专利名称：：含有噻唑衍生物作为活性成分的药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有下式(1)所表示的1^{2-2-[(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐作为活性成分的药物。(1)更详细地，本发明涉及含有上述化合物(1)或其可药用盐作为活性成分的药物，所述药物用作鼻窦炎、鼻塞、鼻黏膜充血的预防和/或治疗剂。此外，本发明涉及含有以上述化合物(1)或其可药用盐作为活性成分的药物，所述药物用作哞喘的预防和/或治疗剂。
背景技术：
：专利文献1中，描迷了下式(2)所表示的化合物，但其中并未描述该化合物对没有有效口服治疗药物的鼻塞有效。并且该文献中也未描述该化合物对鼻窦炎有效。(2)已知鼻塞症状与哮喘相同，为速发型和迟发型反应，但是不同于哮喘，鼻塞属于鼻粘膜血管的反应，并认为鼻塞由于鼻窦粘膜的浮肿胀而发生.与短暂性速发型鼻塞反应不同，认为慢性鼻塞是以炎症反应为主的迟发型反应的结果。过敏性鼻炎中的鼻塞症状仍然是难治性症状，抗组胺药对该症状很难有效。虽然类固醇滴鼻剂对其有效，但缺点是该药物为局部施用，因此该药物因鼻腔阻塞而很难到达鼻粘膜区域。另外从副作用的角度出发，很少使用口服类固醇。已知Cys-LT！受体拮抗刑(抗白三烯药)和TXA2受体拮抗剂(抗凝血噁烷药)对鼻塞有效，但它们仅控制单一的介体，且其有效性有限。专利文献1:WO02/0254
发明内容本发明的课题是提供对花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎(eosinophilerhinitis)、鼻窦炎等中的鼻塞、鼻粘膜充血症状有效的治疗剂。更具体地，本发明的课题是提供对以下疾病有效的治疗剂(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎等；或(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎等伴有的速发型(immediate)鼻塞症状或迟发持续性(delayedpersistent)鼻塞症状；(3)诸如慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎(eosinophilesinusitis)或鼻息肉形成等鼻窦炎；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状。此外，本发明的课题是提供安全性高、毒性低的哮喘治疗剂。为解决以上课题，本发明人进行潜心研究，以找到通过以下手段解决以上课题的方法。即，发现使用式(1)所表示的N-口-2-[(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211>"基乙基}-1^，-曱基脲或其可药用盐作为活性成分，来解决以上课题，完成本发明。本发明涉及下述发明(1)预防或治疗与免疫相关的疾病的方法，其包括对患者给予有效量的下式(1)所表示的N-口-l2-l(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基}-N，-甲基脲或其可药用盐(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(2)预防和/或治疗哞喘症状的方法，其包括对患者给予有效量的N-(2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N'-甲基脲或其可药用盐，(3)预防或/和治疗以下疾病的方法(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，所迷方法包括对患者给予有效量的N-{2M2-(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐。(4)用于孝喘的预防和/或治疗剂，其含有N-口-卩-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基i乙基卜N，-曱基脲或其可药用盐作为活性成分。(5)用于以下疾病的预防和/或治疗剂(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，所述预防和/或治疗剂含有N-(2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基HV，-曱基脲或其可药用盐作为活性成分，(6)用于以下疾病的预防和/或治疗剂(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，所述预防和/或治疗剂含有与作为合用药物(coadministereddmg)的抗組胺药或类固醇组合(incombinationof)的N-(2-2-(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐，(7)根据以上(6)所述的预防和/或治疗剂，其中所述合用药物为始.