注射用维生素k1冻干粉针及制备方法

专利名称：：注射用维生素k1冻干粉针及制备方法
技术领域：
：本发明涉及注射用维生素粉针剂及制备方法。技术背景促凝血药是一类能使某些凝血因子的合成或活性增加，加速血凝固过程及抑制纤溶过程，达到止血目的的药物。目前该类常用治疗药物包含(l)促凝血因子活性药，如维生素Kt、K2、L等；(2)抗纤维蛋白溶解药，如氨基已酸、氨甲环酸、氨甲苯酸等；(3)降低毛细血管通透性药，如卡络柳钠、巴曲霉等。维生素K为促凝血因子活性药物，其作用主要是参与肝合成凝血因子n、VH、IX、X。在有维生素K参与下，可使上述凝血因子的谷氨酸残基的Y-羟基化，而活化为能与Ca"结合的具有凝血活性的凝血因子，从而发挥促凝血作用。维生素K是一组甲萘醌衍生物，其中维生素Kt是从植物苜蓿中获得的天然型维生素K类药。维生素K缺乏可引起这些凝血因子合成障碍或异常，临床可见出血倾向和凝血酶原时间延长。维生素L为脂溶性，口服后依赖胆汁吸收，口腹612小时起效；注射12小时起效，3~6小时止血效果明显，12~14小时后凝血酶原时间恢复正常。其在肝内代谢，经肾脏和胆汁排出。维生素L从70年代以来，一直是促凝血类一线用药，销售量极大，是一个临床疗效确切、不良反应明确的促凝血药。
发明内容市售维生素Id注射液是一个液体制剂，是安瓿包装，其在流通过程中破损比较严重，而且注射液的稳定性较差，因此我们研究开发成固体制剂以解决上述问題，发明人为了满足临床治疗的需求和从市场前景出发研究开发了维生素L冻干粉针。用于维生素K缺乏引起的出血，如梗阻性黄疸、胆瘘、慢性腹泻等所致出血，香豆素类、水杨酸钠等所致的低凝血酶原血症，新生儿出血以及长期应用广镨抗生素所致的体内维生素K缺乏。现有维生素Ki注射液销售。根据上市的国内同品种的剂型、规格和临床使用的实际要求，我们认为将维生素Ki注射液改剂做成冻干粉针，不但安全有效，而且稳定性好，运输、贮藏都方便，故我们研制注射用维生素K,。其适应症治疗方面、规格完全与"维生素L注射液"一致。规格为每瓶含维生素lUOmg。因维生素Ki为油状液体，不溶于水，故要制备成水溶液难度很大。同时，维生素Kl遇光遇热不稳定，发明人通过大量试验找到了加入表面活性剂聚山梨酯-80(吐温-80)解决了制备水溶液难度很大的问题；另外，在配方中加入抗氧剂L-半胱氨酸盐酸盐、L,氨酸、BHA(叔丁基对羟基茴香醚)，BHT(二丁基羟基曱苯)，明显改善了注射用维生素Ki粉针的稳定性。通过光照、高温影响因素试验结果证明，在配方中加入L-半胱氨酸盐酸盐和L-精氨酸，对样品的稳定性较好比加入BHA或BHT更稳定。但配方中加入L-半胱氨酸盐酸盐会影响本品的PH值和样品的复溶，故在配方中选用L-精氨酸最佳。由于现上市的维生素Kl水针的质量标准中无有关物质测定及限度的检查，造成维生素Kl水针的有关物质含量增高而未检出以至造成用药安全的隐患。而发明人对注射用维生素K1粉针有关物质含量能做到有效控制(采用HPLC主成分自身对照法检查有关物质具有较高的分离度(分离度大于1.5);在0.00005mg/ml~0.2mg/ml的浓度范围内，浓度与峰面积呈很好的线性关系(r=0.99997)，能线性检出的最低杂质含量为0.05%，范围符合规定；定量限为0.0005pg;精密度满足药典要求(进样重复性与中间精密度分别为RSD0.56%及RSD4.20%);耐用性好。因此，所建有关物质检查法精密、可靠。故发明人研发的注射用维生素K,比市售水针用药更安全。发明人用新建的HPLC方法测定上市品与粉针剂的有关物质明显可判断，粉针剂的有关物质明显小于上市品。由于现上市的维生素K1水针的质量标准中无有关物质测定及限度的检查，造成其有关物质含量增高而未检出以至造成用药安全的隐患。而发明人对注射用维生素Kl粉针有关物质含量能做到有效控制。一般来说，有关物质对人体都是有害的。