专利名称：：一种消栓滴丸质量标准及检验方法
技术领域：
：本发明涉及一种消栓滴丸质量标准及检验方法，
背景技术：
：中药制剂中滴丸剂作为一种中药新剂型，具有吸收快，生物利用度高等特点，根据我国药品管理的相关法规，改变剂型或工艺作为新药研究管理。消栓滴丸是补气，活血，通络的药品，临床用于中风引起的半身不遂，口眼歪斜，语言蹇涩，口角流涎，下肢痿废，小便频数。现有剂型为口服液，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第11册，原标准中仅有黄芪鉴别方法，尚无含量测定方法，其质量标准鉴别取本品10ml，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解,置已处理好的中性氧化铝柱(100120目，5g，内径1015mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各3y1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(13:7:2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，胱下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯(365nm)下，显相同的橙黄色荧光斑点。
发明内容本发明的目的是提供一种消栓滴丸的质量标准及其检验方法，设置了消栓滴丸中黄芪、赤芍、地龙的鉴别，建立了消栓滴丸中赤芍的含量测定；鉴别采用薄层色谱法鉴别黄芪、地龙，采用高效液相色谱法鉴别赤芍，含量测定采用高效液相色谱法测定赤芍中芍药苷；通过确定的质量标准及检验方法，可增加该产品的质量可控性，为克服现有技术的不足，以便能够更好的保证疗效、提高产品的生物利用度，更好的为广大患者服务。本发明的目的是通过如下技术方案实现的一种消栓滴丸质量标准及检验方法，其特点在于该方法中的质量标准鉴别a及含量测定b方法是以下方法的一种或几种a鉴别黄芪的鉴别包括下列步骤取消栓滴丸310g，研细，加水3090m]，超声处理1560分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇(或三氯甲烷、乙醚、石油醚)2050ml，振摇提取，分取正丁醇(或三氯甲烷、乙醚、石油醚)液，蒸干，残渣加甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)25ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120目，36g，内径l1.5cm)上，用3050%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)4060ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇(或三氯甲垸、乙醇、丙酮)0.51.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇(或三氯甲垸、乙醇、丙酮)制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；用薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各220W,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水[(1015):58):(1.53)]为展开剂，置用展开剂预饱和1530分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以520%5克酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点；赤芍的鉴别包括下列步骤照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1%磷酸水溶液.[(1020):(9080)]为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加4060%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)制成每lml含3050Pg的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约l3g，精密称定，置2550ml量瓶中，加6080%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)3050ml，超声处理2060分钟使溶解，放至室温，加6080%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液1535ml，通过中性氧化铝柱[100200目，1.53g，内径11.5cm，4060%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)湿法装柱]，收集至2550ml量瓶中，再用4060%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520W，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；地龙的鉴别包括下列步骤取消栓滴丸515g，加硅藻土37g，研匀，加甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)3070ml，加热回流23小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水4060ml，超声处理2060分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸[(9.512.5):(0.50.7)]提取23次，每次2030ml，合并乙酸乙酯-甲酸液，蒸干，残渣加甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)0.5L5ml使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材23g，加三氯甲垸(或甲醇、乙醇、丙酮)2040ml，超声处理2060分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)0.51.5ml使溶解，作为对照药材溶液；用薄层色谱法验，吸取上述两种溶液各520W，分别点于同一硅胶薄层板上，以异辛垸-三氯甲烷-乙酸乙酉旨-甲酸[(515):(39):(26):(0.10.3)]为展开剂，置用展开剂预饱和1530分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；b含量测定芍药苷的含量测定方法包括下列步骤照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸水溶液[U020):(9080)]为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加4060%甲醇(或三氯甲垸、乙醇、丙酮)制成每lml含305(Hig的