紐脉I(8)根据以上(6)所述的预防和/或治疗剂，其中所述合用药物为类固醇。(9)N-口-l2-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐在制备预防或治疗哮喘的药物中的用途。(10)N-口-f2-l(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐在制备预防或治疗以下疾病的药物中的用途(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状.发明效果通过使用本发明所涉及的N-{2-2-(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基笨基)-l,3-噻唑-3(2H)-基l乙基HV，-甲基脲或其可药用盐，使以下疾病的预防和/或治疗成为可能(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，另外，通过使用本发明所涉及的N-口-2-[(3-氟苯基)亚氨基-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基I乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐，使得哞喘的安全预防或/和治疗成为可能。附图简述图1示出了药物对来自鼠骨髄来源的肥大细胞的炎症介质的产生和释放的影响。图2示出了来自鼠骨髓来源的肥大细胞的炎症介质。图3示出了药物对来自豚鼠嗜酸性粒细胞来源的肥大细胞的炎症介质的产生和释放的影响。图4示出了药物对豚鼠鼻炎模型中鼻气道阻力变化的影响。图5示出了药物对豚鼠鼻炎模型中速发型、迟发型鼻气道阻力变化的影响。图6示出了药物对豚鼠鼻炎模型的鼻腔中的炎症介质产生和释放的影响。实施本发明的最佳方式关于本发明所涉及的式U)的rH2-l2-[(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211)-基1乙基}-1^，-曱基脲的可药用盐，例举为酸加成盐和碱加成盐。就酸加成盐而言，例举为例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐等无机酸盐，以及诸如柠檬酸盐、草酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、马来酸盐等有机酸盐。就碱加成盐而言，例举为诸如钠盐、钙盐等无机碱式盐，以及诸如葡甲胺盐、三羟甲基氨基甲烷盐等有机碱式盐.本发明中包括的化合物可具有不对称碳或具有含不对称碳的取代基，因而可存在旋光异构体。本发明包括各异构体的混合物或分离的异构体.本发明所涉及的N-(2-f2-(3-氟苯基)亚氨基!-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐还包括其溶剂合物，例如水合物。本发明所涉及的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基1-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐有用于药物，且因所迷化合物抑制嗜酸性粒细胞迁移.浸润、从嗜酸性粒细胞产生和/或释放炎症介质、T细胞迁移.浸润、从肥大细胞产生和/或释放炎症介质、Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)的产生和/或释放、半胱氨酰白三烯类(-白三烯CVD4/E4,下文缩写为Cys-LT)的产生、肿瘤坏死因子-a(下文缩写为TNF-a)的产生和/或释放以及IgE抗体的产生而用作与免疫有关的疾病的预防和/或治疗刑，所迷疾病即(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；或(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状。此外，由于抑制Th2型细胞因子的产生或释放，所述化合物对Th2型细胞因子产生增强引起的疾病治疗也有效。