Gn。np。lar=YXSASA+bkcal/mol。SASA是溶剂可接近表面积，可以用MSMS算法进行估计，估计时用1.4A探针半径。表面张力均衡性常数Y以及点状溶质的非极化溶剂自由能b分别设置为0.00542kcalmol—1A和0.092kcalmol隱1。对于大系统而言，熵的计算是一个极度耗时的过程。在本发明中，仅仅估计AGs。^i。n(而不涉及-TAS)以评估突变对结合自由能的影响。4.计算机丙氨酸扫描突变的分析计算机丙氨酸扫描法被用来估计NRG-1e不同的突变体分别与ErbB3和ErbB4的相对结合亲和力。有两种方法用来计算不同的多肽突变体的相对结合强度。在第一种方法中，复合体、蛋白以及多肽的结构是从复合体轨迹的同一张快照中提取的。丙氨酸突变体结构是通过改变野生型的轨迹的坐标而产生的。这一方法包括剔除原子并将突变残基在Cy处截短而用氢原子代替。因此突变残基的拓扑文档中所有参数均用丙氨酸残基的参数替换。400皮秒内采集100张快照(每4皮秒1张快照)用于能量计算。相对结合自由能是野生型和丙氨酸突变型的自由能之差。在第二种计算相对结合自由能的方法中，我们是对NRG-13丙氨酸突变多肽分别与ErbB3和ErbB4复合体进行几次独立的动力学模拟。然后是用400皮秒内采集的100张快照(每4皮秒1张快照)来计算能量值并进行统计分析。结果l.模建结果及其评价ErbB3和ErbB4的3D模型是通过同源模建而生成的，同源模建时以人表皮生长因子(EGF)与EGF受体(EGFR)胞外段形成的复合物的X射线晶体结构为基础。用FASTA和BLAST对序列数据库进行搜索得到几个与ErbB3和ErbB4同源的结构。在EGFR家族内，我们发现未结合配体的ErbB3(PDB记录号为1M6B)、失活的EGFR与EGF形成的复合物(PDB记录号为1NQ1)、结合有HerceptinFab的ErbB2(PDB记录号为1N8Z)以及EGF/EGFR(PDB记录号为1IV0)在同源蛋白中与ErbB3和ErbB4的序列一致性更高。ErbB2是EGFR家族中一个不同寻常的受体，至今未发现其高亲和力配体。未结合配体的ErbB3与NRG-l卩/ErbB3复合物中的受体具有完全相同的序列。为了专注于配体/受体相互作用，故选择EGF/EGFR复合物的结构作为结构模建的模板。基于EGF受体家族成员的内部序列保守性与一致性，其胞外段可以分为四个结构域(I至IV)。其中结构域n与iv富含半胱氨酸，分别含有24个和21个半胱氨酸。在EGFR晶体结构中，结构域IV的大部分(513-619残基)在结构上呈无序状。因此，我们在同源模建时将结构域IV的这一区域排除在外。ErbB3(8-511残基)和ErbB4(25-533残基)的序列与EGFR(3-512)分别有44%和48%的一致性。而且，另外40%的残基都是保守性替换，这样ErbB3和ErbB4与EGFR的总体序列相似性都约为80%，如图1所示。即使是同一个蛋白的不同区域间其模型的精确性也会有显著的不同通常是高保守性区域的模建结果比可变的环状区或表面残基的模建结果更可靠。从ErbB3和ErbB4推断出总数分别为7个和4个结构保守区(SCRs)，这些区域构成了整体序列的主要片段(图1)。序列余下部分称为结构可变区(SVRs)，其坐标是通过用上面所讲述的方法对蛋白结构数据进行搜索而产生。图2显示的是与EGFR受体的X-射线晶体结构叠加的两个精制模型的立体图示。显然的是模板蛋白的整体拓扑结构依然保持，而在可变区存在某些显著的局部构象改变。精制模型与其模板的"骨架的均方根偏离(RMSDs)是较小的，对ErbB3而言为0.55A，对ErbB4而言为0.39A,这表明其结构上的高度相似性，正如其序列的高度同源性所预期。这个受体家族的几个关键残基，比如EGFG中的Leu69、Leu98、Val350、Asp355和Phe357是与EGF中的残基有疏水相互作用，这些残基在ErbB3和ErbB4中也是保守的。在EGFR结构域I的第39、63、85、和122位以及结构域m的第343、379、404和435位有一堆甘氨酸残基。这些残基在ErbB3和ErbB4模型的相应构象中也是保守性的保留下来了。如同EGFR，ErbB3和ErbB4的I和III结构域都是由6个P-螺旋转折组成，在每一个末端由一个螺旋和一个二硫键封帽。在ErbB3和ErbB4的I和III结构域中的第4个和第5个P-螺旋转折之间还插入有保守的色氨酸(在ErbB3中是Trp176、Trp492;在ErbB4中是Trpl98、Trp513)。这些受体的结构域II与EGFR的第二个结构域有一个相似的折叠，是几个由相似的二硫键连接的小模块构成。然后用PROCHEK中的Ramachandran作图结构确认测试对这些模型进行评估。Ramachandran作图分析某一蛋白的骨架的phi(O)、psi(V|/)扭转角并计算"优选"、"允许"、"可以允许"、"不接受"区的百分比作为该蛋白结构的质量评估。ErbB3和ErbB4模型相应数值概括于下面的表1。ErbB3和ErbB4模型的优选区和允许区的残基总计分别为96.2%和97.5%。除了对模型进行立体化学评估外，我们还用Profiles-3D分析来检测侧链折叠的质量从而进一步对模型进行评估。ErbB3和ErbB4的总体质量分数分别为230.51/257.48和216/256.56。其中分母是指根据已知结构对这一长度的某一蛋白的预期分数。为了比较，分数为115.87/257.48和115.45/256.56或更低，则表明其结构是几乎肯定不正确的。成功确认后，ErbB3和ErbB4结构的质量表明可以进行下一步研究。表1.对ErbB3和ErbB4的3D模型用PROCHEK程序进行Ramachandran作图计算结果<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>NRG-1|3(177_229)的同源模型是从NRG-a的结构(PDB记录号为1HAF)进行同源模建而得，两者总体序列的一致性为80%。为方便起见，我们选择对这一NRG-(x结构域的残基依次编号为1-63。在NRG-a的溶液结构中，其C-末端残基51-63呈无序和柔性状态。更有序的区域(1-50残基)被认为是其结合细胞受体所需的最小亚单位。