专利名称：：胰脂肪酶相关蛋白1的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医学、药物学和转基因
技术领域：
。具体地，本发明涉及一种肥胖/糖尿病小鼠模型、建立该肥胖/糖尿病小鼠模型的方法，以及该肥胖/糖尿病小鼠模型的用途。更具体地，本发明涉及利用模式生物研究胰脂肪酶相关蛋白1在体内的生理和病理功能，并且进一步地发现其可以用于肥胖和糖尿病的诊断和治疗，并能用于肥胖和糖尿病治疗药物的筛选和研制。
背景技术：
：脂肪酶是一种水溶性的酶，能水解甘油三酯、磷脂和胆固醇酯等一些非水溶性物质中的酯键，食物消化、脂肪吸收、平衡能量和血浆脂蛋白代谢等过程中起着非常重要的作用。根据功能的类同和在氨基酸序列上的同源性，目前脂肪酶家族成员包括胰脂肪酶(pancreaticlipase,PL)、脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase,LPL)和肝脂酶(h印aticlipase,HL)、胰脂肪酶相关蛋白1(Pancreaticlipaserelatedproteins1，PLRP1)、胰脂肪酶相关蛋白2(Pancreaticlipaserelatedproteins2，PLRP2)、磷酯酰丝氨酸磷脂酶Al(Phosphatidylserine-specificPhospholipaseA1，PSPLAl)和内皮源性月旨酶(endotheliallipase,EU。人胰脂肪酶相关蛋白1(PLRPl)于1992年被克隆发表(GillerT，BuchwaldP,Blum-KaelinD，HunzikerW.Twonovelhumanpancreaticlipaserelatedproteins,hPLRPlandhPLRP2.Differencesincolipasedependenceandinlipaseactivity.JBiolChem.1992Aug15;267(23):16509-16.)，其氨基酸序列和人胰脂肪酶序列的同源性为68%，在小鼠中存在直系同源基因。在胰腺液中能检测到这个蛋白，表明它能够分泌到细胞外(DeCaroJ,CarriereF，BarboniP,GillerT，VergerR，DeCaroA.Pancreaticlipase-relatedprotein1(PLRP1)ispresentinthepancreaticjuiceofseveralspecies.BiochimBiophysActa.1998Sep8;1387(1-2):331-41.)。尽管PLRP1和PL有很高的同源性，但是已有的研究表明天然的PLRP1没有明显的酉旨酶活性(PayneRM，SimsHF，Je匿nsML，LoweME.Ratpancreaticlipaseandtworelatedproteins:enzymaticpropertiesandmRNAexpressionduringdevelopment.AmJ"Physiol.1994May;266(5Pt1):G914-21.)。综上所述，目前对PLRP1基因的功能和在整体中的作用还不清楚，针对PLRP1的小鼠基因剔除研究也没有文献报道。开展对体内功能未知基因的研究有许多方法，其中小鼠基因剔除技术为研究人类基因在整体中的功能提供了非常强有力的手段，通过分析获得的遗传修饰小鼠的表型变化，就能获得该基因的功能信息；这一研究方法的另一优点是可以将基因功能和疾病进行关联，从而在获得基因功能的同时也能获得该基因作为潜在药物或者药物耙点所能治疗的疾病信息和疾病动物模型。另一方面，由于代谢异常所直接或者间接引发的疾病，如肥胖、糖尿病和心血管疾病等，已成为当今威胁人类健康的主要疾病。就糖尿病而言，据WHO统计，1985年全世界有3000万糖尿病人，到1997年增加至1.35亿，现在全球糖尿病病人约有1.5亿，到2025年全球糖尿病患者将达到3亿。而在工业城市中，过度肥胖的人口已经超过总人口的10%。代谢异常的发生和人类生活方式的改变以及生活环境的恶化有关，同时也和人类基因组成有密切关系。为了研究和开发预防和/或治疗肥胖、糖尿病、高血糖等代谢病，本领域迫切需要开发相关基因种类和遗传稳定、表型稳定的肥胖/糖尿病动物模型。
