专利名称：一种叶酸羧基复合物的制备方法
技术领域：
本发明属制药领域，涉及药物制备方法，具体涉及一种高效制备叶酸羧基复合物 的方法及其在基于叶酸靶向的药物研制中的应用。
背景技术：
叶酸是生命体所需要的营养物质，它主要在细胞的增殖过程中为DNA的合成提供 一碳基团。己知真核细胞自身无法合成叶酸，只能依赖于外源性叶酸来维持。细胞对 叶酸的摄取是通过细胞膜上的叶酸受体，叶酸与叶酸受体之间的作用具有高特异性和 高亲和性的特点。研究表明，叶酸受体在肿瘤细胞表面的表达量较正常细胞显著增加 [Campbell et al :Cancer Res 1991;51:5329。 Coney et al: Cancer Res 1991;51:6125。 Weitman et al: Cancer Res 1992:52:3396]，即肿瘤细胞摄取叶酸量显著大于正常细 胞。因此，利用叶酸作为靶向头基偶联上治疗药物或诊断药物可以增加此类药物对肿 瘤细胞/肿瘤组织的亲和性，减少其对正常细胞的毒副作用[Low et al:W096/36367 Nov. 21, 1996; USA 5688488 Nov. 18， 1997]。
现有技术公开了药物与叶酸的偶联一般是通过药物与叶酸分子中的羧基间形成共 价连接而成。叶酸分子中有两个羧基，即a-羧基和Y-羧基。早期研究认为，药物只 有通过与Y -羧基连接形成的复合物才具有与叶酸受体特异性结合的特性，而通过a -羧基连接形成的复合物则不具备这一特性，但近年来有研究者对此表述表示置疑。
现有技术制备叶酸-药物复合物一般是通过碳二亚胺类脱水剂直接将叶酸与化合 物縮合[Leamon et al:J Biol Chem 1993.268,24847]。这种方法虽然合成上简单，只 需要一步就可得到产物，但是产物中杂质多，有未反应的叶酸、叶酸a-羧基连接产物、 叶酸Y-羧基连接产物以及一些其他杂质，且叶酸a-羧基连接产物含量较多(参见附 图l)，因而产物的后处理比较复杂。
近年来，国外的研究者对合成路线又进行了一些改进。其基本设计思路是将叶 酸拆分为两个部分，喋啉酸与谷氨酸。再在谷氨酸a-羧基保护前提下，进行Y-羧基 的縮合。最后再接上喋啉酸制得叶酸复合物[Jin Luo et al: J Am Chem Soc 1997:119:10004. Fuchs et al: USA6291673 Apl. 17, 2000]。利用这种方法制备叶酸
复合物，所有后处理都可用沉淀方法直接纯化，简便易行，产物中叶酸Y-羧基产物含
量大于90%。但是这种方法步骤繁琐，试剂也昂贵。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效制备叶酸羧基复合物的方法。本发明方法可应用在 基于叶酸靶向的药物的研制。
本发明还提供了以此叶酸羧基复合物为中间体进一步制备其他叶酸一药物复合物 的方法。
本发明是介导多羟基聚合物，利用立体选择性合成方法制备叶酸羧基复合物。从 空间结构上分析，叶酸的a-羧基的位阻效应要大于Y-羧基，利用高分子的空间位阻 效应，使得a-羧基反应活性大大低于Y-羧基，先将叶酸与多羟基聚合物形成以叶酸 Y-羧基连接为主的多酯聚合物；再用双胺或单胺类化合物进行胺解转化，并利用高分 子与小分子在体积上的悬殊差异，大大简化纯化过程，得到含量高达9(^以上的叶酸y 一羧基与胺类化合物的衍生物。并且在此基础上,作为优质中间体进一步制备其他具有 肿瘤靶向特性的叶酸—药物复合物，如叶酸(Y)—二乙三胺五醋酸等。 本发明方法包括下述式(I )的步骤
通过叶酸先与多羟基聚合物形成酯，然后再用胺类化合物进行胺解获得叶酸羧基
复合物。
