专利名称：一种贯叶金丝桃提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物提取物及其制备方法和用途，特别涉及一种贯叶金 丝桃提取物及其制备方法和用途。
背景技术：
贯叶金丝桃是金丝桃属植物，而金丝桃苷是其中具有较强生物活性的成
分之一。金丝桃苷(Hyperin)属黄酮醇苷化合物，结构为槲皮素-3-半乳糖 苷。近年来发现它对组织器官缺血性损伤尤其是在心肌损伤、缺血性脑损伤 方面有显著保护作用。其作用机制是(1)通过阻滞钙通道，抑制f5内流；
(2)清除过量的自由基，保护内源性抗氧化酶活性；(3)降低由于脑缺血 所致N0含量的升高产生显著的脑保护作用。此外金丝桃苷还具有扩张冠状 动脉、改善心肌血流的作用。可作为心脑缺血的治疗药物或保健品。
现有制备金丝桃苷的方法，如中国专利ZL 0214370. 0《一种金丝桃苷的 制备方法及药物新用途》是以干燥的黄蜀花粉为原料，经水溶剂提取、聚酰 胺柱层析、再用有机溶剂提取、重结晶等工艺制成。中国专利ZL 03150847.0
《金丝桃苷和异鼠李素-3-0-半乳糖苷对照品的同时制备方法》以吴茱萸药 材为原料，多次有机溶剂萃取、柱层析、重结晶，工艺过于复杂，适合分离 对照品，而不适合药物生产。这两种现有的方法均未利用我国资源丰富的贯 叶金丝桃，金丝桃苷提取率低，生产成本高，又有大量废液排放，既未综合 利用资源又污染环境。
2006年4月30日申请的专利CN 1880328A《贯叶连翘中金丝桃苷和金 丝桃素的制备方法》运用了吸附树脂分离和反胶束萃取，使用到大量有机溶 剂，生产成本高，工艺复杂，工业化生产存在一定困难。
发明内容
本发明目的在于提供一种贯叶金丝桃提取物；本发明另一 目的在于提供 该提取物的制备方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。本发明所述贯叶金丝桃提取物主要由总黄酮组成，特征性的成分为金丝 桃苷。
本发明贯叶金丝桃提取物的制备方法包括以下步骤
将贯叶金丝桃药材切碎，用40 95%的乙醇溶液回流提取1 3次，每次 1-3小时，温度为75°C-85°C，每次用乙醇的体积量按重量体积比为药材重 量的4 15倍，合并提取液；将提取液减压回收至体积按重量体积比为药材 重量的3 8倍，静置离心；
离心后的上清液上大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为2 8 : 1， 至树脂吸附饱和后用水洗至澄清；用极性有机溶剂洗脱树脂至颜色极淡，回 收有机溶剂，干燥，得到贯叶金丝桃提取物。
所用的大孔吸附树脂为弱极性和非极性大孔吸附树脂，型号包括S-8、 D-401、 D-301、 D-201、 D-101、 X-5、 AB-8、 MN-200、 NKA-II、 NKA-9、 NKA-12 或AP-250等型号的树脂，优选AB-8或D101。
所述树脂洗脱用的极性有机溶剂是不同浓度的乙醇溶液。
所述贯叶金丝桃药材是指金丝桃属植物贯叶连翘或其粗提物。贯叶连翘 粗提物可以从市场上购得。
所述重量体积比单位比例关系为g/ml或kg/L。
本发明贯叶金丝桃提取物的提取优选如下方法
将贯叶金丝桃药材切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，温度为75。C -85。C，用乙醇体积量依次为药材重量的IO倍、8倍、6倍，提取时间分别 为2h、 lh、 lh，合并提取液；将提取液减压回收至药材重量4倍，静置离心； 离心后的上清液上AB-8大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为5 : 1， 树脂吸附饱和后用水洗至澄清；改用85%乙醇洗脱树脂至颜色极淡，改用95% 乙醇洗脱并再生树脂；减压回收乙醇，浓縮干燥，得到贯叶金丝桃提取物。
本发明所述贯叶金丝桃提取物可按药剂学方法加入常规辅料，以此提取 物为活性成分制成单方制剂，或制成含有上述提取物的药物组合制剂。剂型 包括片剂、软胶囊剂、口服液、滴丸剂、微囊剂、颗粒剂，膜剂、栓剂、 经皮给药制剂、针剂、粉针剂、输液剂或脂肪乳注射剂。其中缬草提取物存 在状态可以是固体或液体，给药方式可以是口服、肌肉注射或静脉注射。其用途可以是药物也可以是保健食品。
现有制备金丝桃苷的方法，有的未利用我国资源丰富的贯叶金丝桃，又
有大量废液排放，既未综合利用资源又污染环境；有的使用到大量有机溶剂， 生产成本高，工艺复杂，工业化生产存在一定困难。
本发明方法是利用我国资源丰富的贯叶金丝桃药材进行提取；提取和分 离过程简单，适合工业化生产；所用的试剂为乙醇和水，成本小，无有机残 留，不会对环境造成污染。