发明内容本发明的目的就是提供一种用于建立遗传稳定、表型稳定的肥胖/糖尿病小鼠模型的方法，以及用于该方法的转基因小鼠模型。本发明的另一目的是提供该肥胖/糖尿病小鼠模型的用途。在本发明的第一方面，提供了一种产生肥胖/糖尿病的非人哺乳动物的方法，包括步骤(a)通过从基因组中剔除PLRP1基因或在PLRP1基因中插入外源基因，产生PLRPl基因失活的非人哺乳动物的胚胎干细胞，其中PLRPl是胰脂肪酶相关蛋白1;(b)将步骤(a)中的胚胎干细胞再生成非人哺乳动物，所述的非人哺乳动物的基因组中PLRPl基因由于剔除或插入外源基因而失活。在另一优选例中，所述的步骤(b)是将步骤(a)的胚胎干细胞注射到囊胚腔中并移植到假孕的非人哺乳动物的输卵管或者子宫，然后产生PLRPl基因失活的非人哺乳动物。在另一优选例中，所述的步骤(a)是通过用Neo基因替换PLRPl基因的外显子而导致PLRPl失活。在另一优选例中，所述的方法还包括步骤(c)对步骤(b)获得的非人哺乳动物进行鉴定。在另一优选例中，在步骤(b)还包括对获得的非人哺乳动物进行交配建系，从而获得子代。在另一优选例中，所述的非人哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、猴。在另一优选例中，步骤(b)中的非人哺乳动物是纯合的，即基因组中的两个PLRPl基因都由于剔除或插入外源基因而失活。在本发明的第二方面，提供了一种用本发明上述方法获得的非人哺乳动物的用途，这些非人哺乳动物被用作肥胖/糖尿病模型；或用于筛选预防和/或治疗肥胖的药物；和/或用于筛选预防和/或糖尿病的药物。在另一优选例中，所述的非人哺乳动物是小鼠或大鼠。在另一优选例中，所述的非人哺乳动物是纯合的，即基因组中的两个PLRPl基因都由于剔除或插入外源基因而失活。在本发明的第三方面，提供了一种胰脂肪酶相关蛋白l(PLRPl)或其编码基因或其调控序列的用途，它们被(a)用于制备诊断肥胖、糖尿病、禾P/或高血糖的试剂；或(b)用于制备或筛选治疗肥胖、糖尿病、禾P/或高血糖的药物。应理解，本发明的上述必要的和优选的技术特征以及其他技术特征(包括实施例中所公开的技术特征)，可以互相组合从而构成各种不同的技术方案，这些技术方案都构成本申请的揭示内容。图1显示了打靶载体的结构和打靶策略。图2显示了用PCR鉴定三种基因型的小鼠的电泳图。图3显示了Western印迹结果，证明该基因剔除小鼠不表达PLRP1蛋白。图4显示了基因剔除小鼠(KO)的脂肪含量大于野生型(WT)。其中*表示P<0.05。图5显示了基因剔除小鼠(KO)的血糖值大于野生型(WT)。其中*表示P<0.05。图6显示了人PLRP1的氨基酸序列。图7显示了小鼠PLRP1的氨基酸序列。图8显示了人PLRP1和小鼠PLRP1的序列比对结果。具体实施例方式本发明人经过深入而广泛的研究，建立了一种遗传稳定、表型稳定的肥胖/糖尿病模型，它是由于PLRP1基因被剔除或在PLRP1基因中插入外源基因而失活的小鼠或其他非人哺乳动物。本发明模型动物为肥胖和/或糖尿病模型。可用于脂类代谢和糖代谢研究，并且可以用于筛选预防和/或治疗肥胖和/或糖尿病的药物，尤其是通过调控PLRP1基因而预防和/或治疗肥胖和/或糖尿病的药物。在此基础上完成了本发明。具体而言，本发明人利用DNA同源重组技术，在小鼠胚胎干细胞(ES细胞)中将编码PLRP1的基因实现剔除，并通过小鼠囊胚注射技术，将PLRP1基因突变的小鼠ES细胞注射到3.5天的小鼠囊胚腔中，获得了嵌合小鼠，将嵌合小鼠和正常野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选获得了PLRP1基因突变的杂合子小鼠(PLRP1-A)，通过将杂合子小鼠相互交配获得PLRP1基因突变的纯合子小鼠(PLRP1-/-)。研究结果表明PLRP1-/-小鼠能正常出生、发育和成熟，并能生育后代。纯合子小鼠的饮食和运动和野生型对照相比无明显异常，但是这类小鼠在正常饮食的条件下，生长到6个月大时和同窝出生的野生型小鼠相比其体重明显偏胖，血液中血糖增加，糖耐受实验表明突变小鼠的糖耐受性明显下降。以上实验结果表明，PLRP1基因功能的缺乏将显著增加小鼠发生肥胖和糖尿病的倾向。这一结果将为PLRP1在人类肥胖和糖尿病的诊断和治疗，以及相关的药物开发方面提供了直接的实验证据，具有重要的应用价值。在本发明中，非人哺乳动物的例子包括(但并不限于)小鼠、大鼠、兔、猴等，更佳地是大鼠和小鼠。如本文所用，术语"肥胖/糖尿病"指肥胖和/或糖尿病。如本文所用，术语"PLRP1基因"指编码胰脂肪酶相关蛋白1(Pancreaticlipaserelatedproteins1，PLRP1)的基因。例如，人胰脂肪酶相关蛋白1的蛋白序列号为ENSP00000351695，其具体序列如SEQIDN0:1所示。小鼠胰脂肪酶相关蛋白1的蛋白序列号为ENSMUSP00000045465，其具体序列如SEQIDN0:2所示。应理解，该术语还包括各种天然存在的PLRP1基因的变异形式。代表性的例子包括因密码子的简并性而编码与野生型相同的PLRP1蛋白的核苷酸序列，编码野生型PLRP1蛋白的保守性变异多肽的核苷酸序列。此外，对于小鼠之外的其他哺乳动物时，该术语指PLRP1基因在该哺乳动物中的同系物。例如对于人而言，该术语指人的PLRP1(研究已表明，小鼠的PLRP1是人类PLRP1的直系同源物，两者在氨基酸上的同源性高达83%，基因表达分布一致)。