因此，按照方法中所描述，构建了一个由1-52位残基构成的截短的NRG-ip模型。该模型包含一个N-末端亚结构域，含有一个居于中心的三链p片层、一个螺旋区、以及位于c-末端亚结构域的一个短的p片层。NRG-ip由三个二硫键来稳定其结构Cys6-Cys20、Cysl4-Cys34和Cys36-Cys45。2.NRG-ip与受体结合的模建NRG-l(3/ErbB3和NRG-l(3/ErbB4复合物的最终的3D模型显示于图3。在每一个复合物中，受体的结构域I、II和III排列成C形，而NRG-1卩被包容于结构域I和III之间，其方式类似于EGF与EGFR的结合(图3)。这与以前的生化结果是一致的，以前的生化结果认为ErbB3的结构域I和III参与NRG-1卩的结合。结合亲和力研究表明ErbB3和ErbB4受体上的结合决定基团是非常相似的，尽管两者在整体序列上有较大差异。突变研究也显示对于配体-受体结合而言，NRG-ip的N-和C-末端都很重要。在折叠好的蛋白中，这两个区域在距离上相距甚远，这也支持在配体-受体相互作用时有多个区域起作用。那些介于两个区域之间的残基，尤其是那些在NRG-ip和EGF之间保守的残基，可能通过维持两个区域之间的适当距离以及方向而纯粹起结构性作用。未结合配体的ErbB3的X射线结构显示当结构域II和IV相互影响时，结构域I和III之间的配体结合位点的尺寸是配体尺寸的2倍。结构域II和IV的接触看来是限制了结构域I和III结合受体的相对方向。因此，某一配体仅仅与结构域i(或结构域in)接触的话将能结合受体但不能诱导结构域重排，而结构域重排对信号传导而言看来是必需的。基于这些结果，我们可以推断对于信号传导来说至少需要两个受体结合位点。比较NRG-1卩和EGF的结构显示出高度的结构相似性(图4)。排除N-末端区(Serl-Lys5)、无序的Q-环(Lys24-Ser30)禾卩C-末端区(Met50-Ser52)后，NRG-1(3的Ca原子和EGF的Ca原子能很好地对齐，其RMSD为约1.3A。相对于EGF的序列，NRG-1卩有一个三残基的插入。然而，用EGF的21-30残基替换NRG-ip的21-33残基对纽兰格林受体结合或其刺激受体磷酸化的能力没有影响。实验结果提示NRG-1(3中的三残基(28-30残基)插入对其功能的重要性是极小的，尽管在那一区域的结构上有显著的差异。因此，NRG-ip中突出环的方向不会影响NRG-1(3与受体结合的模建。3.分子动力学模拟受体-配体复合物的行为是通过分子动力学模拟来进行研究的，以解释蛋白柔性和构象改变。NRG-l(3/ErbB3和NRG-l|3/ErbB4的起始模型分别进行1.1纳秒和0.9纳秒的MD模拟。Ca原子从其起始位置(1=0皮秒)的均方根偏离(RMSDs)被用来测量其稳定性并获得其可能的结构起伏方面的一些信息。NRG-l卩/ErbB3和NRG-l卩/ErbB4复合物Ca原子的RMSDs的时间进程显示于图5。从图中可以看出，在第1个100皮秒内，所有残基的RMSDs均有一个急速上升，然后趋于平坦。然而，这些RMSD曲线的幅度在数据采集期间并未继续增加，这说明NRG-l|3/ErbB3和NRG-l卩/ErbB4的结构在这个时间范围内是稳定的。在NRG-l卩/ErbB3和NRG-l(3/ErbB4复合物的整个模拟过程中，平均RMSDs小于3.0A。尤其是，ErbB4与配体NRG-ip的模拟轨迹表现出很好的平衡，在最后的400皮秒内其平均RMSD为2.6A。NRG-1(3结合ErbB3的结构在最后400皮秒内地模拟过程中显示出较高的RMSD，其平均值为3.7A。这提示NRG-ip结合结构的相对稳定性。这一趋势在残基RMS起伏分析中也是显而易见的。ErbB3的残基在NRG-1(3结合结构起伏中与其平均位置的起伏要大于ErbB4复合物中残基。将所有轨迹的平均结构与其相应的起始结构叠加就可以显示出发生较大构象改变的区域。NRG-ip/ErbB3结构中表现出最大偏离的残基(残基243-256)在NRG-l(3/ErbB4复合物中同样存在(残基265-278)，但偏离程度更大。这些残基是(3-发夹环的一部分，在ErbB3的X射线结构中这一部分从结构域II突出有约20A。这个J3-发夹环在EGFR家族中是高度保守的，并且不仅在结构域II和IV之间的分子内接触中发挥明显作用，而且在受体-受体相互作用中也发挥明显的作用。我们的1:1截短模型中缺失了结构域II和IV之间的相互作用以及受体-受体接触可能导致这一区域的较高的目808。但是总体分析显示模建的结构在模拟过程中保持了稳定而没有显著的结构改变。4.受体-配体相互作用配体-受体相互作用在每一个受体上都是由3个位点组成的，如同EGF/EGFR之间的相互作用的3个位点，即位于受体结构域I中的位点1以及结构域III中的位点2和3(图3)。NRG-1卩的25-35残基以及Leu3与位点1相互作用。NRG-ip的10-19残基以及Arg44与位点2相互作用。Tyr48附近的C-末端区与位点3相互作用。配体的这些残基形成多种静电、疏水、以及氢键与受体相互作用。从配体与受体之间的氢键轨迹分析发现，NRG-ip/ErbB3和NRG-ip/ErbB4的侧链残基之间的氢键介导了少数关键性相互作用。这些氢键及其距离列于表2。从表2可以看出，关键性的相互作用包含NRG-1(3的Arg44残基和Tyr48残基(在EGF是Arg41和Arg45)与受体的作用是保留下来的。NRG-ip的Arg44侧链分别与ErbB3的Asp352侧链和ErbB4的Asp376侧链形成氢键。实验发现也支持这一结果，即用丙氨酸替换Arg44后，NRG-1P与ErbB3和ErbB4的结合力显著降低。表2.配体与受体残基侧链之间的氢键氢键配对NRG-1(3ErbB3残基组别残基组别距离(A)Asn47ND2Tyr405OH2.93Tyr48OHAsn379ND23.12Tyr48OHAsn3790D13.10Arg44NH2Asp352OD22.61Arg44NH1Asp3520D12.67Asn47ND2Asp3430D12.90Arg31NH2Glul31OE22.75Arg31NH1Glul310E12.92Asn38ND2Asn250D13,25NRG-ipErbB4残基组别残基组别距离(A)Glu390E2Lys438NZ2,87Tyr48OHAsn4030D12.73Arg44NH2Asp3760D13.04Arg44NH1Asp3760D13.12Ser27OGAspl500D13.59Asn28ND2Tyrl48OH3,16Lys35NZSer40OG2,82Asp43OD2Lys35NZ2.81除了氢键之外，NRG-lj3与ErbB3和ErbB4的位点1、2禾口3的接触面之间还存在广泛的疏水相互作用。