只有对有关物质进行很好的控制，才能保证产品的安全有效。图1维生素Id共熔点测定实验2冻干曲线图图3吸湿平衡曲线图图4工艺流程图具体实施方式发明人更进一步通过实施例详细描述本发明。实施例1注射用维生素K1粉针配方确定根据市售维生素ld注射液的规格选择注射用维生素K,粉针规格确定为每瓶含维生素Id10mg。配方筛选根据维生素K!的溶解性，维生素Ki在氯仿、乙醚或植物油中易溶，在乙醇中略溶，在水中不溶。要能够预制备冻干样品，必须先得到均匀的溶液，首先考虑将其制成水溶液。1、增溶剂的筛选因维生素Ki为油状液体，不溶于水，故要制备成水溶液难度很大。发明人根据经验选摔聚山梨酯-8G为增溶剂并对聚山梨酯-80的不同配比用量进行试验观察。维生素Ki和聚山梨酯-80的不同配比见下表l。表1维生素Ki和聚山梨酯-80的配比<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>试验方法分别称取维生素L1.0g,再按照表1的配比分别加入相应的聚山梨酯-80,混合均匀后，加注射用水至lOOml。再通过肉眼直接观察其澄明度。试验观察结果见表2。表2增溶试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>聚山梨酯-80与维生素L的用量比大于或等于4时，溶液澄清，解决冻干前溶液均匀稳定。故选择No.4配方进行以后的实验。2、赋形剂的筛选需要选用适宜的赋形剂以获得良好的冻干样品外观。发明人根据经验先行选用甘露醇和乳糖，以其溶解能力和样品外观作为指标(见表3)筛选赋形剂。表3赋形剂的筛选配方<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实验方法以配方量配置样品溶液，分别加入甘露醇和乳糖5.0g，完全溶解后定容至100ml。分装lml/瓶，冻干。实验结果见表4。表4赋形剂的筛选试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>故配方中选择甘露醇为适宜的赋形剂。3、甘露醇浓度的筛选。确定了甘露醇为赋形剂，更进一步需确定甘露醇的最佳用量，其配比见下表5。表5甘露醇浓度的配方筛选<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>试验方法以上配比配置样品溶液，分别加入配比的甘露醇，完全溶解后定容至100ml。分装lml/瓶，冻干。实验观察结果见表6。表6甘露醇浓度的筛选结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>故甘露醇浓度6%为:初步确定配方配方维生素K1聚山梨酯-80甘露醇注射用水L好'IOOO瓶10.Og40.Og60.Og至1000ml4、抗氧剂的筛选由于维生素K,遇光、遇热不稳定，对上述初步确定的配方制备的样品进行影响因素试验，其结果与维生素L相同。为了解决其稳定性问题，进行如下研究。发明人选择了四种抗氧剂L-半胱氨酸盐酸盐、L-精氨酸、BHA(叔丁基对羟基茴香醚)，BHT(二丁基羟基甲苯)加入到初步确定的配方中形成如下配方配方1维生素K1聚山梨酯-80L-半胱氨酸盐酸盐甘露醇注射用水IOOO瓶10.Og40.Og5.Og60.Og至1000ml配方2维生素K1聚山梨酯-80L-精氨酸IOOO瓶10.Og40.Og20.Og甘露醇60.0g注射用水至1000ml配方31000瓶维生素K110.0g聚山梨酯-8040.0gBHT(二丁基羟基曱苯)0.2g甘露醇60.0g注射用水至1000ml配方41000瓶维生素K110.0g聚山梨酯-8040.0gBHA(叔丁基对羟基茴香醚)0.2g甘露醇60.0g注射用水至1000ml分别将采用上述四个配方制成的样品进行光照和60。C高温影响因素试验，结果见表7。