专利名称：：一种紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，属于药物制剂领域。紫杉醇注(Paclitaxel),化学名称为5|3,20-环氧-1,2a，4，7(3,10|3,13ct-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯曱酸酯-13-[(2，R,3，S)-N-苯曱酰-3-苯基异丝氨酸酯其结构式为分子式C47H51N014分子量853.92。本品是新型抗微管药物，通过促进微管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白稳定，抑制细胞有丝分裂。体外实验证明紫杉醇具有显著的放射增敏作用，可能是使细胞中止于对放疗敏感的G2和M期。静脉给予紫杉醇，药物血浆浓度呈双相曲线。本品蛋白结合率89%~98%,紫杉醇在肝脏代谢。紫杉醇主要在肝脏代谢，随胆汁进入肠道，经粪便排出体外(90%)。经肾清除只占总清除的1°/。~8%,肾功能不全者一般紫杉醇在肝肾功能不全的病人体内代谢尚不明确。适应症为卯
背景技术：
：巢癌和乳腺癌及CLC的一线和二线治疗。头颈癌、食管癌，精原细胞瘤，复发非何金氏淋巴瘤等。由于在处方中使用了乙醇和聚氧乙基代蓖麻油，因此极易出现过敏反应，发生率为39%，其中严重过^A应发生率为2%。多数为1型变态反应，表现为支气管痉挛性呼吸困难，荨麻療和低血压。几乎所有的反应发生在用药后最初的10分钟。因此要求治疗前应用地塞米松，苯海拉明和H2受体拮抗剂进行预处理。未稀释的浓缩药液不要、換触聚氯乙晞塑料器械或设备，且不能进行静脉滴注。稀释的药液应储藏在瓶内或塑料袋，采用聚氯乙烯给药设备滴注。给药期间应注意有无过敏反应及生命特征的变化。为了预防发生过M应，在紫杉醇治疗前12小时口服地塞米松10mg,治疗前，6小时再口服地塞米松10mg，治疗前30~60分钟给予苯海拉明肌注20mg,静注西咪替丁300mg或雷尼替丁50mg。单药剂量为135~200mg/m2，在G"CSF支持下，剂量可达250mg/m2。将紫杉醇用生理盐水或5%葡萄糖盐水稀释，静滴3小时。联合用药剂量为135~175mg/m2，3~4周重复。为了解决注射剂的使用不便、疼痛和过敏问题，许多人都在研究改变溶媒、制成脂质体或制成乳剂等方式，以期得到不过敏，稳定或具有戎靶向性的制剂，但到目前为止还没有一个很好的解决方案。中国专利02117245.5公开了紫杉醇隐形脂质体，02133333.5公开了紫杉醇纳米微粒的制备方法，03108361.7公开了制备紫杉醇和白蛋白的纳米颗粒的方法，01128733.0^Hf了一种紫杉醇纳米磁性乾向制剂及其制备方法，96112502.0公开了紫杉醇水溶性粉针剂及其制备方法。
发明内容表面活性剂在水性介质中的浓度超过一定值以后，表面活性剂的分子便相互聚集起来形成亲水基团朝外，亲油基团朝内的球状或圆柱状胶束结构，药物则被增溶在这种胶束结构的内部，避免了药物注射给药时与注射部位组织的直4妄^妄触。在胆汁中，胆盐和卵磷脂是以混合胶束形式存在的，可显著提高难溶性药物的溶解度，还能提高药物疗效。胆盐对磷脂的烃基起增溶作用，而磷脂使胆盐的临界胶束浓度比其单独存在时低得多。磷脂的两个不饱和酰基链提高了胶束内部的疏水性，可增加对脂溶性药物的亲和力，而其柔韧性又利于容纳药物分子，并形成近似范德华力的稳定结合；磷脂的介入，使混合胶束的结构稍有膨胀，体积比简单胶束更大，可容纳更多的水难溶性药物分子；胆盐/磷脂混合胶束将药物包裹于胶束内，避免水分的介入，可提高药物对光、热及周围环境的稳定性；胆盐/磷脂胶束系统自身具有高度的安全性，其主成分一一胆盐、磷脂及其降解产物都是机体生理条件下存在的成分，可被机体完全吸收，并且磷脂与胆盐合用时可降低胆盐及降解产物一一溶血卵磷脂的溶血毒性。O胆固醇碌^酸钠胆固醇是一种中性脂质，亦属于双亲分子，其结构与胆酸相似，但亲油性强于亲水性，经衍生化后的胆固醇酰硫酸钠亲水性增强。与胆盐相比亲脂性比亲水性强得多，因此对亲脂性药物的包容性更强。由于其与疏酸是以酯键形式结合，因此，进入体内后可以快速水解成胆固醇，而成为体的固有成分之一，毒性极小。胆固醇酰硫酸钠可以通过亲脂性部分的疏水力以及可能也通过亲水性部分的极性亲和力与紫杉醇形成按照一定分子摩尔数比的多分子复合物。这种复合物也可以和磷脂的亲水头部和两个疏水的尾部产生交连作用，增加复合物的物理化学稳定性。这种脂质复合物在水或以緩冲液为水化介的溶剂中可自发形成胶束，而不同的緩沖液会对药物复合物的粒径分布和稳定产生不同的影响。常用的有氨丁三醇緩沖液(Tris)，磷酸盐緩沖液(P胆盐)，醋酸盐緩沖液，柠檬酸緩沖液等。