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约l3g，精密称定，置2550ml量瓶中，加6080%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)3050ml，超声处理2060分钟使溶解，放至室温，加6080%甲醇(或三氯甲垸、乙醇、丙酮)至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液1535ml，通过中性氧化铝柱[100200目，1.53g，内径11.5cm，4060%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)湿法装柱]，收集至2550ml量瓶中，再用4060%甲醇(或三氯甲烷、乙醇、丙酮)洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各520ul，注入液相色谱仪，测定，即得；消栓滴丸每克含芍药苷不得少于1.30mg;该方法中的质量标准鉴别a及含量测定b方法是以下方法的一种或几种a鉴别黄芪的鉴别取消栓滴丸5g，研细，加水60ml，超声处理30分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120目，5g，内径l1.5cm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点；赤芍的鉴别照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.196磷酸水溶液(15:85)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加5(W。甲醇制成每lml含35l^g的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOiil，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；地龙的鉴别取消栓滴丸10g,加硅藻土5g,研匀，加甲醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml，超声处理30分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸(9.5:0.5)提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材2g，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各1041，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以异辛烷-三氯甲垸-乙酸乙酯-甲酸(5:3:2:0.1)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；b含量测定芍药苷含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定，色谱条件与系统适用性试验，用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸水溶液(15:85)为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35|ig的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10P1，注入液相色谱仪，测定，即得；消栓滴丸每克含芍药苷不得少于1.30mg。本发明的有益效果本发明采用薄层色谱法鉴别黄芪、地龙，采用高效液相色谱法鉴别赤芍，含量测定采用高效液相色谱法测定赤芍中芍药苷；是提供消栓滴丸质量检验方法及标准，通过建立明确专属性强的鉴别及重现性、稳定性及精密度良好的含量测定方法，能够有效控制消栓滴丸的质量，使参消栓滴丸质量达到稳定、可控、高效及安全，是对产品的投料要求及质量控制严格，克服现有技术的不足，提高产品的质量、疗效、生物利用度，产品质量高，能保证产品疗效，更好地满足医疗的需要。图1是本发明的消栓滴丸中黄芪鉴别图2是本发明的消栓滴丸中赤芍的鉴别图3是本发明的消栓滴丸中地龙的鉴别图4是本发明的芍药苷对照品的高效液相色谱图5是本发明的消栓滴丸样品的高效液相色谱图6是本发明的消栓滴丸阴性对照溶液高效液相色谱图7是本发明的消栓滴丸回归曲线图。具体实施例方式实施例1:1、在消栓滴丸的定性鉴别的研究中，设计对处方中黄茛、当归、赤芍、地龙、川芎、桃仁及红花进行定性鉴别，首先考察文献报道方法试验，结果制剂样品不理想，严重拖尾，多次换展开剂，分离效果差。采用不同的处理方法再展开，当归、赤芍、川芎、桃仁、红花效果依旧很差，结果地龙分离效果好，且阴性无干扰；黄芪原制剂中方法分离效果好，故未改变其方法；经过多次试验，采用高效液相色谱法鉴别赤芍分离效果好，阴性无千扰。2、消栓滴丸在定量分析的设计中，因原标准中没有含量测定项，对赤芍进行了成分分析的实验。采用的高效液相色谱法对其中所含芍药苷进行含量测定，经过对系统适用性、线性回归、精密度、重现性、稳定性、回收率等试验考察，证明本检验方法，重现性好，能快速准确的检验药品质量。鉴别1、鉴别对象本处方共七味药，在试验研究中，尝试对所有药材分别采用不同的样品处理方法及不同极性的展开剂分离层析，由于成分复杂，干扰大，结果对处方中黄芪、地龙两味药材建立了薄层鉴别方法，采用高效液相色谱法对赤芍进行了鉴别，结果表明，方法专属性强，重现性好。2、对照品及对照药材来源消栓滴丸所用对照品均购于中国生物制品检定所。3、鉴别方法(1)黄芪薄层色谱鉴别供试品溶液制备取消栓滴丸5g，研细，加水60ml，超声处理30分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇液，蒸千，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120目，5g，内径l1.5cm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸千，残渣加甲醇lml使溶解，即得。阴性对照溶液制备取当归3g、赤芍3g、地龙1.5g、川芎1.5g、桃仁1.5g、红花1.5g，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次分别为l小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至10ml，加乙醇使含醇量为75%,静置，取上清液，浓縮至无乙醇，加聚乙二醇4000适量溶解，加水至60ml，置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120目，5g，内径11.5cm)上，用4096甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸千，残渣加甲醇lml使溶解，即得。黄芪药材溶液的制备取黄芪药材20g，加水60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱(100~120目，5g，内径l1.5cm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，即得。