在NRG-l卩/ErbB3复合物中，ErbB3的位点1中的Val147、Leu48、Met72以及Leul02侧链与NRG-1(3中的Leu3、Val23和Leu33发生疏水相互作用(图6A)。ErbB3的位点2中的Trp354侧链与NRG-1卩中的Phel3和Tyr32发生疏水相互作用(图6B)。此夕卜，Arg44(NRG-l(3)的长链脂肪部分还与Trp354(ErbB3)侧链有范德瓦尔斯作用。ErbB3的位点3中的Tyr405、Phe409和Ile413侧链与NRG-ip的Tyr48附近的残基形成疏水作用网络(图6C)。在NRG-l|3/ErbB4复合物中也存在相似的疏水相互作用。作为这些相互作用的结果，在NRG-1(3和ErbB4的接触面形成了3个疏水相互作用网络。NRG-1卩的Leu3、Val23和Leu33残基的侧链与ErbB4的位点1中的Leu36、Leu91和Leul21发生范德瓦尔斯作用(图7A)。NRG-1卩的Phel3、Val15以及Tyr48附近的残基的侧链分别与ErbB4的位点2和位点3也有相似的相互作用(图7B和7C)。从精制模型中推测的相互作用与存在ErbB3或ErbB4的情况下NRG-lf3突变研究结果是相符的。上述的NRG-lp与受体的结合分析为我们提供了关于ErbB3和ErBbB4与NRG-1(3相互作用的机制方面的大量信息。这反过来又有助于我们通过计算机突变方法对NRG-ip结合受体及其稳定性的相互作用组分的理解以及进一步优化。5.用MM-PBSA方法对NRG-lp进行计算机丙氨酸扫描突变为了测定相互作用界面处每一个残基对配体-受体结合的贡献大小并鉴定出配体中那些通过突变而有可能增强其结合亲和力的残基，对NRG-ip进行计算机丙氨酸扫描突变，并用MM-PBSA方法对突变配体结合受体的结合自由能进行计算。为了减少计算时间，本研究中未计算结合自由能中的熵的贡献(TAS)。当计算野生型和突变型的结合自由能的差异时，熵的贡献被认为可以忽略不计。这一假定看来是合理的，如同Massova和Kollman计算来自人p53及其突变体的一个12-残基多肽的TAS所证明的情况一样。因此，仅仅用AGsubt。ta,(而不涉及-TAS)作为估计AGtoding的标准。表3列出了NRG-1卩及其突变体与ErbB3和ErbB4的所有能量参数以及部分总结合自由能。从表3可以看出，分子间范德瓦尔斯相互作用和非极性溶剂化提供了结合的驱动力。两种复合物形成时导致强烈的有利的静电相互作用(Eek)，由于溶剂化自由能(GpB)的极性部分的不利贡献而产生相反的效果。在几次另外的研究中也发现相似的结果。NRG-ip/ErbB3和NRG-l(3/ErbB4的总的静电贡献(Eelc+GPB)分别为110.2kcalmol"和112.5kcalmol",因此不利于复合物的形成，也与上面引述的相关研究相符。表3.用MM-PBSA对NRG-ip与ErbB受体的自由能计算结果aNRG-lp/ErbB3ErbB3NRG-lpDeltab贡献平均值°标准差d平均值e标准差d平均值°标准差d平均值e标准差d标准差dEelc-16753.91112.6414940.46102,75-1361.1522.58-452.3025.80Evdw-2006.9432.49-1739.6031.19-123.3310.46-144.027.29Eint10831.8063.579798.0560.271033.7520.770.000.00Egas-7929.04133.98-6882.00123.65-450.7325.50-596.3125.25Gnonpolar143.011.19132.171.0119,130.18-8,280.44GpB-7440,22101.09-6863,6188.32-1139.1218.86562.5225.27Gsol-7297.21100.53-6731.4487,93-1120.0018,84554.2325.12Gsubt。tai-15226.2566.86-13613.4565.36-1570.7218.19-42.087.21-TASNDNDNDNDNDNDNDNDNRG-l卩/ErbB4ErbB4NRG-1(3Deltab贡献平均值°标准差d平均值e标准差d平均值e标准差d平均值e标准差d标准差dEelc-16888.0594.37-15171.7466.74-1343.0433.13-373.2727.41Evdw-2068.1931.77-1815.7629.10-119.7410.70-132.696.88E,nt10794.9261.489749,4656.821045,4619.440.000.00Egas-8161.32117.81-7238.04卯.27-417.3243.40-505.9726.96Gnonpolar138.411.45126.651.2419.440.41-7.680.52GPB-7327.2294.47-6658.6767.14-1153.3336.53485.7725.23Gsol-7188.8293.77-6532.0266,67-1134.8936.22478,0925.09Gsubt。tal68.76-13770.0663,84-1552.2020.79-27.8810.09-TASNDNDNDNDNDNDNDNDa所有数值的单位为kcalmo1—1b贡献(复合物)-贡献(受体)-贡献(配体)e400张快照的平均值d平均值的标准差基于对配体-受体相互作用进行的分子动力学模拟，我们鉴定出了NRG-1(3中负责与受体残基结合的关键残基。表4列出了NRG-1(3总共52个残基中参与结合ErbB3和ErbB4的20个残基的计算机丙氨酸扫描突变分析的结果。