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>通过光照和6ox:高温影响因素试验证明明显改善了注射用维生素Kl粉针的稳定性，其中在配方中加入L-半胱氨酸盐酸盐和L,氨酸，对样品的稳定性改善较好。完全解决维生素Kl稳定性差的问题。但L-半胱氨酸盐酸盐加入要影响本品的pH值，故在配方中选用L-精氨酸最佳。实施例2注射用维生素K1粉针制备工艺硏究1、活性炭加入量的筛选用原料药制备注射用维生素K1时，需加入一定量的活性炭除去热原。该实验考察活性炭的加入是否对原料药有吸附作用。具体试验见表8。表8活性炭试验<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论三个样品从HPLC法测定浓度结果来看，将样品3作为对照，样品l和2的浓度有不同程度的减小。说明该溶液中加入活性炭对原料药有吸附。故在制备工艺中我们选择其溶液加入0.1。/。的活性炭除热原并根据活性炭对原料药的吸附增加原料药的加入量。样品1和2经检测细菌内毒素符合标准。2、共熔点测定测定原理利用电阻对相变的显著变化而测定。但由于温度下降时容易产生过冷状态，与真正的共熔点容易混淆，故由升温时的电阻变化来测定共熔点。供试品溶液配制按配方比例配制注射用维生素Id液50ml，作为供试品溶液。测定方法将上述供试品溶液，到入容器中，插入低温温度计和电极进行速冻，使供试品溶液完全冻结成固体。将探头插入电导率仪上，此时电阻值无穷大，电导率值为零。当升温时固相开始熔化，温度每升高一度计数一次，测定此时电阻突然下降的温度即为共熔点。见表9。然后以温度为横坐标，电导率值(AUS)为纵坐标作图，作出维生素Id共熔点测定实验图，见图1。<table>tableseeoriginaldocumentpage208</column></row><table>实验结果本品共熔点为-18X:,在工艺制备中最好低于-25lC条件下进行冷冻。3、冻干曲线样品液进入冻千机后的实验记录见表10。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage208</column></row><table>根据表10中的温度与时间的关系绘制冻千曲线图见图2。4、吸湿平衡试验精密称取本品适量，分别置于8个已于6ox:减压千燥至恒重的敞口扁形瓶中，摊成〈5nim的薄层，精密称定重量，再分别置于8个不同湿度的干燥器中，25t:放置IO天后，吸湿增重相对恒定。然后精密称定，以吸湿增重为纵坐标，以相对湿度为横坐标作图。求出临界相对湿度为78.0%。说明本品吸湿性不强，生产环境相对湿度应控制在75°/。以下，温度在20-25x:之间。结果见表ll、吸湿平衡曲线图见图3。表ll吸湿平衡试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>通过上述试验，发明人最终完成注射用维生素K1制备工艺如下1、取上述配方量维生素K1原料药，加入配方量的聚山梨酯-80,分别加入配方量L-半胱氨酸盐酸盐或BHA，或BHT或L4氨酸混合均匀。搅拌的同时加注射用水适量，再加入配方量的甘露醇，搅拌均勻，加水至全量。2、将上述溶液粗滤，加入0.1%(w/v)的活性炭，搅拌15分钟，过滤，除去活性炭。3、将上述滤液除菌过滤，滤液测其pH值应在5.0-6.5范围内。4、滤液送检合格后，根据原料药含量计算装量。5、无菌分装入10ml无菌抗生素管制瓶，每瓶约灌装lml。6、置冻千机内中丁基胶塞半盖，-25X:温度下冷冻、千燥成型。7、密塞，压盖并加:^铝盖。8、抽检合格后，贴标签，包装入库。工艺流程图见图4。实施例3注射用维生素M粉针影响因素试验注射用维生素L影响因素试验依据《中国药典》2000年版二部附录xixc药物稳定性试验指导原则设计；试验样品符合指导原则的规定。