专利名称：：一种破壁花粉的提取物及其提取方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种破壁花粉的提取物及其提取方法和应用。技术背景花粉(pollen)是植物雄性配子体，例如向日葵花粉为菊科植物向日葵(i/e/^Wfew^ca/^to/wDari)的干燥成熟雄性繁殖器官，油菜花粉为十字花科植物油菜(&^^Cam^欲cwL.)的干燥成熟雄性繁殖器官。现有研究表明花粉具有雌激素样作用，可用于抗前列腺增生、前列腺炎等(杜旭，窦秋莲，李春艳等.黑龙江葵花粉治疗前列腺增生的药效学研究.^房0^^/V发，2002;9(2):9495;吴岩印，赵筱萍，李乓.前列康治疗前列腺增生的研究进展.中国社区医师，2007,23(2):44)。许多研究发现破壁花粉较未破壁花粉具有更佳的疗效，现花粉的破壁方法包括酶破壁法、机械破壁法、温差破壁法等(唐维,张星海.花粉破壁方法研究进展，食品与发酵工业，2003;29(2):8692)。然而，更佳的是要得到花粉中的有效成分，以更好地提高药效。
发明内容本发明要解决的技术问题即是提供一种具有更佳药效的破壁花粉的提取物及其提取方法。本发明人经过诸多试验，惊奇地发现将破壁花粉，如向日葵、油菜花等破壁花粉溶液离心，取得的离心液经过一定规格的膜微滤后取得的截留部分，具有较佳的抗炎和抗前列腺增生的作用。因此，本发明通过下列技术方案来解决上述问题。本发明提供的一种破壁花粉的提取方法，其包括将破壁花粉溶液离心，取得离心液采用《10KD的膜微滤，收集膜截留部分。本发明所说的破壁花粉溶液可以是现有固体的破壁花粉的提取液；也可以是采用现有花粉破壁技术制得的破壁花粉溶液，该溶液干燥后即可得到固体的破壁花粉。本发明优选向日葵破壁花粉、油菜破壁花粉为例来进行说明。较佳地，本发明的破壁花粉溶液选用简单易得、经济的向日葵破壁花粉或油菜破壁花粉的水提取液。该水提取液可以由下列方法制得将向日葵破壁花粉或油菜破壁花粉用水在306(TC提取510小时。同其它常规提取工艺，更佳地是用水先浸泡花粉，搅拌成匀浆后再提取；每次提取用水以花粉重量的310倍为宜。当然，本发明也可以将破壁工艺中最终得到的向日葵或油菜花破壁花粉溶液，例如将酶发酵破壁法制得的含有破壁花粉的发酵液(破壁方法可以参考张星海等.油菜花粉的微生物破壁技术研究，食品科学，2003，24(3):9295;以及公开号为CN1452888A的专利申请文件)直接进行离心。由于上述破壁花粉溶液，不管是破壁花粉水提取液、还是破壁花粉的发酵液，通常为桨液，不能直接进行膜过滤。故根据本发明，所述的离心以取得清液为目的，通常如选择较慢的离心速度，则离心时间较长；反之选择较快的离心速度，则离心时间较长。为更适于本
技术领域：
工业化生产的需求，所述的离心较佳地是以4000~8000转/分离心30~60分钟。显然，为更充分地得到本发明的提取物，提高其收率，可将离心得到的残渣再用水进行上述提取，然后离心取上清液，如此重复通常2~3次后合并所有上清液进行膜过滤；当然也可以将各次上清液分别膜过滤后将最终产物合并。根据本发明，所述的膜优选35KD的陶瓷膜。为便于保存和运输，通常将膜截留部分采用常规技术如真空、冷冻等进行干燥，得到粉末。而本发明要提供的一种破壁花粉提取物，即由上述提取方法制得。本发明制得的破壁花粉提取物经动物试验显示，具有较强的抗炎及抗前列腺增生的作用，可制备成抗炎，以及抗前列腺炎、前列腺增生等前列腺疾病的药物或保健食品。具体实施方式下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。实施例l向日葵破壁花粉水提取液的制备在向日葵破壁花粉中加入花粉重量3倍的水，浸泡，搅拌成匀浆，置30°C提取5小时。实施例2向日葵破壁花粉水提取液的制备在向日葵破壁花粉中加入花粉重量IO倍的水，浸泡，搅拌成匀浆，置6(TC提取10小时。实施例3向日葵破壁花粉发酵液的制备参照下列文献张星海等.