专利名称：：益生微生物用于治疗和预防肥胖及相关病症的用途的制作方法益生微生物用于治疗和预防肥胖及相关病症的用途发明领域本发明涉及食》欠饱足感(satietyofappetite)。在一个实施方案中，本发明涉及微生物的至少一种菌株，优选至少一种乳酸细菌菌一朱，优选至少一种益生细菌(probioticbacterium)菌4^,例如至少一种乳杆菌属菌种(丄a"c^ac/〃Mspp)(例如嗜酸乳杆菌(丄.acWop/H7w)、唾液乳杆菌(丄.ra//vaWw)和/或弯曲乳杆菌(丄.cwvaw))和/或双歧杆菌属菌种CB折^Z)a"eWMwspp.)(例如乳双歧杆菌(5./acto))的菌林用于制备支持体(support)的用途，所述支持体施用于人或动物用于调节饱足感信号传导(satietysignalling),优选用于诱发饱足感。本发明还进一步涉及微生物的至少一种菌林，优选乳酸细菌的至少一种菌抹，优选益生细菌的至少一种菌株，例如乳杆菌属菌种(例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和/或弯曲乳杆菌)和/或双歧杆菌属菌种(例如乳双歧杆菌)的至少一种菌林在过剩体重(excessweight)的治疗或减少或控制中和/或在由超重(overweight)引起的疾病的治疗中，特别是在肥胖和/或与肥胖相关的疾病治疗中的用途。
背景技术：
：在全世界范围内人们为了审美的(美容的)原因进行节食(dieting)和减肥。科学家、药物开发者(developer)和食物开发者在过去的十年中已经引入了许多种食欲抑制剂和/或减肥药(weightlossdrug)和/或"健康，，食谱(foodrange)以帮助身处困境的节食者减肥。节食并不仅限于人，而是还包括其它动物，对于宠物来说具有饮食计划是很普通的。从进化的观点来看，动物(包括人)为防止饥饿已经适应塞满食物并储存能量。然而，不幸的是，尽管这在从前食物缺乏时曾是有用的，但是在目前这种可以不断进食的情况下，这会导致超重，并在一些情况下导致肥胖。肥胖已经成为一个主要的公共卫生问题。由肥胖引起或加重的健康状况(healthcondition)包括高血压、糖尿病(diabetesmellitus)、睡眠性呼吸暂停(sleepapnea)、与肥胖有关的通气不足、背部和关节问题、心血管疾病、非酒精性脂肪肝病和胃食管返流疾病。体重指数(BMI)(用以千克为单位的体重除以以米为单位的身高的平方来计算)是最普遍接受的用于超重和/或肥胖的量度。BMI超过25认为是超重，同时将肥胖定义为30或更高的BMI，将35或更高的BMI认为是严重同病(seriouscomorbidity)，并将具有40或更高的BMI认为是病态肥胖。肥胖抑制素(obestatin)是肽激素，其由在几种哺乳动物包括人的胃和小肠中线性排列的细胞所产生；它使老鼠的食欲剧烈下降，并且认为对于人类也能起同样的作用。令人惊讶地，肥胖抑制素由与编码胃饥饿素(ghrelin)的相同基因所编码，胃饥饿素是增加食欲的肽激素。胃饥饿素和肥胖抑制素两者都是源自由相同基因所产生的激素原并且因翻译后加工而区分开。这种机制的目的还不清楚，但是其却解释了早期的发现，即去除小鼠的胃饥饿素基因并没有显著地减少它们的食名欠。已经考虑过将肥胖抑制素用于作为针对肥胖的药物的用途，然而其不得不作为鼻腔喷雾或通过注射来递送，因为胃液会破坏所述肽。目前对于肥胖的治疗方法很少。在美国已经批准使用的两种药物之中，Roche的Xenical(赛尼可)(其阻断脂肪的消化)在促进体重减轻方面是相对有效的，但是却具有一些不良的副作用。在美国另一种已经批准使用的药物是AbbotLaboratories的Meridia(西布曲明)，据说已经证明其并不是特别地有效(SchafferA.www.slate.com/id/2117332,2005年4月26曰)。目前正在试用中的一种实验性药物是RimonabantTM(利莫那班)(大麻素受体拮抗剂)，据说其能遏制人的渴求感(craving),从而减少肥胖患者的食^&义。因此需要有效的手段(tool)来减少体重、阻止体重增加、促进体重减轻和/或治疗肥胖。在微生物之中，特别是在细菌之中，有一些对免疫系统具有积极的影响，特别是乳酸细菌和双歧杆菌，并且已将它们描述为"益生"细菌或菌抹。通常，就益生细菌或菌抹来说，它意味着非病原性的微生物，当其被活着摄取时，其对宿主的健康或生理机能产生有益的影响。这些益生菌林通过消化道的上部后有能力继续存活。它们是非病原性的、无毒的，并且对健康发挥它们的有益影响，一方面是通过与在消化道中的常居菌群(residentflora)的生态相互作用，另一方面是通过它们经由"GALT"(gut-associatedlymphoidtissue;肠道相关的淋巴组织)以积极方式来影响免疫系统的能力。依赖于益生菌的定义，这些细菌，当其以足够的数量提供时，有能力活着通过肠道，然而它们没有越过肠内屏障(intestinalbarrier),并且它们的主要效果也因此在胃肠道的内腔和/或内壁诱发。接着它们在施用期(administrationperiod)内形成常居菌丛的一部分。这种定居(或短暂的定居)允许益生细菌产生有益的效果，例如阻遏存在于菌群中的潜在病原性微生物并与肠道的免疫系统相互作用。最经常使用的益生菌抹，特别是在乳制品中，主要是以下属的细菌和酵母乳杆菌属菌种、《连球菌属菌种(5^"印tococcMss;p.)、肠球菌属菌种(E^racoccw)、双歧杆菌属菌种和酵母属菌种(iSacc/zaramyces5//.)。在已记录的关于这些细菌的益生效果之中，能够提到作为实例的如改进乳糖耐受性、增强免疫功能、预防或治疗胃肠和泌尿生殖感染以及降低癌症危险性。扭无述方面(aspect)本发明具有发展性的发现是根据本发明的微生物，特别是乳酸细菌和/或益生^f效生物和/或益生乳酸细菌，和/或其代谢物，可以诱发受试者体内的饱足感，特别是食后的饱足感。特别地，本发明具有发展性的发现是乳酸细菌(例如嗜酸乳杆菌，例如菌抹PTA-4797;弯曲乳杆菌；唾液乳杆菌；和/或乳双歧杆菌)和/或其代谢物，可以诱发受试者体内的饱足感，特别是食后的饱足感。详述方面本发明的详述方面在下文中详述。详述方面的一些内容分为几个部分在分开的段落中讨论。这是为了便于参考而决非是限制性的。在一个方面中，本发明提供微生物的至少一种菌林和/或其代谢物用于向受试者施用来调节饱足感信号传导(例如，在肠内)的用途。在一个方面中，本发明提供微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物在制备施用于受试者用于调节饱足感信号传导(例如，在肠道中)的支持体中的用途。此处所用的术语"调节饱足感信号传导，，，指改变与饱足感相关的神经信号传导和/或内分泌信号传导的幅度和/或频率。在一些实施方案中，"调节饱足感信号传导"指改变饱足感标志物(satietymarker)的幅度和/或频率。此处所用的术语"饱足感"，意指处在食欲饱足或过饱的状态，即超出所需的饱胀(fiillnessbeyonddesire)或完全得到满足。在进一步的方面中，本发明提供微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物在制备施用于受试者用于诱发饱足感的支持体中的用途。在另一方面中，本发明提供微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物在制备药物中的用途，该药物用于治疗和/或预防过剩体重，包括肥胖，和/或由过剩体重引起的疾病或病症，包括与肥胖相关的疾病或病症。在另一方面中，本发明提供调节受试者体内饱足感信号传导(例如，在肠内)的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的微生物的至少一种菌林和/或其代谢物。在进一步的方面中，本发明提供诱发受试者体内饱足感的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的微生物的至少一种菌林和/或其代谢物。在进一步的方面中，本发明提供治疗和/或预防受试者中的过剩体重，包括肥胖，和/或由过剩体重引起的疾病或病症，包括与肥胖有关的疾病的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物。在进一步的方面中，本发明提供减轻不肥胖受试者的过剩体重的美容方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物。在另一个实施方案中，本发明提供微生物的至少一种菌林和/或其代谢物在制备施用于不肥胖受试者(non-obesesubject)以诱发饱足感的支持体中的美容用途。在进一步的实施方案中，本发明提供用于选择施用于受试者以诱发饱足感和/或治疗过剩体重，包括肥胖的微生物和/或其代谢物的方法，其中所述方法包括步骤a)使微生物和/或其代谢物与至少一种上皮细胞接触，b)检测所述至少一种上皮细胞内的饱足感标志物(例如蛋白酪氨酸酪氨酸(PYY))的表达。在进一步的实施方案中，本发明提供用于选择微生物和/或其代谢物来制备支持体的方法，该支持体用于向受试者施用以诱发饱足感和/或治疗过剩体重，包括肥胖，其中所述方法包括步骤a)将微生物和/或其代谢物与至少一种上皮细胞接触，b)检测所述至少一种上皮细胞内的饱足感标志物(例如蛋白酪氨酸酪氨酸(PYY))的表达。在阶段a)或b)中所使用的一种或多种上皮细胞优选地来自Caco-2细胞系。这是癌结肠细胞系。他们也可以是来自正在手术的人的活组织检查事项中的分离并纯化的细胞。公众可以通过许多细胞系目录获得Caco-2细胞，例如从ATCC(AmericanTypeCultureCollection;美国典型培养物保藏中心)获得，例如以编号HTB-37。阶段a)的进行优选对每一个待检测上皮细胞使用1-100个微生物细胞，用至少一种上皮细胞。在阶段a)期间的接触期可以在0小时至24小时间变化，并且优选地是大约3小时或至少3小时。通常，根据阶段a)的与细胞的接触可以在本领域技术人员已知的标准温度、修正气压(modified-atmospheres)和无菌条件下进行，特别是在体外上皮细胞培养条件下进行。根据本发明b)阶段的选择方法优选地通过检测饱足感标志物(例如PYY)的信使RNA的表达，和任选地检测其水平来进行，例如通过PCR尤其是通过定量PCR或通过免疫组织化学或通过放射免疫测定法。本
技术领域：
人员已知的用于检测mRNA及其量度的其他技术也可以使用。对于一些实施方案，根据本发明的微生物可以是活的。对于一些实施方案，根据本发明的微生物可以是死亡的或不能存活的。不希望受到任何理论所限制，认为与微生物有关的，例如由微生物产生的代谢物，例如可溶性的代谢物，可能是微生物具有有益效果的原因。因此对于一些方面，不必要将微生物细胞与靶细胞直接接触。对于一些实施方案，认为与微生物相关的一种或多种代谢物，例如由微生物产生的一种或多种代谢物，可能适合于实现本文教导的有益效果。在这样的情况下，可以不必要包括微生物本身。此处所用的术语"其代谢物"，指从根据本发明的微生物中提取的或从正在培养或培养过根据本发明的微生物的培养基中所获得的一种或多种化合物。在一些方面中所述代谢物可以是培养基和/或微生物的粗提取物。合适地，对于一些方面来说所述代谢物可以是从培养基和/或微生物分离和/或纯化的一种或多种化合物。在一些实施方案中，合适地，所述代谢物可以是可溶性的代谢物。在一些实施方案中，所述代谢物可以是水溶性的代谢物。在一些实施方案中，所述代谢物可以是脂溶性的代谢物。合适地，所述代谢物可以是存在于上清相中的代谢物，该上清相是使用微生物的培养物中分离的。以下方法获;的):在培养基中培口养细菌(优选乳酸细菌，优选益生细菌，例如乳杆菌属菌种(例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和/或弯曲乳杆菌)或双歧杆菌属菌种(例如乳双歧杆菌))，一直培养到培养物在X600的OD达到至少0.6,优选0.6至1.5;通过离心和/或过滤(例如，如在25°C，以3000g离心5分钟和/或无菌过滤)来去除所述细菌，以获得包含所述代谢物的滤液。合适地，所述代谢物是可以使用含有1.0%的糖或不含糖的培养基获得的(优选是使用含有1.0%的糖或不含糖的培养基获得的)。合适地，所述代谢物是可以通过在37。C培养细菌获得的(优选是通过在37°C培养细菌获得的)。合适地，所述代谢物是可以通过厌氧培养细菌获得的(优选是通过厌氧培养细菌获得的)。在体外测定法中，可将滤液形式的代谢物任选地与组织培养基中的组织培养细胞混合。优选地，将包含代谢物的滤液与组织培养基以这样一种方式混合，其使得滤液/组织培养基混合物包含至少10%v/v(体积/体积)滤液和至多90。