在本发明中，"PLRP1蛋白的保守性变异多肽"指与野生型PLRP1蛋白的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表1进行氨基酸替换而产生。表1<table><table><row><column>最初的残基</column><column>代表性的取代</column><column>优选的取代</column></row><row><column>Ala(A)</column><column>Val;Leu;lie</column><column>Val</column></row><row><column>Arg(R)</column><column>Lys;Gin;Asn</column><column>Lys</column></row><row><column>Asn(N)</column><column>Gin;His;Lys;Arg</column><column>Gin</column></row><row><column>Asp(D)</column><column>Glu</column><column>Glu</column></row><row><column>Cys(C)</column><column>Ser</column><column>Ser</column></row><row><column>Gln(Q)</column><column>Asn</column><column>Asn</column></row><row><column>Glu(E)</column><column>Asp</column><column>Asp</column></row><row><column>Gly(G)</column><column>Pro;Ala</column><column>Ala</column></row><row><column>His(H)</column><column>Asn;Gin;Lys;Arg</column><column>Arg</column></row><row><column>lie(I)</column><column>Leu;Val;Met;Ala;Phe</column><column>Leu</column></row><row><column>leu(U)</column><column>lie;Val;Met;Ala;Phe</column><column>lie</column></row><row><column>Lys(K)</column><column>Arg;Gin;Asn</column><column>Arg</column></row><row><column>Met(M)</column><column>Leu;Phe;lie</column><column>Leu</column></row><row><column>Phe(F)</column><column>Leu;Val;lie;Ala;Tyr</column><column>Leu</column></row><row><column>Pro(P)</column><column>Ala</column><column>Ala</column></row><row><column>Ser(S)</column><column>Thr</column><column>Thr</column></row><row><column>Thr(T)</column><column>Ser</column><column>Ser</column></row><row><column>Trp(W)</column><column>Tyr;Phe</column><column>Tyr</column></row><row><column>Tyr(Y)</column><column>Trp;Phe;Thr;Ser</column><column>Phe</column></row><row><column>Val(V)</column><column>lie;Leu;Met;Phe;Ala</column><column>Leu如本文所用，术语"PLRPl基因失活"包括一个或两个PLRPl基因被失活的情况，即包括PLRPl基因杂合地和纯合地失活。例如，PLRPl基因失活的小鼠可以是杂合或纯合的小鼠。在本发明中，可基因剔除或转入外源基因而使PLRPl基因失活等方法制备PLRPl基因失活的非人哺乳动物(如小鼠)。在本领域中，通过基因剔除或转入外源基因而使靶基因失活的技术是已知的，这些常规技术都可用于本发明。在本发明的一优选例中，PLRPl基因的失活是通过基因剔除实现的。