AAG^t。w(AGwildtype-AGmutan》为正值或负值分别提示有利或不利的替换。图8是这些数据的图形化显示。图8中的结果表明NRG-1(3的几个丙氨酸突变体显著地降低了配体与ErbB3和ErbB4相互作用的能量，尤其是在第44、48和50位的突变。这可以从结构上来进行解释。残基Arg44和Tyr48与受体的极性残基形成氢键(见图6和7)，这可以通过结合自由能(AAE^项，见补充材料表1和表2)的静电相互作用部分的贡献反映出来。Arg44Ala禾BTyr48Ala突变消除了配体和受体之间的重要氢键。Tyr48Ala和Met50Ala突变弓1起配体和受体之间的有利的范德瓦尔斯相互作用的明显丢失(AAEvdw项，见补充材料表1和表2)。表4.NRG-1(3与ErbB3和ErbB4复合物进行计算机丙氨酸扫描突变的结果(Z/\Gsubtotal=AGwiidtype_^Gmutant)NRG-ipNRG-l|3/ErbB3RG-l|3/ErbB4中的位置AAGsubt。ta,(kcal/mol)AAGsubt她,(kcal/mol)His2AlaLeu3AlaPhel3AlaVall5AlaAsnl6AlaVal23AlaAsp25AlaArg31AlaTyr32Ala-0.10±0.54-1.14±1.24-1.06±0.76-0.78±0.86-0.78土0.85-0.50±1.602.26土0.66-5.90±1.140.32+0.570.13±1.90-0.87土1.19-0,25±0.卯-1.19±0.631.90±2.94-1.53±1.00-2.20±3.71-1.83土4.21-0.34+0.01Leu33Ala-3,31±0.38-0.32±1.27Lys35Ala1.13±0.93-0.00±2.09Asn38Ala0,59±0.761.31±0.89Glu39Ala0.75±2,09-0.51±2.67Phe楊la1.59±2.121.08±3.50Arg44Ala-5.43±4.79-5.30土2.77Gln46Ala3.57±2.69-1.01±1.62Asn47Ala-0.07±2.222.03土1.72Tyr48Ala-2.99±2.45-3.05±2.40Met50Ala-3.45±0.54-1.92±1.45Ser52Ala-0,21±1.770.49±2.25为了获得每一个丙氨酸突变效果的进一步信息，丙氨酸突变后分子间范德瓦尔斯和静电相互作用的改变加上溶剂化自由能显示于图8中。在大多数情况下，分子间静电能量的变化与溶剂化自由能的变化是反向关联的。因此，重要的是根据其贡献的共同静电原点将AAE^和AAGpB合并在一起。从图8中可以看出，与其他的自由能组分的改变相比，AAEn—。M是非常小的。AAEvdw绝大多数情况下都是负值，这提示丙氨酸突变降低了结合界面的范德瓦尔斯作用。另一方面，AAE^和AAGpB合并项在大多数丙氨酸突变是有利的。一个例外是Arg44替换，这时范德瓦尔斯和静电AAGpb)相互作用均有损失。NRG-1J3的带正电荷的Arg44与ErbB3的带负电荷的Asp352和ErbB4的带负电荷的Asp376之间的分子间相互作用在野生型复合物中是极为有利的。相似的结果在Arg31Ala替换的NRG-1P与ErbB3的相互作用中亦存在(图8A)，但与ErbB4的相互作用中就不存在(图8B)。NRG-1(3/ErbB3结构显示Arg31侧链与ErbB3的Glul31侧链形成2个氢键(见表2)。因此，Arg31突变体缺失了氢键相互作用。但是，NRG-ip的Arg31并不与ErbB4受体形成氢键(表2)。6.从NRG-ipArg31Ala和Asn47Ala突变体独立轨迹对AAEbinding进行比较研究假定丙氨酸突变不会引起NRG-1卩/ErbB3禾卩NRG-l(3/ErbB4复合物的整体结构上的大的构象改变，为了验证这一假定的有效性，对NRG-1(3的Arg31Ala和Asn47Ala突变体与ErbB3和ErbB4复合物进行分子动力学模拟。突变体复合物轨迹的平均结构与起始模型之间的Ca原子的rmsd是较小的，在1.9A和2.1A之间起伏。根据突变体复合物的新的轨迹对AE^t。w值进行了重新计算，计算结果列于表5中，可以看出与野生型复合物的修改轨迹计算而得点结果几乎是完全相同的。两种方法计算的AE^t。^值的差异小于1kcalmor1(表5)。这提示在单个丙氨酸突变后，NRG-1(3/ErbB3禾DNRG-1(3/ErbB4的整体构象不会发生剧烈的改变。表5.用野生型修改轨迹以及NRG-l卩的Arg31Ala和Asn47Ala突变体<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>用计算机丙氨酸扫描突变实验计算野生型修改轨迹计算nrg-ie突变体独立轨迹7.纽兰格林及其突变体的受体结合亲和力及信号传导能力的比较研究为了研究纽兰格林及其突变体的受体结合亲和力，使用了ErbB2&ErbB3或ErbB2&ErbB4共表达的COS7细胞。细胞生长至80%满度。下午，在细胞生长至80%满度后，将培养基换成无血清培养基。24小时后，收集细胞用于受体结合亲和力实验。相似的，为了研究纽兰格林及其突变体的信号传导能力，使用了ErbB2&ErbB3或ErbB2&ErbB4共表达的COS7细胞。细胞生长至80%满度。下午，在细胞生长至80%满度后，将培养基换成无血清培养基。24小时后，将不同浓度的纽兰格林及其突变体加入到含有细胞的细胞培养板的独立孔中。IO分钟后，加入上样缓冲液裂解细胞。然后将收集的样品加入独立的孔中进行凝胶电泳以及免疫印迹分析。纽兰格林(指纽兰格林1P2的第177-237氨基酸片段)和纽兰格林突变体L3A和D43A(分别指纽兰格林片段的第3位和第43位氨基酸被丙氨酸替换)的结果显示于表6、表7、图9和图10。表6和表7中的数据表明L3A和D43A与纽兰格林对ErbB2&ErbB3共表达细胞的结合亲和力差不多(如果EC50或KD值越高，则受体结合亲和力越低)，而D43A对ErbB2&ErbB4共表达细胞的结合亲和力比纽兰格林要高(表6)，L3AX寸ErbB2&ErbB4共表达细胞的结合亲和力则比纽兰格林要低(表7)。