专利名称：：预防和治疗心脑血管疾病的葛根素复方的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种有葛根素和红花黄色素B组成的复方制剂及其在心脑血管疾病方面的应用。技术背景心脑血管疾病已成为威胁人类生命的几大主要疾病之一，医药生物学家也一直致力于寻求对抗心脑血管疾病的有效手段，并取得了一定的成效。30年来，美国冠心病(CHD)死亡率降低了50%，近10-20年来我国在心血管病的防治上亦取得了很大的成绩。这些成就的取得主要归功于对心血管病危险因素的确认进而对这些危险因素的控制，积极地开展心血管病的一级预防和二级预防。大量的流行病学研究证实吸烟、血浆高胆固醇血症、高血压、糖尿病、肥胖(尤其是内脏型肥胖)、体力活动少等是心血管病的重要危险因素，而积极控制这些危险因素能有效地防治心血管病，降低心血管病的死亡率。所以Bromn和Goldsteinl996年预言:21世纪前半叶HCD将消亡。鉴于控制吸烟、血浆高TC.高LDL、低HDL，高血压、糖尿病、肥胖(尤其是内脏型肥f)和体力活动等危险因素可降低CHD的患病率，1996年美国心脏学会(AHA)建议全人群的膳食及生活方式应争取达到下列目标。这个指导原则虽然是针对心血管病的预防，但也可预防癌、肾脏病和骨质疏松症等其它疾病，且与目前糖尿病的预防和处理的建议泪一致。膳食指南的推出说明把科学、合理的膳食和生活方式原则交给群众的必要性和重要性。葛根素(puerarin)为一类异黄酮化合物，主要从植物葛根中提取得到，具有扩张冠状动脉、降血压、降血脂、保护心肌及抗氧化、抗血栓形成、改善微循环等多种活性。葛根素制剂产品已广泛用于临床，用来治疗心脑血管疾病。红花黄色素B为红花中的有效成分之一，对其深入的研究目前尚且较少，中国专利CN1765357A公开了红花黄色素B在心血管疾病方面的应用。
发明内容本发明目的在于提供一种由葛根素和红花黄色素B组成的复方制剂，研究中发现，将红花黄色素B和葛根素组合在一起，能更好的预防心肌缺血和脑缺血，保护因缺血而导致的细胞损伤，具有协同增强的效果。本发明葛根素和红花黄色素B的配比为1:50-50:1,优选为1:10-10:1，更优选为1:2。本发明中，除含有原料药葛根素和红花黄色素B外，还含有药学上可接受的制药辅料，在制剂中，原料药所占的重量比例为5%-30%。本发明组合物加入制药辅料，可制成各种制剂，如口服制剂、经皮给药制剂、注射剂、肠道给药制剂等。本发明的协同治疗效果可以通过药理实验加于证明。1、对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用'取40只wistar大鼠，体重220-250g，雌雄不限，随机分为5组，分别为假手术组、对照组和给药组。对照组(A组)iv等容量的生理盐水，给药组分别给予葛根素10mg/kg(C组)、红花黄色素B20mg/kg(D组)、葛根素5mg/kg+红花黄素素B10mg/kg(E组)，给药l次/天，连续3天，假手术组不结扎颈总动脉，其余处理同对照组。末次给药10min后，大鼠以乌拉坦1.0g/kgip麻醉，参照文献(潘鑫鑫，刘天培.人生皂苷对急性脑缺血的保护作用[J].南京医学院学报.1992,12(3):237-239.)方法结扎双侧颈总动脉，30min后再回复脑供血，24h后断头取脑，去除小脑和脑干，制成10%的匀浆，经分级离心后取上清液，按硫代巴比妥酸法测定MDA含量，按试剂盒说明书测定LDH活性和SOD活性。蛋白定量用Folin酚法(LowryOH,RosenbaughNJ,FairAL.Proteinmeasurementwithfolinphenolreagent[J].JBiolChem,1951,193:265-271)。结果见表1表l对大鼠急性不完全性脑缺血再灌注损伤的影响(S士s，n=6)组别剂量mg/kg.dLDHU/mg蛋白MDAnmol/mg蛋白SODU/mg蛋白对照组假手术组葛根素黄色素葛根素+黄色素10205+10186±31110±24##169±32**136±26*182±39**14.36±2.1326.37±2.67##17.64±2.05**18.71±2.37*14.08±2.09**5.57±0.662.06±0.52#**3.75±0.67**3.35±0.46*5.02±0.69**与对照组相比*P<0.05，**P<0.01;与假手术组相比##P<0.01大鼠全脑缺血30min再灌注24小时后，脑组织LDH、SOD活性明显降低，含量明显升高，而给药组能显著提高缺血脑组织的LDH、SOD活力，降低MDA含量，联合用药后基本上能达到假手术组水平，而单独用药则达不到假手术组水平。2、对大鼠血脂水平的影响对30只体重为220-250g的wistar大鼠随机分为5组，分别设1个空白对照组、1个实验对照组、3个实验组。