实验表明本发明所述贯叶金丝桃提取物对组织器官缺血性损伤具有保 护作用，并具有扩张冠状动脉、改善心肌血流的作用，可作为心脑缺血的治 疗药物或具有保健功能的食品或制剂原料使用。
下述实验例和实施例用于进一步说明本发明，但不限于构成对本发明所 要求保护范围的限定。
实验例1 贯叶金丝桃提取的树脂选择试验 1、树脂静态吸附考察
将贯叶金丝桃药材lkg切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，用醇量 依次为药材(V:W)的10倍、8倍、6倍，提取时间分别为2h、 lh、 lh，合 并提取液；将提取液减压回收至药材重量4倍，静置，离心，得上清液留待 树脂筛选用。
取不同类型的大孔吸附树脂各lg (n=3)于50ml试管中，分别加以上 方法制备的上清液20ml，封口，静态吸附3天，每天定时摇动几次，测定溶 液中总黄酮含量，计算比吸附量。结果见表l。表l静态吸附考察
树脂类型样品树脂重吸附前上样液含量吸附后上清液含量比吸附量比吸附量均
号(g)吸光度含量(mg)吸光度含量(mg)(mg/g)值(mg/g)
11.07120. 360175. 78563.912
X-521. 00390. 6813144. 2480. 349773. 56970. 40466. 894
31. 08840. 342472.01366. 368
11. 00230. 469899.16744. 977
MN20021. 07400. 6813144. 2480. 459897. 03643. 95844. 301
31. 08590. 457396. 50343. 967
11. 00080. 6522138. 0456. 198
NKAII21. 03020. 6813144. 2480. 6554138. 7275.3587. 074
31. 05630. 6334134. 0389. 665
11. 09630. 5094107. 60833.421
NKA921. 04580. 6813144. 2480. 5011105. 83936. 72632.615
31.01580. 5493116. 11227. 697
11.03370. 385081.■ 09361. 096
NKA1221. 04770. 6813144. 2480. 391582.47858. 95759. 799
31. 05020. 388981.92459. 344
11. 00420. 379679.94264. 037
D10121.05810. 6813144. 2480. 365276.87263. 67564. 593
31. 08980. 343572.24766. 067
11.01260.412186.86956. 664
D20121. 04860. 6813144. 2480. 389682.07359. 29356. 370
31. 07590. 413087.06153. 152
11. 06340. 295361.97477. 369
D30121. 09040. 6813144. 2480. 301663.31674. 22174. 820
31. 09920. 305564.14872. 871
11. 07970. 293961.67576. 477
D40121. 08090. 6813144. 2480. 293061.48376. 56979. 222
3L 06850. 257153.83284. 620
11. 05520. 450695.07546. 600
AP25021. 03040. 6813144. 2480. 436892.13450. 57648. 327
31.01480. 453795.73647. 804
11. 00930. 361075.97767. 641
AB821. 05150. 6813144. 2480. 364176.53164. 39960. 768
31.01260. 442093.34850. 266
11. 05750. 251752.68086. 588
S821.01360. 6813144. 2480. 251252.57490. 44389. 149
31. 01060. 252652.87290.417
从静态吸附试验结果得知比吸附量从大到小的顺序是S8〉D401〉 D301〉X-5〉D101〉AB8〉NKA12〉D201〉AP250〉丽200〉NKA9〉NKAI1，可选择S8、 D401、 D301、 X-5、 DlOl、 AB-8做动态吸附试验。 2、动态吸附一洗脱试验筛选树脂
取粗提物200g，加6000ml7(m乙醇，回流提取lh，过滤，回收乙醇，定 容至6000ml，放置过夜，离心(2500转/min) 20min，取上清液做动态吸附 一洗脱试验。
