专利名称：：有抗肝癌细胞生长作用的土贝母粗提组分及其cdk1激酶抑制活性的制作方法
技术领域：
：本发明涉及抗肿瘤药物筛选和中草药药效学评价领域。本发明更具体地涉及中草药土贝母(Bo化oWewwa尸Gm'cw/a&m「Ma;c/"JFraw《weO提取物的有效成分及其用途。背录技术恶性肿瘤(通称癌症)，是当前威胁人类健康的主要疾病之一。据WTO统计，2002年全世界闵恶性肿瘤死亡人数达710.6万。我国2000年癌症发病人数180-200万，死亡人数140-150万。外科疗法与放射疗法在恶性肿瘤治疗中具有重要作用，但由于肿瘤往往出现扩散与转移，对于恶性肿瘤迫切需要全身性的有效治疗方法。细胞周期激酶家族(CDK)在细胞周期调控中具有极其重要的作用，多数恶性增生性疾病的发生、发展均与细胞周期调控功能紊乱有关。不受控制的细胞增殖是恶性肿瘤的最重要特征。所以，对CDK的激酶功能进行抑制是治疗增生性(即细胞过度增殖性的)疾病的新策略。CDKl(乂称cdc2)是CDK家族的主要成员，其功能有(l)负责有丝分裂期的调控；(2)促进细胞跨越有丝分裂的检查点，完成有丝分裂等。因此，设计开发对CDK1具有高选择性的天然化合物将成为抗肿瘤药物的开发亮点。可参见例如，CharlesKung等，"利用差别途径敏感性的选择性激酶抑制"，SelectiveKinaseInhibitionbyExploitingDifferentialPathwaySensitivity,Chemistry&Biology13,399-407，2006年4月；YunDai等，"细胞周期蛋白激酶抑制剂"，Cyclin-dependentkinaseinhibitors,CurrentOpinioninPharmacology,3:362—370，2003。我国利用中草药抗肿瘤已有悠久的历史。中草药抗肿瘤与传统化疗药相比，具有毒副作用小等优点。从中草药活性成分中筛选针对CDK的抗肿瘤化合物将具有重要意义。土贝母CSo/6oWemwa尸cr"/cw/a/"w(7V/ax/w.」T^a"gweO，/萬葫卢禾斗丰直物，；实'性味苦，微寒。功能为散结、消肿、解毒。中医上用于治疗乳腺炎、颈腋淋巴结结核、慢性淋巴结炎、肥厚性鼻炎等。从土贝母中已经分离出的土贝母皂苷分别在中闺专禾ijCN94104124.7、CN95113751.4、CN99106201.9禾口CN200410021843.6中被证明具有厂''谱的抗癌效果。具有抗肿瘤作用的土贝母活性组分是否同时具有CDK1的抑制活性，这将为从中草药中寻找新型抗肿瘤药物CDK1抑制剂提供有用线索。本领域迫切需要研究并分离出同时兼具抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然药物活性成分，以更低毒、高效地治疗癌症。发明内赛本发明的目的正是提供一种同时兼具抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然药物活性成分。在本发明的第一方面，提供了一种分离自土贝母提取物的土贝母有效成分，该有效成分具有以下特性-(a)在如下的反相高压液相色谱层析条件下，所述土贝母有效成分在第30±5分钟时流出层析柱C18预装的制备型层析柱，流动相75%甲醇水溶液，流速4m]/分钟检测波长280nm;(b)所述的有效成分对肝癌细胞7721的生长有抑制作用；和(c)所述的有效成分对CDK1激酶活性有抑制作用。在本发明的^个实施方式中，所述土贝母提取物是土贝母的水溶性提取物。在另-优选例中，所述的提取物是用选自甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、或N，N-二甲基甲酰胺有机溶剂或所述有机溶剂与水的混合溶剂进行提取所获得的提取物。在本发明的-一个优选例中，所述土贝母提取物是土贝母甲醇提取物。在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率》70%，和/或对CDK1激酶活性的抑制率》70%。在另-优选例中，该抑制率用以下公式计算袖血凍、用药前细胞生长giaCDKl激酶活性-用药后细胞生长恋DKl激酶活性抑制率(*)=-m允、加胎Av-X100W用药前细胞生长恋DK1激酶活性在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率>80%，和/或对CDKl激酶活性的抑制率>80%。在本发明的一个实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制达到81.5%以上，且对CDK1激酵活性的抑制达88%以上。在本发明的一个实施方式中，所述有效成分在第28士2分钟、或在32土2分钟流出。在另一优选例中，所述有效成分在第28土1分钟、或在32士1分钟流出。在本发明的第二方面中，提供了上述土贝母有效成分在制备用于治疗细胞过度增殖性疾病的药物中的用途。在本发明的-个实施方式中，所述细胞过度增殖性疾病是CDK1激酶过度激活的疾病。在本发明的一个优选例中，所述肿瘤是肝癌。在本发明的一个优选例中，所述CDK1激酶过度激活的疾病是肝癌、结肠癌、乳腺癌、骨髓瘤、淋巴癌。