由于本发明所涉及的N-{2-[2-(3-氟苯基)亚氨基H-(4-吗啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲具有不同于已知药物的机制，因此在用于治疗以上疾病的给药情况下，其可与以往使用的预防或治疗刑联用(coadministered),例如可以与以下药物联用抗过敏药(化学介质释放抑制剂、抗组胺药、抗白三烯药、抗凝血噁烷药或Th2细胞因子抑制剂)、类固醇(吸入类固醇、鼻用(nasal)类固醇、口服类固醇等)、支气管或鼻腔扩张药(P兴奋剂、交感神经兴奋刑(symphasomimetic)、副交感神经阻滞药(抗胆碱能药)等)、用于疫苗疗法的药物、中药、它们的合用药物(吸入卩兴奋剂与吸入类固醇的合用药物等)，尤其在与类固醇或含类固醇的联合药物联用的情况中，增强了类固醇或含类固醇的联合药物的治疗效果，并且有可能减少类固醇或含类固醇的联合药物的量或者消除类固醇或含类固醇的联合药物。抗胆碱能药物包括例如异丙托溴铵、氟托溴铵、氧托溴铵等，化学介质释放抑制剂包括例如色甘酸、色甘酸钠、曲尼司特等.抗组胺药包括苯海拉明、氯笨那敏、西替利嗪、氯雷他定、二苯拉林、奥洛他定、贝他斯汀、酮替芬、特非那丁、美喹他嗪、氮箪斯汀、依匹斯汀、奥扎格雷、非索非那定、依巴斯汀、奥沙米特等。抗白三烯药包括例如普仑司特、孟鲁司特等。Th2细胞因子抑制剂包括例如甲磺司特(suplatast)等。吸入P兴奋剂包括例如沙美特罗、丙卡特罗、马布特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、茶碱、沙丁胺醇等，优选沙美特罗。类固醇包括例如氟替卡松、倍氯米松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松等，优选氟替卡松。吸入p兴奋剂与吸入类固醇的合用药物包括例如沙美特罗和氟替卡松的合用药物。本发明所涉及的ISH2-2-(3-氟苯基)亚氨基M-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲、其可药用盐以及含有此化合物的药物，可以口服给予或胃肠外给予。口服给药的情况中，以通常的形式进行给药。在胃肠外给药中，可以局部给予(吸入剂、滴鼻剂、外用制剂)、注射、经皮给予、经鼻给予等形式给药。口服给予或直肠给予的剂型例举为胶嚢剂、片剂、丸剂、散刑、扁嚢剂(caches)、栓剂、溶液剂等。注射剂例如例举为无菌溶液或混悬剂。局部给予的刑型例举为乳骨剂、软骨剂、洗剂、透皮剂(贴剂等)等。从活性成分和可药用的无毒赋形剂等以通常方式制备以上剂型。赋形剂包括例如栽体、粘合剂、香料、緩沖剂、增稠剂、着色剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、悬浮剂、防腐剂等，栽体例如例举为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。通过以下方法制备胶嚢剂将N-口-2-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲或其可药用盐与可药用栽体放入胶嚢，或者将其与可药用稀释剂混合，并将混合物放入胶囊，或者不用任何栽体而将其放入胶囊。扁囊剂也以同样的方法制备。通过将活性成分与可药用基质混合制备散剂。基质包括滑石粉、乳糖、淀粉等。通过将活性成分与水性或非水性基质以及一种或多种可药用分散剂、混悬剂、增溶剂等混合制备滴剂.可注射溶液例举为溶液、混悬刑、乳剂等，例如水溶液、含水丙二醇等。溶液可含有水，也可以聚乙二醇和/或丙二醇溶液的形式制备溶液。适于口服给予的溶液可通过以下方式制备在水中加入ISK2-[2-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐，并根据需要向其中加入着色剂、香料、稳定剂、甜味剂、增溶剂、增稠剂等。此外，适合口服给予的溶液可通过如下方式制备将N-(2-[2-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐以及分散剂加入水中，以增稠。增稠剂例如包括可药用的天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧曱基纤维素钠或已知的悬浮剂等，局部用制剂包括上述溶液、乳骨剂、气雾剂、喷雾剂、散剂、洗剂、软骨剂等。通过将IH2-2-(3-氟苯基)亚氨基l-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(20-基1乙基卜1^，-甲基脲或其可药用盐与通常使用的稀释剂和栽体混合制备上述局部用制剂。例如通过向水性或油性基质中加入增稠刑和/或胶凝剂来制备乳骨剂和软骨剂。基质包括例如水、液体石蜡、植物油等。