/。v/v组织培养基。当把代谢物装载于支持体时，优选地滤液/支持体混合比是1:10或更大。合适地，根据本发明的微生物可以与一种或多种靶细胞共培养从而允许可溶性级分的转运。合适地，所述微生物可以不与靶细胞进行细胞对细胞(celltocell)的接触。合适地，根据本发明的微生物或其代谢物可以是细菌悬液的形式，在冷冻之前或之后，以浓缩物的形式，干燥、冻干或冷冻的形式。无论使用什么10样的形式，均可以冷冻菌抹。合适地，根据本发明的微生物和/或其代谢物可以包含不同的添加物。合适地，可以将添加物在其干燥的过程中和/或在其冻干的过程中添加。根据本发明使用的微生物，(例如乳杆菌属菌种的菌林；例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和/或弯曲乳杆菌的菌林，和/或双歧杆菌属的菌株，例如乳双歧杆菌)，可以包含10、1(^CFU的细菌/克支持体，和更具体地1()S-1(^CFU的细菌/克支持体，对于低压冻干的形式优选10M(PCFU/克。合适地，根据本发明使用的微生物，(例如乳杆菌属菌种的菌林；例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和/或弯曲乳杆菌的菌株，和/或双歧杆菌属的菌林，例如乳双歧杆菌)，可以按照约106-约1012CFU的微生物/剂的剂量施用，优选约108-约10"CFU的微生物/剂的剂量施用。术语"每剂"是指每天的摄取或每次的摄取提供给受试者的微生物量，优选每天的摄取提供给受试者的微生物量。例如，如果微生物将以食物为支持体(例如在酸奶中)施用——则酸奶将优选地包含约108-1012CFU的微生物。然而，可选择地，这种微生物量可以分为多次施用，每次施用由较小量的微生物装载组成，只要受试者在任意特定时间(例如每个24小时的时间段)内所获得的微生物总量是约106-约1012CFU的微生物,优选108-约1012CFU的微生物。根据本发明微生物的至少一种菌抹的有效量可以是至少106CFU的微生物/剂，优选约106-约1012CFU的微生物/剂，优选约108-约1012CFU的微生物/剂。在一个实施方案中，优选地根据本发明所使用的微生物，(例如乳杆菌属菌种的菌抹；例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和/或弯曲乳杆菌的菌抹，和/或双歧杆菌属的菌抹，例如乳双歧杆菌)，可以按照约106-约1012CFU的微生物/天，优选约108-约10"CFU的微生物/天的剂量施用。因此，在这种实施方案中的有效量可以是约106-约10"CFU的微生物/天，优选约108-约10"CFU的微生物/天。CFU代表"集落生成单位"。以克为单位的支持体优选地指食物产品或可药用的支持体。有利地，本发明是用于减少体重增加，和/或促进体重减轻，和/或治疗或预防肥胖，和/或治疗或緩解与肥胖或超重有关的或由肥胖或超重引起的病症或疾病的有效手段。不希望受到理论的限制，微生物和/或其代谢物可以通过增加肠内的饱足感信号传导来介导体重减轻和/或导致饱足感。不希望受到理论的限制，微生物和/或其代谢物可以通过其对肠道(gut)内存在的胃肠激素(guthormone)和/或一种或多种受体的影响来介导体重减轻和/或导致饱足感。食欲的一些外周调节物(peripheralregulators),包括胃肠激素，在Stanley"a/Physiol.Review85:1131-11582005中描述。不希望受到理论的限制，微生物和/或其代谢物可以通过其对饱足感标志物(例如胃肠激素例如肽酪氨酸酪氨酸(PYY))的影响来介导体重减轻和/或导致饱足感。饱足感此处所用的术语"饱足感"，意指处在食欲饱足或过饱的状态，即超出所需的饱胀或完全得到满足。合适地，本发明可以是用于增加饱足感。优选地本发明是用于诱发和/或增加食后饱足感。本
技术领域：
的人员将会理解饱足感和食后饱足感可以用许多方法来测量。例如，不希望受到理论的限制，在饱足感标志物(例如在血液中或在肠道(gut)内的胃肠激素PYY)的水平和饱足感的水平之间存有联系。因此，饱足感和/或食后饱足感可以通过测定一种或多种饱足感标志物(例如在受试者的血液中和/或在受试者的肠道内的PYY)的水平来测量。合适地，样品可以在受试者进食特定膳食之前或之后的间隔期服用。例如，PYY表达水平的增加和/或PYY水平的增加可以表示饱足感。在其它饱足感标志物和饱足感之间的关系对于本领域技术人员是已知的。除此之外，或可供选择地，饱足感和/或食后饱足感可以通过在动物研究中测量动物的食物摄取量和/或动物喂食的时间间隔和/或动物的重量来测量。动物的食物摄取量和/或动物重量的减少可以表示饱足感。除此之外，或作为另一种选择，动物喂食的时间间隔的增加也可以表示饱足感。除此之外，或可供选择地，饱足感和/或食后饱足感可以通过对受试者使用问巻调查法来主观性地测定，在问巻调查中，询问受试者以下问题"你有多饿，，，"你有多饱"，"你能吃多少"和"你想吃什么(whatisyourdesiretoeat)"。将他们的感觉在100mm直观类比标度上从0(最低)至10(最高)标定等级(如Stocka/J.ofClinicalEndocrinology&Metabolism,firstpublished18Jan2005asdoi:10.1210/jc.2004.1251中教导)。该参考文件在此引入作为参考。优选要求受试者在进食特定膳食之前或之后的间隔期内完成问巻调查。在一些实施方案中，饱足感可以指以下的一种或多种a)食后饱足感；b)餐前饥饿感的减少；c)增强餐内饱足感以减少食量(mealsize);和/或d)增加在两餐之间状态的饱足感，其可以阻止在进餐次数上的补偿性增加和/或可以减少在两餐之间进食点心。在一些实施方案中，饱足感可以作为以下的一种或多种来量度i)通过与比较性试验受试者相比和/或与治疗前的受试者相比，受试者食物摄取量的减少；ii)与治疗前的受试者相比，受试者体重的减少；iii)与比较性试验受试者相比和/或与治疗前的受试者相比，肥胖的减少。饱足感标志物术语"饱足感标志物"如用于此处指与调节食欲和/或食物摄取量有关的化合物和/或胃肠激素。饱足感标志物包括，但不限于，胰多肽(PYY)、缩胆嚢素(CCK)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)、胰岛素、瘦蛋白(leptin)、胃饥饿素、食欲肽(orexin)、促进食名夂的下丘脑牙申经肽Y(orexigenichypothalamicneuropeptideY;NPY)、乙酸、糊精(amylin)和泌酸调节素(oxyntomodulin)。在一个实施方案中，所述饱足感标志物优选地是胃肠激素。在一个实施方案中，所述饱足感标志物可以是PYY、CCK、GLP-1、胰岛素、瘦蛋白、胃饥饿素、食欲肽、促进食欲的下丘脑神经肽Y、糊精或泌酸调节素中的一种或多种。合适地，所述饱足感标志物可以是选自以下中的任意一种或多种PYY、CCK、GLP-1和胰岛素。不希望受到理论的限制，本发明的微生物和/或其代谢物通过增加以下中任意一种或多种的血浆水平来诱发饱足感PYY、CCK、GLP-1和胰岛素。所述增加是指与未施用过所述^t生物和/或其代谢物的等同对照相比。在一个实施方案中，本发明的微生物和/或其代谢物通过增加肠道中下述饱足感标志物中的任意一种或多种的水平来诱发饱足感PYY、CCK、GLP-1和胰岛素。所述增加是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。不希望受到理论的限制，本发明的微生物和/或其代谢物可以通过增加外周血中的痩蛋白的水平和/或通过降低脑内的瘦蛋白的水平来诱发饱足感。所述增加是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。在一个实施方案中，本发明的微生物和/或其代谢物可以增加PYY的水平。所述增加是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。在一个可选择的或附加的实施方案中，本发明中的微生物和/或其代谢物可以增加CCK的水平。所述增加是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。在另一个实施方案中，本发明的^f鼓生物和/或其代谢物可以通过减少肠道中和/或血浆中的一种或多种胃肠激素的水平来诱发饱足感，如以下中的任意一种或多种胃饥饿素和食欲肽(orexins)。所述减少是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。在另一个实施方案中，所述饱足感标志物可以是乙酸。在该实施方案中，本发明的微生物和/或其代谢物可以通过增加血液中乙酸的水平来诱发饱足感。所述增加是指与未施用过所述微生物和/或其代谢物的对照相比。支持体在本发明的用途中所使用的支持体优选是可药用的支持体或食物产品。关于食物和药物二者的进一步信息如下所述。可药用的支持体可以是例如以压制片剂、片剂、胶嚢、软膏剂、栓剂或可饮用溶液的形式的支持体。其它合适的形式将在下文提供。优选地，在本发明的用途中所使用的支持体是食物产品例如基于乳的粉剂、饮料或食品补充剂(foodsupplement)。优选地，其可以是动物或植物来源的乳制品。如下文的进一步记录，此处的术语"食物"以其最广泛的意义来使用——并且包括人的食物以及动物的食物(即祠料)。此处所用的术语"乳制品，，意在包括包含动物和/或植物来源的乳的介质(medium)。作为动物来源的乳可以提及的是奶牛(cow)的、绵羊(sheep)的、山羊(goat)的或水牛(buffalo)的乳。作为植物来源的乳可以提及的是能够根据本发明使用的植物来源的任意可发酵物质，特别是来源于大豆、稻或谷类(cereal)。仍更优选地，根据本发明使用的支持体是发酵乳或母乳化乳(humanizedmilk)。超重/肥胖体重指数(BMI)(用以千克为单位的体重除以以米为单位的身高的平方来计算)是最普遍接受的用于超重和/或肥胖的量度。将BMI超过25认为是超重。将肥胖定义为30或更高的BMI，将35或更高的BMI认为是严重同病，并将40或更高的BMI认为是病态肥胖。此处所用的术语"肥胖"包括肥胖、同病肥胖和病态肥胖。因此，此处所用的术语"肥胖，，可以定义为具有大于或等于30的BMI的受试者。在一些实施方案中，合适地肥胖受试者可具有大于或等于30，合适地35，合适地40的BMI。此处所用的术语"过剩体重"意指受试者的体重过剩。此处所用的术语"过剩体重"意指将所述受试者认为是超重。此处所用的术语"超重"意指所述受试者具有超过25的BMI。过剩体重和/或肥胖可以使用BMI来测量。因此，过剩体重和/或肥胖的减少可以4吏用BMI来测量。过剩体重和/或肥胖的减少还可以(或者可选地)通过测量相对于对照的受试者体重和/或测量本发明的微生物和/或其代谢物施用之前和之后的受试者体重来简单地测量。不希望受到理论的限制，在血清或血液炎性标志物(例如C-反应蛋白和/或白细胞介素6和/或TNF-RII)和肥胖之间也可能存有联系。此外，在血清或血液炎性标志物和BMI之间也可能有相关性。因此，在一个实施方案中，可以通过测量血液炎性标志物以确定受试者的肥胖和/或肥胖的减少。由过剩体重和/或肥胖引起的或者与过剩体重和/或肥胖相关的病症/疾病由肥胖引起或加重的健康状况(即病症和/或疾病)包括高血压，糖尿病，例如2型糖尿病，睡眠性呼吸暂停，与肥胖相关的通气不足，背部和关节问题，心血管疾病，非酒精性脂肪肝病和胃食管返流疾病。受试者术语"受试者"，如用于此处，指动物。优选地，所述受试者是哺乳动物，包括例如牲畜(包括牛、马、猪、鸡和羊)，和人。在本发明的一些方面中所述动物是陪伴动物(companionanimal)(包括宠物)，例如狗或猫。在本发明的一些方面中，合适地受试者可以是人。药物在此处所用的术语"药物(medicament)"包含在人类医学和兽医学中使用的用于人和动物的药物。此外，此处所用的术语"药物"意指提供治疗效果和/或有益效果的任何物质。此处所用的术语"药物"并不必要限于需要市场准入(MarketingApproval)的物质，而是还可以包括能够用于美容剂类(cosmetics)、营养制品、食物(包括例如饲料和饮料)、益生菌培养物和天然药物(naturalremedy)的物质。此外，在此处所用的术语"药物"包括设计用于纟参入动物祠料的产品，例如掺入牲畜饲料和/或宠物食品。治疗可以认识到，所有本文涉及的治疗(treatment)包括治愈性治疗、姑息治疗、预防性治疗。基本上纯的形式和/或分离形式(substantially)纯的形式或者可以是分离形式。