空白对照组(A组)饲喂标准基础饲料，实验对照组(B组)饲喂由1%的胆固醇、10%的猪板油、0.2%的丙基硫氧嘧啶和88.8%基础饲料组成的高脂饲料；实验组在饲喂高脂饲料的同时，各组分别腹腔注射给予葛根素(C组)50mg/kg、红花黄色素B(D组)100mg/kg以及(E组)葛根素30mg/kg+红花黄色素B60mg/kg，6周后静脉取血，采用酶联试剂(盒)使用VitalabMicro半自动化分析仪测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，根据测定结果计算低密度脂蛋白单股出(LDL-C)及LDL-C/HDL-C、HDL-C/TC值，结果见表1表l对大鼠血脂水平的影响(S±s，n=6)组别TG/mmol丄-lTC/mmol丄-lHDL-C/mmol.L-1LDL-C/mmol.L-1LDL-C/HDL-CHDL-C/TC<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>E1.10±0.27**#1.27土0.40**#2.31士0.27**#0.36±0.31**#与空白对照组相比，*P<0.01，**P<0.05;与实验对照组相比，*P<0.01~实验结果表明，饲喂高脂饲料的对照组与正常对照组相比，6周后血清中TG、TC、LDL-C含量、LDL-C/HDL-C明显提高(PO.Ol)，各实验组与空白对照组相比，TG、TC、HDL-C水平均有所降低，HDL-C水平有所上升；实验组与实验对照组相比，各项指标均较实验对照组有显著差异，而组合物组与单独用药组相比，效果较单独用药明显，说明两者在一起合用能其协同作用。3、对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用30只wistar大鼠，体重220-250g，雌雄不限，随机分为5组，分别为对照组(A组)，假手术组(B组)，葛根素30mg/kg(C组)，红花黄色素B60mg/kg(D组)，葛根素15mg/kg+红花黄色素B30mg/kg(E组)，尾静脉注射给药，假手术组和对照组尾静脉注射等量的生理盐水。大鼠用3%己戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定，以心电图机记录II导联心电图监测心脏情况，分离一侧股静脉供给药用。用血管钳沿第4肋间，钝性分离肋问肌，开胸，撑y第4、5肋骨，剪开心包膜，暴露心脏。将心脏挤出胸腔。在左心耳与肺动脉圆锥之间找到与左冠状动脉伴行的大静脉并使之充分暴露，在左心耳下方2mm处用3号丝线穿线，连同心大静脉一齐结扎左冠,状动脉前降支。结扎前于心大静脉处放一小段细硅胶管，引线润滑。结扎冠状动脉后迅速将心脏放人胸腔，轻挤胸腔排出胸腔气体及残留血液。胸部皮肤用血管钳闭合胸腔，引线尾端留在胸外。稳定10min(稳定后心电图不正常者弃去)，缺血10min后从股静脉缓慢注射给药，20min后剪断结扎线，使前降支再灌注30min。再灌后腹主动脉取血，离心取血清，检测大鼠血清中SOD及MDA含量，结果见表2。0.37±0.161.05±0.23*0.21±0.19**#0.25±0.14**#0.16±0.20**#0.83±0.420.22±0.39*1.37±0.58**#1.23±0.51**#1.82±0.49**#结扎3h后立即取下心脏称重，冷冻。在冠脉结扎线下，平行于冠状沟，将心室横切成O.lcm厚的心肌片，生理盐水冲洗后，置于0.05X氯化硝基四氮唑蓝液(N一BT)37。C恒温水浴中染色30min，染色过程中不时振摇染色液，使之与心肌充分接触，染色后立即用水冲去多余染料。正常心肌染为暗蓝色，梗死区不着色。减去梗死心肌称重计算梗死区重占全心重的百分比。表2对心肌缺血再灌注苏上大鼠血清SOD、MDA的影响(；土s，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01;与假手术组相比，##P<0.01对大鼠心肌梗死范围假手术组无梗死心肌，对照组梗死心肌所占的比例为11.25±2.14%，C组心肌梗死所占比例为7.48±1.35%，D组心肌梗死所占比例为8.07±1.24%，E组心肌梗死所占比例为6.81士1.380/0，各治疗组与对照组相比，在心肌梗死方面都有一定程度的减小，差别具有显著意义，但联合用药显著意义更明显(P<0.01)。具体实施例下文提到的是本发明制f配方说明性而非限定性实例1)、葛根素5g红花黄色素B,250g2)、葛根素250g红花黄色素B5g3)、葛根素10g红花黄色素B100g4)、葛根素100g红花黄色素B10g5)、葛根素15g红花黄色素B300g6)、葛根素300g红花黄色素B15g7)、葛根素100g红花黄色素B200g8)、葛根素200g红花黄色素B200g9)、葛根素10g红花黄色素B300g淀粉700g10)、葛根素40g红花黄色素B60g注射用水1800ml11)、葛根素10g红花黄色素B50g甘露醇400g上述组合物通过适宜的制剂工艺，加上一些适宜的药用辅料，可制成口服、非肠道、直肠或透皮给药的固体、半固体、液体、半液体、粉末、颗粒或脂质体形式。权利要求1.一种用于预防和治疗心脑血管疾病的复方制剂，其特征是由原料药葛根素和红花黄色素B组成。2、如权利要求1所述的复方制剂，其特征在于所述的原料药葛根与红花黄色素B的重量比为1:50-50:1。3、如权利要求2所述的复方制剂，其重量比为1:10-10:1。4、如权利要求3所述的复方制剂，其重量比为1:2。5、如权利要求1-4所述的复方在制备具有预防和治疗高血脂制剂、心肌缺血、脑缺血作用的药物和保健品中的应用。全文摘要本发明涉及一种用于预防和治疗心脑血管疾病的葛根素复方制剂，由重量配比为1∶50-50∶1的葛根素和红花黄色素B组成，在预防和治疗心脑血管疾病方面有协同增强作用。文档编号A61P9/00GK101269084SQ20071011944公开日2008年9月24日申请日期2007年7月25日优先权日2007年7月25日发明者张树祥申请人:北京星昊嘉宇医药科技有限公司