分别取以上上清液180ml作为上柱液，每种考察的树脂分别装柱3支， 树脂体积约60ml (事先分别用95%乙醇、水处理树脂)，上柱流速 0.83ml/min(即每份样品上柱时间均为2. 5h)，合并上样时的流出液和水洗 液，测总黄酮含量，计算总黄酮的动态比吸附量。结果见表2。
用90%乙醇洗脱，收集洗脱液至近无色，测总黄酮含量，计算比洗脱量 和洗脱率。结果见表3。
洗脱液减压回收乙醇，干燥，得提取物，测提取物的总黄酮含量和纯度。 结果见表4。
表2树脂动态比吸附量的考察
树脂类型 上样量(rag) 流失量(mg) 比吸附量(mg/ml) 比吸附量均值(mg/ml)
10621.2
S-8122713220.120.9
9721.3
9820.2
歸12279920. 120.1
9920. 1
16519.0
咖l122717618.818.8
18618,6
9720. 2
X-512279520.120.2
9720.2
12619.7
D101122712619. 719.8
10520.2
13519.5
AB-8122713419.519.5
13719.6表3树脂比洗脱j1与洗脱率的考察(11=3)
树脂类型比洗脱量均值(mg/ml)洗脱率(％)
S-85.325.36
D40117.285. 57
D30117. 190. 96
X-517.486.14
D10118.894. 95
AB-819.599. 98
表4提取物中总黄酮含量和纯度的测定结果(n=3)
树脂类型总黄酮含量(mg/g)纯度(％)
S-865365.3
D柳85685.6
D30180780.7
X-590490,4
D10196996.9
AB-896996.9
根据各树脂对总黄酮的动态比吸附量、比洗脱量和所得提取物纯度的试
验结果综合分析，以AB-8和D101最好。 实验例2贯叶金丝桃提取物的制备 贯叶金丝桃提取液的制备
将贯叶金丝桃药材lkg切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，用醇量 依次为药材(V:W)的10倍、8倍、6倍，提取时间分别为2h、 lh、 lh，合 并提取液；将提取液减压回收至药材重量4倍，静置。
树脂预处理方法
用95y。乙醇浸泡AB-8大孔吸附树脂24h后装柱，以95%乙醇洗柱，至流 出液加水不再浑浊为止。蒸馏水洗至无醇味。 大孔树脂分离
以上提取液离心，弃去沉淀。上清液上AB-8大孔吸附树脂，树脂吸附 饱和后用水洗至澄清；改用85%以上乙醇洗脱树脂至颜色极淡，回收乙醇洗 脱液，浓縮液减压干燥，得到贯叶金丝桃提取物。
树脂再生用95%乙醇洗脱并再生树脂。采用GC方法，检査该提取物中的树脂有机 残留，结果均未检出。 实验例3 贯叶金丝桃提取物的含量测定
取按本发明所述方法制备的贯叶金丝桃提取物按如下方法进行含量测
定
总黄酮含量测定已知主要黄酮类成分有芦丁、金丝桃苷、槲皮素、槲
皮苷等，均具有槲皮素的基本结构，利用黄酮类化合物能与金属盐类试剂络 合反应来进行测定。其中最常用为铝盐，试剂用硝酸铝，亚硝酸钠在碱性条
件下产生红色络合物，在510nm波长处有最大吸收，且能避免其它成分颜色 干扰。以金丝桃苷为标准品测定在510nm下吸光度值，以金丝桃苷计总黄酮 的含量为98. 06%。
金丝桃苷含量测定以十八硅垸基键合硅胶为填充剂；检测波长为 360nm，金丝桃苷为对照品，用高效液相的方法测定其中金丝桃苷的含量为 11.51%。
具体实施例方式
实施例l贯叶金丝桃提取物的制备
将贯叶金丝桃药材lkg切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，温度为 80°C，用醇量分别为10L、 8L、 6L，提取时间分别为2h、 lh、 lh，合并提取 液；将提取液减压回收至药材重量的4倍，静置离心。 离心后的上清液上AB-8大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为5: 1， 树脂吸附饱和后用水洗至澄清；改用85%乙醇洗脱树脂至颜色极淡；减压回 收乙醇，浓縮干燥，得到贯叶金丝桃提取物59g。 实施例2贯叶金丝桃提取物的制备
将贯叶金丝桃粗提物200g， 2000ml的75%乙醇溶液回流提取1小时，温 度为80。C,过滤，回收乙醇，定容至6000ml，放置过夜，离心(2500转/min) 20min。
离心后的上清液上D101大孔吸附树脂，至树脂吸附饱和，上样液体积 与树脂体积比为4:1;用90%乙醇洗脱树脂至颜色极淡，回收乙醇，干燥， 得到贯叶金丝桃提取物56g。实施例3: 滴丸
取贯叶金丝桃提取物30kg，聚乙二醇6000 120kg,制成滴丸。 实施例4: 软胶囊
取贯叶金丝桃提取物30kg，食用植物油90kg,加明胶、水、甘油，制 成软胶囊。
实施例5:微型胶囊