将紫杉醇、磷脂和胆固醇硫酸钠溶解在有机相中，再将此有机相注入到緩冲液中时，有机相便开始在緩沖液中扩散，有机相浓度降低，药物、磷脂和胆固醇硫酸钠在有机相中的溶解度下降，不能溶解的药物和磷脂、胆固醇硫酸钠相互结合形成一种分子复合物以胶体的形式分散在緩沖液中，随有机相浓度的继续降低，剩下的紫杉醇和磷脂、胆固醇疏酸钠同样结合在一起以胶体形式分散在緩冲液中，如此反复，至全部的药物和磷脂、胆固醇硫酸钠形成复合物而分散。胆固醇酰硫酸钠胶束可以进行冷冻干燥,以利于制品的物理稳定性和化学稳定性。影响冻干效果的因素很多，但冻干保护剂对冻千品质量的影响更为突出。冻干保护剂能够在冷冻干燥过程对样品起到保护作用，保持冻干前后性质不变。其保护机理如下(l)随着样品混悬液的冻结和水晶的生长，保护剂逐渐浓缩，逐渐形成一种坚硬的骨架结构，分不在药物微粒的周围，阻止药物微粒的融合和药物的渗漏。(2)可以抑制水晶的生长，使药物混悬液最大程度的实现玻璃化，减少了晶态固化，从而减少了水晶对药物微粒的损伤。冻千保护剂主要为糖及糖醇类，这种冻干保护剂由于使药物溶液的黏性增加，弱化了水的结晶过程，能达到最佳的保护目的，以乳糖和葡萄糖作为冻干保护剂，冻干品外观差，重建困难。以甘露醇作为冻干保护剂，冻干品的外观较好，但复溶困难。以乳糖作冻干保护剂，冻干品外观好，重建容易，重建后粒径小，粒径分布窄。所制药物脂质复合物属于一种胶体分散体系，由于其粒径在100nm以下，所以紫杉醇脂质复合物的灭菌采用过滤过O.22pm滤膜灭菌法。从而解决了脂质体、乳剂等微粒制剂因无法灭菌或灭菌后粒径增大、药物降解等问题，为工业化生产铺平了道路。本发明提供了一种紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物。该胶束使紫杉醇具有更高的化学稳定性，不易降解；降低了紫杉醇的局部刺激性，提高患者顺应性，加入长循环辅料还可避免体内网状内皮系统吞噬，延长药物有效时间。通过将紫杉醇脂质化，从而解决了注射剂的有机溶媒问题和表面活性剂过敏问题。本发明的又一个目的是提供一种制备本发明的紫杉醇脂质复合物的方法。为实现上述目的，本发明提供了一种紫杉醇脂质复合物，其基本上由9治疗有效量的紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物、附加剂、长循环辅料和注射用水组成。具体而言，在上述技术方案中，本发明提供的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物胶束含有以下成分紫杉醇0.000001~5wt%磷脂0.0001~20wt%胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物0.0001~20wt°/。长循环辅津牛0~15wt%附加剂0~15wt%注射用水余量。所述磷脂包括天然来源的磷脂与合成来源的磷脂，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氪化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、画PC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。优选的是，该磷脂为大豆卯磷脂。所述胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆周醇衍生物及其任意组合。优选的是该胆固醇硫酸盐为胆固醇>&危酸钠。所述长循环辅料为PEG分子量为PEG分子量为1000-10000的硬脂酸酯、PEG分子量为1000-10000维生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯与分子量为200~10000的PEG的混合物、Myrj类、Brij类、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆^5咸、PEG—二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、神经节苷脂、聚丙烯酰胺、壳聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量为200-10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是神经节苷脂、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱及其任意组合。本发明提供的紫杉醇脂质复合物进一步包括0~15wt%的附加剂，优选包括0~5wty。