(1)样品采用发明人设计的配方2制备的市售包装样品(2)检测项目外观、干燥失重、pH值、含量、澄清度和颜色。(3)检测方法按申才艮资料10所迷各项测定方法进行。1、强光照射试验取发明人制备的市售包装样品，横放置于光橱内离日光灯5cm处照射，光照度4200LX。于5、IO天取样，进行各规定项目的检查，结果见表12。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>数据表明光照5天、10天，外观及溶液的颜色有所加深，含量有所下降。2、高温试验取发明人制备的市售包装样品，分别放入40C、60匸的恒温箱中，于5、IO天取样检测各项指标，结果见表13、14。表13注射用维生素l4or;热稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表14注射用维生素L60n热稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>6数据表明，40'C下放置10天，含量及其它指标均无明显变化；601C放置10天，含量及其它指标均无明显变化。3、高湿度试验取发明人制备的市售包装样品，置于92.5%(含饱和KN03水溶液)的密闭干燥器中，恒温25匸。于5、IO天取样检测各项指标，结果见表15。表15注射用维生素ld92.5%相对湿度下稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>数据表明，在上述高湿度环境里放置IO天，本品各项指标均无明显变化。说明发明人制备的市售包装样品是可行的。4、稳定性考察本品与临床常用稀释液生理盐水配伍的稳定性十分重要，将该品以临床用量溶解在氯化钠输液中，经8小时观察溶液澄清度、颜色、pH值情况和稳定性，结果见下表16。表16稀释剂溶液在8小时稳定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>数据显示用氯化钠输液配成的溶液，在8h内完全稳定，溶液澄清无色，pH值和含量无明显变化。遵照已上市品种的用法(静滴时要求在30min-60min内滴完)是绝对安全的。综和上述试验，注射用维生素Id样品(配方2制备的市售包装样品)，经40°C，6(TC考察10天，各项指标均无明显变化，光照考察10天，分解产物有所增加，其它指标无明显变化，这进一步说明了注射用维生素Ki的配方及工艺是可行的。本发明的最佳配方如下(IOOO瓶)维生素K110.Og聚山梨酯-8040.OgL-精氨酸20.0g甘露醇60.0g注射用水至1000ml按上述配方和工艺制备的三批样品检验结果如下表17。表17三批样品检验结果样品批号040301040302040303<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>检验结果证明三批样品均符合临床用质量标准，从而验证了已确定的配方和工艺是成熟和完善的。5、加速试验根据影响因素试验结果，本品对光极为敏感，401C10天稳定，故，加速试验避光，在40'C下进行。发明人依据确定的配方和工艺制备按市售包装的供试品三批放入相对湿度75°/。(含饱和NaCl水溶液)的密闭干燥器中，40t:隔水式电热恒温培养箱中放置6个月，每月取样一次，进行各项检测，结果见表18。表18注射用维生素L40t:,75。/nRH加速试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>别于3、6、9、12、18个月取样检测各项指标。目前得到18个月的测试结果(发明人将继续对其进行考察)见表19。表19注射用维生素L25匸，6(WRH长期试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>数据表明，在该条件下放置18个月，异构体无明显变化，单个杂质与总杂质仅略有增加，含量无明显变化。