相似的，图9和图10显示L3A和D43A结合ErbB2&ErbB4共表达细胞后诱导的AKT磷酸化要比纽兰格林诱导的多，但在ErbB2&ErbB3共表达细胞中这两个突变体诱导的AKT磷酸化要比纽兰格林诱导的低。这些结果表明L3A和D43A结合能强烈的活化ErbB2&ErbB4共表达细胞的AKT信号传导途径，但在ErbB2&ErbB3共表达细胞中仅能引起较少的活化。这些结果具有重要意义，由于心脏细胞主要表达ErbB2&ErbB4，因此诸如D43A和L3A这样的突变体能够用于治疗心血管疾病而同时减少纽兰格林结合其他表达ErbB2&ErbB3细胞而引起的副作用。表6.纽兰格林及D43A突变体分别与表达ErbB2&ErbB3和ErbB2&ErbB4的COS7细胞的受体结合亲和力比较<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>EC50是将50%的结合至受体复合物的放射性标记的配体竞争下来的配体浓度。表7.纽兰格林及L3A突变体分别与表达ErbB2&ErbB3和ErbB2&ErbB4的COS7细胞的受体结合亲和力比较<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>KD等于([配体]X[受体])/[配体受体复合物]，它反映的是配体从受体上解离下来的速率。[配体]代表配体的浓度。构建了纽兰格林双突变体8A47A(纽兰格林片段的第8位和第47位氨基酸同时被丙氨酸替换)。用上面所述的同样的方法来研究纽兰格林及其双突变体的信号传导能力。纽兰格林(纽兰格林1P2的第177-237氨基酸片段)以及纽兰格林双突变体8A47A(纽兰格林片段的第8位和第47位氨基酸同时被丙氨酸替换)的结果显示于图11。图11表明8A47A结合ErbB2&ErbB4共表达细胞后诱导的AKT磷酸化要比纽兰格林诱导的多，但在ErbB2&ErbB3共表达细胞中其诱导的AKT磷酸化与纽兰格林诱导差不多。这一结果非常重要，由于心脏细胞主要表达ErbB2&ErbB4，因此8A47A能够用于治疗心血管疾病而同时维持了纽兰格林结合其他表达ErbB2&ErbB3细胞而引起的副作用。结论同源模建、分子动力学和自由能计算方法被用于研究NRG-le与其受体ErbB3和ErbB4之间的相互作用。用分子动力学(MD)模拟研究了NRG-1P与ErbB3和ErbB4的结合特征。配体与受体的结合自由能是用MM-PBSA方法来计算的。MD模拟表明与EGF结合其受体相比，在NRG-IP结构上重要的一些残基比如Leu33、Arg44、Tyr48和Met50等与受体结合的残基被保留下来。对配体和受体结合自由能的计算有助于解析NRG-1P与受体结合亲和力的起源。而且，使用了计算机丙氨酸扫描方法来对接触面的每一个残基对结合亲和力的贡献进行作图，并通过检测结合位点的单个残基的功能来确认构建的配体-受体复合物模型的有效性。计算机丙氨酸扫描结果鉴定出来几个重要的相互作用残基配对，例如在NRG-IP与ErbB3和ErbB4结合中，显示出与实验突变结果的很好一致性。这提示NRG-13/ErbB3和NRG-1P/ErbB4复合物目前的结构模型是可靠的并且可以用于选择预期的NRG-1P突变体，这些突变体能够选择性结合受体并且结合亲和力增强，同时可以用于发现治疗心衰的新的治疗物，纽兰格林突变体L3A和D43A极大支持这一观念。上述例子仅仅是用来举例说明的，而不是用来限制本发明的范围。对上面所述进行更改是可能的。因为对本领域的技术人员来说对上面描述的例子进行修改或更改是显而易见的，此处特意指出本发明的保护范围仅受所附属的权利要求限定。权利要求1.包含SEQIDNO1所示氨基酸序列的纽兰格林-1β多肽突变体，所述多肽突变体含有一个与SEQIDNO1序列不同的氨基酸，所述多肽突变体与SEQIDNO1多肽相比有增强的ErbB3结合亲和力，而且其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y；或在第35位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y；或在第46位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。2.权利要求l中的多肽突变体，所述多肽突变体由SEQIDNO:l所示氨基酸序列组成，而且其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;或在第35位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、L、N、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;或在第46位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、R、S、T、V、W或Y。3.权利要求l中的多肽突变体，其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A;在第35位残基所述不同的氨基酸是A;或在第46位残基所述不同的氨基酸是A。4.权利要求2中的多肽突变体，其中在第25位残基所述不同的氨基酸是A;在第35位残基所述不同的氨基酸是A;或在第46位残基所述不同的氨基酸是A。5.权利要求1中的多肽突变体，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有减弱的或相近的ErbB4结合亲和力。6.权利要求5中的多肽突变体，在第25位残基所述不同的氨基酸是A。7.权利要求5中的多肽突变体，在第35位残基所述不同的氨基酸是A。8.权利要求5中的多肽突变体，在第46位残基所述不同的氨基酸是A。9.一种包含编码权利要求l中多肽突变体的核酸序列的多核苷酸。10.—种药物组合物，包含有效剂量的权利要求1中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。11.一种药物组合物，包含有效剂量的权利要求5中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。