专利名称：：通关藤总皂苷在制备治疗乙型肝炎药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药新药研发领域，涉及通关藤总皂苷在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
背景技术：
：乙型肝炎是由乙肝病毒(HBV)引起的肝脏炎症性损害，是我国当前流行最广、危害最严重的一种传染病。我国每年报告乙型肝炎新发病例约50万，约占全国曱、乙类传染病报告发病总人数的1/4。乙型肝炎流行对人民健康危害严重，社会经济负担沉重。部分乙型肝炎病毒携带者将发展为肝病、肝硬化患者，少部分慢性肝病患者还会转变为肝细胞癌。据调查，目前全国患慢性病毒性肝炎患者约2000万人，每年死于与乙型肝炎相关的肝病约28万人，其中50%为原发性肝细胞癌。乙型肝炎不仅严重影响人体健康，而且给家庭、社会造成沉重的经济负担，我国每年用于肝炎和肝病的医疗、保健费用高达1,000多亿元。乙型肝炎也是贫困地区因病返贫、因病致贫的一个重要因素。另外，乙型肝炎病毒携带者在入托、入学、就业、婚姻等方面受到很大影响，引起一系列社会问题。因此，乙肝不仅是我国严重的公共卫生问题之一，而且也是值得关注的it会问题。至今治疗乙型肝炎仍无特效药物。以往a干扰素(IFN-a)被认为是唯一有效的抗病毒治疗药物，但它的适应症有限，耐药性较强，易出现反弹，不良反应的发生率较高，且价格高昂贵。近年来，许多核苷类药物被发现具有很强的抗HBV作用，如拉米夫定、阿昔洛韦或其口服制剂泛昔洛韦、Adefovir及Lobucavir等，其中以拉米夫定的研究较为深入，但长期应用拉米夫定可引起HBVDNA多聚酶基因酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(YMDD)位点突变，使病毒对拉米夫定产生耐药，难以推广应用。因此，人们把治疗慢性乙型肝炎的希望寄托在中医和中草药。据大量的研究资料证实，在乙肝的治疗方面，有关抗病毒、抗免疫、保肝降酶、保肝退黄的中草药确实发挥了重要的作用，成了除西药之外的第二大类常用药。中药通关藤为箩摩科植物通关藤胞i^cfe/7/a/^/ac/5^/鹏(Roxb.)WightetArn.的干燥藤茎。清热解毒，止咳平喘，利湿通乳，抗癌。主治咽喉肿痛，肺热咳嗽，湿热黄疽，小便不利，乳汁不通，瘉邦，癌肿。近代药理学研究认为，通关藤具有抗肿瘤、平喘等作用。中国专利CN1544032A公开了通关藤总皂苷的制备方法及抗胂瘤的医药用途。但目前还未见有关于通关藤总皂苷具有治疗乙型病毒性肝炎的文献才艮道。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供中药通关S^取物在制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，尤其是指从中药通关藤中分离提取治疗乙型病毒性肝炎的有效部位一一通关藤总皂苷，并用于制备疗效好、毒副作用小、服用方便、可长期使用的治疗乙型病毒性肝炎的药物。为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。所述通关藤总皂苷在制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其所述的通关藤总皂苷中总皂苷含量C>50%,较好的技术方案是通关藤总皂苦中总皂苷含量080%，最优选为通关藤总皂苷中总皂苷含量095%,因为随着总皂苷含量的增加，去除了更多地杂质，其疗效也将更加显著。所述的通关藤总皂苷可以通过本领域内已经公开的制备方法制备。具体通关藤总皂苷的制备方法可以采用专利文献报道的方法(申请号200310110990.6;公开号CN1544032A;发明名称一种具有抗癌活性的中药提取物和它的制备工艺及其应用)。本发明故在此不作详细说明。所述制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其药物为含治疗有效量的通关藤总皂苷和药学上可接受的载体。且该药物制剂以口服制剂，或注射制剂，或吸入剂，或局部皮肤制剂的形式给药。本发明采用经典的2.2.15细胞体外培养模型和鸭乙型病毒性肝炎模型，分别从体外及体内水平观察了药物的抗乙肝病毒作用，试验证明了通关藤总皂苷具有较好的抑制乙肝病毒复制的作用。具体实施例方式用以下实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。实施例1通关藤总皂苷体外抗乙肝病毒(HBV)活性筛选实验所用通关藤总急苷(CMT-S)中总鸟普的含量分别为50°/。，80%,95%。用MTT法检测CMT-S对2.2.15细胞的毒性；用ELISA方法检测不同急苷含量的CMT-S作用于2.2.15细胞不同时间后细胞培养上清中HBV相关抗原一一表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的水平，计算药物对细胞的半数毒性浓度(TC50)和对抗原的半数抑制浓度(ICso)，以TCs。和ICs。的比值(即治疗指数)来评价药物的有效性和安全性。实验结果见表l。