<formula>formula see original document page 5</formula>
基乙醇、单氨基PEG、单氨基PEG-SH、单氨基PEG-C00H等。
具体说，上述推荐的反应路线是将叶酸溶于有机溶剂，如二甲亚砜、N，N-二甲基 甲酰胺等中，加入碳二亚胺类縮合剂(如二环己基碳二亚胺)和碱性催化剂(如吡啶、 对二甲基氨基吡啶等)；室温活化1 2个小时后，加入多羟基聚合物(如多聚糖)，于 室温反应20小时后除去游离叶酸等小分杂质，得化合物1;化合物1溶解于有机溶剂 (如二甲亚砜、N，N-二甲基甲酰)中，加入二胺或单胺基化合物，或直接悬浮于二胺或 单胺基化合物中，于室温反应3 6小时得化合物2。
上述的多羟基聚合物选自葡聚糖类、聚蔗糖类、果聚糖类、杂聚多糖类、单或杂 聚多糖硫酸酯类、单或杂聚糖醛酸多糖类或其它亲水性醇类高聚物；优选葡聚糖，所 述的葡聚糖是右旋糖酐，分子量范围为10， 000-500, 000;
所述的胺类化合物为双胺类化合物或双胺类聚合物或单胺类化合物或单胺类聚合 物，其中所述的双胺类化合物或双胺类聚合物其二端氨基之间的碳原子数介于2-20之 间的化合物，或其二端氨基之间为重复单元的聚合物；所述的单胺类化合物或单胺类 聚合物其一端为氨基另一端为羟基或巯基或羧基；
所述的双胺类化合物选自乙二胺或己二胺，所述的双胺类聚合物选自聚氧乙烯二 胺或聚乙二醇二胺。
所述的单胺类化合物为氨基乙醇；所述的单胺类聚合物选自单氨基聚氧乙烯或单 氨基聚乙二醇、单氨基单巯基聚氧乙烯或单氨基单巯基聚乙二醇、单氨基单羧基聚氧 乙烯或单氨基单羧基聚乙二醇，其中所述的聚氧乙烯或聚乙二醇的分子量范围均为 2, 000 20, 000。
本发明的制备方法无需价格昂贵的特殊试剂，操作方便，反应条件温和。产物中 只有叶酸a -羧基连接产物和Y —羧基连接产物，且叶酸Y —羧基连接产物为主 (>90%)。同时可以进一步方便地制备具有肿瘤靶向特性的其他叶酸Y —羧基复合物， 如肿瘤显像剂叶酸一二乙三胺五醋酸的制备。
图1是二环己基碳二亚胺为缩合剂，叶酸与乙二胺直接反应的粗品HPLC图谱。 其中，色谱方法色谱柱Diamonsil C18 200X4. 6 迪马；流动相A: 5mM 磷酸盐缓冲液pH 7;流动相B:乙腈；洗脱程序0—15min 3%B-15%B;流速0. 7ml/min;
柱温25。C;检测UV365nm;
t叶酸17. 199min; ta—叶酸乙二胺22.916min; ty-叶酸乙二胺23.987min。 图2是利用立体位阻效应间接合成叶酸一乙二胺的HPLC图谱， 其中，色谱方法同图1中所述； ta-叶酸乙二胺22.896min ; ty-叶酸乙二胺23.507min。 图3是间接法制备的叶酸一PEG 二胺的HPLC图谱，
其中，色谱条件色谱柱TSK GEL G4000PWXL column 300 x 4. 6咖；流动相5mM 氯化钠；流速0.5ml/min;柱温25°C;检测UV280nm; t叶酸一pEG二胺22. 167min。 图4是叶酸-乙二胺-荧光素细胞内化照片，
其中，叶酸-乙二胺-荧光素100nM于37。C与KB和SGC7901细胞作用4小时的荧光显
微照片，A:KB细胞，溶液中不含游离叶酸；B: KB细胞，溶液中含lmM叶酸；C:
SGC7901细胞，溶液中不含游离叶酸；D: SGC7901细胞，溶液中含lmM叶酸； 左图为荧光照片，右图为明场照片对照。 图5是叶酸-PEG 二胺-荧光素细胞内化照片，
其中，叶酸-PEG 二胺-荧光素100nM于37'C与KB和SGC7901细胞作用4小时的荧光
显微照片，A:KB细胞，溶液中不含游离叶酸；B: KB细胞，溶液中含lmM叶酸；C:
SGC7901细胞，溶液中不含游离叶酸；D: SGC7901细胞，溶液中含lmM叶酸；
左图为荧光照片，右图为明场照片对照。
图6是叶酸一二乙三胺五醋酸的荷瘤裸鼠影像照片，
其中，叶酸一二乙三胺五醋酸放射性标记后尾静脉注射荷SGC — 7901瘤裸鼠，SPECT
于4小时显像照片，3:肿瘤；b:肾脏；C:膀胱。
图7是叶酸a-乙二胺-荧光素与叶酸Y-乙二胺-荧光素细胞内化照片，
其中，叶酸a -乙二胺-荧光素与叶酸Y-乙二胺-荧光素lOOnM于37。C与KB细胞作 用4小时的荧光显微照片，A:叶酸a-乙二胺-荧光素；B:叶酸Y-乙二胺-荧光素； 左图为荧光照片，右图为明场照片对照。
图8是叶酸ct 一二乙三胺五醋酸与叶酸Y —二乙三胺五醋酸不同比例混合样品的肿 瘤组织与其它非靶组织的XID/g比值，
其中，叶酸Y—二乙三胺五醋酸与叶酸a —二乙三胺五醋酸不同比例混合样品(分
别为10/0、 5/1、 10/1、 20/1、 0/10)，尾静脉注射荷瘤裸鼠，分别测定三个时相(0.5h、 lh和4h)所得肿瘤组织与其它非靶组织的XID/g比值。
具体实施例方式
通过下述实施例将有助于进一步理解本发明，但并不限制本发明的内容。
实施例l.制备化合物l
1、 叶酸一右旋糖酐
0.74g二甲氨基吡啶溶于12ml甲酰胺/N，N-二甲基甲酰胺/二氯甲烷(10:9:1)混 合溶剂，加入0. 25g叶酸和1. 16g 二环己基碳二亚胺，然后加入溶于上述混合溶剂的 右旋糖酐(分子量分别为10, 000; 40， 000; 70， 000; 110， 000; 500， 000)溶液(0. lg/ml) 6ml， 25'C蔽光反应20小时，反应终止后抽滤，滤液注入丙酮中，产生淡黄色沉淀， 抽滤收集沉淀物，真空干燥，得叶酸一右旋糖酑粗品。用S印hadex G-15柱纯化，重 蒸水洗脱，收集第一色谱段洗脱液，冷冻干燥，得叶酸一右旋糖酐纯品。
2、 叶酸一聚蔗糖
以0. 6g聚蔗糖替代0. 6g右旋糖酐，进行与叶酸一右旋糖酐制备完全相同的反应 和处理。
3、 叶酸一糊精
0. 74g 二甲基氨基吡啶溶于8ml 二甲亚砜，加入0. 25g叶酸和1. 16g 二环己基碳二 亚胺，然后加入溶于二甲亚砜的糊精溶液(0. 15g/ml) 4ml,后续制备及纯化方法与叶 酸一右旋糖酐制备及纯化方法相同。
实施例2.制备化合物2
1、 叶酸一乙二胺
3g叶酸一右旋糖酐悬浮于20ml乙二胺中，室温蔽光反应3小时。随着反应的进行， 溶液逐渐变为澄清。反应终止后，反应液注入丙酮中形成淡黄色沉淀。抽滤收集沉淀 物，沉淀重新溶解于50ml蒸馏水中，1.6N盐酸调节pH至7.0，形成暗红色沉淀。离心得 沉淀，经丙酮、乙醚洗漆后真空干燥得目标化合物3。 1H醒R (DMS0-d6/CF3C02D, 10/1 v/v S ppm): 8. 75 (s， 1H' C7-H) ， 7.66 (d， J ) 8.6 Hz, 2H, Ar) ， 6.63 (d， J ) 8.6Hz， 2H, Ar), 4.57 (s， 2H， C9—H2)， 4.34 (dd， J) 4.0, 9.6 Hz， 1H, C19—H)， 3.28-3.13 (m， 2H, C25-H2), 2.80 (m, 2H, C26-H2)， 2.16 (m， 2H， C22—H2)， 2.15—1.85 (m， 2H, C21-H2)。
MS(EI) :m/z 484(M+) 。 HPLC分析结果见附图2。
2、 叶酸一己二胺
3g叶酸一右旋糖酐混悬于40ml己二胺的二甲亚砜溶液(己二胺/二甲亚砜 1/1，v/v)，于室温避光反应20小时。后续制备及纯化与叶酸一乙二胺制备及纯化方法 相同。
3、 叶酸—PEG二胺