12.—种药物组合物，包含有效剂量的权利要求9中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。13.—种试剂盒，包含权利要求10中的药物组合物和用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB3受体预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。14.一种试剂盒，包含权利要求ll中的药物组合物和用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB3受体预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。15.—种预防、治疗或延迟哺乳动物精神分裂症发展的方法，包括对需要预防、治疗或延迟的动物施用包含有效量的权利要求1中的多肽突变体和制药中可接受的赋型剂的药物组合物。16.权利要求15中的方法，所述哺乳动物是人。17.包含SEQIDNO:l所示氨基酸序列的纽兰格林-l卩多肽突变体，所述多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，所述多肽突变体与SEQIDNO:l多肽相比有增强的ErbB4结合亲和力；而且其中在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;或在第47位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。18.权利要求17中的多肽突变体，所述多肽突变体由SEQIDNO:1所示氨基酸序列构成，且在第16位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y;在第31位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、S、T、V、W或Y;或在第47位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。19.权利要求17中的多肽突变体，基酸是A。20.权利要求18中的多肽突变体，基酸是A。其中在第16位残基所述不同的氨其中在第16位残基所述不同的氨21.权利要求17中的多肽突变体，其中在第31位残基所述不同的氨基酸是A。22.权利要求18中的多肽突变体，其中在第31位残基所述不同的氨基酸是A。23.权利要求17中的多肽突变体，其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。24.权利要求18中的多肽突变体，其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。25.权利要求23中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A。26.权利要求24中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A。27.权利要求25中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。28.权利要求26中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。29.权利要求17中的多肽突变体，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有减弱的或相近的ErbB3结合亲和力。30.—种包含编码权利要求17中的多肽突变体的核酸序列的多核苷酸。31.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求17中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。32.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求29中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。33.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求30中的多核苷酸和制药中可接受的赋形剂。34.—种试剂盒，包含权利要求31中的药物组合物和使用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB4受体预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。35.—种试剂盒，包含权利要求32中的药物组合物和使用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB4受体预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。36.—种预防、治疗或延迟哺乳动物病毒性心肌炎、扩张性(充血性)心肌症、心脏毒性或心肌梗死发展的方法，包括对需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物使用包含有效量的权利要求17中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂的药物组合物。37.权利要求36中的方法，所述哺乳动物是人。38.—种筛选对ErbB3有选择性增强的结合亲和力的纽兰格林-ip多肽突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-l(3或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物、以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物、以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(△GSubtotalwildtype);(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-l卩或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(AGsubt。