增稠剂包括例如凡士林、硬脂酸铝、十八醇十六醇混合物、丙二醇、羊毛脂、氩化羊毛脂、蜂蜡等，通过向水性或油性基质中加入至少一种可药用稳定剂、悬浮剂、乳化刑、分散剂、增稠剂、着色刑、香料等制备洗剂。局部用制剂根据需要可含有诸如羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯铵等防腐剂或细菌生长抑制剂.可以喷雾溶液、散剂、干粉剂或滴刑的形式经肺、吸入剂或经鼻给予PH2-l2-l(3-氣苯基)亚氨基M-(4-吗啉-4-基苯基)-l,3-塞唑-3(2H)-基l乙基卜N，-曱基脲或其可药用盐，化合物(l)或其可药用盐的剂量和给药间隔根据症状、年龄、体重、给药方式等变化。在口服给药的情况下，可以单刑量或分次剂量给予通常为约2-500mg/成人/天(优选约5-200mg,特别优选1(M00mg)的化合物。注射情况下，可以单刑量、分次剂量或连续(通过点滴)给予约0.1-300mg(优选约1-200mg)化合物。在经肺、吸入剂或经鼻给药的情况下，可以单剂量或分次剂量给予约0.1-300mg(优选约1-200mg)化合物，在外部施用(软骨、乳骨等)的情况下，可以单刑量或分次剂量给予约为0.1-300mg(优选约1-200mg)化合物。作为贴剂情况下，可以单剂量或分次剂量给予约0.1-300mg(优选1-200mg)化合物，通过以下实施例对本发明进行举例说明，但本发明并不限于此.(试样)色甘酸二钠(DSCG，色甘酸钠吸入剂，FujisawaPharmaceutical)、地塞米松(dex.，NakaraiTesc)、AA-861(WakoPureChemical)以及吲哚美辛(WakoPureChemical)均为市售商品。实施例1N-(2-[2-(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲(有时缩写为SMP-028)用WO00/18399(专利文献l)中所描述的方法制备本化合物，(1)向含有2-(氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(L02克)的乙腈(20毫升)溶液中滴入3-氟苯基异疏氰酸酯(752毫克)，在75'C加热混合物l小时，将混合物真空浓缩，并从正己烷结晶，得到2-{[(3-氟苯胺基)硫羰基(carbotWoyl)1氨基}乙基氨基甲酸叔丁酯(1.81克)。力-NMR(CDCb):<51.35(9H，s)，3.35(2H，m)，3.74(2H，m),4.89(1H，bs)，6.99(3H，m),7.37(1H，m)，7.81(1H，bs)(2)在氮气氛下，将以上(1)中制备的2-{1(3-氟苯胺基)硫羰基1氨基}乙基氨基甲酸叔丁酯U.81克)、ot-溴-4'-吗啉基苯乙酮U.56克)和乙醇(20毫升)的混合物于45X:搅拌.l小时后，过滤所得的晶体，得到(2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基-4-(4-吗啉基苯基)噻唑-3(2H)-基l乙基}氨基曱酸叔丁酯(1.76克)。将如此得到的化合物(1.76克)、甲醇(5毫升)和4N-盐酸二噁烷(50毫升)的混合物于室温搅拌。3小时后，将反应混合物真空浓缩，滤除不溶性物质，得到N-13-(2-氨基乙基HK4-吗啉基苯基)噻唑-2(3H)-亚基卜3-氟苯胺(1.57g)。向这样得到的化合物(1.57g)、2N-氢氧化钠水溶液(10毫升)和四氩呋喃(20毫升)的混合物中加入N-甲基氨基甲酸苯酯(907毫克)，55t;下搅拌该混合物。3小时后向反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取混合物。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥.真空脱除溶剂，残渣从甲醇中结晶，得到针状的标题化合物(810毫克)。mp:190-191'CIR(KBr，cm1):3328，2949,2852，1618,1595，1577。H-NMR(CDC13):32.69(3H,d，J=4.8)，3.26(4H，t,J=4.8)，3.45(2H，m)，3.89-3.93(6H，m),5.10-5,60(2H，ra),5.80(1H，s),6.80-6.93(3H，m)，6,97(2H，d，J=8.8)，7.28-54(3H，m)。实施例2药物对来自鼠肥大细胞的炎症介质的释放的影响(1)对来自鼠肥大细胞的炎症介质的释放的研究按照与Razin等(J.Immunol.132，1479-1486(1984))的方法几乎相同的方法，将鼠骨髓细胞分化为肥大细胞.