专利名称：细胞色素c纳米脂质体药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及细胞色素C纳米脂质体药物及其制备方法。
背景技术：
细胞色素C，又称为细胞色素丙，Cytochromum C，本药是从猪心或者牛心中提取的细胞呼吸激活剂，为内呼吸链组成成分之一。在内呼吸链中起到传递电子的作用。在正常情况下，本药不能透过细胞膜，但当组织缺氧时，细胞膜通透性增强，外源性制剂即能通过细胞膜进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢的作用。因而其可用于临床各种缺氧的急救或辅助治疗。如一氧化碳中毒、中枢抑制药中毒、新生儿窒息、严重休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难、高山缺氧、脑病及心脏病引起的缺氧等。
但是现有技术制备的此药，存在两大缺陷，一个是疗效有时不稳定，二是存在过敏性。由于疗效及安全性考虑，大大影响了此药在临床上的应用。
发明内容
为了解决现有细胞色素C类药物存在的上述缺陷，本发明提供一种细胞色素C纳米脂质体药物。
本发明的技术方案如下本发明提供一种细胞色素C纳米脂质体药物，包括如下重量份数的原料中性磷脂 40-80；谷甾醇 10-20；胆固醇 20-40；细胞色素C 10-30；
聚乙二醇 20-25；还原性谷胱甘肽5-10；维生素C 40-50。
具体讲，所述中性磷脂是指鸡蛋卵磷脂或氢化大豆卵磷脂与脑磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氢化大豆卵磷脂与脑磷脂、谷甾醇、胆固醇混合，组成了本发明药物特殊的脂质体结构，聚乙二醇掺入脂质体中，形成长循环脂质体，谷胱甘肽是体内抗氧剂兼细胞色素C的体内激活剂，维生素C是赋形剂兼体外抗氧剂。
本发明还提供上述细胞色素C纳米脂质体药物的制备方法，步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；(2)将步骤(1)制得的溶液超滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液，除去分子量大于13000道尔顿的杂质异性蛋白质；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，用匀质机反复挤压，直至通过0.05μm核孔膜滤过，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
上述药剂学上可以接收的剂型是指小容量注射剂或冻干针剂。
本发明提供的细胞色素C纳米脂质体药物所实现的有益效果如下1.本发明药物把细胞色素C制成纳米脂质体药物，使细胞色素C进入体内靶向于缺氧细胞，而磷脂是细胞膜的主要组成成分，所以，本发明所提供的药物对细胞膜的通透性大大提高。
2.本发明药物的纳米脂质体粒径50-120nm之间，正好是缺氧组织毛细血管空隙尺寸，容易从循环体系进入缺氧细胞部位，增加了靶向性，提高了疗效。
3.本发明药物掺入了聚乙二醇，避免了在肝脏中被清除，称为长循环脂质体，可大部分进入缺氧细胞。
4.由于本发明药物纳米脂质体药物中掺入了还原型谷胱甘肽，消除了由于外源细胞色素C在体内外氧化使外源性细胞色素C活性降低的弊端，同时，还原型谷胱甘肽还是细胞色素C的激活剂。
5.用截留分子量13000道尔顿的滤膜分离细胞色素C中的异性蛋白分子及其他杂质，提高了纯度并清除了热源，降低了过敏性。
6.本发明药物细菌内毒素残留量小，大大降低了其致敏性。
7.本发明药物生产工艺采用膜分离技术，替代了现有工艺中的活性炭吸附细菌内毒素工艺，消除了活性炭污染导致的致敏性。
8.本发明药物制成纳米脂质体药物载体，使细胞色素C被包封在脂质体内，降低了其致敏性。
9.本发明药物加入了抗氧剂，避免了细胞色素C在体内外的氧化，减少了副反应，从而降低了毒性和致敏性。
具体实施例方式
实施例1本实施例所采用的配方中，各原料及其重量份数如下中性磷脂 40；谷甾醇 20；胆固醇 20；细胞色素C30；聚乙二醇 20；
还原性谷胱甘肽10；维生素C 40。