本品长期试验18个月稳定。结论注射用维生素Kl按市售包装对光极不稳定(光照10天)，高温60。C不稳定，对湿基本稳定(92.5%RH,IO天)；40X:加速试验6个月基本稳定(各项指标均符合质量标准)；251C长期试验18个月稳定。长期留样试验仍在继续之中。实施例4本发明的维生素k1粉针和市售维生素k1注射液稳定性比较发明人对现行市售的5家药厂生产销售的维生素Kl水针取样和发明人研发的维生素kl粉针采用HPLC法主成分自身对照法进行有关物质(杂质)测定检查，结果见表20和21:表20市售维生素Kl注射液与维生素Kl粉针有关物质测定结果单个杂质总杂质市售样品13.0%6.0%市售样品22.5%4.8%市售样品33.1%5.5%市售样品42.6%5.3%市售样品51.5%3.6%发明人研发的粉针0-5%1.0%表21市售维生素Kl注射液与维生素Kl粉针60°C10天有关物质测定结果单个杂质总杂质市售样品15.0%8.0%市售样品24.2%6.8%<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>结论从表20和表21实验结果可知，发明人用新建的HPLC方法测定现市售品与发明人研发的粉针剂的有关物质(杂质)明显可作如下判断粉针剂的有关物质(杂质)明显少于上市品，两者之间存在显著差别。从理论上说，有关物质(杂质)对人体都是有害的。只有在制备用于人体的药物制剂时对有关物质(杂质)进行严格的控制，才能保证人用药物制剂的安全有效，在为人类健康服务的同时减少对人类的危害，保证用药安全。由此判断，发明人经过研究开发的粉针剂比目前市场销售的维生素K1注射液更加安全和有效。权利要求1、一种注射用维生素K1粉针，由活性成分维生素K1、增溶剂、稳定剂、赋形剂及注射用水所组成，最后经低温冷冻干燥而得。2、如权利要求l所述的粉针，其特征在于增溶剂为聚山梨酯-80。3、如权利要求1所述的粉针，其特征在于稳定剂为L-精氨酸或BHA或BHT或L-半胱氨酸盐酸盐。4、如权利要求l所述的粉针，其特征在于赋形剂为甘露醇、乳糖。5、如权利要求l-4所述的粉针，其特征在于维生素Kl为10.0g;聚山梨酯-80为40.0g;1>~#氨酸20.Og;甘露醇60.Og;注射用水加至1000ml,制成1000瓶，最后经-25X:低温冷冻干燥。6、一种注射用维生素K1粉针的制备方法，其工艺步骤如下1)取配方量维生素Kl原料药，加入配方量的聚山梨酯-80，分别加入配方量L老氨酸或BHA或BHT或L-半胱氨酸盐酸盐混合均匀；搅拌的同时加注射用水适量，再加入配方量的甘露醇，搅拌均匀，加注射用水至全量；2)将上述溶液粗滤，加入0.1%(w/v)的活性炭，搅拌15分钟，过滤，除去活性炭。3)将上述滤液除菌过滤，滤液测其pH值应在5.0~6.5范围内。4)滤液送检合格后，根据原料药含量计算装量。5)无菌分装入10ml无菌抗生素管制瓶，每瓶约灌装lml。6)置冻干机内丁基胶塞半盖，-251C温度下冷冻、干燥成型。7)密塞，压盖并加扎铝盖。8)抽检合格后，贴标签，包装入库。全文摘要本发明公开了一种注射用维生素K1冻干粉针及制备工艺，其成分为维生素K1、吐温-80、L-半胱氨酸盐酸盐或BHA或BHT或L-精氨酸、甘露醇，混合均匀；搅拌的同时加注射用水至全量，溶液粗滤，加入0.1％(w/v)的活性炭，搅拌15分钟，过滤，除去活性炭；无菌分装入10ml管制注射剂瓶、丁基胶塞无菌处理、高度洁净无菌室中分装、置冻干机内丁基胶塞半盖，-25℃冷冻、干燥成型、铝盖密封、检查、包装、贴标签。文档编号A61P7/04GK101327202SQ20071012658公开日2008年12月24日申请日期2007年6月22日优先权日2006年6月23日发明者张为群,放杨申请人:张为群