的附加剂。所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用，选自渗透压调节剂，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜稳定剂，如油酸、油酸钠等；金属离子络合剂，如EDTA、乙二按四乙酸二钠盐、钙盐等；防腐剂，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、对羟基苯曱酸酯类、山梨酸等；抗氧剂，如维生素C、维生素E等；分子量为20Q~10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。优选的是，该附加剂为丙三醇、甘露醇、油酸钠、EDTA、维生素C、维生素E、PEG及其任意组合。本发明提供的紫杉醇脂质复合物，具有以下优点1、与紫杉醇的注射液相比，本发明的制剂使紫杉醇包裹在脂质复合物中，减少药物与水的接触，且可滤过除菌，降低高温灭菌导致的紫杉醇失活，使之稳定性增加且刺激性降低。2、与紫杉醇的乳剂、脂质体相比，本发明的制剂通过长循环辅料对脂质复合物表面进行修饰，有助于避免体内肝脾网状内皮系统的吞噬，延长药物在体内的循环时间。3、本发明的制剂可用生理盐水或葡萄糖注射液进行稀释或分散，用ii于静脉注射给药，优选技术方案中脂质复合物粒度小(平均粒度小于100nm),分布较窄，可滤过除菌，且药物包封率高，有助于提高注射安全性。本发明还提供了一种本发明的紫杉醇脂质复合物的制备方法，该方法包括以下步骤(1)将处方量的紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；(3)在0~60。C的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得紫杉醇脂质复合物。(4)将所得紫杉醇脂质复合物用0.22nm的滤膜滤过除菌，分装，置于4。C下密封保存，即得注射液，其粒径在20-200nm之间。(5)将上述所得胶束加入冻干保护剂进行冻干处理，即得粉针剂，加溶媒再分散后，其粒径在20-200nm之间。其中，对所得到的紫杉醇脂质复合物进行冻干处理的工艺可为将140wt。/。(重量比)的冻干保护剂溶于本发明的紫杉醇脂质复合物的水分散体中，该冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意组合，然后分装于西林瓶中，并置于冷冻干燥机中-45。C预冻3h,然后以5。C/h升温至-5(TC，维持10h，再以5。C/h升温至(TC，维持8h,最后升温至l(TC保温10小时后出箱，加塞密封即可。实施例1取紫杉醇500mg，蛋黄卵磷脂2.Og，胆固醇硫酸钠400mg，维生素E10mg，溶解于30。C的曱醇中作为有机相；将PEG4000.5g溶于90ml注射用水中，加热至3(TC作为水相，在3(TC搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌5min,再减压旋转蒸去曱醇，得带蓝色乳光的紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为70土15nm。加注射用水补至总体积为100ml，用0.22pm的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，12rC灭菌30min,即得注射液。在制得的脂质复合物加入海藻糖5g,注射用水至100ml，用0.22jam的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为80±15舰。实施例2取紫杉醇l.Og，大豆卵磷脂3.Og,胆固醇疏酸钠500mg,溶解于35。C的无水乙醇中作为有机相；将PEG2001.Og溶于90ml注射用水中，加热至35。C作为水相，在35。C搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌l(kin，再减压旋转蒸去乙醇，得带蓝色乳光的紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为75士18nm。加注射用水补至总体积为100ml,用0.22jum的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，12rC灭菌30min,即得注射液。在制得的脂质复合物加入海藻糖5g,注射用水至100m1,用O.22|am的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为62±17nm。