专利名称：：一种治疗动脉粥样硬化疾病的药物组合及用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种丹参酮IlA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的药物组合及其在治疗动脉粥样硬化方面的用途。背景玟术心脑血管疾病是威胁人类健康的重大疾病之一，特别是动脉粥样硬化，它是发达国家的主要死亡原因。随着我国人民生活水平提高和饮食习惯改变，该病也成为我国主要死亡原因。临床上用于治疗动脉粥样硬化的传统中药有很多，丹参是其中研究最为透彻的一种。丹参酮IIA是丹参的脂溶性成分，我国现已用其磺酸钠盐制成注射液供临床使用。但单独使用丹参酮IIA磺酸钠注射液治疗动脉粥样硬化，用量相对较大，近来也出现了对其毒副作用的报道，故研究药物组合有其理论依据，药物组合的各种药效成分清楚且便于定量生产，在实际使用中具有重大的社会和经济效益。
发明内容为了克服上述缺点，本发明提供了一种新的治疗动脉粥样硬化的药物组合。发明人经过对丹参酮1IA磺酸钠的各种药物组合的筛选，研究出一种含有丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的药物组合，并通过细胞、动物水平的反复验证，证明该药物组合具有抑制体外平滑肌细胞增殖、体内血管损伤后内膜增生、平滑肌细胞迁移的效果，从而完成了本发明。含有丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的药物组合，其特征为所述丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的浓度份数为l:(0.1—0.5):(1—2.5)。含有丹参酮nA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的药物组合，所述丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的浓度份数可优选自1:(0.2—0.3):(1.5—2)。含有丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的药物组合，所述丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的浓度份数特别优选自1:0.25:1.75。本发明具有以下优点丹参酮IlA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍后可治疗动脉粥样硬化，且结果优于单独使用丹参酮nA磺酸钠注射液。同时，丹参酮I1A作为常用中药丹参的提取物，人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl在人参、三七等多种中药中均广泛存在，故此三种成分来源广，原料易得，安全性大，药用前景广阔。图l.丹参酮IIA磺酸钠对血管平滑肌细胞增殖的影响图2.人参皂苷Rgl对血管平滑肌细胞增殖的影响图3.三七皂苷Rbl对血管平滑肌细胞增殖的影响图4.筛选出的最佳配伍组(IIA4ymol/L+Rgl1umol/L+Rbl7Pmol/L)对血管平滑肌细胞增殖的影响具体实施例方式下面通过以下实施例来阐述本发明所述药物丹参酮nA磺酸钠及人参皂苷Rgi和三七皂苷Rbl体外对平滑肌细胞增殖作用、体内对内膜增生进行评价，但并不限于以下途径。这些生物实验主要包括l.丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl单体、三七皂苷Rbl单体、丹参酮IIA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍组对血管紧张素n(AngII)诱导平滑肌细胞增殖的影响；2.体内球囊损伤后，丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IlA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍组对血管内膜增生及平滑肌细胞迁移的影响。以下所述丹参酮IIA磺酸钠可为临床使用的丹参酮nA磺酸钠注射液，人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl为中国生物制品检验所购买的标准品。