专利名称：：防治阿尔茨海默病的药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种生物医学领域，特别是一种防治阿尔茨海默病的药物。(二)、
背景技术：
阿尔茨海默病的其英文词是Alzheimer'sdisease,通常縮写简称为AD。AD是以痴呆为特征的进行性神经系统退行性疾病，是当前危害老年人群健康和生命的重要疾病。目前全球有AD患者约2430万人，每年新发病例460万，预计到2040年全球将共有AD患者8100万。AD已成为当前人口死亡的第7-8位原因，65岁以上人群死亡的第4-5位原因。AD给家庭和社会带来的经济负担，在所有疾病中排位三，仅次于心脏病和癌症。我国面临着严峻的人口老龄化形势，是世界上老年人口最多的国家。到2020年，我国将有AD患者430万-650万，每年新发病例200万-300万；到2050年，我国将有AD患者800万-1200万，每年新发病例450万-600万。在未来50年中，AD将成为我国一个非常沉重的经济和社会负担。目前还没有能够预防AD发生、延缓或阻止AD病情进展的方法和药物。在AD的临床治疗方面，迄今为止仅有几个药物被美国食品与药品管理局批准用于轻度和中度AD的治疗，但这些药物都是神经递质调节药物，仅能暂时改善部分患者的认知功能，不能延缓或阻止病情进展。A卩是被认为是AD的致病物质，降低脑内A(3水平是防治AD的一个重要策略。免疫治疗是近年来在此方面所取得的一个重要进展。研究表明，主动免疫(接种A卩疫苗)和被动免疫(直接注射抗A卩抗体)治疗，均能有效清除AD小鼠和病人脑内的A(3，减轻A(3相关病理改变，并改善认知能力。因此抗A卩免疫治疗被认为是最有希望成为首个有效清除患者脑内A|3的AD治疗新方法。但是，免疫治疗存在一些严重副作用，包括引起中枢神经系统炎症反应和微血管出血。这些副作用都和抗A(3抗体的Fc段介导的免疫炎症反应有关。(三)、
发明内容本发明的目的就是提供一种防治阿尔茨海默病的药物，它所携带的scFv基因，可以在人体内长期产生，能够持续不断地能除脑内AP，同时避免了中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用。本发明的目的是通过这样的技术方案实现的，它是以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Ae单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗AP单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗AP单链抗体基因的核苷酸序列为1atggcccaggtgcagctcgtgc3gtctggggctg鄉tga卿agcctggggcctc昭tg61aaggtttcctgcaaggcttctggatacaccttcactagctatgctatgcattgggtgcgc121caggcccccggacaaaggctt眺tggatgggatggatcaacgctggcaatggtaacaca181aaatattcacagaagttccagggcagagtcaccattaccagggacacatccgcgagcaca241gcctacatggagctgagcagcctgaggtctgaagacacggccgtgtattactgtgcaaga301agtcgt鄉aattggggcca鄉taccctggtcaccgtgtcg卿ggtgg鄉cggttca361ggcggaggtggctctggcggtggcggatcgtctgagctgactcaggaccctgctgtgtct421gtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattat481gcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggt犯aaac541犯ccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttcc601ttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggac661agcagtggtaaccatgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgixctaggt。在本发明中，重组病毒可以是重组腺相关病毒，可以是慢病毒，也可以是腺病毒，还可以是逆病毒。分泌信号肽核苷酸序列可以是atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc，可以是rgagcccacagcctcttcttgaggatcctggagc兆gtggcatgccactccgactgga，也可以是tacaggctccgaggagccctccggtcaggatggatgacagccttcgccttatggacc，当然，它还可以是任何能够使所表达蛋白分泌到细胞外的核苷酸序列。在说明本发明的制备方法之前，现将相关的符号作如下的解释1、scFv:它是人源性抗A(3单链抗体，其英文词是Singlechainantibody,通常縮写成scFv。2、pGEX-6P-scFv:它是包含scFv基因的质粒(名称为pGEX-6P)，用于表达生成scFv蛋白。3、AAV:它是腺相关病毒，其英文词时Adeno-associatedvirus,通常縮写成AAV。4、pSNAVl:它是编码AAV基因的质粒，用于产生AAV。