0. 3g叶酸一右旋糖酐混悬于10mlPEG二胺的二甲亚砜溶液(PEG二胺分子量为 2,000; 3,350; 20，000,浓度为10%)，于室温避光反应20小时。反应结束后，反应液 注入乙醚中得沉淀，抽滤收集沉淀物，真空干燥，得叶酸一PEG二胺粗品。用S印hadex G-15柱纯化，重蒸水洗脱，收集淡黄色色谱段洗脱液，冷冻干燥，得叶酸一PEG二胺纯 品。HPLC分析结果如图3所示。
实施例3.叶酸羧基连接物的细胞试验
1、 叶酸一乙二胺荧光标记物/叶酸一PEG荧光标记物
5mg叶酸一 乙二胺/叶酸一PEG溶解于lmlDMSO，加入10mg异硫氰荧光素于室温反应3 小时。反应液注入冷丙酮中沉淀并用丙酮洗涤沉淀，真空干燥得叶酸一乙二胺一荧光 素/叶酸一PEG-荧光素。
2、 叶酸一乙二胺一荧光素/叶酸一PEG—荧光素对叶酸受体亲和性评价 取对数生长期的单层贴壁培养细胞KB和SGC7901，用O. 02WEDTA和0. 25%胰蛋白酶消
化并吹打成单细胞悬液，细胞悬浮在含10。/。小牛血清的RPMI1640培养液中，计数，接种 于24孔培养板，每孔接种约1乂105个细胞，在二氧化碳培养箱内(37°C、 5%C02、饱和 湿度)培养。使用前一天，将细胞用无叶酸培养液RPMI1640培养液洗涤3次，并用该培 养液培养24h，使用当天，再用不含血清的无叶酸RPMI1640培养液洗涤1次。
全部细胞分为四组，其中两组分别加入浓度为100nM的叶酸一乙二胺一荧光素和叶 酸一PEG—荧光素，另两组分别加入含lmM游离叶酸的lOOnM的叶酸一乙二胺一荧光素和 叶酸一PEG—荧光素，37X:孵育4小时，洗弃上清液。加入预冷的pH7. 4磷酸缓冲液终止 反应，并用该缓冲液洗三遍，除去未摄取的叶酸复合物，荧光显微镜下观测(图4、 5)。
结果表明，釆用无叶酸RPMI1640培养液处理后，KB细胞和SGC7901细胞对叶酸一乙 二胺一荧光素/叶酸一PEG—荧光素的摄取量均很多，而在同等实验条件下，细胞对含 游离叶酸的叶酸一乙二胺一荧光素/叶酸一PEG—荧光素的摄取都很少，即大量游离叶 酸与叶酸一乙二胺一荧光素/叶酸一PEG—荧光素竞争肿瘤细胞表面的叶酸受体，从而
抑制了肿瘤细胞对叶酸一乙二胺一荧光素/叶酸一PEG —荧光素的摄取。
结果证明，通过以上方法制备的叶酸羧基连接物具有靶向肿瘤细胞表面叶酸受体 的特性。
实施例4.叶酸一二乙三胺五醋酸制备及其肿瘤靶向试验
1、 制备叶酸一二乙三胺五醋酸
lg叶酸一乙二胺溶于50mlDMS0中形成暗黄色溶液，将该溶液缓慢滴加到二乙胺五 醋酸酐(DTPAA)的DMSO的混悬液中(DTPAA浓度为20X )，待叶酸一 乙二胺滴加完毕后， 体系变澄清。30分钟后结束反应，过滤反应液。反应液置冰浴中冷却，用10ml 2.5 N 氢氧化钠溶液中和反应液，使之产生沉淀。离心得沉淀，用100ml的乙腈洗涤沉淀。沉 淀重新溶解于50ml水中，用盐酸调pH至7。过滤，滤液上制备HPLC柱纯化，梯度洗脱(A， lOmM碳酸铵缓冲液pH7; B,乙腈。梯度Omin 4%B， 10min 12%B; 15min 15%B。 流速10ml/min)，得纯叶酸一二乙三胺五醋酸。
2、 叶酸一二乙三胺五醋酸的放射性""Tc标记 取叶酸一二乙三胺五醋酸适量，加磷酸盐缓冲液(pH7. 4)溶解至浓度为1500吗/mL，
充氮气保护。称取氯化亚锡适量，溶于O. 15mol/L盐酸，得浓度为3(ag/pL的溶液。取 叶酸—二乙三胺五醋酸叶酸溶液200laL(含DTPA-叶酸300吗)，加到380|aL磷酸盐缓冲 液中，然后加入10pL氯化亚锡溶液，振摇。向该混合液加入Na,Tc04注射液200)aL(约 4mCi)，振摇，室温静置30min。标记产物经层析分析(硅胶纸一生理盐水和新华1号 纸一丙酮)，放化纯>97%，待用。