术语"基本上纯的形式"用于指根据本发明的微生物和/或代谢物以高水平存在。当微生物和/或代谢物是基本上纯的形式时，所述微生物和/或代谢物理想地是组合物中存在的主要组分。优选地它是以高于30%、高于50%、高于75%、高于90%或者甚至高于95%的水平存在，所述水平是以干重/干重为基础相对于所研究的总组合物来测定的。在很高的水平(例如在高于90%、高于95%或高于99%的水平)时，可以认为所述组分是"分离的"。本发明的生物活性物质(包括多肽、核酸分子、通过筛选鉴定的/可鉴定的碳水化合物、通过篩选鉴定的/可鉴定的脂质、通过筛选鉴定的/可鉴定的部分(moieties)等)可以以基本上不含在其他情况下可能与该物质结合的(associatedwith)—种或多种污染物的形式来提供。因此，例如，他们可以基本上不含一种或多种潜在的污染多肽和/或核香酸分子。它们可以以基本上不含其它细胞组分(例如细胞膜的、细胞质的组分等)的形式来提供。当组合物基本上不含指定污染物时，所述污染物将在低水平(例如在如上所示的干重/干重勤出上低于10%、低于5%或者低于1%的水平)。微生物在本发明中所用的合适的活微生物包括细菌、霉菌和/或酵母。优选地在本发明中所用的合适的活微生物是活细菌。术语"活微生物，，意指有代谢活性的微生物。所述微生物可以是天然存在的微生物，或者其可以是经转化的微生物。所述微生物也可以是合适的微生物的组合。在一些方面，根据本发明的微生物可以是下述中的一种或多种细菌、真菌、酵母。合适地，根据本发明的微生物可以是细菌。合适地，根据本发明的微生物可以是来自下述菌属中的一种或多种的细菌乳3求菌属(丄actococcM力、链3求菌属(5^ep/ococcw力、片3求菌属(尸eii/ococcz^)、肠球菌属(￡>2feracocci)、明串玉朱菌属(丄ewccwoWoc)、肉杆菌属(Carwo6a"en.wm)、丙酸才干菌属(/Vo//om力a"en'wm)、双歧4干菌属和乳4干菌属。优选地，在一些实施方案中，根据本发明的微生物是益生微生物。合适地，所述益生微生物可以是来自以下菌属的细菌或酵母乳杆菌属菌种、链球菌属菌种、肠球菌属菌种、双歧杆菌属菌种和酵母属菌种。对于一些实施方案，根据本发明的微生物是乳酸细菌(lacticacidbacterium)。合适地，所述乳酸细菌可以是来自以下菌属中的一种乳杆菌属、链球菌属、乳球菌属、明串珠菌属、肉杆菌属、肠球菌属、短杆菌属(5rev/6(3"en'Mw)和漫游5求菌属(J^gococcw力。本列举并非穷举。对于一些实施方案，根据本发明的微生物是益生乳酸细菌。益生乳酸细菌可以是来自以下菌属中的一种乳杆菌属菌种、双歧杆菌属菌种、链球菌属菌种和肠球菌属菌种。根据本发明可以使用的其它细菌菌属包括片球菌属、微球菌属(M/crococcM力、葡萄球菌属(5Va//z3;/ococci^)、芽孢杆菌属(5flc/〃w)、库克氏菌属(《ocwn'a)、节杆菌属(^^ra6ac/w)、丙酸杆菌属、短杆菌属和棒杆菌属优选地，根据本发明使用的微生物是通常被认为是安全的微生物，并且优选GRAS认可的微生物。技术人员将会容易地知道来自此处描述的属内的微生物的特定种和/或菌林，其用于食品和/或农业工业并且通常被认为适于人和/或动物消耗(consumption)。优选地，根据本发明所使用的微生物是适于人和/或动物消耗的一种微生物。在一个实施方案中优选地所述微生物来自乳杆菌属或双歧杆菌属或是它们的混合。合适地，所述微生物可以是来自以下菌种的菌林嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌(丄.Maw"oms)、干酪乳杆菌(丄.ca化z')、类干酪乳杆菌(丄.；aracaseO、唾液乳杆菌、乳双歧杆菌、动物双》支杆菌CSa"/ma/^)、长双歧杆菌(5./o"gww)和/或双歧双歧杆菌OB.6析^/m)。在一个实施方案中，优选地所述微生物可以是来自以下菌种的菌抹嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌、唾液乳杆菌和/或乳双歧杆菌。在一个实施方案中优选地所述微生物来自乳杆菌属。合适地，所述微生物是来自以下菌种的菌林嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、类干酪乳杆菌和唾液乳杆菌。在一个实施方案中，优选地所述微生物可以是来自菌种嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌或唾液乳杆菌的菌4朱。在一个实施方案中优选地所述微生物来自链球菌属。在一个实施方案中优选地所述微生物来自肠球菌属。在一个实施方案中优选地所述微生物来自双歧杆菌属。合适地，所述微生物可以是来自菌种乳双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌或双歧双歧杆菌的菌抹。优选地所述微生物可以是来自菌种乳双歧杆菌的菌林，例如乳双歧杆菌420或乳双歧杆菌HN019的菌抹。对于一些实施方案所述微生物可以是多于一种益生微生物(优选地多于一种益生细菌)的混合物；多于一种乳酸细菌的混合物；或者一种或多种益生微生物(优选益生细菌)和一种或多种乳酸细菌的混合物。优选地，所述混合物可以包含来自乳杆菌属菌种和/或双歧杆菌属菌种的一种或多种菌抹。在一个实施方案中优选地所述微生物是乳杆菌属菌种中的至少一种菌林。在一个实施方案中优选地所述微生物是嗜酸乳杆菌的至少一种菌抹。在一个实施方案中优选地所述微生物是弯曲乳杆菌的至少一种菌林。在一个实施方案中优选地所述微生物是唾液乳杆菌的至少一种菌抹。根据本发明所使用的微生物，优选例如乳杆菌属菌种例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌，优选地是革兰氏阳性的菌抹。有利地，它可以是过氧化氢酶阴性菌抹，具有引起乳酸产生的同型发酵代谢。根据本发明所使用的微生物，优选例如乳杆菌属菌种例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌，也可以生产针对其它微生物有活性的细菌素，例如莴苣苦素(lactacin)。优选地，根据本发明所使用的微生物，优选例如乳杆菌属菌种例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌，在酸性pH条件下具有对胃蛋白酶的良好抗性，具有对胰酶制剂的良好抗性和/或对胆汁盐的良好耐受性。在一个实施方案中，根据本发明的微生物，优选例如乳杆菌属菌种例如嗜酸乳杆菌，可以是被描述为"疏水性，，的微生物，优选例如"疏水性，，的乳杆菌属菌种例如"疏水性"的嗜酸乳杆菌，即对极性或非极性疏水有机溶剂，例如正癸烷、氯仿、十六烷或二曱苯，具有强亲和力。根据本发明优选的嗜酸乳杆菌可以是嗜酸乳杆菌PTA-4797。这种嗜酸乳杆菌的菌4朱已经由RhodiaChimie，26，quaiAlphonseLeGallo，92512BOULOGNE-BILLANCOURTCedexFrance根据布达佩斯条约(BudapestTreaty)在美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureColleciton;ATCC)进行了登记，其以登录号PTA-4797记录在案。根据本发明所使用的嗜酸乳杆菌的菌抹可以是与其它乳酸细菌的混合物的形式。有可能适于本发明的乳酸细菌包括在农业、食品和药物工业中通常使用的任何乳酸细菌。有利地，当产品是食品(foodstuff)时，由所述微生物产生的活微生物和/或可溶性代谢物在正常的"最迟销售"日期或"产品有效"日期内应该保持有效，在这段时间内食物产品由零售商开价待售。优选地，有效期应该延长至这些日期之后，直到正常的质量保证期(freshnessperiod)结束当食物腐败开始变得明显时。期望的时间长度和正常的储藏期限在食品和食品之间是不同的，并且本
技术领域：
的普通技术人员将会认识到储藏期限将依赖于食品类型、食品大小、储藏温度、加工条件、包装材料和包装设备而不同。在一个实施方案中优选地所述微生物不是幽门螺杆菌(//e/ko6a"w基于CACO-2细胞的接触测定法(CACO陽2CELL-BASEDEXPOSUREASSAY)将人结肠直肠癌细胞系Caco-2保持在37。C和5%C02的Dulbecco，sMEM(BiochromAG)中，所述Dulbecco，sMEM中补充有20。/o胎牛血清(FBS,Gibco)、2mM稳定的谷氨酰胺(BiochromAG)和1X非必需氨基酸(BiochromAG)、20U.ml"青霉素(Gibco)、20ng-ml"链霉素(Gibco)和0.5吗'mr1两性霉素。当传代培养时，将所述细胞用lxPBS(Gibco)洗涤并用TrypleSelect(Gibco)分离。为了确定不同微生物和/或其代谢物对胃肠激素例如PYY的影响，根据5日实验方案在胶原涂布的Transwell插入式细胞培养皿(Transwellcellcultureinsert)(Coming)中接种6.6x105/cm2Caco-2细胞并使其分化(Yamashitaetal.2001,J.Pharm.Sci.91(3):669-679)。在接种于Transwell插入皿中之后，将Caco-2细胞在培养基中保持48小时，所述培养基由Dulbecco，sMEM(BiochromAG)、10。/o胎牛血清(FBS,Gibco)、2mM稳定的谷氨酰胺(BiochromAG)和1X非必需氨基酸组成，但不含抗生素。在48小时之后，将培养基用肠STIM培养基(Enterostimmedium)(BDBiosciences)交换，所述肠STIM培养基补充有根据制造商提供的方案添加的MITO+血清添加剂(serumextender)(BDBiosciences)。在接种于Transwell插入皿中之后的第四天，或在经上皮电阻(transpithelialelectricalresistance)已经增加到指示出细月包分化的水平之后，在实验中使用所述细胞。在所有的实验中既不使用抗生素也不使用血清。将代谢物和/或不同的微生物添加到插入皿的顶面(apicalside)上。在24小时接触之后，清除培养基，溶解插入亚内的细胞并用Qiagen(Germany)的RNeasyMiniKit提取RNA。将DNA用相同制造商的不含RNA酶的DNA酶消化。反转录用SuperscriptIII反转录酶(Invitrogen)根据制造商提供的说明书来实行。激素(例如PYY)表达模式可以通过下述方法来测定实时定量TaqManPCR(即相对定量方法-参见Holland"a/.,1991Proc.Natl.Acad.Sci.USAAug15;88(16):7276-80;和LivakandScmittgen，2001MethodsDec;25(4):402-8)，其4吏用ABIPrism7000SequenceDetectionInstrument(ABIPrism7000序列检测仪)(AppliedBiosystems)的默认设置；或绝对定量方法例如TaqManPCR(AppliedBiosystems)，其使用ABIPrism7000GeneticAnalyzer(ABIPrism7000遗传分析仪)的寡核苷酸设置和特异性识别所述激素(例如人PYY)的标准寡核苷酸。在上述测定中所使用的微生物悬液可以通过在合适的培养基上培养微生物来制备。可以离心培养物形成细胞沉淀，随后可以将所述细胞沉淀悬浮在合适的培养基中，例如DMEM。在上述测定中所使用的代谢物悬液可以通过在合适的培养基上培养微生物来制备。可以离心培养物和/或过滤(合适地无菌过滤)培养液来提供代谢物悬液。与未经过处理的对照相比引起对激素表达水平的修饰(例如PYY的增加)技术人员通过使用所述"基于Caco-2细胞的接触测定法"将能够容易地筛选益生微生物和非益生微生物，以鉴定在本文具体教导的微生物之外有能力产生所要求效果的特定微生物。与其它组分的组合因此，本发明还涉及组合(combination)。微生物和/或其代谢物在本文可能称为"本发明的组合物"。本发明的组合包含本发明的组合物和另一种组分，其适于动物或人消耗并且能够为消耗者提供医学上的或生理上的益处。本发明组合中的其它组分包括聚右旋糖(polydextrose)，例如Litesse，和/或麦芽糖糊精和/或乳糖醇(lactitol)。这些其它的组分可以任选地添加到所述组合物以辅助干燥过程和帮助微生物存活。其它合适组分的进一步的实例包括下述中的一种或多种增稠剂、胶凝剂、乳化剂、粘合剂、结晶改性剂、增甜剂(包括人工增甜剂)、流变改进剂、稳定剂、抗氧化剂、染料、酶、运载体(carrier)、媒介物(vehicle)、赋形剂、稀释剂、润滑剂、调味剂、着色剂、悬浮剂、分解剂、颗粒形成粘合剂(granulationbinder)等。