在本发明的另一优选例中，PLRP1基因的失活是通过PLRP1基因中插入外源基因而实现的。用本发明方法获得的纯合或杂合的小鼠可育，发育正常。失活的PLRP1基因失活可以孟德尔规律遗传给后代小鼠。在一优选例中，本发明提供了一种体细胞和生殖细胞缺失PLRP1基因的纯合小鼠，该小鼠可作为肥胖/糖尿病小鼠模型，用于脂类代谢和糖代谢研究，并且可以用于筛选预防和/或治疗肥胖和/或糖尿病的药物，尤其是通过调控PLRP1基因而预防和/或治疗肥胖和/或糖尿病的药物。本发明的主要优点在于(a)本发明肥胖/糖尿病小鼠模型的遗传稳定、表型稳定。(b)用本发明方法获得的纯合或杂合的小鼠可育，发育正常。失活的PLRP1基因失活可以孟德尔规律遗传给后代小鼠。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1打耙载体的构建和基因剔除小鼠的制备及鉴定打耙策略如图1所示。打耙载体设计如图，同源重组臂的长度为5.7kb，同源重组的结果以筛选基因Neo取代了小鼠PLRP1基因2-8个外显子。构建同源臂的DNA由PCR获得，来源于129小鼠ES细胞DNA。载体构建和ES细胞打耙方法根据发表的文献。简言之，以ES细胞DNA为模板，通过PCR扩增同源左臂(1.6k)和右臂(4.lk)，左臂用Xbal和Xhol双酶切后与同样双酶切的常规的P12-neo载体(US6，528，314)连接转化，然后用Kpnl和BamHI双酶切构建后的载体和右臂，再连接转化即完成打靶载体的构建。将打靶载体线性化后电转染ES细胞，获得抗G418的细胞克隆。提取每个细胞克隆的DNA，用PCR的方法鉴定同源重组的发生，获得所需要的发生了PLRP1基因缺失的阳性ES细胞克隆。将培养的阳性ES细胞克隆注射到小鼠囊胚腔中，再将胚胎移植到同步发情的假孕小鼠子宫中，继续发育，获得嵌合小鼠。嵌合小鼠获得后，对其进行遗传繁育，最后获得PLRP1的杂合子小鼠和纯合子小鼠。可以利用小鼠尾端组织提取DNA，并利用PCR区分不同基因型的小鼠。区分野生型、杂合子和纯合子小鼠的PCR引物分别如下Pl:5'-GGGCCCCACCATGCTTGCTCT-3'(SEQIDNO:3)P2:5'-TCGGCAGGAGCAAGGTGAGATGACAGGAG-3'(SEQIDNO:4)P3:5'-CCACCGGGACCTTTTTATGCTC-3'(SEQIDNO:5)PCR反应时，同时加入上述3种引物，对应的基因型如图2所示，其中纯合子小鼠具有1.5kb的反应条带，野生型小鼠具有l.Okb的条带，杂合子同时具有上述两条。采用WesternBlot方法对基因剔除小鼠PLRP1蛋白的去除进一步进行了鉴定，方法如下胰脏抽提蛋白经SDS聚丙烯凝胶电泳后转移到硝酸纤维素膜上。WesternBlot根据常规方法进行。抗体为用常规方法制备的兔抗小鼠PLRP1多抗。结果表明，PLRP1基因剔除纯合子小鼠(KO)中已检测不到PLRP1蛋白的存在(图3)。实施例2PLRP1基因剔除小鼠脂肪含量变化研究对野生型小鼠和PLRP1基因剔除小鼠，用正常饮食进行喂养，当小鼠年龄为6.5个月时，用台式核磁共振分析仪Brukerminispec(购自Bruker公司)测定脂肪含量。结果如图4所示，基因剔除小鼠(KO)的脂肪含量大于野生型(WT)。这表明，PLRP1的失活会导致肥胖。实施例3PLRP1基因剔除小鼠血糖变化研究对野生型小鼠和PLRP1基因剔除小鼠，用正常饮食进行喂养，当小鼠年龄为6.5个月时，用日立牌的生化分析仪测定血糖值。结果如图5所示，基因剔除小鼠(KO)的血糖值大于野生型(WT)。这表明，PLRP1的失活会导致高血糖。实施例4人类PLRP1蛋白序列和小鼠PLRP1蛋白序列的同源性比较用NCBI的blastp软件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，对小鼠的PLRP1(SEQIDN0:2和图7)与人的PLRP1(SEQIDN0:1和图6)进行序列比对。比对结果如图8所示，两者在氨基酸序列上的同源性高达83%。实施例5筛选预防/治疗肥胖或高血糖的化合物在对照组中，对野生型小鼠和PLRP1基因剔除小鼠，用正常饮食进行喂养。在测试组中，对PLRP1基因剔除小鼠，用正常饮食进行喂养，并且定期添加候选的测试物质(植物提取物或合成的化合物)。当小鼠年龄为6个月时，用实施例4相同方法测定脂肪含量，用实施例5相同方法测定血糖值。如果测试组中脂肪含量显著低于对照组中的PLRP1基因剔除小鼠，则提示该测试化合物有降低脂肪含量的作用，可作为预防/治疗肥胖的候选药物。如果测试组中血糖值含量显著低于对照组中的PLRP1基因剔除小鼠，则提示该测试化合物有降低血糖的作用，可作为预防/治疗高血糖的候选药物。讨论人类基因组计划完成后，生命科学研究的重心已从分子和基因水平扩大到对整体动物的功能性分析及其在临床上的应用。