实施例3取紫杉醇500mg，大豆卵磷脂10g，胆固醇磺酸钠5g，溶解于35r的四氢吹喃中作为有机相；将poloxamer1885g溶于950ml注射用水中，加热至35。C作为水相，在35。C搅拌下将有机相注入水相，持续搅拌10min,再减压旋转蒸去四氢呋喃，得带蓝色乳光的紫杉醇脂质复合物，测其平均粒径为68±16nm加注射用水补至总体积为100ml，用0.22lam的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，12rC灭菌30min，即得注射液。在制得的脂质复合物加入海藻糖5g,注射用水至100ml，用0.22jam的微孔滤膜滤过除菌，分装4ml/支，无菌操作下冷冻干燥，即得。将冻干后的制剂用生理盐水稀释，测其平均粒径为73±12腦。实施例4表1列举了几种紫杉醇脂质复合物的处方(表中所列辅料为权利要求1-11所述)及冻干针剂和注射剂的规格(以紫杉醇计)，但所用处方组成、各辅料配比及制剂规格不限于下表所列浓度。制备方法与工艺同实施例1—3。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>实施例5(1)刺激性试验取健康家兔6只分别固定于兔箱内，随机分成2组，每组3只家兔，左右耳缘静脉分别滴注生理盐水和紫杉醇注射液、紫杉醇脂质复合物注射液即左耳给生理盐水，右耳给紫杉醇注射液或紫杉醇脂质复合物注射液(用0.9%的氯化钠注射液稀释)。紫杉醇注射液和紫杉醇脂质复合物注射液给药剂量相同，均为10mg/只，溶液总体积均为12ml/只/次。左耳耳缘静脉滴注生理盐水，滴注量及滴注速度同检品组。每日各滴注l次，连续3天，观察兔耳缘静脉刺激反应。于末次给药24h后将兔子放血处死，取下两耳进行组织切片检查(切片位置距进针位置2.6cm),根据病变程度，记为"-"，"+","++，，，"+++，，，"++++"。切片病理学检查结果表明1)左耳阴性对照(氯化钠注射液)的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。内皮细胞清晰、无肿胀、坏死，管壁及管周无明显炎症细胞浸润，管壁内未见血栓形成等病变。2)右耳阳性对照(紫杉醇注射液)组的各取材点血管明显扩张为"++",内皮细胞肿胀、坏死为"++",见血栓形成为"++",管壁及管周见出血及炎症细胞浸润为"+++，，。3)右耳紫杉醇脂质复合物注射液组的各取材点耳缘静脉管壁完整，血管无明显扩张。管腔内未见血栓形成等病变。紫杉醇脂质复合物组形态学明显好于市售紫杉醇注射液组，无明显刺激性。试验结果表明，紫杉醇脂质复合物注射液对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用。(2)溶血性试验取家兔血10mL,置于涂有肝素的离心试管中，4000rpm离心5min,弃去上层血浆，将血细胞用生理盐水10mL沖洗多次，每次沖洗后离心除去上清液，直至上清液不呈红色为止，然后吸取一定量红细胞，按体积比稀释制备2°/。的红细胞混悬液，4。C冰箱中冷藏备用。记录方式"--，，凝集不溶血，但出现红细胞凝聚成团，摇晃后能重新分开。"-，，不溶血红细胞全部下沉，上层为淡黄色略樣i混浊的溶液。"+"部分溶血溶液呈淡黄色或浅红色，试管底部有少量红细胞残留。"++"溶血溶液呈红色，试管底部无红细胞残留。表2溶血性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>结果_-_---++结果显示，所制的紫杉醇脂质复合物溶液未引起红细胞的溶血反应，符合静脉注射的标准。(3)过敏性试验将实施例1所制的紫杉醇脂质复合物注射液加用0.9%氯化钠注射液稀释，制成供试品溶液。采用临床推荐剂量lmg/ml/kg，给豚鼠腹腔注射该供试品溶液0.5ml，隔日一次，共三次，给药后第14天及第21天分别股静脉注射该供试品溶液l.Oml，结果均未见豚鼠有过敏反应。给予2%新鲜蛋清的豚鼠在给予蛋清后第14天及第21天分别经股静脉注射蛋清后均出现过敏反应，且皆于15min内死亡。结果显示，所制紫杉醇脂质复合物溶液不引起豚鼠过敏反应，符合静脉注射的标准。权利要求1、一种紫杉醇脂质复合物，由治疗有效量的紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物组成。2、一种由权利要求1所述的紫杉醇脂质复合物组成的注射用胶束组合物，其含有以下成分紫杉醇0.000001~20wt%磷脂0.0001~20wt%胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物0.0001~20wt%长循环辅津牛0~15wt%附加剂0-15wt°/。