丹参酮IlA磺酸钠、丹参酮nA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍组对AngII诱导平滑肌细胞增殖的影响1.平滑肌细胞培养采用组织块培养法，无菌条件下，取SD大鼠(购自军事医学科学院动物中心)胸主动脉血管放入Hanks液中清洗，小心剔除血管外结缔组织并刮去内膜，将中膜平滑肌层剪成lmi^的小块在培养瓶内，加10%胎牛血清和100IU/ml青霉素、100Ug/ml链霉素的DMEM置于37'C、5。/。C02孵箱内培养，待细胞出现"峰谷"结构，用0.25%胰酶消化细胞，传代。采用a-actin免疫组化染色进行鉴定，证实为平滑肌细胞,实验选用第4-6代细胞。2.丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl单体、三七皂苷Rbl单体、丹参酮IIA磺酸钠及人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍组对AngII诱导平滑肌细胞增殖的影响各组用药及剂量,详见表l。表1药物分组情况分组序号_受试药物_剂量(ymol/L)10.042丹参酮IIA磺酸钠0.43440.15人参皂苷Rgl161070.07<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>后换1%低血清培养液，各组分别加入上述药物，另设对照组和AngII模型组，24h后各组加入AngII，使AnglI终浓度为0.1umol/L，24h后加入MTT试剂继续孵育2h，每孔加入100y1DMSO，在酶标仪上读取570nm的吸光值。3.结果的处理与统计数据用x土s表示。组间资料采用方差分析。*P<0.05具有显著差异性，"P〈0.01具有极显著差异。资料统计学处理应用SPSS13.0软件。4.结果丹参酮IIA(0.04-4ymol/L)、人参皂苷Rgl(0.1-10ymol/L)、三七皂苷Rbl(0.07-7ymol/L)呈剂量依赖性地抑制AngII引起的细胞增殖，三味药配伍组中IIA4umol/L+Rgllumol/L+Rbl7umol/L对AngII诱导引起的SMC增殖的抑制作用最强，与模型组相比P<0.01。实验独立重复三次，MTT检测结果见图1、图2、图3、图4。体内球囊损伤后，丹参酮IIA磺酸钠组、HA4umol/L+Rgl1umol/L+Rbl7ymol/L配伍组对血管内膜增生及平滑肌细胞迁移的影响l.SD大鼠培养选用健康成年SD雄性大鼠40只，体质量200土20g，由军事医学科学院动物实验中心提供。大鼠词养环境温度25'C。2.丹参酮IIA磺酸钠、IIA4ymol/L+Rgl1umol/L+Rbl7Pmol/L配伍组对血管内膜损伤及平滑肌细胞迁移的影响内膜损伤大鼠模型制作行左颈总动脉球囊拉伤术。P/。戊巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉，沿前正中线切开皮肤，暴露左颈总动脉，结扎左颈外动脉的远心端,将2F(0.16mm)球囊导管经左颈外动脉插入颈总动脉至起始部，球囊注入空气，有轻微阻力感时，回拉至颈内、外动脉分叉处，120°不同方向重复3次，结扎左颈外动脉，逐层缝合。术后注射肝素500U/kg，青霉素20万IU/kg共3天。动物分组及处理40只大鼠中随机选用8只为对照组(灌胃等体积生理盐水)。将其余32只造成血管损伤模型，均造模成功。随机分为4组，每组8只11A4umol/L治疗组(按0.882mg/kg剂量灌胃丹参酮IIA磺酸钠溶液)，IIA4umol/L+Rgl1nmol/L+Rbl7umol/L配伍组治疗组(按0.882mg/kg丹参酮IIA磺酸钠+0.625mg/kg人参皂苷Rgl+4.05mg/kg三七皂苷Rbl剂量灌胃)，阳性药组(按3mg/kg剂量灌胃阿托伐汀溶液)，模型组(灌胃等体积生理盐水)。手术后开始给药，l次/天，连续7天。心脏灌流，处死，取左侧颈总动脉，固定、包埋、切片，HE染色。检测指标血管内腔面积、血管中膜面积、新生内膜与中膜面积比、管腔面积3.结果HA4umol/L+Rgllumol/L+Rbl7umol/L组、阳性药组新生内膜与中膜面积比、管腔面积均与模型组相比PO.Ol，证明药物可以减少内膜增生，11A4pmol/L组与模型组相比无显著性差异,可见IlA4wmol/L剂量时不能通过减少内膜增生达到治疗动脉粥样硬化的目的，证实配伍组效果优于单味药组，检测指标结果见表2。