即，收集雌性BALB/c小鼠(购自CharlesRiverJapan)的股骨骨髓细胞，并在含50%WEHI-3细胞培养上清液的RPMI640培养基(Inv"rogen制备，含10y。固定的FBS)中进行培养，培养超过三周并显微镜下确认分化为肥大细胞后，对细胞进行以下实验《(2)组胺释放实验将肥大细胞以2xl(^细胞/ml的浓度悬浮，向其中加入0.1jig/ml抗小鼠DNP-IgE抗体(SPE7，Sigma-Aldrich制)，将细胞悬浮液在二氧化碳孵育箱(5MC02，37t:)中醉育过夜，并被动致敏。通过用Tyrone溶液(Sigma-Aldrich制)洗涂超过两次来除去未与细胞结合的抗体，使肥大细胞以1.25"06细胞/1111的浓度在Tyrone溶液中分散。将此细胞悬浮液(80nl)加入到96孔培养板(Asahi-techno-glassCo.Ltd,)中，然后加入试样的DMSO溶液或仅加入2.5%DMSO溶液(10p，)。在二氧化碳孵育箱中再保温10分钟后，向每孔加入10jil抗原(lpg/ml，DNP-HSA，Sigma-Aldrich制，抗原终浓度为100ng/mi)进行刺激。然后将板在二氧化碳孵育箱中孵育20分钟。此时向空白组添加Tyrone溶液.通过将板置于水上以终止反应后，测定上清液中的组胺浓度。使用组胺酶免疫分才斤试剂盒(Histamineenzymeimmunoassaykit)(SPIbio)进4亍效'J定。(3)Cyst-LT释放实验除了抗原(DNP-HSA)终浓度为10ng/ml以外，采用与组胺释放实验几乎相同的方法实施本实验。使用半胱氨酰-白三烯EIA试剂盒(Cysteinyl-LeukotHeneEIAKit)(CaymanChemkal)测定上清液中半胱氨酰.白三烯的浓度。(4)细胞因子(TNF-a、IL-13)释放实验除了抗原(DNF-HSA)终浓度为3ng/ml以及加入抗原后的反应时间为4小时以外，采用与组胺释放实验几乎相同的方法实施本实验.使用酶联免疫分析试剂盒(Enzyme-lmkedimmunoassaykit)(Quantikine(注册商标)小鼠TNF-a/TNFSFlA和IL-13Immunoassay,R&Dsystems制)测定上清液中TNF-a和IL-13的浓度.结果示于图1和困2中。图1显示了药物对从鼠骨髄来源的肥大细胞产生及释放炎症介质的影响。该图显示SMP-028对从鼠骨髄来源的肥大细胞释放半胱氨酰.白三烯(Cys-LT)(A)或组胺(B)的影响，用5次重复试验的平均值士标准误差来表示结果，百分比表示抑制率。**p<0.005，*p<0.025:与对照组比较(使用原始数据进行Williams检验，单侧检验)。§§p<0.01:与对照组比较(使用原始数据进行Welch检验，双侧检验)。NS:相对于对照组无显著差异(使用原始数据进行Williams检验，单侧检验)。图2显示来自鼠骨號来源的肥大细胞的炎症介质，该图显示SMP-028对从鼠骨髄来源的肥大细胞产生和/或释放IL-13(A)或TNF-a(B)的影响。用6次重复试验的平均值士标准差来表示结果。百分比表示抑制率。##p<0，01，§§p<0.01:与对照组比较(双因素(two-waylayout)方差分析，双側检验)。*p<0.05，**p<0.01:与对照组比较(双因素Dunnett检验，双侧检验)。(5)评价如图1和图2中清楚显示，SMP-028抑制源自肥大细胞的组胺、Cys-LT、TNF-a和IL-13的释放，即，表明，SMP-028抑制来自鼻腔和鼻窦中存在的肥大细胞的炎症介质的释放。实施例3药物对来自豚鼠嗜酸性粒细胞的炎症介质的释放的影响按照与Sugasawa等(AgentsandActions37，233-237(1992))的方法几乎相同的方法，从雄性Hartley豚鼠(购自SLC)的腹部分离提纯嗜酸性粒细胞，并用改进的hanks溶液将细胞浓度调节至1.25xl07细胞/ml，将此细胞悬浮液(80)加入到96孔培养板(Asahi-techno-glassCo.Ltd.)中，然后加入试样的DMSO溶液或仅加入2.5。/oDMSO溶液(10nl)。将板在二氧化碳气体孵育箱(5%C02，371C)中预孵育10分钟后，向其中加入血小板活化因子(PAFC-16,CaymanChemical)10pi(PAFC-16的终浓度107M)，在二氧化碳气体孵育箱中进一步孵育此混合物IO分钟。通过使用免疫分析试剂盒(凝血噁炕B2EIA试剂盒、前列腺素D2-MOXEIA试剂盒，CaymanChemical)测定上清液中凝血噁烷B2和前列腺素D2的浓度，结果示于图3中。图3显示药物对来自豚鼠嗜酸性粒细胞的炎症介质的释放和产生的影响。该图显示SMP-028和吲哚美辛对来自PAF诱导的豚鼠嗜酸性粒细胞的前列腺素D2或凝血噁烷B2的释放和产生的影响。