其中模式动物，包括果蝇、线虫、斑马鱼、小鼠等是最主要的研究对象。小鼠基因组与人类具有90%以上的同源性，小鼠在胚胎发育、组织器官和功能、细胞内信息传导和生化代谢通路等与人类极为相似，经过基因工程修饰的小鼠动物模型，是基因功能、人类疾病发生机制及新药研究开发最重要的模式生物。作为人类疾病的模型，小鼠动物模型已经涵盖了包括糖尿病、肥胖症、心房纤颤等心血管系统障碍等多种人类疾病的动物模型。利用小鼠模型研究未知基因的功能，是通过基因剔除，基因突变或转基因，产生经过遗传改造的小鼠，通过对动物表型变化的分析及生理生化代谢过程的变化分析，在整体动物、细胞及分子水平解析基因的功能，从而将相关基因作为药物作用的靶点，用来进行新型药物的筛选。对于PLRP1而言，有研究表明，需要大量的PLRP1蛋白和各种不同的底物，才能发现有微量的酯酶活性，这种活性依赖胆汁酸盐和共脂肪酶，令人感兴趣的是PLRP1和共脂肪酶的结合活性和脂肪酶相当(CrenonI，FoglizzoE，KerfelecB，VerineA，PignolD，HermosoJ，BonicelJ，ChapusC.Pancreaticlipase-relatedproteintypeI:aspecializedlipaseoraninactiveenzyme.ProteinEng.1998Feb;11(2):135-42.)。事实上，PLRP1在结构和氨基酸组成上和PL非常相似，根据PL的结构和序列，只需要将PLRP1的V179和A181突变成A179和P181就能显著重建PLRP1酉旨酶的活性(CrenonI，JayneS，KerfelecB，HermosoJ，PignolD，ChapusC.Pancreaticlipase-relatedproteintype1:adoublemutationrestoresasignificantlipaseactivity.BiochemBiophysResCommun.1998May19;246(2):513-7;BezzineS，RousselA，deCaroJ，GastinelL，deCaroA，CarriereF，LeydierS,VergerR，CambillauC.Aninactivepancreaticlipase-relatedproteinisactivatedintoatriglyceride-lipasebymutagenesisbasedonthe3-Dstructure.ChemPhysLipids.1998Jun;93(1-2):103-14.)。根据上述的研究结果，本发明人认为，PLRPl可能是PL的一个活性调节蛋白，通过竞争结合共脂肪酶来抑制PL的活性。一些体外的研究表明，失活的PL蛋白通过竞争共脂肪酶强烈地抑制PL的活性。另外，PLRP1蛋白主要表达在胰腺中，在胰岛中表达较高，和PL不同，它在胚月台其月艮卩表达(YangY，SanchezD，FigarellaC，LoweME.Discoordinateexpressionofpancreaticlipaseandtworelatedproteinsinthehumanfetalpancreas.PediatrRes.2000Feb;47(2):184-8.)。PLRPl基因在人群中存在多态性，但是还没有将其和人类代谢疾病联系的证据(CaoH，HegeleRADNApolymorphismsoflipaserelatedgenes.J"HumGenet.2003;48(8):443-6.Epub2003Aug1)。PLRPl受可的松的调节，可的松下调PLRPl的表达，而但上调PLRP2的表达(KullmanJ，GisiC，LoweME.Dexamethasone-regulatedexpressionofpancreaticlipaseandtworelatedproteinsinAR42Jcells.AmJPhysiol.1996May;270(5Pt1):G746-51)，而瘦素(l印tin)也可以下调PL和PLRPl的表达'上调PLRP2的表达(ElinsonN，AmichayD，BirkRZ.Leptindirectlyregulatesexocrinepancreaslipaseandtworelatedproteinsintherat.BrJNutr.2006Oct;96(4):691-6.),PLRPl蛋白在激素调节代谢方面的意义还不明确。本发明人利用DNA同源重组技术，首次制备了剔除PLRPl的基因的小鼠。PLRPl-/-小鼠能正常出生、发育和成熟，并能生育后代。纯合子小鼠的饮食和运动和野生型对照相比无明显异常，但是这类小鼠在正常饮食的条件下，生长到6个月大时和同窝出生的野生型小鼠相比其体重明显偏胖，血液中血糖增加，糖耐受实验表明突变小鼠的糖耐受性明显下降。