油菜花粉的微生物破壁技术研究，食品科学，2003，24(3):9295;以及公开号为CN1452888A的专利申请文件，具体步骤为①培养基的制备将黄豆用粉碎机碾碎，按l:IO的重量比例加水，在高压锅中蒸煮6080分钟，用纱布过滤，或将黄豆包在纱布中蒸煮，提取黄豆汁，按10g黄豆，3g蔗糖，4g琼脂的比例制备培养基;②灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装在培养皿中，灭菌，冷却至室温，分别接种试管菌种黑曲霉菌(Aspergillus3040sp.)和米曲霉菌(Aspergillus3514sp.)(购自浙江大学微生物研究所)，置283(TC的恒温培养箱中培养48小时；③曲子制备采用麦麸培养基，按照体积比30%的比例，分别接种步骤②中培养皿中的菌种，在283(TC发酵2天，发酵完毕后，4000转离心20分钟分别获得黑曲霉液和米曲霉液；④将上述黑曲霉液和米曲霉液按体积比2:13:1组成酶液，将干燥的向日葵花粉和酶液按照重量比1:3的比例混合均匀，置发酵罐中37'C发酵24小时，待pH值到4.5，停止发酵。实施例4向日葵破壁花粉提取物的制备将实施例1制得的向日葵破壁花粉水提取液以4000转/分离心30分钟，取上清液(离心液)，以5KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。实施例5向日葵破壁花粉提取物的制备将实施例2制得的向日葵破壁花粉水提取液以8000转/分离心30分钟，取上清液，以10KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。实施例6向日葵破壁花粉提取物的制备将实施例3制得的向日葵破壁花粉发酵液以6000转/分离心60分钟，取上清液，以3KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。实施例7油菜破壁花粉水提取液的制备在油菜破壁花粉中加入花粉重量6倍的水，浸泡，搅拌成匀浆，置45"C提取7小时。实施例8油菜破壁花粉水提取液的制备在油菜破壁花粉中加入花粉重量10倍的水，浸泡，搅拌成匀浆，置60°C提取IO小时。实施例9油菜破壁花粉发酵液的制备参照下列文献张星海等.油菜花粉的微生物破壁技术研究，食品科学，2003,24(3):9295;以及公开号为CN1452888A的专利申请文件，具体步骤为①培养基的制备将黄豆用粉碎机碾碎，按l:IO的重量比例加水，在高压锅中蒸煮6080分钟，用纱布过滤，或将黄豆包在纱布中蒸煮，提取黄豆汁，按10g黄豆，3g蔗糖，4g琼脂的比例制备培养基;②灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装在培养皿中，灭菌，冷却至室温，分别接种试管菌种黑曲霉菌(Aspergillus3040sp.)和米曲霉菌(Aspergillus3514sp.)(购自浙江大学微生物研究所)，置283(TC的恒温培养箱中培养48小时；③曲子制备采用麦麸培养基，按照体积比30%的比例，分别接种步骤②中培养皿中的菌种，在283(TC发酵2天，发酵完毕后，4000转离心20分钟分别获得黑曲霉液和米曲霉液；④将上述黑曲霉液和米曲霉液按体积比2:13:1组成酶液，将干燥的油菜花粉和酶液按照重量比1:3的比例混合均匀，置发酵罐中37。C发酵24小时，待pH值到4.5，停止发酵。实施例IO油菜破壁花粉提取物的制备将实施例7制得的油菜破壁花粉水提取液以4000转/分离心30分钟，取上清液(离心液)，以5KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。实施例ll油菜破壁花粉提取物的制备将实施例8制得的油菜破壁花粉水提取液以8000转/分离心30分钟，取上清液，以10KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。实施例12油菜破壁花粉提取物的制备将实施例9制得的油菜破壁花粉发酵液以6000转/分离心60分钟，取上清液，以3KD的陶瓷膜微滤，得到膜截留部分和膜透过部分，收集膜截留部分，并进行冷冻干燥。上述实施例中的向日葵破壁花粉和未破壁花粉为北京中健博元生物科技有限公司的产品；油菜花粉和破壁花粉为安徽省宣城市百康蜂业的产品；陶瓷膜为意大利水气公司的产品。离心机为江苏昆山市昆工环保机械有限公司SS450型离心机。