5、pSNAVl-scFv:它是含有scFv基因的AAV质粒，用于产生含有scFv基因的AAV。6、BHK-21细胞它是一种细胞，用于生产AAV。7、G418:它是一种抗生素，用于选择含pSNAVl-scFv质粒的细胞。8、AAVrep基因它是编码AAVrep的基因，rep是replicate的縮写，在病毒的复制、基因的表达调控及整合中起重要作用。9、AAVcap基因它是编码AAVcap的基因，cap是capsid的縮写，在病毒包装中有重要作用。10、辅助病毒rHSVl/repcap:它是一种含有AAVrep基因和cap基因的辅助病毒，pSNAVl需要在辅助病毒rHSVl/repcap的帮助下，才可以产生AAV。11、rAAV病毒颗粒它是重组腺相关病毒，其英文词为recombinedadeno-associatedvirus。在本专利中指由pSNAVl编码的AAV。12、AAV-scFv:它是指含有scFv基因的AAV。现以重组病毒为AAV、信号肽序列为atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc为例，来说明本发明的制备方法及使用方法本发明的制备方法是首先采用多聚酶链式反应(PCR)方法从pGEX-6P-scFv质粒中克隆出scFv基因，并引入分泌信号肽和酶切位点，然后酶切连入AAV质粒pSNAVl中，构成pSNAVl-scFv质粒。所述的信号肽序歹U为atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc0将所得质粒进行转化、扩增。提取质粒，进行DNA单向测序鉴定。将pSNAVl-scFv质粒导入BHK-21细胞，G418选择pSNAVl-scFv质粒载体细胞。加入含AAVrep和cap基因的辅助病毒rHSVl/repcap,感染pSNAVl-scFv载体细胞，进行病毒的复制和包装。搜集培养上清，离心。加入聚乙二醇和NaCl，孵育，离心，搜集rAAV病毒颗粒沉淀。PBS重悬，氯仿抽提。搜集上清，离子交换柱层析纯化浓縮AAV病毒颗粒。SDS凝胶电泳印染法鉴定AAV-scFv病毒纯度，DNA斑点杂交法确定病毒滴度。分装后低温保存。本发明的使用方法是将所述AAV-scFv病毒制品，用注射器注入脑组织、侧脑室或者肌肉组织中，AAV-scFv病毒感染组织细胞，并将所携带的scFv基因带入细胞内。scFv基因在细胞内表达，产生scFv，并释放到细胞外，与Ap结合而发挥清除脑内AP的治疗作用。scFv具有AP结合能力，能够抑制AP单体的聚合，并促进AP原纤维的解聚。scFv不含Fc段，可避免与其相关的副作用。通过用于基因转染的重组病毒，将scFv基因在外周和脑内转染，使scFv基因在细胞中表达、释放，从而达到清除脑内AP，治疗AD的目的。由于采用了上述技术方案，本发明具有如下的优点1.避免了抗AJ3免疫治疗所引起的中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用。2.通过基因转染技术，使scFv在体内长期表达，避免了抗Ap药物的反复给药，可减少治疗成本。本发明提供了一个安全有效和长期发挥作用的AD治疗新技术，具有广阔的临床应用前景。本发明的如下图1是将A(342单体单独，或与scFv-GST或GST共同孵育后的Ap42纤维的荧光强度的比较示意图；图2是将AP42纤维单独，或与scFv-GST或GST共同孵育后的Ap42纤维的荧光强度的比较示意图；图3是表明AAV-scFv海马转染对A(3的清除作用的照片。具体实施方式下面结合实施例及实验例对本发明作进一步说明本发明是以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗AP单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗A3单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗AP单链抗体基因的核苷酸序列为-1atggcccaggtgcagctcgtgcagtctggggctgaggtga卿agcctggggcctcagtg61aaggtttcctgc犯ggcttctggatacaccttcactagctatgctatgcattgggtgcgc121caggcccccggacaaaggctt卿tgg3tgggatggatcascgctggcaatggt犯C3C8181aaatattcacag犯gttccagggc卿gtcaccattaccagggacacatccgcgagcaca241gcctacatggagctgagcagcctgaggtctg3卿C3Cggccgtgtattactgtgcaaga301agtcgtaggaattggggccaaggtaccctggtcaccgtgtcg鄉ggtggaggcggttca361ggcggaggtggctctggcggtggcggatcgtctgagctgactcaggaccctgctgtgtct421gtggccttgggacagacagtcaggatcaicatgcca鄉agacagcctcagaagctattat481gcaagctggta^ccagcetgaagccaggacaggcccctgtacttgtcatcta541eiaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctceiggaaacacagcttcc601ttgaccatcactggggctcaggcgga鄉tg鄉Ctg3Ctattactgtaactcccgggac661agcagtggtaaccatgtggt3ttcggcggagggacc犯gctgaccgtcctagg"在本发明中，重组病毒可以是重组腺相关病毒，可以是慢病毒，也可以是腺病毒，还可以是逆病毒。