在本发明的第三方面中，提供了一种药物组合物，它包含(1)治疗有效量的活性成分，所述的活性成分是前述的土贝母有效成分；(2)药学h可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在本发明的一个实施方式中，所述的土贝母有效成分占组合物总重量的0.001-99.9%。在另一优选例中，所述药物组合物还包含其它治疗细胞过度增殖性疾病的活性成分。在另-优选例中，联合给予所述药物组合物和其它治疗细胞过度增殖性疾病的活性成分或药物。在另一优选例中，所述其它活性成分或药物选自TNF-a、TGF-p、IFN-a、血管它T、内皮它丁、甘磷酰芥、lfiL卟啉、石蒜碱内铵盐、鸦胆子乳、足叶乙甙、脱水卫矛醇、阿霉素、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、去甲斑螯素、双呋喃氟尿嘧啶、葫芦素、三尖杉酯碱、冬凌草乙素、马蔺子甲素、云芝糖肽、阿糖胞苷、卡波铂、紫杉醇、香菇多糖、氟他胺、异环磷酰胺、乌苯美司、醋酸亮丙瑞林、脱氧氟尿苷、洛波铂、依林诺特肯、来屈唑或替尼泊武。附圉说明图l:土贝母的反相高压液相色谱分离过程中，在280nm下的紫外吸收光谱图。其中组分13在第28-29分钟流出，组分14在第30-31分钟流出，组分15在第32-33分钟流出。具体实簾方式本发明人经长期深入的研究发现，用有机溶剂(优选甲醇)提取的土贝母提取物经HPLC分离可分成16个组分，其中有两种组分同时显示出对肿瘤细胞增殖和细胞周期激酶CDK1的强抑制作用，在此基础上完成了本发明。具体而言，本发明所用的提取物是用例如甲醇等的有机溶剂对土贝母原料进行提取制得的。该提取物经高效液相层析根据极性分离得到了16种组分。通过细胞增殖试验(MTT)和同位素方法对上述组分进行研究，证实其中的组分13和组分15(分别于第28-29分钟或第32-33分钟流出)同时具有肿瘤细胞生长抑制活性和CDK1抑制活性，对肝癌细胞7721的生长和CDK1激酶活性的抑制都可达70%以上。本发明还涉及含有士贝母提取物有效成分的药物组合物及其在制备新型抗肿瘤药物或细胞过增殖抑制剂中的用途。本发明为在天然产物中寻找新颖CDK1激酶抑制剂提供了有用试验路线，有助于开发针对CDK1激酶耙标的高效低毒的抗肿瘤天然药物。可用作本发明原料的土贝母没有特别限制，可为新鲜土贝母(可为春播或秋播的收获物)、土贝母干、土贝母粉、土贝母粗提物或它们的衍生物、或它们的组合等。原料土贝母可采集自各产地，或通过市售购得。可对本发明采用的土贝母原料进行例如清洗等预处理，也可以不进行预处理。用于本发明方法中的一种优选原料形式是土贝母粉末。对土贝母中组分的提取可采用本领域普通技术人员已知的方法，例如，有机溶剂提取法、超临界(:02提取法、超声提取法等。优选采用甲醇萃取法。对土贝母提取物中各组分的分离可通过反相高压液相制备色谱法等本领域常规方法进行。本发明所用的土贝母提取物也可为市售的产品，例如可购自上海华大天源生物技术有限公司。i^糊欢靜游,褒成分如本文所用，"本发明的活性物质"、"活性成分"、"有效成分"指土贝母提取物的分离组分中能有效抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶的组分。在如下的反相高压液相色谱条件F,可将土贝母的提取物分离为16个组分使用C18预装的制备型层析柱，以75%甲醇水溶液为流动相，流速为4ml/分钟，检测波长为280nm。其中的有效成分组分13、14和15对肝癌细胞7721的生长抑制率》70%，优选>80%，更优选》81.5%。并且组分13和15还同时对CDK1激酶活性具有很强的抑制作用，其抑制率》70%，优选》80%，更优选》88%。在一个优选实施方式中，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制达到81.5%以上，且对CDK1激酶活性的抑制达88%以上。在优选实施方式中，组分13、14和15的肿瘤细胞生长抑制率分别为83%、85.8%和81.5%。在优选实施方式中，组分13和组分15还同时对细胞周期激酶CDK1具有很强的抑制作用，抑制率分别为88.3%和89.7%，比CDK1的专一抑制剂奥罗莫星(01omoucine，100uM)的抑制效率高约0.3倍。本发明的土贝母有效成分在第30土5分钟时流出，更优选在第28土2分钟流出或第32土2分钟时流出，最优选在第28土1分钟或在32士1分钟时流出。本发明的有效成分在HPLC分离过程中的紫外吸收谱图上分别对应有单峰(见图l)，由此可实现有效成分的有效分离。因此，可将本发明的有效成分作为药物有效成分用于治疗哺乳动物、尤其是人体内以内源性组织不需要的增生为特征的增生性疾病。例如，可用来治疗患有与细胞过量增殖有关的疾病(如癌、牛皮癣、涉及白细胞有不需要的增殖的免疫疾病、以及再狭窄和其它平滑肌疾病)的对象。另外，这些有效成分还可用来预防有丝分裂后的组织和/或细胞分化。坦TBI1"',顆wiw4ei本发明还提供了一种组合物，它含有(a)有效量的本发明的土贝母有效成分；以及(b)可接受的载体、稀释剂或赋形剂。