贯叶金丝桃提取物3kg，阿拉伯胶粉1.5kg， 3y。阿拉伯胶液90L， 3%明胶 液120L，甲醛、淀粉适量。经乳化、包囊、稀释、固化、分散、干燥制成微 型胶囊。
实施例6: 胶囊剂
贯叶金丝桃提取物150kg加羧甲基淀粉钠38kg，制颗粒，装胶囊。
实施例7: 片剂
贯叶金丝桃素提取物150kg，加微晶纤维素25kg，制颗粒，压片包衣。
权利要求
1、一种贯叶金丝桃提取物，其特征在于该提取物是由下方法提取而成将贯叶金丝桃药材切碎，用40～95％的乙醇溶液回流提取1～3次，每次1-3小时，温度为75℃-85℃，每次用乙醇的体积量按重量体积比为药材重量的4～15倍，合并提取液；将提取液减压回收至体积按重量体积比为药材重量的3～8倍，静置离心；离心后的上清液上大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为2～8:1，至树脂吸附饱和后用水洗至澄清；用极性有机溶剂洗脱树脂至颜色极淡，回收有机溶剂，干燥，得到贯叶金丝桃提取物。
2、 如权利要求1所述的贯叶金丝桃提取物，其特征在于所用的大孔吸 附树脂为弱极性和非极性大孔吸附树脂，型号为S-8、 D-401、 D-301、 D_201、 D-lOl、 X-5、 AB-8、 MN-200、 NKA-II、 NKA-9、 NKA-12或AP-250的树脂。
3、 如权利要求1或2所述的贯叶金丝桃提取物，其特征在于所述树脂 洗脱用的极性有机溶剂是不同浓度的乙醇溶液。
4、 如权利要求1或2所述的贯叶金丝桃提取物，其特征在于所述贯叶 金丝桃药材是指金丝桃属植物贯叶连翘或其粗提物。
5、 如权利要求1所述的贯叶金丝桃提取物，其特征在于该提取物是由 下方法提取而成将贯叶金丝桃药材切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，温度为80°C, 用乙醇体积量依次为药材重量的10倍、8倍、6倍，提取时间分别为2h、 lh、 lh，合并提取液；将提取液减压回收至药材重量4倍，静置离心；离心后的上清液上AB-8大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为 5:1，树脂吸附饱和后用水洗至澄清；改用85%乙醇洗脱树脂至颜色极淡，改 用95%乙醇洗脱并再生树脂；减压回收乙醇，浓縮干燥，得到贯叶金丝桃提 取物。
6、 一种贯叶金丝桃提取物的提取方法，其特征在于该方法为 将贯叶金丝桃药材切碎，用40 95%的乙醇溶液回流提取1 3次，每次1-3小时，温度为75°C-85°C，每次用乙醇的体积量按重量体积比为药材重量的4 15倍，合并提取液；将提取液减压回收至体积按重量体积比为药材 重量的3 8倍，静置离心；离心后的上清液上大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为2 8:1， 至树脂吸附饱和后用水洗至澄清；用极性有机溶剂洗脱树脂至颜色极淡，回 收有机溶剂，干燥，得到贯叶金丝桃提取物。
7、 如权利要求6所述的贯叶金丝桃提取物的提取方法，其特征在于所 用的大孔吸附树脂为弱极性和非极性大孔吸附树脂，型号为S-8、 D-401、 D-301、 D-201、 D-101、 X-5、 AB-8、 MN-200、 NKA-II、 NKA-9、 NKA-12、 AP-250 的树脂。
8、 如权利要求6或7所述贯叶金丝桃提取物的提取方法，其特征在于 所述树脂洗脱用的极性有机溶剂是不同浓度的乙醇溶液。
9、 如权利要求6或7所述贯叶金丝桃提取物的提取方法，其特征在于 所述贯叶金丝桃药材是指金丝桃属植物贯叶连翘或其粗提物。
10、 如权利要求6所述贯叶金丝桃提取物的提取方法，其特征在于方法为将贯叶金丝桃药材切碎，用55%的乙醇溶液回流提取3次，温度为75°C -85。C，用乙醇体积量依次为药材重量的10倍、8倍、6倍，提取时间分别 为2h、 lh、 lh，合并提取液；将提取液减压回收至药材重量4倍，静置离心；离心后的上清液上AB-8大孔吸附树脂，上样液体积与树脂体积比为 5:1，树脂吸附饱和后用水洗至澄清；改用85%乙醇洗脱树脂至颜色极淡，改 用95%乙醇洗脱并再生树脂；减压回收乙醇，浓縮干燥，得到贯叶金丝桃提 取物。
全文摘要
本发明涉及一种贯叶金丝桃提取物及其制备方法，该提取物主要通过大孔树脂分离提取。实验表明该提取物对组织器官缺血性损伤具有保护作用，并具有扩张冠状动脉、改善心肌血流的作用，用作心脑缺血的治疗药物或具有保健功能食品或制剂原料使用。
文档编号A61K36/185GK101411732SQ20071017598
公开日2009年4月22日 申请日期2007年10月17日 优先权日2007年10月17日
发明者何大林, 曦 刘, 段震文, 郭树仁 申请人:北京北大维信生物科技有限公司