表2.球囊损伤后血管形态学比较内腔面积(mm2)中膜面积(mm2)内膜与中膜面积管腔面积(mm2)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>[实施例三]丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.5:1l.SD大鼠培养选用健康成年SD雄性大鼠40只，体质量200土20g，由军事医学科学院动物实验中心提供。大鼠饲养环境温度25'C。2.丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.5:1内膜损伤大鼠模型制作同前所述动物分组及处理32只大鼠中随机选用8只为对照组(灌胃等体积生理盐水)。将其余24只造成血管损伤模型，均造模成功。随机分为3组，每组8只IIA4ymol/L+Rglmol/L+Rbl4nmol/L配伍组治疗组(按0.882mg/kg丹参酮IIA磺酸钠+1.25mg/kg人参皂苷Rgl+2.31mg/kg三七皂苷Rbl剂量灌胃)，阳性药组(按3mg/kg剂量灌胃阿托伐汀溶液)，模型组(灌胃等体积生理盐水)。手术后开始给药，l次/天，连续7天。心脏灌流，处死，取左侧颈总动脉，固定、包埋、切片，HE染色。检测指标血管内腔面积、血管中膜面积、新生内膜与中膜面积比、管腔面积3.结果IIA4umol/L+Rgl2nmol/L+Rbl4ixmol/L配伍治疗组新生内膜与中膜面积比、管腔面积均与模型组相比P〈0.05，证明药物可以通过减少内膜增生达到治疗动脉粥样硬化的目的，检测指标结果见表3。表3.球囊损伤后血管形态学比较<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>配伍纟且0.22±0.020.22±0.021.00±0.05*0.26±0.01*阳性药组_0.20±0.02_0.22±0.0〗0.92土0.03"0.26士0.0广'P<0.05,**P<0.01丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.1:2.5l.SD大鼠培养选用健康成年SD雄性大鼠40只，体质量200士20g，由军事医学科学院动物实验中心提供。大鼠饲养环境温度25'C。2.丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.1:2.5内膜损伤大鼠模型制作同前所述动物分组及处理32只大鼠中随机选用8只为对照组(灌胃等体积生理盐水)。将其余24只造成血管损伤模型，均造模成功。随机分为3组，每组8只1IA4umol/L+Rgl0.4limol/L+Rbl10wmol/L配伍组治疗组(按0.882mg/kg丹参酮IIA磺酸钠+0.25mg/kg人参皂苷Rgl+5.786mg/kg三七皂苷Rbl剂量灌胃)，阳性药组(按3mg/kg剂量灌胃阿托伐汀溶液)，模型组(灌胃等体积生理盐水)。手术后开始给药，l次/天，连续7天。心脏灌流，处死，取左侧颈总动脉，固定、包埋、切片，HE染色。检测指标血管内腔面积、血管中膜面积、新生内膜与中膜面积比、管腔面积3.结果11A4umol/L+Rgl0.4i:mol/L+Rbl10umol/L配伍治疗组新生内膜与中膜面积比、管腔面积均与模型组相比P<0.05，证明药物可以通过减少内膜增生达到治疗动脉粥样硬化的目的，检测指标结果见表4。表4.球囊损伤后血管形态学比较内膜面积(mm2)中膜面积(mm2)内膜与中膜面积比管腔面积(mm2)AngII0.26±0.010.21±0.011.21±0.070.22±0.02配伍组0.22±0.020.21±0.011.05土0.09'0.26±0.02'阳性药组0.21±0.010.22±0.010.95±0.05"0.28±0.02"P<0.05,P<0.01丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.2:1.5l.SD大鼠培养选用健康成年SD雄性大鼠40只，体质量200士20g，由军事医学科学院动物实验中心提供。大鼠饲养环境温度25'C。2.丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.2:1.5内膜损伤大鼠模型制作同前所述动物分组及处理32只大鼠中随机选用8只为对照组(灌胃等体积生理盐水)。将其余24只造成血管损伤模型，均造模成功。