如本文所用，术语"本发明的组合物"包括药物组合物，只要其含有本发明的土贝母有效成分作为抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶的活性成分。该药物组合物可含有(a)有效量的本发明的士贝母有效成分；以及(b)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明中，术语"含有"表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语"主要由...组成"和"由...组成"包含在术语"含有"中。本发明中，"药学上可接受的"成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。本文所用的术语"有效量"指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。为了本发明的R的，有效的剂量为给予个体约0.01毫克/千克至50毫克/千克，较佳地0.05毫克/千克至10毫克/千克体重的本发明活性物质。此外，本发明的活性物质还可与其'S治疗剂一起使用。本发明的药物组合物还可含有药学上可接受的载体。术语"药学上可接受的载体"指用于治疗剂给药的载体。该术语指这样一些药剂载体它们本身不诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体，且给药后没有过分的毒性。这些载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPub.Co.，N.J.1991年)中可找到关于药学上可接受的载体的充分讨论。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐剂、及其组合。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。本发明的组合物可通过口服以及静脉内、肌内或皮下等途径给药；优选的是口服或静脉内注射给药。适用于固体剂型的载体包括淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土等。适用于液体剂型的载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和朋A。本发明的组合物及其药物组合物也可储存在适宜于注射或滴注的消毒器具中。通常，在本发明的药物组合物中，土贝母有效成分占组合物总重量的0.00199.9%;优选为组合物总重量的195%，较优选为590%，更优选1080%。余量为药学上可接受的载体以及其它添加剂等物质。餘秀方式廣舰本发明的组合物或药物组合物，可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。本发明所述的药物组合物的剂型可以是多种多样的，只要是能耗够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。组合物可以制成适合所需给药方式的各种形式。例如，药物组合物可以制成片剂、丸剂、粉剂、锭剂、袋剂、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂(作为固体或在液体基质中)、油膏、软凝胶和硬凝胶胶囊、栓剂、无菌可注射液、无菌包装的粉末等。其中，本发明的土贝母有效成分较佳为存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。本发明的药物组合物优选通过口服给药，口服形式包括但不限于片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5%悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50%糖)、和酏剂(含有约20--50%乙醇)，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5%悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约占总重量0.001199.9重量％，优选的195重量％，较优选为590重量％，更优选1080重量％的活性成分。本发明的土贝母有效成分及其组合物也可经肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。适应于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。所用的活性成分的有效剂量可随所用的化合物、给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约1-300mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以1-3次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为5-1000mg，较佳地约为10-500mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约1-200mg的活性化合物。