这些其它的组分可以是天然的。这些其它的组分可以通过使用化学技术和/或酶技术来制备。在一个实施方案中所述微生物和/或其代谢物可以是胶嚢化的(encapsulated)。在一个优选的实施方案中在本发明中使用的微生物和/或其代谢物可以与一种或多种脂质组合使用。例如，在本发明中使用的微生物和/或其代谢物可以与一种或多种脂微胶粒组合使用。所述脂微胶粒可以是简单脂微胶粒或复杂脂微胶粒。所述脂微胶粒可以是两性物质定向分子胶体维度(colloidaldimension)的聚集物，所述聚集物与形成它的化学物类平衡存在于溶液中。微胶粒通常是带电荷的。在水溶液中微胶粒聚集物(cellularaggregate)的单个分子的方向是它们的极性基团指向水介质而它们的疏水部分指向微胶粒的中心。所述脂微胶粒可以包含脂质和/或油。因此在一个实施方案中本发明提供微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物与脂微胶粒的组合用于调节饱足感信号传导和/或用于治疗和/或预防过剩体重(或肥胖)和/或由过剩体重(或肥胖)引起的疾病的用途。此处所使用的术语"增稠剂或胶凝剂"指通过减緩或阻止粒子(particle)的运动来防止分离的产品，所述粒子为不混溶液体的小滴(dr叩let)、空气或不溶性固体。当单个的水合分子引起粘度的增加，减緩分离时，产生增稠。当所述水合分子连接形成俘获粒子从而将它们固定化的三维网络时，产生胶凝。此处使用的术语"稳定剂"定义为防止产品(例如食物产品)随时间发生变化的成分或成分的组合。此处使用的术语"乳化剂"指阻止乳剂分离的成分(例如食物产品成分)。乳剂是两种不混溶的物质，一种以小滴的形式存在，包含在另一种内。乳剂可以由水包油组成，其中小滴或分散相是油而连续相是水；或由油包水组成，其中水变为分散相而连续相是油。泡沫是液体包气体型(gas-in-liquid)，而悬液是液体包固体型(solid-in-liquid),它们也可以通过乳化剂的使用来稳定化。充气可以在三相系统中发生，在三相系统中空气通过液体油来捕获，然后通过附聚的脂肪结晶使其稳定，该附聚的脂肪结晶用乳化剂来稳定。乳化剂具乳化剂在;述两种物质的交界面t上被吸收，J供界面膜','、发挥使乳剂i定的作用。乳化剂的亲水/亲脂的性质受分子结构的影响。这些性质通过亲水/亲脂平衡(HLB)值来鉴定。低HLB值表示比较强的亲脂趋势，将其用于稳定油包水型乳剂。将高HLB值指定给亲水的乳化剂，通常在水包油型的乳剂中使用。这些值来源于筒单的体系。因为食品通常包含影响乳化性质的其它成分，所以HLB值并不总是乳化剂选择的可靠指导原则。此处使用的术语"粘合剂，，指通过物理或化学反应把产品结合到一起的成分(例如食物成分)。例如在"胶凝作用，，的过程中，水被吸收，提供了结合作用。但是，粘合剂可以吸收其它液体，例如油，并将他们保持在产品内。在本发明的上下文中粘合剂将通常用于固体或低水份产品中，例如焙烤产品焙烤面制食品(pastry)、炸面圈(doughnut)、面包和其它。此处使用的术语"结晶改性剂"指影响脂肪或水的结晶作用的成分(例如食物成分)。冰晶的稳定化之所以重要的原因有两个。第一个直接涉及到从分离立场来看的产品稳定性。产品遭遇越多的冻融循环，冰晶就变得越大。这些大的结晶可能会损坏产品结构，所述结构或者是天然存在的，如细胞壁的情况，或者是通过"兴奋(elation)，，产生的。因为水不再保持在适当的位置，产品在融化之后可能会显示脱水收缩，或漏液(weeping)。第二，在产品以冷冻形式被消耗的情况下，这些大的结晶导致不合需要的、含砂样的口感。"运载体"或"媒介物"意指适用于化合物施用的材料并包括在本
技术领域：
已知的任何像这样的材料例如，任何液体、凝胶、溶剂、液态稀释剂或增溶剂等，其是无毒的并且不与组合物中的任何组分以有害的方式相互作用。营养上可接受的运载体的实例包括，例如，水、盐溶液、醇、有机硅(silicone)、蜡类、石油膏(petroleumjelly)、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂质体、糖、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、表面活性剂、硅酸、粘稠的石蜡(viscousparaffin)、芳香油、脂肪酸甘油一酯和甘油二酯、petroethral脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。赋形剂的实例包括下述中的一种或多种微晶纤维素和其它纤维素、乳23糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、甘氨酸、淀粉、乳糖(milksuger)和高分子量聚乙二醇。分解剂的实例包括下述中的一种或多种淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧曱纤维素钠和某些复合硅酸盐。颗粒形成粘合剂的实例包括下述中的一种或多种聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基曱基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、麦芽糖、明胶和阿拉伯胶(acacia)。润滑剂的实例包括下述中的一种或多种硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酉旨(glycerylbehenate)和滑石。稀释剂的实例包括下述中的一种或多种水、乙醇、丙二醇和甘油，和它们的组合。所述其它组分可以同时地使用(例如当他们混合在一起时或者甚至当他们通过不同的途径递送时)或顺序地使用(例如当他们通过不同的途径递送时)。优选地，当本发明的组合物与任何其它组分混合时，所述微生物保持存活。此处使用的术语"适于动物或人消耗的组分"意指作为添加物添加至或能够添加至本发明的组合物的化合物，其可能具有营养价值，可能是纤维取代物或对消费者具有普遍的有益效果。所述成分可以用于各种各样的产品，该产品需要胶凝作用、组织化处理、稳定处理、悬浮处理、成膜处理和结构化处理(structuring),保持多汁，而不增加不必要的粘性。优选地，所述成分将能够改进活培养物的储藏期限和稳定性。所述组分可以是益生元(prebiotics)，例如藻酸盐、黄色素(xanthan)、果胶、槐树豆胶(locustbeangum;LBG)、菊粉(inulin)、瓜尔豆胶、半乳低聚糖(galacto-oligosaccharide;GOS)、果糖寡糖(fructo-oligosaccharide;FOS)、聚右旋糖(即Litesse⑧)、乳糖醇、乳蔗糖(lactosucrose)、大豆寡糖、帕拉金糖(palatinose)、异麦芽寡糖、葡糖寡糖和木糖寡糖。在本发明的组合中使用的组合物的最优量将依赖于将要处理的产品和/或将产品与组合物接触的方法和/或产品的预期用途。组合物中使用的活微生物的量应该是在改进包含所述组合物的食物产品的香气(aroma)、风味、温和感(mildness)、稠度(consistency)、质地、浓郁度(body)、口感、粘度、结构和/或感官特性、营养和/或健康益处方面有效并且足以保持有效性的足够量。有效性的这种时间长度应该延续到至少是利用该产品的时间。浓缩物在本发明中使用的组合物可以是浓缩物的形式。这些浓缩物通常包含基本上是高浓度的活微生物和/或其代谢物。微生物和/或其代谢物在此处可称为"本发明的组合物，，或"组合物"。浓缩物形式的粉剂、颗粒和液体组合物可以用水稀释，或在水或其它合适的稀释剂例如适当的生长培养基如乳或矿物油或植物油中再悬浮，以提供即用型纟且合净勿(compositionreadyforuse)。浓缩物形式的本发明的组合可以根据本
技术领域：
中已知的方法来制备。在本发明的一个方面中用浓缩形式的组合物接触产品。优选地，用喷雾干燥的和/或再悬浮的组合物来接触产品。本发明的组合物可以通过本
技术领域：
已知的方法来喷雾干燥或冷冻干燥。体材料(例如在发酵培养基中的微生物培养物)。可选地，所述材料可以在非溶剂中悬浮或乳化以形成悬液或乳剂。其它成分(如上所述)或组分例如抗微生物剂、稳定剂、染料和有助于干燥过程的作用物可以任选地在本阶段添加。然后将所述溶液喷成雾状以形成小滴的轻雾。所述小滴立即进入干燥室，在干燥室内他们接触干燥气体。溶剂从小滴中蒸发出来进入干燥气体以固化所述小滴，从而形成颗粒。然后将所述颗粒从干燥气体中分离并收集。产品受益于所述组合物的任何产品都可以在本发明中使用。这些产品包括但不限于水果蜜饯和乳制品和乳制品衍生的产品，美容的和药物的产品。所述微生物和/或其代谢物在此处可称为"本发明的组合物"或"组合物"。作为实例，本发明的组合物可以用作下述产品的成分软性饮料、果汁或包含乳清蛋白的饮料、保健茶(healthteas)、可可饮料、乳饮料和乳酸菌饮料、酸奶和饮用酸奶、干酪(cheese)、水洪淋、水冰(waterice)和甜品、糖果(confectionary)、々并干蛋糕、(biscuitscakes)和制蛋粽、用混合泮牛(cakemix)、点心、平衡食品和饮料(balancedfoodsanddrinks)、水果馅、保健釉(careglaze)、巧克力焙烤馅(chocolatebakeryfilling)、乳酪蛋糕调味馅(cheesecakeflavouredfilling)、果味蛋糕馅(fruitflavouredcakefilling),蛋糕和炸面圈糖衣(cakeanddoughnuticing)、即食型焙烤用夹心用稀奶油(instantbakeryfillingcreams)、用于曲奇饼干的馅(fillingsforcookies)、即用型焙烤馅(ready-to-usebakeryfilling)、低热量馅(reducedcaloriefilling)、成人营养饮料(adultnutritionalbeverage)、酸化的大豆/果汁饮料(acidifiedsoy/juicebeverage)、无菌的/杀菌的巧克力々大泮+(aseptic/retortedchocolatedrink)、p巴'混合物(barmixes)、々欠津牛4分、钩强4b大豆/普通和巧克力乳(calciumfortifiedsoy/plainandchocolatemilk)、钩强4匕咖啡々大冲牛(calciumfortifiedcoffeebeverage)。所述组合物可以进一步用作食物产品中的成分，例如美式软干酪酱(Americancheesesauce)、用于干酪碎和干酪丝的^t结块剂(anti-cakingagentforgrated&shreddedcheese)、薄片食品蘸料(chipdip)、稀奶油干酷(creamcheese)、干式混合搅打发泡的糕点表面装饰用无脂肪酸性稀奶油(dryblendedwhiptoppingfatfreesourcream)、冻融乳制品〗觉打发泡稀奶油(freeze/thawdairywhippingcream)、冻融穂'定性搅打发泡顶端附加物(freeze/thawstablewhippedtipping)、j氐月旨清淡天然切达干酪(lowfatandlightnaturalcheddarcheese)、寸氐脂瑞士风才各酸奶(lowfatSwissstyleyoghurt)、充气冷冻甜品(aeratedfrozendesserts)、硬包装冰淇淋(hardpackicecream)、标签友好经济性改进和嗜好的硬包装水洪淋(labelfriendly,improvedeconomics&indulgenceofhardpackicecream)、低脂水淇淋软性食品(softserve)、烤肉酱(barbecuesauce)、干酪浸渍酱(cheesedipsauce)、生干酪调味料(cottagecheesedressing)、干混合Alfredo酱(drymixAlfredosauce)、混合干赂酱(mixcheesesauce)、番痴酱干粉(drymixtomatosauce)等等。对于某些方面来说，优选地本发明可以与酸奶产品组合使用，所述酸奶产品例如发酵型酸奶饮料(fermentedyoghurtdrink)、酸奶、饮用酸奶、干酪、发酵型奶油、基于乳的甜品(milkbaseddesserts)等等。合适地，所述组合物可以进一步用作下述中一种或多种的成分干酪应用(cheeseapplications)、肉应用(meatapplications),或包含4呆护'l"生i咅养物的应用(applicationscomprisingprotectivecultures).