分泌信号肽核苷酸序列可以是atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc，可以是gagcccacagcctcttcttgaggatcctggagcaggtggcatgccactccgactgga，也可以是tacaggctccgaggagccctccggtcaggatggatgacagccttcgccttatggacc，当然，它还可以是其它任何具有相同作用和功能的分泌信号肽核苷酸序列。现以重组病毒为AAV、信号肽序列为atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc为例，来说明本发明的制备方法及使用方法本发明的制备方法是首先采用多聚酶链式反应(PCR)方法从pGEX-6P-scFv质粒中克隆出scFv基因，并引入分泌信号肽和酶切位点，然后酶切连入AAV质粒pSNAVl中，构成pSNAVl-scFv质粒。所述的信号肽序歹ll为atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc。将所得质粒进行转化、扩增。提取质粒，进行DNA单向测序鉴定。将pSNAVl-scFv质粒导入BHK-21细胞，G418选择pSNAVl-scFv质粒载体细胞。加入含AAVrep禾Bcap基因的辅助病毒rHSVl/repcap，感染pSNAVl-scFv载体细胞，进行病毒的复制和包装。搜集培养上清，离心。加入聚乙二醇和NaCl，孵育，离心，搜集rAAV病毒颗粒沉淀。PBS重悬，氯仿抽提。搜集上清，离子交换柱层析纯化浓縮AAV病毒颗粒。SDS凝胶电泳印染法鉴定AAV-scFv病毒纯度，DNA斑点杂交法确定病毒滴度。分装后低温保存。本发明的使用方法是将所述AAV-scFv病毒制品，用注射器注入脑组织、侧脑室或者肌肉组织中，AAV-scFv病毒感染组织细胞，并将所携带的scFv基因带入细胞内。scFv基因在细胞内表达，产生scFv，并释放到细胞外，与A(3结合而发挥清除脑内A卩的治疗作用。scFv具有Ap结合能力，能够抑制A卩单体的聚合，并促进A卩原纤维的解聚。scFv不含Fc段，可避免与其相关的副作用。通过用于基因转染的重组病毒，将scFv基因在外周和脑内转染，使scFv基因在细胞中表达、释放，从而达到清除脑内AP，治疗AD的目的。结合上述方法制备出来的AAV-scFv病毒，做出如下的实验例1、scFv对AP42单体聚合的抑制作用为检测scFv对Ap聚合的影响，将30(igAp42和等摩尔scFv混合，终浓度为25)LiM。37。C孵育7天。结果显示，A(342与scFv-GST按等摩尔浓度混合孵育后，其ThioflavineT荧光强度明显低于A^42单独孵育组和A卩42与GST蛋白共同孵育组的荧光强度，如图1所示，图l中A(3是指Ap42单体单独孵育组，A卩+scFv是指A(342单体与scFv-GST蛋白共同孵育组，A(3+GST是指A|342单体与GST蛋白共同孵育组，GST是指GST蛋白单独孵育组。从图1中可知，本试验中的阳性对照AP42单独孵育组和A|342与GST蛋白共同孵育组的荧光强度无显著区别，表明在AP42与scFv-GST共同孵育组中AP42聚合物荧光强度的下降是scFv与AP42相互作用的结果，而不是GST蛋白与AP42相互作用的结果，它表明scFv具有抑制A|3单体聚合的作用。2、scFv対AP42聚合物的解聚作用为检测scFv对A卩原纤维解聚的影响，首先将30吗A(342溶于DMEM至25^M，37。C孵育4天。将预先孵育的AP和scFv或GST蛋白等量混合，37。C孵育3天。结果显示，在A卩42聚合物中加入等摩尔浓度的scFv-GST作用3天，如图2所示，图中Ap是指Ap42纤维单独孵育组，A(3+scFv是指Ap42纤维与scFv-GST蛋白共同孵育组，Ap+GST是指A^42纤维与GST蛋白共同孵育组，GST是指GST蛋白单独孵育组。从图2可知，ThioflavineT荧光强度明显低于A(342单独孵育组和A(342+GST蛋白共同孵育组，Ap42单独孵育组和Ap42+GST蛋白共同孵育组之间的ThioflavineT荧光强度无显著差别，它表明scFv具有促进A(3聚合物解聚的作用。3、海马注射AAV-scFv对A卩的清除作用本发明采用9月龄Mo/HuAPPswePSldE9AD小鼠。该小鼠为双重转基因小鼠，载有人早老素蛋白-1DeltaE9突变体和人APP瑞典突变体(APPSwe，KM593/594NL)嵌合基因。小鼠麻醉后，在左侧海马注入2^AAV-scFv病毒(3xl012particles/ml)，右侧海马注入2pl生理盐水。对照组在左侧海马注入2AAV-EGFP(3xl012particles/ml)，右侧海马注入2pl生理盐水。1月后取脑组织进行分析，并分别拍摄出如图3所示的照片，图3中A是对照组总体AP斑染色(免疫组织化学染色)；B是对照组A卩致密斑染色(ThioflavineS染色)；C是AAV-scFv海马注射组总体A卩斑染色(免疫组织化学染色)；D是AAV-scFv海马注射组A卩致密斑染色(ThioflavineS染色)。由图3可以显示出在对照组中，注射侧的免疫组化反应性AP斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率与对照侧比较无显著差异，见图3A。