随机分为3组，每组8只1IA4ymol/L+Rgl0.8umol/L+Rbl5umol/L配伍组治疗组(按0.882mg/kg丹参酮IIA磺酸钠+0.5mg/kg人参皂苷Rgl+2.89mg/kg三七皂苷Rbl剂量灌胃)，阳性药组(按3mg/kg剂量灌胃阿托伐汀溶液)，模型组(灌胃等体积生理盐水)。手术后开始给药，l次/天，连续7天。心脏灌流，处死，取左侧颈总动脉，固定、包埋、切片，HE染色。检测指标血管内腔面积、血管中膜面积、新生内膜与中膜面积比、管腔面积3.结果IIA4umol/L+Rgl0.8Pmol/L+Rbl5umol/L配伍治疗组新生内膜与中膜面积比、管腔面积均与模型组相比P〈0.05，证明药物可以通过减少内膜增生达到治疗动脉粥样硬化的目的，检测指标结果见表5。表5.球囊损伤后血管形态学比较内膜面积(mm2)中膜面积(mm2)内膜与中膜面积比管腔面积(mm2)AngII0.26±0.010.22±0.011.18±0.010.20±0.03配伍组0.23±0.020.21±0.021.08土0.03'0.26±0.02'阳性药组0.21±0.030.21±0.020.97±0.08"0.28±0.02"P<0.05,PO.01丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.3:2l.SD大鼠培养选用健康成年SD雄性大鼠40只，体质量200土20g，由军事医学科学院动物实验中心提供。大鼠饲养环境温度25'C。2.丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl配伍比例为1:0.3:2内膜损伤大鼠模型制作同前所述动物分组及处理32只大鼠中随机选用8只为对照组(灌胃等体积生理盐水)。将其余24只造成血管损伤模型，均造模成功。随机分为3组，每组8只11A4iimol/L+Rgl1.2nmol/L+Rbl8umol/L配伍组治疗组(按0.882mg/kg丹参酮IIA磺酸钠+0.75mg/kg人参皂苷Rgl+4.63mg/kg三七皂苷Rbl剂量灌胃)，阳性药组(按3mg/kg剂量灌胃阿托伐汀溶液)，模型组(灌胃等体积生理盐水)。手术后开始给药，l次/天，连续7天。心脏灌流，处死，取左侧颈总动脉，固定、包埋、切片，HE染色。检测指标血管内腔面积、血管中膜面积、新生内膜与中膜面积比、管腔面积3.结果IIA4umol/L+Rgl1.2Umol/L+Rb18"mol/L配伍治疗组新生内膜与中膜面积比、管腔面积均与模型组相比P<0.05，证明药物可以通过减少内膜增生达到治疗动脉粥样硬化的目的，检测指标结果见表6。表6.球囊损伤后血管形态学比较<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1.一种治疗动脉粥样硬化疾病的药物组合，其特征为其活性成分包括丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rg1、三七皂苷Rb1。2.根据权利要求1所述的药物组合，其特征为所述丹参酮IU磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的重量份数为1:(0.1—0.5):(1—2.5)。3.根据权利要求2所述的药物组合，其特征为所述丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的重量份数为1:(0.2_0.3):(1.5—2)。4.根据权利要求3所述的药物组合，其特征为所述丹参酮IIA磺酸钠、人参皂苷Rgl和三七皂苷Rbl的重量份数为时1:0.25:1.75。5.根据权利要求1一4所述的药物组合，可被配制成片剂、胶囊、滴丸、颗粒剂、缓释制剂、控释制剂、注射剂和其他适宜的剂型。6，权利要求1一4所述药物组合，用于治疗动脉硬化。全文摘要本发明涉及一种丹参酮IIA磺酸钠及人参皂苷Rg1和三七皂苷Rb1的药物组合及在治疗动脉粥样硬化方面的用途。该组合物具有药物用量少、毒副作用小，抗动脉粥样硬化效果好的特点。文档编号A61K31/7028GK101461818SQ20071030216公开日2009年6月24日申请日期2007年12月18日优先权日2007年12月18日发明者喆周,丹朱,王升启,王晓伟,田琳琳,赵海豹,邢雅玲,钟芝茵,马永洁申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所