试验实施例1本发明破壁花粉提取物的抗炎作用SD大鼠按体重随机分组每组10只，空白组给予0.4%的吐温-80，试验组按表1的剂量给予相应供试品，阳性组给予阿司匹林为0.12g/kg,并给予现有花粉药物前列康(油菜破壁花粉制剂)0.5g/kg剂量和舍尼通(裸麦破壁花粉提取物)0.015g/kg剂量作为对照。灌胃容积均为10ml/kg体重，连续给药7天，末次给药前lh用外径千分尺测量大鼠左后足跖的厚度，给药后lh左后足跖注射鸡蛋清0.05ml/爪，然后于注射鸡蛋清后2、4、6小时用外径千分尺各测量一次左后足跖的厚度，测量时均在相同的部位，计算大鼠左后足跖在给药后不同时间点的肿胀度，将其左后足跖肿胀度进行组间比较，t检验。肿胀度(mm)-左后足跖厚度(注射鸡蛋清后)一左后足跖厚度(注射鸡蛋清前)，结果如下表1所示。表1本发明提取物对蛋清致大鼠足肿胀度的影响(7土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>可见，本发明向日葵破壁花粉提取物和油菜破壁花粉提取物的抗炎作用，如抗前列腺炎的疗效较现常用的消炎药阿司匹林更佳，也优于现有破壁花粉制剂。试验实施例2本发明破壁花粉提取物的抗前列腺增生作用取大鼠，随机取9只做伪手术空白组，其他大鼠在无菌条件下，用2%的戊巴比妥钠麻醉，摘除双侧睾丸，缝合皮肤。手术1周后，将去睾丸大鼠按体重随机分组。除空白组外，其余大鼠每日按0.1ml/200g体重皮下注射丙酸睾酮，剂量为3mg/kg，共30d，试验组和原料对照组按表2的剂量给予相应实施例或原料供试品，阳性组分别给予前列康0.5g/kg剂量和舍尼通0.015g^g剂量，空白组和模型组给予等容积的蒸馏水，均灌胃给予，给药容积为1.0ml/100g体重，l次/d，连续给药30d。于末次给药后2h处死动物，剖取前列腺各叶(腹、背+侧叶)，用滤纸吸除表面液体，电子天平称其湿重，计算前列腺各叶重量指数；前列腺各叶重量脏器指数=-xlOO体重结果如下表2所示。表2、本发明提取物对丙酸睾酮诱导前列腺增生大鼠模型前列腺指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与模型组比较，><0.05》<0.01可见，本发明破壁花粉提取物的抗前列腺增生疗效优于现有破壁花粉制剂，特别是较现常用药物前列康和舍尼通更佳。权利要求1、一种破壁花粉的提取方法，其包括将破壁花粉溶液离心，取得离心液采用≤10KD的膜微滤，收集膜截留部分。2、如权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的破壁花粉溶液为破壁花粉的水提取液。3、如权利要求2所述的提取方法，其特征在于所述的水提取液是由破壁花粉用3~10倍重量的水在3060'C提取5~10小时制得。4、如权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的离心为4000~8000转/分离心3060分钟。5、如权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的膜为3~5KD的陶瓷膜。6、如权利要求1所述,取方法，其特征在于将膜截留部分进行干燥得到粉末。7、如权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的破壁花粉为向曰葵或油菜花的破壁花粉。8、如权利要求17任一项所述的提取方法制得的破壁花粉提取物。9、如权利要求8所述的破壁花粉提取物在制备消炎药物或保健食品中的应用。10、如权利要求8所述的破壁花粉提取物在制备防治前列腺炎或前列腺增生的药物或保健食品中的应用。全文摘要本发明公开了一种破壁花粉的提取方法，其包括将向日葵或油菜花等破壁花粉溶液离心，取得离心液采用≤10KD的膜微滤，收集膜截留部分。本发明方法简单，易于操作，制得的破壁花粉提取物具有较佳的消炎作用以及防治前列腺炎、前列腺增生等前列腺疾病的功效。文档编号A61K36/28GK101332219SQ20071004327公开日2008年12月31日申请日期2007年6月29日优先权日2007年6月29日发明者坤李,李永辉,杨义芳申请人:浙江海正药业股份有限公司;上海医药工业研究院