本发明还提供制备食物或食物成分的方法，该方法包括将本发明的组合物与另外的食物成分混合。有利地，本发明涉及已经与本发明的组合接触的产品，其中以能够改进所述产品的营养和/或健康益处的量使用所述组合物。此处使用的术语"接触"指向产品间接或直接施用本发明的组合物。可以使用的施用方法的实例，包括但不限于，在包含组合物的材料中处理产品，通过将组合物与产品混合的直接施用，喷涂组合物到产品表面上或将产品浸渍于组合物的制备物中。当本发明的产品是食品时，优选将本发明的组合物与所述产品混合。可选择地，可将所述组合物包括在所述食品的乳剂或原料中。在进一步的选择中，所述组合物可以作为调味品、釉料(glaze)、着色剂混合物(colorantmixture)等应用。对于一些应用，重要的是使所述组合物在要受影响/处理的产品表面上可用或使其对于要受影响/处理的产品表面是可用的。这使得所述组合物能够赋予下述有利特征中的一个或多个营养和/或健康益处。本发明的组合物可以应用于使用受控量的活微生物来点缀(intersperse)、涂覆(coat)和/或'/曼透(impregnate)产f口。食物本发明的组合物可以用作食物，或在食物的制备中使用。这里，术语"食物"以广义使用——包括用于人类的食物以及用于动物的食物(即饲料)。在优选的方面中，所述食物用于人类消耗。所述食物可以是以溶液的形式或作为固体——依赖于用途和/或应用的方式和/或施用的方式。当用作食物——或在食物的制备中使用时，例如用作功能性食物或在功能性食物的制备中使用，本发明的组合物可以与下述中的一种或多种组合使用在营养上可接受的运载体、在营养上可接受的稀释剂、在营养上可接受的赋形剂、在营养上可接受的佐剂、有营养活性的成分。优选地，将所述组合物用于发酵乳或蔗糖强化乳或具有蔗糖和/或麦芽糖的乳介质(lacticmedia),其中可以将包含所述组合物全部组分——即根据本发明的所述孩i生物——的所得介质作为成分以合适浓度添加到酸奶(yoghurtmilk)中——例如以在最终产品中提供106-101Qcfb的每日剂量的浓度。根据本发明的^L生物可以在酸奶的发酵之前或之后使用。对于一些方面来说，将根据本发明的微生物用作动物饲料，或在动物饲料的制备中使用，所述动物饲料例如牲畜饲料，特别是家禽(例如鸡)饲料，或宠物食品。食物成分本发明的组合物可以用作食物成分和/或饲料成分。如此处所用的术语"食物成分"或"饲料成分"包括作为营养补充剂添加到或能够作为营养补充剂添加到功能性食品或食物(flmctionalfoodorfoodstuff)的成分(formulation)。所述食物成分可以是以溶液的形式或作为固体——依赖于用途和/或应用的方式和/或施用的方式。食品补充剂本发明的组合物可以是——或可以添加到——食品补充剂。功能性食品本发明的组合物可以是——或可以添加到——功能性食品。如此处所使用，术语"功能性食品"意指不但能够提供营养效果，而且能够递送进一步的有益效果给消费者的食品。因此，功能性食品是普通的食品，其具有混合到它们中的某些组分或成分(例如此处所描述的那些)，这些组分或成分向食品赋予特定功能——例如医学或生理学益处——而不只是纯营养效果。尽管没有功能性食品的法律定义，对本领域感兴趣的大多数参与者认为功能性食品是作为除基本的营养效果外还具有特定健康效果的在市场销售的食品。一些功能性食品是营养制品(nutraceutical)。这里，术语"营养制品"意指不但能够提供营养效果和/或味觉满足，而且能够向消费者传递治疗(或其它有益的)效果的食品。营养制品超越了在食品和药物之间的传统分界线。调查已经显示消费者最关注涉及到心脏病的功能性食品需要。预防癌症是消费者大有兴趣的另一个方面的营养作用，但是有趣的是消费者觉得这是他们能施加最小影响的领域。事实上，根据世界卫生组织，至少35%的癌症病例与饮食有关。此外，涉及骨质疏松、肠道健康和肥胖影响的要求也是有可能刺激功能性食品的购买和推进市场发展的关键因素。益生菌菌培养物(probioticculture)作用。向本发明的组合物添加另外的益生菌和/或益生元也在本发明的范围内。这里，益生元是"不可消化的食品组分，其通过选择性地刺激一种或少数几种有益细菌的生长和/或活性对宿主产生有益影响"。此处使用的术语"益生菌培养物"定义为活的微生物(包括例如细菌或酵母)，当例如以足够的量摄取或局部应用时，所述微生物对宿主生物产生有益影响，即通过将一种或多种可证实的健康益处赋予宿主生物而对宿主生物产生有益影响。益生菌可以改进在一种或多种粘膜表面的微生物平衡。例如，所述粘膜表面可以是肠、泌尿道、呼吸道或皮肤。此处使用的术语"益生菌，，还包括活的微生物，其能够激发免疫系统的有益分支并同时减少在粘膜表面例如肠道的炎性反应。同时对于益生菌摄取量来说没有上限或下限，已经显示将至少106-1012，优选地至少106-101Q,优选108-10、&作为每日剂量将有效地实现在宿主微生物，例如人体内的有益健康效果。除了益生菌的效果，根据本发明的微生物可以具有益生元，根据本发明的微生物提供益生元也包括在本发明的范围内，所述益生元作为其它化合物同组合物一起包含在组合内。此处可将根据本发明的微生物和/或其代谢物称发酵緩慢。这些益生元能够对肠道菌群发挥积极的影响，具体而言是在结肠的左侧中，其是特别易于患上病症的区域，特别是肠癌和溃疡性结肠炎。益生元通常是不可消化的糖类(寡糖或多糖)或糖醇，其在上消化道内没有被分解或吸收。用于商业产品并且依照本发明可以使用的已知益生元包括菊粉(果糖寡糖，或FOS)和转半乳寡糖(transgalacto-oligosaccharides)(GOS或TOS)。其它适合的益生元包括帕拉金糖寡糖(palatinoseoligosaccharide)、大豆29寡糖、龙胆寡糖(gentiooligosaccharide)、木糖寡聚物(xylooligomers)、不可降解的淀粉、乳蔗糖(lactosaccharose)、乳酮糖、乳糖醇、麦芽糖醇、聚右旋糖(即Litesse⑧)或类4以物。在一个实施方案中本发明涉及根据本发明的微生物和/或其代谢物与益生元的组合。在这种组合中使用的益生元可以是下述中的一种或多种菊粉(果糖寡糖，或FOS)和转半乳寡糖(GOS或TOS)。其它适合的益生元包括帕拉金糖寡糖、大豆寡糖、龙胆寡糖、木糖寡聚物、不可降解的淀粉、乳蔗糖、乳酮糖、乳糖醇、麦芽糖醇、聚右旋糖(即Litesse⑧)或乳糖醇。合在一起，或者通过相同或不同的途径同时递送)，或者顺续施用(例如通过相同或不同的途径)。中的用途，所述药物用于诱发饱足感和/或治疗或预防过剩体重或肥胖。合生元(SYNBIOTICS)本发明还预期将益生元和益生菌二者与本发明的组合物一起用作组合中的成分，当它们组合时，便成为合生元。此处可将根据本发明的微生物和/或其代谢物称为"组合物"。此举的目的是将新的有益细菌的作用和身体自身有益细菌的刺激作用结合。这些混合物的开发和消费具有很大的潜力，因为它们中的一些可以^艮好地显示强效的协同营养作用和/或健康作用。因而本发明的组合物可以特别设计为包含不同的组分，其能够向消费者提供合生元效果。药物(PHARMACEUTICAL)本发明的组合物可以用作药物或在药物的制备中使用。这里，术语"药物"以广义使用——而且包含用于人的药物以及用于动物的药物(即兽医应用)。在优选的方面中，所述药物是用于人用和/或用于畜牧业。所述药物可以用于治疗目的——其本质上可以是治愈性或姑息性或预防性的。所述药物甚至可以用于诊断目的。当用作药物或在药物的制备中使用时，本发明的组合物可以与下述中的一种或多种组合使用可药用运载体、可药用稀释剂、可药用赋形剂、可药用佐剂、药用活性成分。所述药物可以是以溶液的形式或作为固体——依赖于用途和/或应用的方式和/或施用的方式。药物成分本发明的微生物可以用作药物成分。这里，所述组合物可以是单一的活性组分或者所述组合物可以是多种(两种或更多种)活性组分中的至少一种。所述药物成分可以是以溶液的形式或作为固体——依赖于用途和/或应用的方式和/或施用的方式。形式本发明的微生物和/或其代谢物可以以任何合适的形式来使用——不管是单独使用时还是与其它组分或成分以组合存在时。此处可将本发明的微生物和/或其代谢物称为"组合物"。同样地，包含本发明组合物和其它组分和/或其它成分(即成分——例如食物成分、功能性食物成分或药物成分)的组合可以以任何合适的形式来使用。本发明的微生物可以以固体或液体制备物的形式或其替代的形式来使用。固体制备物的实例包括，但不限于，片剂、胶嚢、粉剂(dust)、颗粒和散剂(powder)，其可以是可湿的、喷雾干燥的或冷冻干燥的。液体制备物的实例包括，但不限于，含水溶液、有机溶液或含水-有机溶液、悬液和乳剂。形式的合适实例包括下述中的一种或多种片剂、丸剂、胶嚢、小卵(ovule)、溶液或悬液，其可以包含调味剂或着色剂，用于立即释放、迟延释放、改进释放、持续释放、脉冲释放或受控释放应用。作为实例，如果本发明的组合物以片剂的形式使用——例如用作功能性成分——所述片剂也可以包含下述中的一种或多种赋形剂如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钩、磷酸氬钓和甘氨酸；分解剂如淀粉(优选地玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧曱纤维素钠和某些复合硅酸盐；颗粒形成粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基曱基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶；也可以包括润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石。营养上可接受用于制备所述形式的运载体的实例包括，例如，水、盐溶液、醇、有机硅、蜡类、石油膏、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂质体、糖、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、表面活性剂、硅酸、粘稠的石蜡、芳香油、脂肪酸甘油一酯和甘油二酯、petroethral脂肪酸酯、羟曱基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。优选用于所述形式的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖(milksugar)或高分子量聚乙二醇。对于含水悬液和/或酏剂，本发明的组合物可以与各种各样的甜^^未剂或调味剂、色素或染料组合，可以与乳化剂和/或悬浮剂组合，并且可以与稀释剂例如水、丙二醇和丙三醇组合，以及可以与它们的组合进行组合。所述形式也可以包括明胶胶嚢；纤维胶嚢、纤维片剂等；或甚至纤维饮料。形式的进一步实例是例如以乳膏(cream)的形式。对于一些方面，可以将微生物和/或其代谢物包括在药物乳膏和/或化妆用乳膏例如防晒乳膏(suncream)和/或晒后乳膏(after-suncream)中。在一个方面中，根据本发明的组合物可以以气溶胶形式施用，例如经由鼻腔喷雾的方式，例如用于施用于呼吸道。实施例本发明现在将仅通过实施例来描述，在实施例中以下所述图可以用来作参考图1显示在用嗜酸乳杆菌所处理的Caco-2细胞中肽YY(PYY)的基因表达模式。数据相对于RNA量进行了标准化。倍数差异如LivakandSchmittgen,2001中来计算；图2显示用嗜酸乳杆菌调节的培养基对Caco-2细胞中PYY表达的影响；图3显示在与具有益生菌性质的不同微生物接触之后PYY的基因表达；图4显示嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞；简单脂纟敖胶粒和它们的组合对分化的Caco-2细胞中PYY表达的影响；图5显示嗜酸乳杆菌代谢物；复杂脂微胶粒和它们的组合对分化的caco-2细胞中PYY表达的影响；和图6显示嗜酸乳杆菌NCFM不含细胞的上清液和细菌对PYY表达的影响；和图7显示弯曲乳杆菌853对PYY表达的影响。实施例1分析在用嗜酸乳杆菌处理的Caco-2中肽YY(PYY)的基因表达模式方法将人结肠癌细胞系Caco-2在半多孔的插入式细胞培养皿上培养并根据5曰分化实验方案来分化，使用由肠STIM培养基组成的分化培养基(DM)，所述培养基补充有MITO+血清添加剂，并且不含抗生素。使用TER测量法和碱性磷酸酶活性测量法来监控分化。将嗜酸乳杆菌(菌抹PTA4W7)细菌在补充有1%(重量/体积)葡萄糖的MRS液体培养基上培养，直到OD細达到0.6-0.7。