3、 肿瘤模型动物体内靶向试验
BALB/C裸鼠右前肢近腋下皮下接种SGC—7901细胞0. lml (1"07个)后，饲养于 SPF屏障系统内。待接种细胞在裸鼠体内连续繁殖生长成较大瘤块后处死。在无菌条件 下，取瘤块切成小块，用20号套管针移植于同规格裸鼠的相同部位，SPF屏障系统内 饲养。实验前三周开始喂食自制低叶酸饲料。
取荷瘤小鼠4只，自尾静脉注射[""Tc]DTPA-叶酸稀释液约20(^L，剂量为 200nCi/i^tg/鼠。给药后，裸鼠取俯卧位，用胶布固定于板上，SPECT及图像处理系 统连续静态显像6h，观察裸鼠显像状况并摄片记录(图6)。用RO I技术勾划肿瘤、 肾脏和膀胱的放射性计数密度，以肿瘤对侧肢体相应肌肉区的计数密度为本底，计算 以上组织器官的相对放射性强度。
SPECT显像结果显示，荷瘤裸鼠尾静脉注射给药4h后，肿瘤影像清晰，与周围组 织对比明显，显像部位与接种部位一致。RO I技术勾划瘤区与对侧非瘤肌肉区计数 密度，计算T/NT比值(瘤/非瘤区计数密度比)为4.8±1.1，说明该法制得的叶酸一 Y羧基复合物对肿瘤具有很强的靶向性。
实施例5.叶酸a-羧基与Y-羧基复合物的肿瘤靶向性比较试验
1、 制备叶酸a-乙二胺与叶酸Y-乙二胺
441mg叶酸溶于20ml 二甲亚砜中，加入220mg 二环己基碳二亚胺与200mgN-羟基 琥珀酰亚胺，于室温活化3小时。然后于溶液中加入0.6ml乙二胺于50nl吡啶，室温 反应5小时。反应液离心去除不溶物，滴加入丙酮中形成淡黄色沉淀并用丙酮洗涤沉 淀。所得沉淀真空干燥，经制备HPLC纯化分别得叶酸ci-乙二胺与叶酸Y-乙二胺。
2、 叶酸a-羧基与叶酸Y-羧基连接物的细胞比较试验 方法同叶酸羧基连接物的细胞试验。结果(见附图7)表明，采用无叶酸RPMI1640
培养液处理后，KB细胞对叶酸a —乙二胺一荧光素与叶酸Y-乙二胺一荧光素的摄取都 很多，可见叶酸Y-乙二胺一荧光素被肿瘤细胞摄取量较叶酸a-乙二胺一荧光素多， 提示叶酸Y -羧基连接物对肿瘤的亲和性较a -羧基连接物更好。
3、 叶酸a-羧基与叶酸Y-羧基复合物的肿瘤靶向比较试验
① 叶酸a—二乙三胺五醋酸和叶酸Y—二乙三胺五醋酸制备、放射性标记 方法同实施例4中1和2。
② 叶酸a —与叶酸Y—二乙三胺五醋酸在肿瘤模型动物体内的分布试验 取荷SGC-7901瘤裸鼠60只，随机分为15组叶酸Y—二乙三胺五醋酸/叶酸a
一二乙三胺五醋酸为10/0、 5/1、 10/1、 20/1和0/10,分别测定三个时相:0.5h、 lh 和4h。自尾静脉注射200nL，剂量为50pCi/3.74)ag/鼠。
分别于给药0.5h、 lh和4h后处死给于不同比例药品的裸鼠，取血、心、肝、脾、 肺、肾、胃、大肠、小肠、肌肉和肿瘤等脏器或组织，称重，测定放射性计数，计算 每克脏器或组织放射性计数占注射总放射性计数的百分数(％ID/g)，得出肿瘤组织与 其它非靶组织的XID/g比值(T/NT)。(图8)
实验显示，a-羧基复合物对叶酸受体的亲和性仅略差于Y-羧基复合物。所以将 药物与叶酸连接，无论是通过a -羧基或是Y -羧基形成复合物都能使药物靶向至肿瘤
细胞，但与叶酸y-羧基连接可使药物靶向肿瘤效果更好些。
结果表明，肿瘤组织对叶酸a —二乙三胺五醋酸与叶酸Y—二乙三胺五醋酸不同 比例混合样品的摄取量都显著高于正常组织(肾脏除外)，显示出很好的肿瘤靶向效果。 尽管各时相点肿瘤组织摄取量无显著差异，但4h时纯叶酸a —二乙三胺五醋酸组结果
略差于其他组。
权利要求