,aninesubstituted腿ant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-l卩或其片段的一个氨基酸被丙氨酸替换；(e)计算AAGsubtotal=AGsubtotalwildtvt)e—AGs^subtotal—n^subtotalwildtype^subtotalalaninesubstitutedvariant^(f)选择使纽兰格林-l卩或其片段与ErbB3的复合物之AAG^t。ta,为正值、而使纽兰格林-l(3或其片段与ErbB4的复合物之AAGsubtotal为负值或零左右的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个与ErbB3有选择性增强的结合亲和力的纽兰格林-l卩多肽突变体。39.用权利要求38中的方法发现的纽兰格林-lJ3多肽突变体。40.—种筛选与ErbB4有选择性增强的结合亲和力的纽兰格林-l(3多肽突变体的方法，该方法包括(a)通过同源模建来建立纽兰格林-ip或其片段、ErbB3、ErbB4、纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物、以及纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物的三维结构；(b)用分子动力学模拟法来建立纽兰格林-ip或其片段与ErbB3的复合物、以及以及纽兰格林-l卩或其片段与ErbB4的复合物在溶液中的构象变化及稳定性方面的数据；(c)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由能(△Gsubtotalwildtype)5(d)用分子力学泊松玻尔兹曼表面积(MM-PBSA)法来计算纽兰格林-ip或其片段的丙氨酸替换突变体与ErbB3或ErbB4的部分总结合自由目g(AGsub她lalaninesubstitutedvariant)，其中丙氨酸替换突变体是指纽兰格林-1(3或其片段中的一个氨基酸被丙氨酸替换；wildtypeAGsubtotalalaninesubstitutedvari肌t，(f)选择使纽兰格林-ip或其片段与ErbB4的复合物之AAGsub她,为正值、而使纽兰格林-l(3或其片段与ErbB3的复合物之AAGsubt。tal为负值或零左右的丙氨酸替换突变体；就此发现了一个与ErbB4有选择性增强的结合亲和力的纽兰格林-l卩多肽突变体。41.用权利要求40中的方法发现的纽兰格林-l(3多肽突变体。42.—种包含SEQIDNO:1所示氨基酸序列的纽兰格林-lp多肽突变体，所述多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有增强的ErbB2/ErbB4结合亲和力，而且其中在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。43.权利要求42中的多肽突变体，所述多肽突变体由SEQIDNO:1所示氨基酸序列组成，而且其中在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。44.权利要求42中的多肽突变体，其中在第43位残基所述不同的氨基酸是A。45.权利要求43中的多肽突变体，其中在第43位残基所述不同的氨基酸是A。46.权利要求44中的多肽突变体，其中所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。47.权利要求45中的多肽突变体，其中所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。48.权利要求42中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A。49.权利要求43中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A。50.权利要求48中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。51.权利要求49中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。52.权利要求42中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。53.权利要求43中的多肽突变体进一步含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，其中在第47位残基所述不同的氨基酸是A。54.权利要求42中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽有减弱的或相近的ErbB2/ErbB3结合亲和力。55.权利要求54中的多肽突变体，其中在第43位残基所述不同的氨基酸是A。56.—种包含编码权利要求42中的多肽突变体的核酸序列的多核苷酸。57.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求42中的多肽突变体和制药中可接受的赋型剂。58.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求43中的多肽突变体和制药中可接受的赋型剂。59.—种药物组合物，它包含有效量的权利要求56中的多核苷酸和制药中可接受的赋型剂。60.—种试剂盒，它包含权利要求57中的药物组合物以及用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB4受体来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。