把嗜酸乳杆菌处理添加到插入式细胞培养皿的顶面，并温育24小时。根据由RNeasyminikit(RNeasy小型试剂盒)(Qiagen)所提供的实验方案，将RNA从细胞中分离，并使用SuperscriptIII逆转录酶(Invitrogen)合成cDNA。可以使用具有ABIPrism7000GeneticAnalyzer(ABIPrism7000遗传分析4义)的SYBRGreen(AppliedBiosystems)，使用对人肽YY具有特异性的引物来监控基因表达模式。正向引物是5'GGAGGCCTCAGCTTGACC3，和反向引物5'TGCGCACGAACACCATAG3，。将所获得的阈循环(Ct)用Livak等(2001)的方法转化为相对表达值，所述阈循环(Ct)是荧光强度跨过背景阈值的PCR循环。作为对照，将Caco-2细胞类似地培养在未用嗜酸乳杆菌处理的插入式细胞培养皿上。结果来自碱性磷酸酶活性测量法以及TER测量法的结果表明细胞分化良好(数据未显示)。基因表达分析显示饱足感标志物肽YY(PYY)的表达。当与对照样本相比时，当Caco-2细胞用嗜酸乳杆菌处理时，肽YY(PYY)的表达增加了255%(pO.05,AN0VA)(图1)。嗜酸乳杆菌处理的Caco-2细胞增加了饱足感标志物肽YY(PYY)的表达。结果表明消耗嗜酸乳杆菌能够通过增加肠内的饱足感信号传导来增加食后饱足感。实施例2用葡萄糖模拟膳食的体外实验用分化的Caco-2细胞的实验。用嗜酸乳杆菌调节的培养液在用不同量的葡萄糖处理的细胞中的作用将Caco-2细胞在半多孔的插入式细胞培养皿上培养并根据5日分化实验方案来分化，使用由肠STIM培养基组成的分化培养基(DM),该培养基补充有MITO+血清添加剂，并且不含抗生素。使用TER测量法和碱性磷酸酶活性测量法来监控分化。在实验的第四天，将插入式培养亚两面上的培养基均用不含葡萄糖的培养基交换，并使细胞对葡萄糖饥饿24小时。Caco-2细胞的处理由对照细胞和试验细胞组成，所述对照细胞在顶面上用包含0.5mM和5mM葡萄糖的培养基来处理，所述试验细胞在顶面上用包含0.5mM和5mM葡萄糖的培养基和共同添加的嗜酸乳杆菌处理来处理。此外，还包括在顶面上未添加任何包含葡萄糖的培养基的对照Caco-2细胞。在所有孔中，在基面(basalside)上添加5mM葡萄糖。将细胞在37。C,5%C02温育24小时。将嗜酸乳杆菌细菌在不含糖的MRS液体培养基中培养，直到OD,达到0.6-0.7。'将细胞离心并将培养液无菌过滤并在试验培养基中使用。根据由RNeasy小型试剂盒(Qiagen)所提供的实验方案，将RNA从Caco2细胞中分离，并使用SuperscriptIII逆转录酶(Invitrogen)合成cDNA。使用具有ABIPrism7000GeneticAnalyzer的TaqMan探针化学法(AppliedBiosystems)，使用特异性识别人PYY的寡核苷酸集来监控PYY的基因表达模式。所述寡核香酸包括正向引物5'GGAGGCCTCAGCTTGACC3'，反向引物5'TGCGCACGAACACCATAG3',和探针UniversalProbeLibrary(通用探针文库)探针#10(Roche)。获得的阈循环(Ct)是荧光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环用标准曲线转化为绝对定量值(absolutequantitativevalue),该标准曲线来自表示目标转录物反义序列的定量合成寡核苷酸，其显示拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(NurmiWa/.,2005Nutrition&Cancer51(1):83-92.)。该标准寡核香酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3，。结果来自碱性磷酸酶活性测量法以及TER测量法的结果表明细胞分化良好(数据未显示)。结果显示在图2中。与具有相似葡萄糖量的各自的对照相比，嗜酸乳杆菌培养液的添加使包含0.5mM葡萄糖的样本中PYY的表达增加到1.3倍(p0.05，ANOVA)，并使包含5mM葡萄糖的样本中PYY的表达增加到2倍(p0.05)。与具有相似葡萄糖值的各自的对照细胞相比，嗜酸乳杆菌和Caco2细胞的共培养使包含0.5mM葡萄糖的样本中PYY的表达增加到1.7倍，并且使包含5mM葡萄糖的样本中PYY的表达增加到2倍。实施例3使用其它益生菌的体外实验将Caco-2在半多孔的插入式细胞培养皿上培养并根据5日分化实验方案来分化，使用由肠STIM培养基组成的分化培养基(DM)，该培养基补充有MITO+血清添加剂，并且不含抗生素。使用TER测量法和碱性磷酸酶活性测量法来监控分化。Caco-2细胞的处理由对照细胞和试验细胞组成，将所述对照细胞用Caco-2培养基来处理，并且将所述试验细胞用在Caco-2培养基中的益生菌培养液来处理。此外，还包括添加了在Caco-2培养基中稀释的MRS液体培养基的对照Caco-2细胞。将细胞在37。C,5%(302温育24小时。在补充有1%(重量/体积)葡萄糖的MRS液体培养基中培养益生细菌，直到OD綱达到0.6-0.7。将细胞离心，再将培养液无菌过滤并在试-验培养基中使用。试验的益生菌林包括以下商品化的菌抹乳双歧杆菌420(来自Danisco)、乳双歧杆菌HN019(商品名HowaruBifido—DaniscoA/S)和唾液乳杆菌Ls-33(来自Danisco)。根据由RNeasy小型试剂盒(Qiagen)所提供的实验方案，从Caco2细胞中分离RNA,并使用SuperscriptIII逆转录酶(Invitrogen)合成cDNA。使用具有ABIPrism7000GeneticAnalyzer的TaqMan探针化学法(AppliedBiosystems)，使用特异性识别人PYY的探针集来监控PYY的基因表达模式。所述寡核香酸包括正向引物5'GGAGGCCTCAGCTTGACC3'，反向引物5'TGCGCACGAACACCATAG3'，和探针UniversalProbeLibrary探针#10(Roche)。获得的阈循环(Ct)是焚光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环用标准曲线转化为绝对定量值，该标准曲线来自表示目标转录物反义序列的定量合成寡核苦酸，表示在拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(Nurmie/a/.,2005Nutrition&Cancer51(1):83-92.)。该标准寡核苦酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3，。结果结果显示在图3中。与对照相比，乳双歧杆菌420和乳双歧杆菌HN019的添加使PYY的表达分别增加76%和68%。与对照相比，唾液乳杆菌33的处理使PYY的表达增加67%。因此，嗜酸乳杆菌以外的其它细菌可能具有相同的饱足感诱发效果。实施例4大鼠血液中饱足感信号传导的测量在本研究中，将大鼠用作人的模型，尽管存在一些生理上的不同。与在人胃中不同，大鼠胃的近心端几乎没有胃液，致使细菌能够存活并在该处将食物发酵。这可以引起人和大鼠之间在饱足感方面的不同。因此，将对使用下述实验方案获得的大鼠血浆进行分析，分析由胃产生的神经内分泌信号(胃饥饿素、瘦蛋白)、由肠产生的神经内分泌信号(CCK、GLP-1、PYY、食欲素)或血液循环中的代谢物(乙酸、葡萄糖)，和在它们的激素应答(胰岛素)。胃肠道含有丰富的内分泌细胞和神经元细胞，这些细胞响应于与膳食摄取相关的腔内刺激物而合成并分泌增加饱足感的肽、缩胆嚢素(CCK)和肽YY(PYY)。CCK迅速地抑制食物摄取，并且抑制的持续时间相对短暂。还已知由肠道微生物所产生的短链脂肪酸可以诱导诱发饱足感的胃肠激素PYY。益生菌也可以引起刺激食欲的肽胃饥饿素和食欲肽的减少。它们的血浆浓度在餐前达到峰值并在餐后迅速降低。因此，注意力将集中在增加饱足感的肽CCK和PYY的血浆水平，以及刺激食欲的肽胃饥饿素或食欲肽的血浆水平，这些水平作为在补充益生菌之后控制短期食物摄取的指示物。此外，将会分析乙酸的血浆水平以观察血浆中发酵产物的水平。将在实验开始时称重为248g(STDEV12.1g)的雄性Wistar大鼠(HsdRddHan:WIST)在21。C以12小时的光照/黑暗循环圈养，并可随意地自由获取自来水。在环境适应期间(14天)，颠倒正常循环，并且训练老鼠在从上午8点钟黑暗循环开始起的5小时内消耗掉所有它们的食物(20g/天)。使用的FormulabDiet5008是高能量、高蛋白饮食并且它包含可消化的碳水化合物49,55(Digestiblecarbohydrates49，55)和纤维。将大鼠随机分配成两个各有20只动物的处理组和一个有5只大鼠的组。在上午8点钟在进食前将后一组麻醉以提供空腹血液样本。剩余的组是Bifido420(I()IO)、NCFM(1010)、NCFM(1010)+乳糖醇(2g)、仅乳糖醇(2g)和对照组。包括乳糖醇的原因是已知其增加食后的循环PYY水平。全部试验项目均置于无菌水中以小管喂养来施用，以每只动物2.5ml无菌水的体积。在相同的条件下，将没有任何补充的无菌水给予对照组。在定量给料(dose)之后给予动物标准食物。将每个试验组分为五个亚组，并将每个亚组轮流麻醉，以便在黑暗循环开始之后的1、5、10和24小时进行血液取样。将大鼠用二氧化碳来麻醉以便通过心脏穿刺来进行血液取样。将根据Gee和Johnson(2005)由血浆分析PYY浓度。可以分析的其它激素包括根据Deaconetal(2002)Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.282:E873-E879用放射免疫测定法(RIAs)分析的GLP-1，用RIA分析的胃饥饿素，根据Paloheimo和Rehfeld(1995)分析的CCK,根据Heinonen等(2005)分析的食欲肽，和通过HPLC分析的乙酸。通过心脏穿刺将所有血液样本取入EDTA试管。将所述样本在4。C以1,600xg离心15分钟。去除血浆级分并转移到新鲜试管中并在分析之前贮藏在-70。C。监控餐内食物摄取的试验使用如上文所描述的雄性Wistar大鼠。每组(对照和试验饮食喂养的大鼠的组)使用十只大鼠。所述大鼠首先对本试验有十天的环境适应，在那之后试验开始并持续十天。将大鼠分为五组，一个对照组和四个试验组。在所有组中用对照饮食随意地喂养大鼠。对照组每天一次以强饲法接受生理盐水，而试验组每天一次以强饲法接受108和101()的量的嗜酸乳杆菌。优选在黑暗循环期间喂养大鼠。在每个黑暗循环之后监控每只大鼠的食物摄取和体重增加。初步的研究表明在大鼠的食物中添加微生物，特别是益生菌林可以减少这些大鼠的食物摄取。临床试验关于人的食后饱足感信号传导的研究用15-20名自愿者(人受试者)来实施试点研究。所述受试者是他们自身的对照(用对照饮品或试验々欠品进行的两个单独的试验)。受试者优选人数相等的中年健康男性和女性(体重指数BMI大约为25)。使受试者经受禁食过夜(overnight-fasting)。然后，给予他们试验饮品(包含一种或多种在本发明说明书中公开的感兴趣的菌林)，和对照饮品(不含所述感兴趣的菌林)。之后，在0、2和5小时取静脉血样本。所述受试者需要填写调查问巻，以叙述他们在已经食用完试验饮品或对照々欠品之后具有的饥饿的感觉和饱足的感觉。平行地，从血浆测量PYY的浓度(PeninsulaLaboratories,SanCarlos,CA，USA)。实施例5使用分化的Caco-2细胞的实验。用嗜酸乳杆菌调节的培养液在用脂质处理的细^^中的作用本实验用脂肪酸模拟膳食来实施使用根据5日实验方案分化的Caco-2细胞来进行本实验(Yamashita,S.,Konishi,K.,Yamazaki，Y.,Taki,Y.,Sakane,T.,Sezaki，H.&Furuyama，Y,(2002)/尸/zwm91,669-79)。将所述细胞分化至经上皮电阻(TEER)超过200ohmxcm2。复杂脂微胶粒根据(Chateau,D.，Pauquai，T.,Delers，F.,Rousset,M.,Chambaz,J.&Demignot,S.(2005)Ce〃尸/^/。/202，767-776)制备，具有或不具有10%嗜酸乳杆菌NCFM代谢物。将所述Caco-2细胞用脂微胶粒处理3个小时，在处理完之后测量来自所述细胞的PYY表达。