注射侧的ThioflavinS染色A(3斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率与对照侧比较也无显著差异，见图3C。在AAV-scFv海马注射组中，与对照侧比较，AAV-scFv注射侧的免疫组化反应性AP斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率均低于对照侧，见图3B;AAV-scFv注射侧的ThioflavinS染色A卩斑的数量、平均大小和所占海马总面积的百分率也低于对照侧，见图3D。采用注射侧与对照侧的比值来进行AAV-scFv海马注射组和对照组的组间比较。AAV-scFv注射组的免疫组化反应性Ap斑的数量、平均大小和全部斑块所占海马总面积的百分率均显著低于对照组，详见表1;AAV-scFv注射组的ThioflavinS染色A(3斑的数量和所占海马总面积的百分率低于对照侧，而平均大小的差异无统计学意义，详见表2。这些结果表明AAV-scFv海马注射具有降低脑内Ap的作用。表1AAV-scFv/AAV-EGFP注射侧和对照侧免疫组化反应性A卩斑的数量比率、平均大小比率和所占海马总面积的百分比比率的组间比较(平均值i标准误)分组斑块数量比率斑块平均大小比率斑块所占面积比率对照组1.05士0.080.99±0.040.94士0.10AAV-scFv《射组E0.65±0.050.75±0.040.54±0.05P值<0.001<0.001O.001表2AAV-scFv/AAV-EGFP注射侧和对照侧ThioflavineS染色A卩斑的数量比率、平均大小比率和所占海马总面积的百分比比率的组间比较(平均值±标准误)分组斑块数量比率斑块平均大小比率斑块所占面积比率对照组1.04±0.041.01±0.061.09±0.09AAV-scFv注射组0.75士0.031.07±0.070.82±0.06P值O.0010.5550.0174、AAV-scFv侧脑室注射对脑内A卩的清除作用治疗组在左侧侧脑室中注入10AAV-scFv(3xl012particles/ml)，对照组在左侧侧脑室注入10^AAV-EGFP(3xl012particles/ml)。3月后取脑测定A(3水平。结果表明，侧脑室注射组的总AP水平和非可溶性A(3水平低于对照组，可溶性AP水平高于对照组，详见表3。这些结果表明侧脑室注射AAV-scFv具有溶解脑内非可溶性Ap，清除脑内AP的作用。表3AAV-scFv侧脑室转染后脑内总体A{3水平的组间比较(平均值士标准误)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>治疗组在左侧大腿股四头肌多点注射10plAAV-scFv(3xl012particles/ml)，对照组在左侧大腿股四头肌多点注射10|ilAAV-EGFPGx1012particles/ml)。3月后取脑组织进行分析。结果表明，肌肉注射组的脑内总体A卩和非可溶性A卩水平均低于对照组，可溶性A卩水平高于对照组(表4)。这些结果表明肌肉注射AAV-scFv具有溶解脑内非可溶性A(3，清除脑内A卩的作用。表4AAV-scFv肌肉转染后脑内总体A(3水平的组间比较(平均值士标准误)分组总Ap(pmols/g)可溶性AP(pmols/g)非可溶性AP(pmols/g)对照组5955±348831±1075124±269AAV-scFv肌肉注射组4489±211931±983547±213P值0.0120.5490.0026、scFv不激活脑内小胶质细胞和T淋巴细胞，也不引起脑内微血管出血。采用CD68作为激活的小胶质细胞的标志物，采用CD3作为T淋巴细胞的标志物，对脑组织进行分析。结果表明，在海马、侧脑室和肌肉注射AAV-scFv后脑内均未见明显的小胶质细胞激活和T淋巴细胞浸润。肌肉注射AAV-scFv和侧脑室注射AAV-scFv后脑内微血管出血点与对照组(1.87士0.14)无明显差别(p=0.059，p=0.075)。这些结果表明scFv不引起脑内的炎症反应，也不引起微血管出血。核苷酸序列表的计算机可读形式的序列表电子文件<110〉王延江〈120〉防治阿尔茨海默病的药物<130>无<140>无<141〉无〈腸4<170>PatentlnVersion2.1<210>1〈211>714<212>腿<213>人工序列〈■>13tggCCC鄉tgcagctcgtgcagtctggggCtg鄉tg3卿agcctggggcctc兆tg60aaggtttcctgc卿gcttctggatacaccttcactagct3tgctatgcattgggtgcgc120caggcccccggac肌aggcttgagtggatgggatggatcaacgctggc犯tggtaacaca180犯atattcacagaagttcceigggc卿gtcaccattaccagggacacatccgcgagcaca240gCCt8C3tgg鄉tg3gC3gcctgaggtctga卿cacggccgtgtattactgtgc犯ga3003gtcgtstggaattggggccaaggtaccctggtcaccgtgtcg卿ggtgg鄉cggttca360ggcggaggtggctctggcggtggcgg自gtctgagctgactcaggaccctgctgtgtct420gtggccttggcaggatcacatgcc犯ggagacagcctcag犯gctattat480gc卿ctggtgCC3gg織ggcccctgtacttgtcatctatggtaa犯ac540aaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcagg犯acacagcttcc600ttgaccatcactggggctcaggcgga卿tgaggctgactattactgtaactcccgggac660etgcagtggtaacratgtggtgggaccaagctgaccgtcct郷t714〈210〉2<211〉57<212〉醒<213〉人工序列atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc57<210〉3<211>57<212〉DNA<213>人工序列<400〉3gagcccacagcctcttcttgaggatcctggagcaggtggcatgccactccgactgga57<210>4<211〉57〈212>DNA<213>人工序列〈400>4tacaggctccgaggagccctccggtcaggatggatgacagccttcgccttatggacc5权利要求1.一种防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品；其中，所述的抗Aβ单链抗体基因的核苷酸序列为1atggcccaggtgcagctcgtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtg61aaggtttcctgcaaggcttctggatacaccttcactagctatgctatgcattgggtgcgc121caggcccccggacaaaggcttgagtggatgggatggatcaacgctggcaatggtaacaca181aaatattcacagaagttccagggcagagtcaccattaccagggacacatccgcgagcaca241gcctacatggagctgagcagcctgaggtctgaagacacggccgtgtattactgtgcaaga301agtcgtaggaattggggccaaggtaccctggtcaccgtgtcgagaggtggaggcggttca361ggcggaggtggctctggcggtggcggatcgtctgagctgactcaggaccctgctgtgtct421gtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattat481gcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaac541aaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttcc601ttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggac661agcagtggtaaccatgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt。2.如权利要求l所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的分泌信号肽核苷酸序列为atggactggacctggaggatcctcttcttggtggcagcagccacaggagcccactcc。3.如权利要求l所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的分泌信号肽核苷酸序歹ij为gagcccacagcctcttcttgaggatcctggagcaggtggcatgccactccgactgga。4.如权利要求1所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的分泌信号肽核苷酸序歹!j为tacaggctccgaggagccctccggtcaggatggatgacagccttcgccttatggacc。5.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的重组病毒是重组腺相关病毒。6.权利要求1、2V3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的重组病毒是慢病毒。7.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的重组病毒是腺病毒。8.权利要求1、2、3或4所述的防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于所述的重组病毒是逆病毒。全文摘要一种防治阿尔茨海默病的药物，其特征在于以用于基因转染的重组病毒为载体，将一条、二条或多条的抗Aβ单链抗体基因的前端均连接一条分泌信号肽核苷酸序列，然后将抗Aβ单链抗体基因插入到重组病毒的基因中，通过重组病毒包装成产品。本发明将能够抑制Aβ单体聚合和能促进Aβ聚合物解聚的抗Aβ单链抗体基因，通过外周和脑内转染，在体内产生抗Aβ单链抗体，使scFv在体内长期表达，从而有效清除阿尔茨海默病脑内的Aβ，避免了抗Aβ免疫治疗所引起的中枢神经系统炎症反应和微血管出血的副作用，并避免了抗Aβ药物的反复给药，可减少治疗成本。本发明提供了一个安全有效和长期发挥作用的阿尔茨海默病治疗新技术，具有广阔的临床应用前景。文档编号A61K48/00GK101152576SQ20071009283公开日2008年4月2日申请日期2007年10月15日优先权日2007年10月15日发明者周华东,周新富,王延江申请人:王延江;周新富;周华东