注射用水余量。3、根据权利要求1所述紫杉醇脂质复合物，其特征在于紫杉醇脂质复合物颗粒悬浮于水性介质中粒径在20-200nm之间,。4、根据权利要求1和2所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，其中所述磷脂选自所有天然来源和合成来源的磷脂及其任意组合。5、根据权利要求4所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过各种加工方法提取出来的磷脂，如大豆磷脂、蛋黄磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氬化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。6、根据权利要求1和2所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物，其中所述胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物，包括胆固醇硫酸钠、胆固醇硫酸钾、胆固醇磷酸钠、胆固醇磷酸钾、胆固醇磺酸钠、胆固醇磺酸钾和其它方式修饰的上述胆固醇衍生物及其任意组合。7、根据权利要求2所述的紫杉醇脂质复合物组成的注射用胶束组合物，其中所述长循环辅料为PEG分子量为1000-10000的硬脂酸酯、PEG分子量为1000~10000维生素E琥珀酸酯、PEG^5更脂酸酯与分子量为200-10000的PEG的混合物、Myrj类、Brij类、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG—二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、神经节苷脂、聚丙烯酰胺、壳聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量为200~10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合；所迷附加剂选自渗透压调节剂、界面膜稳定剂、金属离子络合剂、防腐剂、抗氧剂、分子量为200-10000的PEG、PVP或PVA及其任意组合。8、一种制备如权利要求1~7所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，该方法包括以下步骤■(1)将处方量的紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或类似胆固醇衍生物或、长循环辅料、附加剂分散于有机溶剂中，以构成有机相；(2)将长循环辅料、附加剂溶于注射用水中，以构成水相；(3)在0~60。C的温度下，在搅拌或/和高剪切条件下将所述有机相和水相混合，再采用减压蒸发等方法除去有机溶剂，从而制得紫杉醇脂质复合物。(4)将所得紫杉醇脂质复合物用0.22Mm的滤膜滤过除菌，分装即注射液，4立径为20-200nm。9、根据权利要求8所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，其中，所述有机溶剂选自二氯曱烷、氯仿、丙酮、曱醇、乙醇、乙醚、四氬呋喃或异丙醇及其任意组合。10、根据权利要求8所述的紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物的方法，其中，向所述制得的紫杉醇脂质复合物进一步加入冻干保护剂以制成冻干制剂，临用前加无菌注射用水或生理盐水重建后静脉注射或肌注给药，粒径为20-200nm;上述冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化钠、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意组合。全文摘要本发明提供了一种紫杉醇脂质复合物及其注射用胶束组合物。该紫杉醇脂质复合物由治疗量的紫杉醇、磷脂、胆固醇硫酸盐或/和类似胆固醇衍生物、附加剂与注射用水组成。通过将紫杉醇脂质化，从而解决了注射剂的有机溶媒问题和表面活性剂过敏问题。本发明提供的紫杉醇脂质复合物注射剂具有副作用小，血管刺激性低，载药量高，粒径分布窄、可滤过除菌，药物稳定性好等优点。文档编号A61K9/00GK101439032SQ200710158458公开日2009年5月27日申请日期2007年11月22日优先权日2007年11月22日发明者飒徐,德瑞克·王,李林穗申请人:沈阳沃森药物研究所