1、一种叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于通过叶酸先与多羟基聚合物形成酯，然后再用胺类化合物进行胺解获得叶酸羧基复合物，包括下述式(I)的步骤 id="icf0001" file="A2007100442330002C1.tif" wi="126" he="61" top= "51" left = "38" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>其中，X-OH多羟基聚合物；Y-NH2二胺类化合物，或单胺类化合物。
2、 按权利要求1所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于所述的多羟基聚合物选自葡聚糖类、聚蔗糖类、果聚糖类、杂聚多糖类、单或杂聚多糖硫酸酯 类、单或杂聚糖醛酸多糖类或其它亲水性醇类高聚物。
3、 按权利要求1所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于所述的多羟基聚合物是葡聚糖。
4、 按权利要求3所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于所述的葡聚糖 是右旋糖酐，其分子量范围为10， 000-500, 000。
5、 按权利要求1所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于所述的胺类化 合物是双胺类化合物或双胺类聚合物，其二端氨基之间的碳原子数介于2-20之 间的化合物，或其二端氨基之间为重复单元的聚合物。
6、 按权利要求5所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征是所述的双胺类化 合物是乙二胺或己二胺。
7、 按权利要求5所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征是所述的双胺类聚 合物为聚氧乙烯二胺或聚乙二醇二胺。
8、 按权利要求1所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于所述的胺类化 合物为单胺类化合物或单胺类聚合物，其一端为氨基另一端为羟基或巯基或羧 基。
9、 按权利要求8所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征是所述的单胺类化 合物为氨基乙醇；所述的单胺类聚合物选自单氨基聚氧乙烯或单氨基聚乙二醇、 单氨基单巯基聚氧乙烯或单氨基单巯基聚乙二醇、单氨基单羧基聚氧乙烯或单氨 基单羧基聚乙二醇。
10、 按权利要求9所述的叶酸羧基复合物的制备方法，其特征在于其中所述的聚 氧乙烯或聚乙二醇的分子量范围为2, 000 20， 000。
全文摘要
本发明属制药领域，涉及一种高效制备叶酸羧基复合物的方法及其在基于叶酸靶向的药物研制中的应用。本发明介导多羟基聚合物，利用立体位阻选择性合成方法制备叶酸γ-羧基复合物。在普通反应试剂和温和反应条件下，先将叶酸与多羟基聚合物形成以叶酸γ-羧基连接为主的多酯聚合物；再用双胺或单胺类化合物进行胺解转化，并利用高分子与小分子在体积上的悬殊差异，大大简单纯化过程，得到含量高达90％以上的叶酸γ-羧基与胺类化合物的复合物。为进一步制备具有肿瘤靶向特性的叶酸γ-羧基复合物，如叶酸(γ)-二乙三胺五醋酸等，提供优质中间体。
文档编号A61P35/00GK101352572SQ20071004423
公开日2009年1月28日 申请日期2007年7月25日 优先权日2007年7月25日
发明者敏 刘, 朱建华, 操 谢, 陆伟跃, 雪 韩 申请人:复旦大学