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。本发明的组合物或药物中还可含有其它活性成分，或可将本发明的组合物或药物与其它活性成分或抗肿瘤药物或抗细胞过度增殖性疾病药物联合给药。所述的其它活性成分或抗肿瘤或抗细胞过度增殖性疾病的药物包括但不限于TNF-a、TGF--p、IFN-a、血管它丁、内皮它丁、甘磷酰芥、血卟啉、石蒜碱内铵盐、鸦胆子乳、足叶乙甙(即依托泊甙)、脱水卫矛醇、阿霉素、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、去甲斑螯素、双呋喃氟尿嘧啶、葫芦素、三尖杉酯碱、冬凌草乙素、马蔺子甲素、云芝糖肽、阿糖胞苷、卡波铂、紫杉醇、香菇多糖、氟他胺、异环磷酰胺、乌苯美司、醋酸亮丙瑞林、脱氧氟尿苷、洛波铂、依林诺特肯、来屈唑或替尼泊甙等。当两种或两种以上的药物联合给药时，一般具有优于两种药物分别单独给药的效果。优选地，联合施用的药物或其它制剂不干扰本发明土贝母有效成分的治疗活性。本发明的主要优点在于-(1)从天然中药土贝母的提取物中筛选出了具有抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶作用的活性成分，极大提高了该药材的药效和利用率；(2)本发明的的土贝母活性成分同时具有很强的抑制肿瘤细胞增殖和抑制CDK1激酶的作用，其对CDK1的抑制作用甚至超过了CDK1专一性抑制剂奥罗莫星，因而提供了一种新的肿瘤和/或细胞过度增殖性疾病的治疗剂和方案。实饞拥以下将以实施例进"步说明本发明。这些实施例仅用于举例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例中的所有参数及其余说明，除另外说明之外，都是以质量为依据的。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的常规方法及材料皆可应用于本发明方法中。实據例l土贝母有效成分的制备摔必餘姿土贝母药材经甲醇浸泡后，将其粗提液冻千。称重15.5mg所得冻干粉，溶于15%的甲醇溶液中，过C18预装的制备型的反相高压液相色谱层析柱(HPLC，岛津A6型号)，根据紫外吸收光谱图(见附图)收集16个组分，流动相为75%甲醇水溶液，第-个组分是从样品流出的第四分钟开始收集，流速为4ml/分钟，每个组分收集2分钟共接8ml，冻千后，称重，以2rag/ral溶于DMS0有机溶剂中作为母液，待用，工作终浓度以此再稀释100倍。絲露,廉癧斧色谱仪HPLC，岛津A6型；色谱柱C18预装的制备型反相高压液相色谱柱；流动相75%甲醇水溶液；i3i:4ml/分争中；检测波长280nm。遂分雌遍潘根据紫外吸收光谱图(见图1)收集16个组分，第一个组分是从样品流出的第4分钟开始收集，每个组分收集2分钟，各收集8ml。其中组分13在28-29分钟流出，组分14在第30-31分钟流出，组分15在第32-33分钟流出。冷冻千燥所得收集液，并称重。将所得冻干粉溶于DMSO有机溶剂中，获得浓度为2mg/ml的母液，存于-2(TC冰箱备用。每次实验前，先把母液解冻，用酶反应缓冲液或细胞培养基将母液稀释10倍，使其浓度为0.2mg/ml。然后将其加入酶反应混合物或细胞培养物中时，再稀释10倍，使其最终反应浓度为0.02mg/ml。实施锎2CDK1粗糖液的翻备将处于对数生长期的Hela细胞接种于在10厘米培养板上，待其70%铺满后加入终浓度为lug/ml秋水仙素。继续培养7-17小时，使大部分细胞生长同步于M期。用新鲜培养基(DMEM)轻轻吹打，将贴壁不牢的M期细胞吹下，离心，用在冰上预冷的PBS溶液重悬一次，再次离心，加入蛋白抽提试剂(PIERCE，M-PERMammalianProteinExtractionReagent)、100X蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂(购自康成生物有限公司)后，在冰上轻轻摇动IO分钟。在4。C下，高速(15000g)离心15分钟，收集上清，对蛋白质进行定量。所得产物保存于-7(TC，备用。实據例3CM1,潘籌定采用了Promega公司的SignatectCDK1蛋白激酶分析体系(SignatectCDK1通过激酶反应将同位素标记的ATP磷酸基团转移到生物素标记的底物上，反应完成后，将反应混合物加到抗生物素膜上，洗膜后，测定膜上的同位素信号。信号强度即表示激酶活力的大小。proteinkinaseAssaysystem)(["卞]-ATP)。,潘5XCDK1激酶反应缓冲液ATP混合液(0.5raMATP，0.4uCi["P]-ATP)CDKl蛋白激酶生物素标记的肽底物(O.25mM)去禺子水5.0y12.6u12.5u17.4u1土贝母组分(0.2mg/ml)或奥罗莫星(1mM)2.5u1总体积20.0u1空白对照不加任何酶抑制剂；阳性对照加了CDKl阳性化合物奥罗莫星(100uM)。将上述反应混合物在30。