表1.CMT-S对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的无毒抑制率CMT-S95°/含量组(5mg/ml)80%含量组(5mg/ml)50%含量组(5mg/ml)对HBsAg的抑制率对HBeAg的抑制率第一批94%第二批93%50%24%68%30%第一批76%38%20%第二批61%51%39%由表1可见，不同皂苷含量的CMT-S(均为对2.2.15细胞的无毒浓度)作用于2.2.15细胞8天后，细胞培养液中的病毒含量均有不同程度的降低，且具有较好的剂量-效应关系。其中CMT-S含量为95%时，对HBsAg的抑制率两批实验分别达到了94%和93%;对HBeAg的抑制率两批实验分别达到了76%和61%。根据实验结果，体外CMT-S对HBsAg有显著的抑制作用，对HBeAg有明显的抑制作用。本次实验结果提示CMT-S体外对HBV具有较好的抑制作用。实施例2通关藤总皂苷对鸭乙型病毒性肝炎的影响实验所用通关藤总皂苷(CMT-S)中总皂苷的含量分别为50%,80%,95%。一曰龄麻鸭给予胫静脉注射含鸭乙肝病毒(DHBV)的血清，复制麻鸭乙型病毒性肝炎模型后，分别设置不同皂苷含量的CMT-S(总皂苷含量分别为50%,80%,95%)三个组，按照80mg/kg连续给药IO天，分别检测给药前(T。)、给药后第5天(T5)、第10天(L。)和停药后第3天(P3)鸭血清中DHBV-DM水平，同时设立模型对照组(给予生理盐水)和阳性药组(拉米夫定3TC,20mg/kg)平行操作。同时计算每组鸭用药Ts、L。和停药后P3对鸭血清中上述指标的抑制率，判断药物对乙肝病毒的抑制作用及程度。实验共进行三批。实验结果见表2。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>表2.CMT-S灌胃给药对鸭血清中DHBV-DM的抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注此表只显示了抑制率结果，鸭血清DHBV-DNA平均光密度值未显示，统计处理数据为鸭血清DHBV-DNA平均光密度值，标记显示*:成对t检验给药組不同时间(T5、T1()、P3)鸭血清DHBV-DNA平均光密度值与感染前(Tq)平均光密度值比较。A:组间t检验给药组不同时间(TQ、T5、T1()、P3)鸭血清DHBV-DNA平均光密度值与模型组(T0、T5、T10、P3)平均光密度值比较。P<0.05,P<0.01,P<0.001AP<0.05,AAP<0.01,AAAP<0.001三批实验中模型组在T5、L。和P3的血清DHBV-DNA永平与T。比较均未见显著性差异(p>0.05);三批实验中给药组T。的鸭血清DHBV—DNA水平与模型组T。比较均未见显著性差异(p〉0.05)。说明每批实验全程13天内模型组动物血清中DHBV-DNA水平基本平稳，且给药前各组鸭血清DHBV—DM处于同一水平。三批实验中，阳性药组(3TC)给药后第5、10天和停药后第3天的血清腿V-DNA水平与给药前相比均有显著性下降(p<0.01或者p<0.001);三批实验中，阳性药组(3TC)给药后第5、10天的血清DHBV-DNA水平分别与相应的模型组同期相比均有显著性下降(p<0.001或者p<0.05)。此三批实验结果说明阳性药3TC口服给药对DHBV-DNA有明显的抑制作用，证明实验方法成功。三批实验中，CMT-S不同皂苷含量組在给药不同时间后，对鸭血清中DHBV-DNA均有明显的的作用，且随着CMT-S的含量升高，其抑制效果也增强。三批实验结果表明CMT-S灌胃给药对鸭乙肝病毒具有较好的抑制作用。权利要求1.通关藤总皂苷在制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用。2.根据权利要求1所述制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其特征在于通关藤总皂苷中总皂苷的含量050%。3.根据权利要求1所述制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其特征在于通关藤总皂苷中总皂苷的含量080%。4.根据权利要求1所述制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其特征在于所述药物为含治疗有效量的通关藤总皂苷和药学上可接受的载体。5.根据权利要求4所述制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用，其特征在于药物以口服制剂，或注射制剂，或吸入剂，或局部皮肤制剂的形式给药。全文摘要本发明涉及通关藤总皂苷的医药用途，通关藤总皂苷可有效地治疗乙型病毒性肝炎，特别是能够有效地抑制乙肝病毒的复制。通关藤总皂苷可以与药学上可接受的各种辅料制备成临床上可以接受的药物制剂进行实际应用。文档编号A61P1/16GK101317868SQ20071011050公开日2008年12月10日申请日期2007年6月6日优先权日2007年6月6日发明者周亚伟申请人:周亚伟