用6次重复试验的平均值士标准误差来表示结果。百分比表示抑制率。##p<0.001，§§p<0.01:与对照组比较(双因素方差分析，双侧检验)，*p<0.05，**p<0.01:与对照组比较(双因素Dunnett检验，双侧检验)。NS:相对于对照组无显著差异(双因素Dunnett检验)，评价如图3中清楚显示，SMP-028浓度依赖性地抑制源自嗜酸性粒细胞的前列腺素D2或凝血噁烷B2的释放，即，表明，SMP-028抑制来自浸润入弃腔和鼻窦中的嗜酸性粒细胞的炎症介质的释放。实施例4药物对豚鼠鼻炎模型鼻气道阻力变化的影响(1)对豚鼠鼻炎模型鼻腔阻力变化的评价参照报道(第74届日本药理学会(2001)，摘要编号P-258,Establishmentdelayedrhinitismodelbyaguineapigandeffectofpolysulfonicacidifiedhyaluronicacid,MasakiMatsudo，JunichiFuchigami等)进行以下的评价。(2)致敏对雄性Hartley豚鼠(购自KyudoCo.Ud.)从后颈透皮给予1ml含有50mgOVA和lmg氢氧化铝凝胶(PIERCE)的生理盐水，以使主动致敏。(3)药物给予从致敏开始每日1次口服给予SMP-028(5ml/体重(kg))，持续15天。在致敏日或抗体攻击日l小时前口服给药.生理盐水攻击组(生理盐水组)和对照组口服0.5%MC。地塞米J^组(dex.组)在抗体攻击的16小时和2小时前口服给予药物。(4)抗体滴鼻攻击(nasalchallenge)致敏后十四天，用微量吸管将5叽OVA-生理盐水溶液经鼻给予鼻腔两侧(每側20fU)，以进行抗体滴鼻攻击，生理盐水滴鼻组(生理盐水组)同样进行浓度致敏，并经鼻给予生理盐水(溶剂滴鼻攻击)以代替抗体滴鼻攻击。(5〉鼻腔阻力的测定通过使用综合呼吸功能分析系统(PULMOS-I，M丄P.S制)，按照双流体积描记器(Doubleflowplestymograph)法测定豚鼠在苏醒状态下的鼻腔阻力.由于抗体攻击部位局限于鼻部，因此将通过计算机分析输出的sRaw(特异性气道阻力)作为鼻腔阻力的指标，在抗体滴鼻攻击前、攻击后10分钟、2、3、4、5、6和7小时后各自测定一次每只动物的sRaw值，并在各测定时间以IOO次呼吸的平均值作为sRaw值。使用综合呼吸功能分析系统的分析軟件(WinPUL13ver，1.21)，并通过使用计算式(各测定时间期间的sRaw增加率W-100x(各测定时期的sRaw-攻击前的sRaw)/攻击前的sRaw)，从sRaw值计算sRaw的变化率。从各测定时间的sRaw变化率、攻击后10分钟的sRaw增加率(速发型反应，IAR，速发型鼻气道反应)以及由攻击后3~7小时的sRaw的增加率计算的反应曲线下面积(AUC3.7hr,迟发型反应，LAR，迟发型鼻气道反应)对化合物进行评价。通过梯形(echelon)法计算AUC3.7hr。此外，从介质对照组和各试验组的IAR和LAR计算各试验组相对于介质对照组的抑制率(％)。结果示于图4和图5中，图4显示药物对豚鼠鼻炎模型的鼻腔阻力变化的影响。该图中显示通过滴鼻对主动致敏的豚鼠进行抗原诱导后，SMP-028和地塞米松对鼻腔阻力(sRaw)随时间变化的影响，用8只动物的平均值士标准误差表示结果。百分比表示抑制率。##p<0.01:与对照组比较(学生t检验或Aspin-Weich检验，双侧检验)，*卩<0.05，**p<0.01:与对照组比较(Dunnett检验，双侧检验)。+p<0.05，++p<0.01:与对照组比较(学生t检验，双侧检验)。图5显示药物对豚鼠鼻炎模型的速发型和迟发型鼻腔阻力变化的影响。该图中显示SMP-028和地塞米松对主动致敏豚鼠模型中抗原诱导的即发型鼻腔阻力反应(IAR)和迟发型鼻腔阻力反应(LAR)中鼻腔阻力(sRaw)随时间变化的影响。用8只动物的平均值士标准误差表示结果。百分比表示抑制率。##p<0.01:与对照组比较(学生t检验，双侧检验)。*p<0.05，**p<0,01:与对照组比较(Dunnett检验，双側检验)。+p<0.05:与对照组比较(学生t检验，双侧检验)。(6)评价如图4和图5中清楚显示，在其中阳性对照(地塞米松)显示功效的试验中，SMP-028剂量依赖性地抑制速发型和迟发型鼻塞反应，在30mg/kg下，其显示与地塞米松相当的功效。(7)鼻腔灌洗液抗原滴鼻攻击8小时后，通过腹腔内给予戊巴比妥钠30mg/体重(kg)(Nembutal(注册商标)，DainipponSumitomoPharma制)进行麻醉，将动物从背部固定。打开支气管，将插管插入肺部以维持呼吸，并打结固定。