C下预温1-5分钟，加入5.Oy1CDK1粗酶液(2mg/ml)以启动反应，总反应体积为25ul。该反应体系在3(TC下反应10分钟后，加入12.5"1终止液，混匀以终止反应。雕薪力離厨,取15ul终止的反应液，点样到5八1^2@膜(标记了抗生素)上，依次用2似化(:1、2MNaCl+1%H:,P04及水充分洗涤后，放于锡箔纸上l小时，晾干。在液闪计数仪(上海精博工贸有限公司的f3、y检测仪，JB4040型)上对同位素信号进行计数。重复试验三次，取测定值的平均值，按公式(l)计算抑制率，计算结果示于表l中w—未加抑制剂的酶反应信号值-加抑制剂的反应信号值酵牛S1HS^应信号值~x0公式(l)在土贝母的16种提取物中，组分13和组分15对细胞周期激酶CDK1的抑制率分别为88.3%和89.7%，比CDK1的专-抑制剂奥罗莫星(IOOuM)的抑制效率高约0.3倍。结果表明，组分13和组分15可有效用于CDK1的抑制，从而用于治疗以CDK1失调为特征的肿瘤。实據镯4MM鹿鏐墓抑镧试敏試紗蹇将肝癌细胞7721以2X10'(个/孔)的密度接种于96孔板上，培养20小时。在该板中分别加入CDK1的阳性化合物奥罗莫星和土贝母的16种分离组分，于37'C下继续培养20小时。采用了Pronega公司在细胞滴度96孔水性单溶液细胞增殖分析试齐U盒(Celltiter96AqueousOneSolutionCellProliferationAssayKit)，加入细胞滴度96孔水性单溶液试剂(Celltiter96AqueousOneSolutionReagent)，于37"C下培养2小时。在490mn下，用自动酶标仪(Bio-Rad550型)测定光吸收值。重复试验三次，并计算平均值，抑制率的计算公式同实施例3中的公式(1)，试验结果见表l。表l:土贝母的16种反相HPLC分离组分与奥罗莫星<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*奥罗莫星为CDK1的阳性化合物由表1可见，在土贝母的16种组分中，组分13、组分14和组分15对肝癌细胞株7721的生长具有很强的抑制作用，抑制率分别为83%、85.8%和81.5%。结果表明，组分13、组分14和组分15是抑制肝癌细胞生长的有效组分。综合实施例3和实施例4中的试验结果可见，本发明的土贝母活性成分(组分13和15)能在押制细胞周期激酶CDK1的同时，抑制癌细胞的生长，可作为治疗细胞过度增殖性疾病(例如肿瘤或CDK1激酶过度表达的疾病)的有效成分。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。权利要求1.一种分离自土贝母提取物的土贝母有效成分，其特征在于，所述的有效成分具有以下特性(a)在如下的反相高压液相色谱层析条件下，所述土贝母有效成分在第30±5分钟时流出层析柱C18预装的制备型层析柱，流动相75％甲醇水溶液，流速4ml/分钟检测波长280nm；(b)所述的有效成分对肝癌细胞7721的生长有抑制作用；和(c)所述的有效成分对CDK1激酶活性有抑制作用。2.如权利要求1所述的土贝母有效成分，其特征在于，所述土贝母提取物是土贝母的水溶性提取物。3.如权利要求1所述的土贝母有效成分，其特征在于，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率》70%，和/或对CDKl激酶活性的抑制率》70%。4.如权利要求1所述的土贝母有效成分，其特征在于，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制率》80%，和/或对CDKl激酶活性的抑制率》80e/0。5.如权利要求l所述的土贝母有效成分，其特征在于，所述有效成分对肝癌细胞7721的生长抑制达到81.5%以上，且对CDK1激酶活性的抑制达88%以上。6.如权利要求l所述的土贝母有效成分，其特征在于，所述有效成分在第28土2分钟、或在32土2分钟流出。7.权利要求1-6中任一项所述的土贝母有效成分在制备用于治疗细胞过度增殖性疾病的药物中的用途。8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述细胞过度增殖性疾病是CDK1激酶过度激活的疾病。9.一种药物组合物，其特征在于，它包含(l)治疗有效量的活性成分，所述的活性成分是权利要求1所述的土贝母有效成分；和(2)药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述的土贝母有效成分占组合物总重量的O.O(H-99.9%。全文摘要本发明公开了来自中草药土贝母提取物的有效成分。通过细胞增殖试验(MTT)证明，所述的有效成分具有肿瘤细胞生长抑制活性和CDK1抑制活性。本发明还涉及含有所述土贝母提取物有效成分的药物组合物，及其在制备抗肿瘤药物或细胞过增殖抑制剂中的用途。文档编号A61K125/00GK101229215SQ20071003668公开日2008年7月30日申请日期2007年1月22日优先权日2007年1月22日发明者姚根富,岳利多,杨胜利,覃文新,顾健人申请人:上海市肿瘤研究所