黄芪甲苷对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，即得。试验方法照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述5种溶液各5W，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10输克酸乙醇溶液，在105T:加热至斑点显色清晰。供试品色谱及黄芪药材色谱中，在与黄芪对照药材及黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点；而阴性对照溶液无斑点出现，结果不干扰黄芪的鉴别，见图l。(2)赤芍高效液相色谱鉴别供试品溶液的制备取消栓滴丸约2g，精密称定，置50ml容量瓶中，加709i甲醇40ml，超声处理(功率250W，频率25kHz)30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100120目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50nil量瓶中，再用5096甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。阴性对照溶液制备取黄芪10.5g、当归lg、地龙O.5g、川芎O.5g、桃仁O.5g、红花O.5g，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次分别为l小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮至10ml，加乙醇使含醇量为75%，静置，取上清液，浓縮至无乙醇，加聚乙二醇4000适量溶解，加甲醇使含醇量为70%，并调至50ml，摇匀，精密量取25ml，通过中性氧化铝柱(100120目，2g，内径1L5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。芍药苷对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35Pg的溶液，即得。试验方法照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)试验，以十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂，以乙腈-O.1%磷酸水溶液(15:85)为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。吸取上述3种溶液各10W，分别注入液相色谱仪，测定。供试品色谱中应呈现与芍药苷对照品保留时间相同的色谱峰，而阴性对照溶液在与芍药苷对照品相应的保留时间处，无色谱峰，故其它组分不干扰赤芍的鉴别，见图2。(3)地龙薄层色谱鉴别供试品溶液的制备取消栓滴丸10g，加硅藻土5g，研匀，加甲醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml，超声处理30分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸(9.5:0.5)提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，即得。阴性对照溶液制备取黄芪50g、赤芍5g、当归5g、川芎2.5g、桃仁2.5g、红花2.5g，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次分别为l小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓縮，加乙醇使含醇量为75%，静置，取上清液，浓縮至无乙醇，加聚乙二醇4000适量溶解，加水至50ml，用乙酸乙酯-甲酸(9.5:0.5)提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，即得。地龙对照药材溶液的制备取地龙对照药材2g，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，即得。地龙药材溶液的制备取地龙药材2g，加三氯甲垸20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸千，残渣加甲醇lml使溶解，即得。试验方法照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述4种溶液各10W，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以异辛烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5:3:2:0.1)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱及地龙药材色谱中，在与地龙对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，而阴性对照溶液无此斑点，结果不干扰地龙的鉴别，见图3。含量测定消栓滴丸由黄芪、当归、赤芍、川芎、地龙、杉〖仁、红花组成。釆用高效液相色谱法测定消栓滴丸中芍药苷的含量。K仪器与试剂SpectraSERIESP100泵SpectraSERIESUV100检测器NC—2000工作站岛津UV2201型紫外-可见分光光度计芍药苷对照品(批号110736—200220，购6中国药品生物制品检定所)乙腈(色谱纯)样品批号20040701、20040702、20040703。2、检测波长的选择取芍药苷对照品适量，精密称定，用50%甲醇制成lml含104g的溶液，在200400nm波长范围扫描，结果在230mn波长处有最大吸收。3、色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈-O.1%磷酸水溶液(15:85);检测波长230nm。4、系统适用性试验(1)芍药苷对照品的HPLC图的测定取芍药苷对照品适量，精密称定，用50%甲醇制成lml含35Pg的溶液，取10W注入液相色谱仪测定。(2)消栓滴丸的HPLC图的测定取消栓滴丸5g，研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加7096甲醇40ml，超声处理(功率250W，频率25kHz)30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径l1.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液注入液相色谱仪测定。(3)阴性对照溶液的HPLC图的测定取黄芪10.6g、当归1.06g、地龙0.53g、川芎O.53g、桃仁0.53g、红花0.53g，加水煎煮三次，第一次1.5小时，第二、三次分别为l小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至10ml，加乙醇使含醇量为75%，静置，取上清液，浓縮至近千，加聚乙二醇40001.Og，加甲醇50ml，超声处理(功率250W，频率25kHz)使溶解，摇匀，精密量取25ml，通过中性氧化铝柱(100120目，2g,内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10W注入液相色谱仪测定。