阻断(stopping)口腔和鼻腔的通道后，从一部分打开的支气管至鼻腔一侧插入插管并打结，插管与注射泵连接，在鼻腔中以1ral/分钟的流速灌流(reflux)生理盐水溶液10分钟后，回收灌流液得到鼻腔灌洗液(NCLF),离心NCLF(1710.5xg(3000rpm)，4°C，10分钟),在-80'C冷冻上清液，用于实施例5中的实验，实施例5药物对豚鼠鼻炎模型的鼻腔中炎症介质的产生的影响(1)鼻腔中炎症介质的测定将实施例4中得到的NCLF上清液在-80'C冷冻保存。样品解冻后，通过免疫分析试剂盒(白三烯E4EIA试剂盒，CaymanChemical)测定LTE4的浓度，通过生物分析方法(DavidH.等，J.AllergyClin.Immunol.89，958-967(1992))使用L929细胞(购自DainipponSumitomoPharma)测定TNF的浓度。使用重组人TNF-a(PeproTech)作为标准物，用人TNF-a细胞毒性的效价表示结果。结果示于图6中，图6显示药物对豚鼠鼻炎模型鼻腔中的炎症介质的产生的影响。该图显示SMP-028和地塞米松在对主动致敏的豚鼠滴鼻进行抗原诱导8小时后抗鼻腔灌洗液(NCLF)中的抗炎症介质((A)TNF或(B)LTE4)的作用。用8只动物的平均值士标准误差表示结果。百分比表示抑制率。#p<0.05:与对照组比较(学生t检验，双侧检验)。**p<0.01:与对照组比较(Dunnett检验，双侧检验)。NS:相对于对照组无显著差异(学生t检验，双侧检验)。(2)评价如图6中清楚显示，SMP-028呈现抑制鼻腔内TNF和LTE4产生的倾向或和活性。实施例6对豚鼠迟发型哮喘模型进行化合物评价被评价化合物化合物2:WO02/02542(专利文献1)实施例350化合物1(SMP-028):实施例1化合物2化合物1(SMP-028)评价方法雄性Hartley豚鼠购自SLC,将其检疫一周后，在检疫完毕的那周通过抗原暴露进行初次致敏。通过使用超声雾化器(OMRONNE-U12，条件:雾化量最大，风量小)雾化2%(w/v)卵白蛋白(OVA，Sigma-Aldrich)的生理盐水溶液，通过暴露十分钟，将豚鼠初次致敏。致敏时，将其固定在豚鼠用身体固定夹(bodyholdercartridge)(M丄P.S制)上，并将其设置在用于8只豚鼠的暴露室架台(disposalchamberholder)上(M.I.P.S.制)。初次致敏7天后以同样方式进行追加致敏。初次致敏14至16天后，通过吸入抗原诱导哮喘反应。诱导前l小时，腹腔内给予抗组胺药马来酸吡拉明(溶于生理盐水，10mg/2mL/kg),接着口服试样。用0.5%甲基纤维素(MC)水溶液制备试样，给予量为5mL/kg。同样给予疾病诱导组0.5%MC。使用超声波雾化器将2%OVA溶液(SeikagakuCorp.制造的OVA)雾化，并通过吸入其5分钟来诱导哮喘反应。通过综合呼吸功能测定仪(M.I.P.S制)，利用双流体积描记器方法(PennyA.Hutson等，AmRevRespirDis1988137，548-557)测定呼吸功能。在反应诱导前(前值)、完成反应诱导后5分钟、1、2、3、4、5、6、7和8小时测定呼吸功能。通过使用参数之一sRaw/TV(特异性气道阻力/一次呼吸)作为改善呼吸功能的指标，计算每一个体的各测定时间之间的sRaw/TV相对前值的变化率(o/。sRaw/TV)。绘制经时间的%sRaw/TV的图，计算反应诱导后4至8小时的曲线下面积(AUC4.8br).通过使用AUC4.8hr值来计算对各个体的迟发型哞喘反应的抑制率。以这些值为基础，获得表1中所示的EDso(mg/kg)值。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>工业实用性以单剂量或分次剂量对患有以下疾病的患者给予化合物(1)或其可药用盐，可实现无副作用的治疗(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎等；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、千燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎等伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)诸如慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成等鼻窦炎；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状。此外，以单剂量或分次剂量对对患有哞喘症状的患者给予该化合物，可实现无副作用的治疗，权利要求1.