所述中性磷脂是指氢化大豆卵磷脂与脑磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氢化大豆卵磷脂与脑磷脂、谷甾醇、胆固醇混合，组成了本发明药物特殊的脂质体结构，聚乙二醇掺入脂质体中，形成长循环脂质体，谷胱甘肽是体内抗氧剂兼细胞色素C的体内激活剂，维生素C是赋形剂兼体外抗氧剂。
制备步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；(2)将步骤(1)制得的溶液超滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液，除去分子量大于13000道尔顿的杂质异性蛋白质；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，用匀质机反复挤压，直至通过0.05μm核孔膜滤过，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
药效验证试验如下将小白鼠置于密闭容器内，通以96.2％氮气和3.8％氧气的混合气体，直至小白鼠倒地，意识丧失为止，造成缺氧。治疗组选择用本发明药物，剂量为以细胞色素C计，1.0mg/kg用量(治疗组1)、0.5mg/kg用量(治疗组2)各一组，每天给药一次，腹腔注射给药。对照组使用现有细胞色素C注射液药物，1.0mg/kg用量(对照组1)、0.5mg/kg用量(对照组2)各一组，剂量和给药次数同治疗组。治疗组及对照组每组设小白鼠30只，给药时间3天，以小白鼠救活生存并回复正常活动能力为有效。
以上进行试验的小白鼠，均是事先进行试验所用药物过敏性试验合格的小鼠。在试验过程中统计过敏发生率。
试验结果如下
实施例2本实施例所采用的配方中，各原料及其重量份数如下中性磷脂 80；谷甾醇10；胆固醇40；细胞色素C 10；聚乙二醇 25；还原性谷胱甘肽5；维生素C 50。
所述中性磷脂是指氢化大豆卵磷脂与脑磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氢化大豆卵磷脂与脑磷脂、谷甾醇、胆固醇混合，组成了本发明药物特殊的脂质体结构，聚乙二醇掺入脂质体中，形成长循环脂质体，谷胱甘肽是体内抗氧剂兼细胞色素C的体内激活剂，维生素C是赋形剂兼体外抗氧剂。
制备步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；
(2)将步骤(1)制得的溶液滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
药效验证试验如下将小白鼠置于密闭容器内，通以96.2％氮气和3.8％氧气的混合气体，直至小白鼠倒地，意识丧失为止，造成缺氧。治疗组选择用本发明药物，剂量为以细胞色素C计，1.0mg/kg用量(治疗组1)、0.5mg/kg用量(治疗组2)各一组，每天给药一次，腹腔注射给药。对照组使用现有细胞色素C注射液药物，1.0mg/kg用量(对照组1)、0.5mg/kg用量(对照组2)各一组，剂量和给药次数同治疗组。治疗组及对照组每组设小白鼠30只，给药时间3天，以小白鼠救活生存并回复正常活动能力为有效。
以上进行试验的小白鼠，均是事先进行试验所用药物过敏性试验合格的小鼠。在试验过程中统计过敏发生率。
试验结果如下
实施例3
本实施例所采用的配方中，各原料及其重量份数如下中性磷脂 80；谷甾醇20；胆固醇40；细胞色素C 30；聚乙二醇 25；还原性谷胱甘肽10；维生素C 50。
所述中性磷脂是指氢化大豆卵磷脂与脑磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氢化大豆卵磷脂与脑磷脂、谷甾醇、胆固醇混合，组成了本发明药物特殊的脂质体结构，聚乙二醇掺入脂质体中，形成长循环脂质体，谷胱甘肽是体内抗氧剂兼细胞色素C的体内激活剂，维生素C是赋形剂兼体外抗氧剂。
制备步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；(2)将步骤(1)制得的溶液滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
药效验证试验如下