61.—种试剂盒，它包含权利要求58中的药物组合物以及用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB4来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。62.—种预防、治疗或延迟哺乳动物精神分裂症发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物施用包含有效量的权利要求42中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂的药物组合物。63.权利要求62中的方法，其中哺乳动物是人。64.—种预防、治疗或延迟哺乳动物病毒性心肌炎、扩张性(充血性)心肌症、心脏毒性或心肌梗死或心血管疾病发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物施用含有效量的权利要求42中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂的药物组合物。65.权利要求64中的方法，其中哺乳动物是人。66.包含SEQIDNO:1所示氨基酸序列的纽兰格林-l(3多肽突变体，所述多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应的多肽相比有减弱的ErbB2/ErbB4受体结合亲和力，而其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。67.权利要求66中的多肽突变体，所述多肽突变体由SEQIDNO:1的氨基酸序列构成，而且其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y。68.权利要求66中的多肽突变体，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A。69.权利要求67中的多肽突变体，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A。70.权利要求68中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。71.权利要求69中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽在ErbB2/ErbB4表达的细胞中诱导更多的Akt磷酸化。72.权利要求66中的多肽突变体，所述多肽突变体比SEQIDNO:l对应多肽有增强的或相近的ErbB2/ErbB3结合亲和力。73.权利要求72中的多肽突变体，其中在第3位残基所述不同的氨基酸是A。74.—种包含编码权利要求66中的多肽突变体的核酸序列的多核苷酸。75.—种药物组合物，它包含有效剂量的权利要求66中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。76.—种药物组合物，它包含有效剂量的权利要求67中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂。77.—种药物组合物，它包含有效剂量的权利要求74中的多核苷酸和制药中可接受的赋形剂。78.—种试剂盒，它包含权利要求75中的药物组合物以及使用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB3受体来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。79.—种试剂盒，它包含权利要求76中的药物组合物以及使用该药物组合物经激活ErbB2/ErbB3受体来预防、治疗或延迟个体疾病的说明书。80.—种预防、治疗或延迟哺乳动物精神分裂症发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物施用包含有效量的权利要求66中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂的药物组合物。81.权利要求80中的方法，其中哺乳动物是人。82.—种预防、治疗或延迟哺乳动物病毒性心肌炎、扩张性(充血性)心肌症、心脏毒性、心血管疾病或心肌梗死发展的方法，包括给需要这种预防、治疗或延迟的哺乳动物施用包含有效量的权利要求66中的多肽突变体和制药中可接受的赋形剂的药物组合物。83.权利要求82中的方法，其中哺乳动物是人。84.包含SEQIDNO:1所示序列的纽兰格林-1|3多肽突变体，所述多肽突变体含有一个与SEQIDNO:l不同的氨基酸，所述多肽突变体与SEQIDNO:l对应多肽相比有增强的ErbB3结合亲和力，而且其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第47位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。85.权利要求84中的多肽突变体，所述多肽突变体由SEQIDNO:1所示氨基酸序列构成，而其中在第8位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第43位残基所述不同的氨基酸是A、C、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W或Y;和/或在第47位残基所述不同的氨基酸是A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y。全文摘要本发明提供纽兰格林1-β(neuregulin-1β，NRG-1β)的多肽突变体，这些突变体增强或减弱了与ErbB3和/或ErbB4的结合亲和力。本发明还提供了产生和筛选NRG-1β多肽突变体的方法以及用NRG-1β多肽突变体治疗疾病的方法。文档编号A61P25/00GK101336251SQ200680052155公开日2008年12月31日申请日期2006年12月4日优先权日2005年12月2日发明者周明东申请人:上海泽生科技开发有限公司