(4)色谱柱的理论板数测定取芍药苷对照品溶液10W注入液相色谱仪，测定。色谱柱的理论板数为8887.3。见图4。(5)相邻峰的分离度的测定取消栓滴丸供试品溶液10W注入液相色谱仪，测定。结果芍药苷与前面峰的分离度为3.846，与后面峰的分离度为3.920。见图5。(6)赤芍药材的HPLC图的测定-取赤芍药材粉末0.15g，精密称定，置50ml量瓶中，加7(F。甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径1L5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液注入色谱仪测定。结果表明，消栓滴丸中的其它组分不干扰芍药苷的测定。见图6。5、线性关系考察精密称取芍药苷对照品约16mg，置50ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4禾口1.6ml，分别置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，取10W注入液相色谱仪，测定。测定结果见表l。回归曲线见图7。表1线性关系表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>回归方程Y-8312.8-5714.8，相关系数r=0.9998结果表明，芍药苷在浓度为13.252.8ug/ml范围内具有良好的线性关系。6、精密度试验取消栓滴丸5g，研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加709i甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液注入色谱仪测定。重复进样6次。结果见表2。表2精密度试验<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果表明本法精密度良好。7、重复性试验取消栓滴丸5g，研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，力Q70y。甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；另精密称取芍药苷对照品适量，加509()甲醇制成每lml含35ug的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10W分别注入液相色谱仪测定。重复取样测定9次。计算含量，结果见表3。表3重复性试验结果批号20040701浓度(mg/g)1.6551.6921.7111.6431.6291.6301.6511.6151.690RSD(%)1.99结果表明，本法重复性较好。8、稳定性试验取消栓滴丸5g，研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加7096甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10W注入液相色谱仪测定；供试品溶液分别在O、4、8小时测定，结果见表4。表4稳定性试验结果序号1230小时峰面积244372.4260742.2284005.5247084.2261954.2283640.84小时峰面积240763.0263576.3284176.3244177.7263426.9284768..88小时峰面积240381.0258512.9286033.7241832.4259274.2285631.5RSD(%)1.060.810.33结果表明，本法在8小时内测定方法稳定。9、回收率测定取样品(批号20040701)，研细，取约10g，精密称定，置250ml量瓶中，精密称取芍药苷对照品16mg，加7096甲醇400ml，超声处理(功率250W，频率25kHz)30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径1L5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至100ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过；另精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇制成每lml含35ug的溶液。分别精密吸取上述两种溶液各10W注入色谱仪，测定。计算加样回收率，结果见表5。表5加样回收率试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>结果表明本法回收率良好。10、样品含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35化的溶液，即得。供试品溶液的制备取消栓滴丸5g，研细，取约2.0g,精密称定，置50ml量瓶中，加7096甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径l1.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10W，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表6。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由测定结果可见，考虑到大生产时药材不同，故规定消栓滴丸每克含赤芍以芍药苷(C23H28Ou)计，不得少于1.30mg。根据所定质量标准，对样品进行了长期稳定性试验和加速试验，试验表明消栓滴丸稳定，可控。1、试验条件长期稳定性试验将模拟市售包装的样品置于温度25。C士2'C、相对湿度60%±5%条件下放置12个月，分别在O、1、2、3、6、12个月取样，检测各项质量指标，观察其变化情况，结果见表79;加速试验将模拟市售包装的样品置于温度4(TC士2t:、相对湿度75%±5%条件下放置6个月，分别在O、1、2、3和6个月取样，检测各项质量指标，观察其变化情况，结果见表1012。2、检验结论消栓滴丸室温放置12个月和加速试验6个月，各项指标均符合质量标准要求,产品质量稳定。本发明的有益效果本发明经过多次试验在该品种的质量标准中制定了薄层色谱鉴别及含量测定项目。本发明就是提供消栓滴丸的质量标准及检验方法。本发明通过建立明确专属性强的鉴别及重现性、稳定性及精密度良好的含量测定方法，能够有效控制消栓滴丸的质量,使消栓滴丸质量达到稳定、可控、高效及安全。