预防或治疗与免疫相关的疾病的方法，其包括对患者给予有效量的下式(1)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基]-4-(4-吗啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(2H)-基]乙基}-N’-甲基脲或其可药用盐2.预防或治疗津喘症状的方法，其包括对患者给予有效量的N-(2-2-(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l,3-噻唑-3(2H)-基J乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐。3.预防或/和治疗以下疾病的方法(1)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，所迷方法包括对患者给予有效量的>1-{2-12-1(3-氟笨基)亚氨基j-4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐。4.用于哞喘的预防或治疗剂，其含有下式(l)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐作为活性成分<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>5.用于以下疾病的预防或治疗剂(1)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性真塞症状，所述预防或治疗刑含有N-口-l2-[(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐作为活性成分，6.用于以下疾病的预防或治疗剂(1)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性真炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或鼻息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，所述预防或治疗剂含有与作为合用药物的抗组胺药或类固醇组合的N-口-l2-l(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-l，3-噻唑-3(2H)-基j乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐。7.根据权利要求6所迷的预防或治疗剂，其中所述合用药物为抗组胺药。8.根据权利要求6所迷的预防和/或治疗剂，其中所迷合用药物为类固醇。9.下式(1)所表示的N-口-l2-(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基H，3-噻唑-3(2H)-基乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐在制备预防或治疗哮喘的药物中的用途10.1^{2-[2-〖(3-氟苯基)亚氨基卜4-(4-吗啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(211)-基l乙基卜N，-甲基脲或其可药用盐在制备预防或治疗以下疾病的药物中的用途(l)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性鼻炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎；(2)花粉变态反应、嗜酸性粒细胞增多性鼻炎、急性鼻炎、慢性鼻炎、肥厚性弄炎、萎缩性鼻炎、干燥性前鼻炎、血管运动性鼻炎或坏死性鼻炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状；(3)慢性鼻窦炎、顽固性鼻窦炎、嗜酸性粒细胞增多性鼻窦炎或舁息肉形成；或(4)鼻窦炎伴有的速发型鼻塞症状或迟发持续性鼻塞症状，全文摘要用于鼻窦炎、鼻塞、鼻黏膜充血的预防和/或治疗剂，其含有式(1)所表示的N-{2-[2-[(3-氟苯基)亚氨基]-4-(4-吗啉-4-基苯基)-1，3-噻唑-3(2H)-基]乙基}-N’-甲基脲或其可药用盐作为活性成分。文档编号A61P37/00GK101505758SQ200680055308公开日2009年8月12日申请日期2006年12月22日优先权日2006年5月11日发明者中岛孝,菅泽敏成申请人:大日本住友制药株式会社