材料和方法将Caco-2细胞(HTB-37,美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection),ATCC)在基础培养基中并在潮湿的5%C02的大气中在37°C培养，该基础培养基由以下成分组成补充有20%FBS(Invitrogen)的Dulbecco，sModifiedEagle'sMedium(Dulbecco改进的Eagle;咅养基)(DMEM，InvitrogenCarlsbad,CA,US)、2mM稳定谷氨酰胺(Invitrogen)、1x非必需氨基酸(Irwitrogen)、20U/ml青霉素(Invitrogen)、20|ig/ml链霉素(Invitrogen)，禾口0.5pg/ml两小生霉素(Invitrogen)。使用第26代传代的Caco-2细胞并以6.6x105个细胞/cm2涂布在12孔插入式细胞培养皿(BIOCOATHTS,BDBiosciences,LePontdeClaix，France)上，并根据5日实验方案进行分化(Yamashita,S.，Konishi，K.，Yamazaki,Y.,Taki:Y,,Sakane，T.,Sezaki，H.&Furuyama，Y.(2002)J尸/wrm91，669-79)。简而言之，在涂布之后，将所述细胞在不含抗生素的基础培养基中在潮湿的5%C02的大气中在37°C温育过夜，其后将培养基吸出并用分化培养基(肠STIM,BDBiosciences)置换，该分化培养基补充有MITO+血清添加剂(BDBiosciences)250|il/250ml培养基。在培养的第4天，置换培养基，并在培养的第5天进行使用脂微胶粒的实验。将嗜酸乳杆菌NCFM(来自DaniscoCultures,Paris,France)在补充有1.0%(重量/体积)葡萄糖的Man,RogosaandSharpe(MRS)液体培养基中在37。C厌氧条件下培养到OD600达到0.6-0.7。细菌细胞密度用流式细胞仪(FACSCalibur，BectonDickinson,SanJose,CA,US)来测定，如先前所描述(Apajalahti，J.H.，Kettunen,H.,Kettunen，A.，Holben,W.E.,Nurminen，P.H.,Rautonen,N.&Mutanen,M.(2002)J;//.￡"Wra".Mifcra6/o/.68,4986-4995)。无细胞上清液通过离心(25。C,5分钟，3000g)来收集并将上清液移除。将嗜酸乳杆菌NCFM无细胞上清液(在下文中称为嗜酸乳杆菌NCFM代谢物)以及MRS对照在分化培养基中稀释为10%(体积/体积)并将复杂脂微胶粒制备成合成medium)(参见下文)。将所述复杂脂微胶粒在分化培养基中制备到24mM牛磺胆酸盐中(Sigma:StLouis,MO,USA)。所使复杂微胶粒的成分是0.6mM油酸-2mM牛磺胆酸盐—0.2mM2-单油酰甘油(2画mono-oleylglycero1)—0.05mM胆固醇-0.2mM磷酸卵^畴酯。通过在无菌玻璃试管中将油酸(6pl的100mlVH诸液)与其它脂质(2!il)混合来制备一毫升的微胶粒。将脂质在氮气环境在室温下干燥，并将残余物溶解在83|il的分化培养基中的24mM牛磺胆酸盐中，并通过单纯的分化培养基，或通过由10。/。(体积/体积)MRS组成的分化培养基，或通过由10%(体积/体积)嗜酸乳杆菌NCFM代谢物组成的分化培养基，将体积补足为1ml。将脂微胶粒在Caco-2分化的第五天施用在细胞的顶面上，并使之与所述细胞反应3小时。使用10%(体积/体积)MRS和不含嗜酸乳杆菌NCFM代谢物的复杂脂微胶粒作为对照。将他们制备成分化培养基。在处理之后将细胞培养基吸出并将细胞使用补充有1%p-巯基乙醇(Sigma)的150jilRA1(Macherey画Nagel，Dtiren,Germany)溶解。根据由制造商(Macherey-Nagel)提供的说明书，用Nucleospin96RNA分离试剂盒从细胞溶解产物收集RNA。根据由制造商(Invitrogen)提供的说明书，利用SuperscriptIII使用随机引物进行第一链cDNA的合成。使用ABIPRISMSequenceDetectionSystem(ABIPRISM序列才全测系统)(AppliedBiosystems，FosterCity,CA，USA)，使用特异性检测人PYY的寡核苷酸来分析在样本中的PYY表达模式。所述寡核苷酸包括正向引物5'GGAGGCCTCAGCTTGACC3，；反向引物5'TGCGCACGAACACCATAG3，；和探针UniversalProbeLibrary探针#10(Roche)。获得的阈循环(Ct)是荧光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环通过使用标准曲线转化为绝对定量值，该标准曲线来自代表目标转录物的反义序列的定量合成的寡核苷酸，显示拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(Nurmi""/"2005Nutrition&Cancer51(1):83-92.)。该标准寡核苷酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3，。统计分析使用斯氏t检验来完成。40结果结果显示在图5中。当仅用嗜酸乳杆菌NCFM代谢物或与复杂脂微胶粒组合的嗜酸乳杆菌NCFM代谢物处理Caco-2细胞时，饱足感标志物肽YY(PYY)的表达增加。在使用复杂脂微胶粒(由0.6mM油酸、2mM2-单油酰甘油、0.2mM胆固醇和0.05mML-ot-磷酸卯磷酯)的实验中，当与仅使用复杂脂微胶粒的处理相比时，与复杂脂微胶粒混合物组合的MRS液体培养基并没有诱导PYY表达。与对照相比，嗜酸乳杆菌NCFM代谢物增加了PYY的表达(p0.05当与单独的复杂脂樣i胶粒比较时，和p二0.05当与单独的10。/。MRS比较时)。当所述复杂脂微胶粒与10%嗜酸乳杆菌NCFM代谢物组合时，它进一步增加了PYY表达(p0.05当与单独的复杂脂微胶粒处理比较时，或与10。/。MRS处理比4交时)。实施例6嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞对用脂质处理的分化Caco-2细胞的影响使用根据5日实验方案分化的Caco-2细胞来进行本实验(Yamashita，S.，Konishi，K.,Yamazaki,Y"Taki，Y,，Sakane,T"Sezaki,H.&Furuyama，Y.(2002)/尸/2"rm91，669-79)。将所述细胞分化至经上皮电阻(TEER)超过200ohmxcm2。复杂脂微胶粒根据(Chateau,D.,Pauquai,T.,Delers，F.，Rousset,M.，Chambaz，J.&Demignot,S.(2005)/Ce〃尸/2;;W0/202,767-776)制备，其具有或不具有以每1个Caco-2细胞50个细菌细胞的比率的嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞。将所述Caco-2细胞用脂微胶粒处理3个小时，在处理完之后测量来自所述细胞的PYY表达。材料和方法将Caco-2细胞(HTB-37,美国典型培养物保藏中心，ATCC)在基础培养基中在潮湿的5。/。C02的大气中在37。C培养，该基础培养基由以下成分组成补充有20%FBS(Invitrogen)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM,InvitrogenCarlsbad,CA,US)、2mM稳定谷氨酰胺(Invitrogen)、1x非必需氨基酸(Invitrogen)、20U/ml青霉素(Invitrogen)、20|ig/ml链霉素(Invitrogen),禾口0.5ng/ml两性霉素(Invitrogen)。使用第26代传代的Caco-2细胞并以6.6x105个细胞/cm2涂布在12孔插入式细胞培养皿(BIOCOATHTS，BDBiosciences,LePontdeClaix，France)上，并根据5日实验方案进行分化(Yamashita,S.,Konishi，K.，Yamazaki,Y.，Taki:Y"Sakane，T.,Sezaki，H.&Furuyama，Y(2002)J尸/wrm91，669-79)。简而言之，在涂布之后，将所述细胞在不含抗生素的基础培养基中在潮湿的5%C02的大气中在37°C温育过夜，其后将培养基吸出并用分化培养基(肠STIM，BDBiosciences)置换，该分化培养基补充有MITO+血清添加剂(BDBiosciences)250ml培养基。在培养的第4天，置换培养基，并在培养的第5天进行使用脂微胶粒的实验。将嗜酸乳杆菌NCFM(来自DaniscoCultures,Paris,France)在补充有1.0%(重量/体积)葡萄糖的Man,RogosaandSharpe(MRS)液体培养基中在37°C厌氧条件下培养到OD600达到0.6-0.7。细菌细胞密度用流式细胞仪(FACSCalibur，BectonDickinson,SanJose,CA,US)来测定，如先前所描述(Apajalahti,J.H,,Kettunen，H"Kettunen,A.，Holben,W.E.，Nurminen,P.H.,Rauto羅，N.&Mutanen，M.(2002)如/.五謂'訓.M/c油'o/.68,4986-4995)。细菌细胞上清液通过离心(25。C，5分钟，3000g)来收集并将上清液移除。将嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞用分化培养基洗涤一次，并且用所述细菌来制备简单脂微胶粒(参见下文)。将所述简单脂4敬胶粒在分化培养基中制备到24mM牛磺胆酸盐中(Sigma:StLouis,MO，USA)。所使简单微胶粒的成分是0.6mM油酸-2mM牛磺胆酸盐。在无菌玻璃试管中从油酸(6pl的lOOmM储液)制备一毫升的微胶粒。将脂质在氮气环境在室温下干燥，并将残余物溶解在83pi的分化培养基中的24mM牛磺胆酸盐中，并通过单纯的分化培养基，或通过由10%(体积/体积)MRS组成的分化培养基，或通过由嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞以每一个Caco-2细胞50个细菌细胞的比率组成的分化培养基，将体积补足为1ml。将脂微胶粒在Caco-2分化的第五天施用在细胞的顶面上，并使之与所述细胞反应3小时。使用10%(体积/体积)MRS和不含嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞的简单脂微胶粒作为对照。将他们制备到分化培养基中。在处理之后将细胞培养基吸出并将细胞用补充有1。/。(3-巯基乙醇(Sigma)的150piRA1(Macherey-Nagel,Diiren,Germany)溶解。根据由制造商(Macherey-Nagel)提供的说明书，用Nucleospin96RNA分离试剂盒从细胞溶解产物收集RNA。根据由制造商(Invitrogen)提供的说明书，利用SuperscriptIII使用随机引物进行第一链cDNA的合成。使用ABIPRISMS叫uenceDetectionSystem(ABIPRISM序列;险测系统)(AppliedBiosystems,FosterCity,CA,USA),使用特异性检测人PYY的寡核苷酸来分析在样本中的PYY表达模式。所述寡核苷酸包括正向引物5，GGAGGCCTCAGCTTGACC3，；反向引物5'TGCGCACGAACACCATAG3，；和探针UniversalProbeLibrary探针#10(Roche)。获得的阈循环(Ct)是荧光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环通过使用标准曲线转化为绝对定量值，该标准曲线来自代表目标转录物的反义序列的定量合成的寡核苷酸，显示拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(Nurmi"a/.，2005Nutrition&Cancer51(1):83-92.)。该标准寡核芬酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3，。统计分析使用斯氏t检验来完成。结果结果显示在图4中。当仅用嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞或与简单脂微胶粒组合的嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞处理Caco-2细胞时，饱足感标志物肽YY(PYY)的表达增力口。