表7长期稳定性试验考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表8长期稳定性试验考察结果批号20040702<table>complextableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>批号20040701<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表ll加速试验考察结果批号20040702<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表12加速试验考察结果批号20040703<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>实施例2:批号200407011、鉴别(1)黄芪薄层鉴别取消栓滴丸5g，研细，加水60ml，超声处理30分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ral，振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120目，5g，内径11.5cm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲垸-甲醇-水(13:7:2)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10竊克酸乙醇溶液，在105'C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。(2)芍药薄层色谱鉴别以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1%磷酸水溶液(15:S5)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。.对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35Pg的溶液，即得。供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm,50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10P1，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。(3)地龙薄层色谱鉴别取消栓滴丸10g，加硅藻土5g，研匀，加甲醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸千，残渣加水50ml，超声处理30分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸(9.5:0.5)提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取地龙对照药材2g，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各IOW，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以异辛烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5:3:2:0.1)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。2、芍药苷含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1%磷酸水溶液(15:85)为流动相；检测波长为230咖。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，力B50%甲醇制成每lml含354g的溶液，即得。供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.0g,精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱(100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱)，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得。结果消栓滴丸每克含芍药以芍药苷(C23H280)计为1.642mg。实施例3:批号20040702按20040701批检验，检测结果1、鉴别呈阳性；2、每克含芍药以芍药苷(C23lU)n)计为1.572mg.实施例4:批号20040703按20040701批检验，检测结果1、鉴别呈阳性；2、每克含芍药以芍药苷(C23H2SOu)计为1.588mg。.权利要求1、一种消栓滴丸质量标准及检验方法，其特征在于该方法中的质量标准a鉴别及b含量测定方法是以下方法的一种或几种a鉴别黄芪的鉴别包括下列步骤取消栓滴丸3～10g，研细，加水30～90ml，超声处理15～60分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇或三氯甲烷、乙醚、石油醚20～50ml，振摇提取，分取正丁醇或三氯甲烷、乙醚、石油醚液，蒸干，残渣加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮2～5ml使溶解，置中性氧化铝柱100～120目，3～6g，内径1～1.5cm上，用30～50％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮40～60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮0.5～1.5ml使溶解，作为供试品溶液另取黄芪甲苷对照品，加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；用薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水10～15∶5～8∶1.5～3为展开剂，置用展开剂预饱和15～30分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5～20％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色的荧光斑点；赤芍的鉴别包括下列步骤照高效液相色谱法中国药典2005年版一部附录VID，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸水溶液10～20∶90～80为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮制成每1ml含30～50μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约1～3g，精密称定，置25～50ml量瓶中，加60～80％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮30～50ml，超声处理20～60分钟使溶解，放至室温，加60～80％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液15～35ml，通过中性氧化铝柱100～200目，1.5～3g，内径1～1.5cm，40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮湿法装柱，收集至25～50ml量瓶中，再用40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；地龙的鉴别包括下列步骤取消栓滴丸5～15g，加硅藻土3～7g，研匀，加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮30～70ml，加热