将小白鼠置于密闭容器内，通以96.2％氮气和3.8％氧气的混合气体，直至小白鼠倒地，意识丧失为止，造成缺氧。治疗组选择用本发明药物，剂量为以细胞色素C计，1.0mg/kg用量(治疗组1)、0.5mg/kg用量(治疗组2)各一组，每天给药一次，腹腔注射给药。对照组使用现有细胞色素C注射液药物，1.0mg/kg用量(对照组1)、0.5mg/kg用量(对照组2)各一组，剂量和给药次数同治疗组。治疗组及对照组每组设小白鼠30只，给药时间3天，以小白鼠救活生存并回复正常活动能力为有效。
以上进行试验的小白鼠，均是事先进行试验所用药物过敏性试验合格的小鼠。在试验过程中统计过敏发生率。
试验结果如下
实施例4本实施例所采用的配方中，各原料及其重量份数如下中性磷脂 80；谷甾醇20；胆固醇40；细胞色素C 30；聚乙二醇 25；还原性谷胱甘肽10；维生素C 50。
所述中性磷脂是指鸡蛋卵磷脂，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
氢化大豆卵磷脂与脑磷脂、谷甾醇、胆固醇混合，组成了本发明药物特殊的脂质体结构，聚乙二醇掺入脂质体中，形成长循环脂质体，谷胱甘肽是体内抗氧剂兼细胞色素C的体内激活剂，维生素C是赋形剂兼体外抗氧剂。
制备步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；(2)将步骤(1)制得的溶液滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
药效验证试验如下将小白鼠置于密闭容器内，通以96.2％氮气和3.8％氧气的混合气体，直至小白鼠倒地，意识丧失为止，造成缺氧。治疗组选择用本发明药物，剂量为以细胞色素C计，1.0mg/kg用量(治疗组1)、0.5mg/kg用量(治疗组2)各一组，每天给药一次，腹腔注射给药。对照组使用现有细胞色素C注射液药物，1.0mg/kg用量(对照组1)、0.5mg/kg用量(对照组2)各一组，剂量和给药次数同治疗组。治疗组及对照组每组设小白鼠30只，给药时间3天，以小白鼠救活生存并回复正常活动能力为有效。
以上进行试验的小白鼠，均是事先进行试验所用药物过敏性试验合格的小鼠。在试验过程中统计过敏发生率。
试验结果如下
本发明提供的药物，疗效大大提高，同时致敏性大大降低。
权利要求
1.本发明提供一种细胞色素C纳米脂质体药物，包括如下重量份数的原料中性磷脂 40-80；谷甾醇 10-20；胆固醇 20-40；细胞色素C10-30；聚乙二醇 20-25；还原性谷胱甘肽 5-10；维生素C 40-50。
2.根据权利要求1所述的细胞色素C纳米脂质体药物，其特征在于，所述中性磷脂是指鸡蛋卵磷脂或氢化大豆卵磷脂与脑磷脂重量比1-3∶1的混合物，所述谷甾醇是指β-谷甾醇，所述聚乙二醇是指聚乙二醇4000。
3.制备权利要求1或2任意一项所述细胞色素C纳米脂质体药物的方法，步骤如下(1)用磷酸盐缓冲液溶解所述量的细胞色素C。聚乙二醇、还原性谷胱甘肽和维生素C，制成溶液；(2)将步骤(1)制得的溶液超滤过截留分子量13000道尔顿的滤膜，取滤液；(3)用2∶1体积混合的氯仿/甲醇混合液溶解所述量的中性磷脂、谷甾醇、胆固醇，制得溶液；(4)将步骤(3)制得的溶液滤过截留分子量5000道尔顿的滤膜，取滤液；(5)将步骤(4)制得的滤液在旋转蒸发仪中蒸干，制得脂质体膜；(6)在氮气保护下，取步骤(2)制备的滤液水化步骤(5)制备的脂质体膜，制成粒径50-120nm的纳米脂质体药物载体粒子分散液；(7)制成药剂学上可以接收的剂型。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述药剂学上可以接收的剂型是指小容量注射剂或冻干针剂。
全文摘要
本发明涉及细胞色素C纳米脂质体药物及其制备方法。本发明提供一种细胞色素C纳米脂质体药物，包括如下重量份数的原料中性磷脂40－80；谷甾醇10－20；胆固醇20－40；胞色素C 10－30；聚乙二醇20－25；还原性谷胱甘肽5－10；维生素C 40－50。本发明提供的脂质体药物可用于临床各种缺氧的急救或辅助治疗。
文档编号A61P43/00GK101019836SQ20071008642
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月8日 优先权日2007年3月8日
发明者蔡海德 申请人:蔡海德