以上实验结果表明，PLRPl基因功能的缺乏将显著增加小鼠发生肥胖和糖尿病的倾向。这一结果将为PLRPl在人类肥胖和糖尿病的诊断和治疗，以及相关的药物开发方面提供了直接的实验证据，具有重要的应用价值。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。序列表<110>上海南方模式生物科技发展有限公司上海南方模式生物研究中心<120〉胰脂肪酶相关蛋白l的用途<130〉071989<160>5<170>Patentlnversion3.4<210>1〈212〉PRT<213〉人(homosapiens)<400>1<formula>seeoriginaldocumentpage14</formula><sequence>seeoriginaldocumentpage15</sequence><210〉2<211〉473<212〉PRT<213〉小鼠(Musmusculus)<400>2<sequence>seeoriginaldocumentpage15</sequence><formula>seeoriginaldocumentpage16</formula><212〉DNA<213>人工序列<220〉<221〉misc—feature<223>引物<400>3gggccccaccatgcttgctct21〈210〉4<211>29<212〉腿<213〉人工序列<220><221〉misc—feature<223〉引物<400〉4tcggcEiggeigc卿gtgagatg3C3ggeig29<210〉5<211〉22<212〉DNA<213>人工序列<220〉<221〉misc—feature<223>引物<400〉5ccaccgggacctttttatgctc2权利要求1.一种产生肥胖/糖尿病的非人哺乳动物的方法，其特征在于，包括步骤(a)通过从基因组中剔除PLRP1基因或在PLRP1基因中插入外源基因，产生PLRP1基因失活的非人哺乳动物的胚胎干细胞，其中PLRP1是胰脂肪酶相关蛋白1；(b)将步骤(a)中的胚胎干细胞再生成非人哺乳动物，所述的非人哺乳动物的基因组中PLRP1基因由于剔除或插入外源基因而失活。2.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述的步骤(b)是将步骤(a)的胚胎干细胞注射到囊胚腔中并移植到假孕的非人哺乳动物的输卵管或者子宫，然后产生PLRP1基因失活的非人哺乳动物。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(a)是通过用Neo基因替换PLRP1基因的外显T而导致PLRP1失活。4.如权利要求l所述的方法，其特征在于，还包括步骤(c)对步骤(b)获得的非人哺乳动物进行鉴定。5.如权利要求l所述的方法，其特征在于，在步骤(b)还包括对获得的非人哺乳动物进行交配建系，从而获得子代。6.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述的非人哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、猴。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中的非人哺乳动物是纯合的，即基因组中的两个PLRP1基因都由于剔除或插入外源基因而失活。8.—种用权利要求1所述方法获得的非人哺乳动物的用途，其特征在于，用作肥胖/糖尿病模型；或用于筛选预防和/或治疗肥胖的药物；和/或用于筛选预防和/或糖尿病的药物。9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的非人哺乳动物是小鼠或大鼠。10.—种胰脂肪酶相关蛋白l(PLRPl)或其编码基因或其调控序列的用途，其特征在于，它们被(a)用于制备诊断肥胖、糖尿病、和/或高血糖的试剂；或(b)用于制备或筛选治疗肥胖、糖尿病、禾B/或高血糖的药物。全文摘要本发明公开了一种肥胖/糖尿病模型动物、建立该肥胖/糖尿病模型动物的方法，以及该肥胖/糖尿病模型动物的用途。在本发明的肥胖/糖尿病小鼠模型中，已从基因组中剔除PLRP1基因或在PLRP1基因中插入外源基因而导致PLRP1基因失活。该肥胖/糖尿病动物模型的遗传稳定、表型稳定，可用于研究胰脂肪酶相关蛋白1在体内的生理和病理功能，用于肥胖和糖尿病治疗药物的筛选和研制。文档编号A61K49/00GK101342372SQ20071004358公开日2009年1月14日申请日期2007年7月9日优先权日2007年7月9日发明者任健科,王铸钢,俭费申请人:上海南方模式生物科技发展有限公司;上海南方模式生物研究中心