回流2～3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40～60ml，超声处理20～60分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸9.5～12.5∶0.5～0.7提取2～3次，每次20～30ml，合并乙酸乙酯-甲酸液，蒸干，残渣加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮0.5～1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材2～3g，加三氯甲烷或甲醇、乙醇、丙酮20～40ml，超声处理20～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮0.5～1.5ml使溶解，作为对照药材溶液；用薄层色谱法验，吸取上述两种溶液各5～20μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以异辛烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸5～15∶3～9∶2～6∶0.1～0.3为展开剂，置用展开剂预饱和15～30分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；b含量测定芍药苷的含量测定方法包括下列步骤照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸水溶液10～20∶90～80为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮制成每1ml含30～50μg的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约1～3g，精密称定，置25～50ml量瓶中，加60～80％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮30～50ml，超声处理20～60分钟使溶解，放至室温，加60～80％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液15～35ml，通过中性氧化铝柱100～200目，1.5～3g，内径1～1.5cm，40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮湿法装柱，收集至25～50ml量瓶中，再用40～60％甲醇或三氯甲烷、乙醇、丙酮洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；消栓滴丸每克含芍药苷不得少于1.30mg。2、根据权利要求1所述的一种消栓滴丸质量标准及检验方法，其特征在于该方法中的质量标准a鉴别及b含量测定方法是以下方法的一种或几种-a鉴别-黄芪的鉴别取消栓滴丸5g，研细，加水60ml，超声处理30分钟使溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇30ml，振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，置中性氧化铝柱100120目，5g，内径11.5cm上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄甚甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VIB试验，吸取上述两种溶液各5W，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水13:7:2为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105'C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色的荧光斑点；赤芍的鉴别照高效液相色谱法中国药典2005年版一部附录VID，色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1%磷酸水溶液15:85为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35^g的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱100200目，2g,内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；地龙的鉴别取消栓滴丸10g，加硅藻土5g，研匀，加甲醇50ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸千，残渣加水50ml，超声处理30分钟使溶解，用乙酸乙酯-甲酸9.5:0.5提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材2g，加三氯甲烷20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VIB试验，吸取上述两种溶液各IOW，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，使成条状，以异辛垸-三氯甲垸-乙酸乙酯-甲酸5:3:2:0.l为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；b含量测定芍药苷含量测定照高效液相色谱法中国药典2005年版一部附录VID测定，色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸水溶液15:85为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000;对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每lml含35Pg的溶液，即得；供试品溶液的制备取消栓滴丸研细，取约2.Og，精密称定，置50ml量瓶中，加70%甲醇40ml，超声处理30分钟使溶解，放至室温，加70%甲醇至刻度，摇匀，静置，精密量取上清液25ml，通过中性氧化铝柱100200目，2g，内径11.5cm，50%甲醇湿法装柱，收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测定，即得；消栓滴丸每克含芍药苷不得少于1.30mg。全文摘要本发明公开了一种消栓滴丸的质量标准及其检验方法，增加了消栓滴丸中黄芪、赤芍、地龙的鉴别，建立了消栓滴丸中赤芍的含量测定；鉴别采用薄层色谱法鉴别黄芪、地龙，采用高效液相色谱法鉴别赤芍，含量测定采用高效液相色谱法测定赤芍中芍药苷；通过确定的质量标准及检验方法，每克中含芍药苷不得少于1.30mg的定量方法及检验方法，可增加该产品的质量可控性，克服现有技术的不足，以便能够更好的保证疗效、提高产品的生物利用度，更好的为广大患者服务。文档编号A61K36/71GK101204434SQ200710194568公开日2008年6月25日申请日期2007年11月23日优先权日2007年11月23日发明者于得才,朱贺年,贾金良申请人:包头中药有限责任公司