在使用由2mM牛黄胆酸盐中0.6mM油酸组成的简单脂微胶粒的实验中，当与仅使用脂微胶粒的处理相比时，与简单脂微胶粒混合物组合的MRS液体培养基并没有诱导PYY表达。与对照相比，嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞增加了PYY的表达(p0.05当与单独的脂微胶粒比较时，和当与单独的10%MRS比较时)。当所述脂微胶粒与嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞以每一个caco-2细胞50个细菌细胞的比率组合时，PYY表达得到了相似的诱导，尽管高偏差引起了统计学显著性的降低(pK).08当与复杂脂微胶粒处理比较时)。实施例7嗜酸乳杆菌NCFM对PYY表达的影响(时间序列)试验概要使用根据5日实验方案分化的Caco-2细胞来进行本实验(Yamashita，S.,Konishi,K.,Yamazaki,Y"Taki,Y,，Sakane,T"Sezaki,H.&Fumyama,Y.(2002)J尸/zwm91,669-79)。将所述细胞分化至经上皮电阻(TEER)超过200ohmxcm2。将所述细胞用细菌细胞(50个微生物1个Caco-2细胞)处理，或用在caco-2培养基中稀释的0.1%(体积/体积)，1%(体积/体积)，和10%(体积/体积)无细胞上清液来处理。在施用测试物质之后的两个不同时间点3小时和24小时收集用于PYY表达研究的样本。材泮+和方法将Caco-2细胞(HTB-37，美国典型培养物保藏中心，ATCC)在基础培养基中在潮湿的5。/。C02的大气中在37。C培养，该基础培养基由以下成分组成补充有20%FBS(Invitrogen)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM,InvitrogenCarlsbad,CA,US)、2mM稳定谷氨酰胺(Invitrogen)、1x非必需氨基酸(Invitrogen)、20U/ml青霉素(Invitrogen)、20fig/ml链霉素(Invitrogen),和0.5|xg/ml两性霉素(Invitrogen)。使用第58代传代的Caco-2细胞并以6.6x105个细胞/cm2涂布在12孔插入式细月包培养皿上(BIOCOATHTS,BDBiosciences,LePontdeClaix，France),并根据5日实验方案进行分化(Yamashita,S.,Konishi,K.,Yamazaki,Y,,Taki，Y.:Sakane,T.，Sezaki,H.&Fumyama,Y.(2002)J尸/zwwSc/91,669-79)。简而言之，在涂布之后，将所述细胞在不含抗生素的基础培养基中在潮湿的5°/。C02的大气中在37。C温育过夜，其后将培养基吸出并用分化培养基(肠STIM[BDBiosciences],补充有MITO+血清添加剂，250pl/250ml培养基)置换。在培养的第4天，置换培养基，并在培养的第5天进行使用细菌以及无细胞上清液的实验。将嗜酸乳杆菌NCFM(DaniscoCultures,Paris,France)在补充有1.0%葡萄糖(重量/体积)的Man,RogosaandSharpe(MRS)液体培养基中在3"C厌氧条件下新鲜培养到OD600达到1.0-1.5。无细胞上清液通过离心(25。C,5分钟，3000g)来收集并将其移除，再于分化培养基中稀释为0.1%(体积/体积)，1%(体积/体积)和10%(体积/体积)，并经由0.2nm无菌注射器式滤器装置(Sartorius，Goettingen，Germany)过滤。基于OD值估计细菌细胞密度，并且使用肠STIM将它们洗涤一次，再以每1个Caco-2细胞50个细菌细胞的比率重悬于肠STIM中。将测试物质施用于Caco-2细胞的顶面上。在处理之后将细胞培养基吸出并将细胞用补充有1%(3-巯基乙醇(Sigma)的150piRA1(Macherey-Nagel，Diiren，Germany)溶解。来自嗜酸乳杆菌NCFM样本的用于PYY表达分析的样本取自3小时和24小时温育之后。根据由制造商(Macherey-Nagel)提供的说明书，用Nucleospin96RNA分离试剂盒收集来自细胞溶解产物的RNA。根据由制造商(Invitrogen)提供的说明书，利用SuperscriptIII使用随机引物进行第一链cDNA的合成。使用ABIPRISMSequenceDetectionSystem(ABIPRISM序列才企测系统)(AppliedBiosystems，FosterCity,CA,USA),使用特异性检测人PYY的寡核苷酸来分析在样本中的PYY表达模式。所述寡核香酸包括正向引物5，GGAGGCCTCAGCTTGACC3;反向引物5，TGCGCACGAACACCATAG3，；和探针UniversalProbeLibrary探针#10(Roche)。获得的阈循环(Ct)是焚光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环通过使用标准曲线转化为绝对定量值，该标准曲线来自代表目标转录物的反义序列的定量合成的寡核苷酸，显示拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(Nurmi,J.T.，Puolakkainen，P.A.&Rautonen,N.E.(2005)M//rCa"cw51,83-92)。该标准寡核香酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3，。统计分析使用ANOVA完成。结果图6显示嗜酸乳杆菌NCFM无细胞上清液和细菌对PYY表达的影响。使用了无细胞上清液的三个不同的稀释0.1%(体积/体积)，1%(体积/体积)和10%(体积/体积)。在测试物质施用3小时和24小时之后收集用于PYY表达研究的样本。*p<0.05与肠STIM(培养基)对照比较；LANCFM细菌^耆酸乳杆菌NCFM细菌。在施用细菌之后的两个时间点3小时和24小时，嗜酸乳杆菌NCFM细菌细胞均增加了PYY表达。10%稀释的无细胞上清液在温育3小时之后增加了PYY表达。剂量以及处理时间均影响PYY表达。细菌细胞，特别是活的细菌细胞，与代谢物相比对PYY表达可具有持续性更强的影响。实施例8弯曲乳杆菌细菌细胞对PYY表达的影响使用根据5日实验方案分化的Caco-2细胞来进行本实验(Yamashita,S.，Konishi，K.，Yamazaki，Y.,Taki,Y.，Sakane，T.，Sezaki,H.&Furuyama,Y.(2002)J尸/zarm91，669-79)。将所述细胞分化至经上皮电阻(TEER)超过200ohmxcm2。将所述细胞用弯曲乳杆菌853细菌细胞(50个樣i生物1个Caco-2细胞)处理。在处理4小时之后收集用于基因表达分析的样本。材一+和方法将Caco-2细胞(HTB-37，美国典型培养物保藏中心，ATCC)在基础培养基中在潮湿的5。/。C02的大气中在37。C培养，该基础培养基由以下成分组成补充有20%FBS(Invitrogen)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM,InvitrogenCarlsbad,CA，US)、2mM稳定谷氨酰胺(Invitrogen)、1x非必需氨基酸(Invi加gen)、20U/ml青霉素(Invitrogen)、20昭/ml链霉素(Invitrogen),和0.5fig/ml两性霉素(Invitrogen)。使用第58代传代的Caco-2细胞并以6.6x105个细胞/cm2涂布在12孔插入式细胞培养皿上(BIOCOATHTS,BDBiosciences,LePontdeClaix，France),并根据5日实验方案进行分化(Yamashita,S.，Konishi,K.,Yamazaki,Y.,Taki，Y.,Sakane，T.,Sezaki,H.&Fumyama,Y.(2002)J户/wTw91，669-79)。筒而言之，在涂布之后，将所述细胞在不含抗生素的基础培养基中在潮湿的5%C02的大气中在37°C温育过夜，其后将培养基吸出并用分化培养基(肠STIM[BDBiosciences],补充有MITO+血清添加剂，250ml培养基)置换。在培养的第4天，置换培养基，并在培养的第5天进行使用细菌细胞的实验。将弯曲乳杆菌853在补充有1.0%葡萄糖的Man,RogosaandSharpe(MRS)液体培养基中在37。C在厌氧条件下新鲜培养，直到OD600达到1.0-1.5。通过离心(25。C,5分钟，3000g)来收集无细胞上清液并将其移除。基于OD值来估计细菌细胞密度，并将他们用肠STIM洗涤一次，稀释并应用在Caco-2细胞的顶面上。在4小时处理之后将细胞培养基吸出并将细胞用补充有1%P-巯基乙醇(Sigma)的150|alRA1(Macherey-Nagel,Diiren，Germany)溶解。根据由制造商(Macherey-Nagel)提供的说明书，用Nucleospin96RNA分离试剂盒收集来自细胞溶解产物的RNA。根据由制造商(Invitrogen)提供的说明书，利用SuperscriptIII使用随机引物进行第一链cDNA的合成。使用ABIPRISMS叫uenceDetectionSystem(ABIPRISM序列4全测系统)(AppliedBiosystems,FosterCity,CA，USA),使用特异性检测人PYY的寡核苷酸来分析在样本中的PYY表达模式。所述寡核芬酸包括正向引物5，GGAGGCCTCAGCTTGACC3;反向引物5，TGCGCACGAACACCATAG3，；和探针UniversalProbeLibrary探针WO(Roche)。获得的阈循环(Ct)是荧光强度跨过背景阈值的PCR循环，将所述阈循环通过使用标准曲线转化为绝对定量值，该标准曲线来自代表目标转录物的反义序列的定量合成的寡核苷酸，显示拷贝数和PCR循环之间的反对数线性关系(Nurmi，J.T.，Puolakkainen,P.A.&Rautonen，N.E.(2005)Ca"cer51,83-92)。该标准寡核苦酸的序列是5，TGCGCACGAACACCATAGCGATAGCTTGTGAAGCAGACGAGCAGGAGGTGGAAGGCGAGGGAAGTCCCAAGGGCTGCACTGCCGCAGGTCAAGCTGAGGCCTCC3'。统计分析用ANOVA来完成。结果图7显示弯曲乳杆菌853对PYY表达的影响。在测试物质施用之后4小时收集用于PYY表达研究的样本。*p<0.05与仅含培养基的对照比较。在温育4小时之后，弯曲乳杆菌853细菌细胞增加了PYY表达。本发明范围和宗旨的前提下，对本发明描述的方法和系统的多种修饰和变化对于本领域技术人员是显而易见的。尽管本发明已经练习具体优选的实施方案进行了描述，但是应该理解的是，要求保护的发明不应过分局限于这些具体的实施方案。事实上，对用于进行本发明的所述模式的多种修饰对于生物化学和生物技术或者相关领域的技术人员是显而易见的，因此也应在本发明权利要求书的范围之内。参考文献1.LivakKJ，andSchmittgenTD(2001)Analysisofrelativegeneexpressiondatausingreal-timequantitativePCRandthe2(-DeltaDeltaC(T))Method.Methods,25(4):402-8.2.YamashitaS，KonishiK，YamazakiY,TakiY，SakaneT,SezaniH,FuruyamaY(2002)Newandbetterprotocolsforashort-termCaco-2cellculturesystem.JPharmSci91(3):669-679.ATCC_10801UniversityBlvdManassas,VA20110-2209电话703-365-2700传真703-365-2745布达佩斯条约关于用于专利程序的国际认可的微生物保藏国际局表格原始保藏依照第7条第3款发布和存活证明依照第IO条发布的情况下的收据收件人(保藏人或代理人的姓名和地址)RhodiaInc.(罗地亚公司)代理人GrsgoryL6ysr2802WaltonCommonsWestMadison,WI53718代表RhodiaChimie(罗地亚化学)，法国保藏保藏人给出的鉴定号码专利保藏机构指定的登记号码嗜酸乳杆菌NCFMPTA-4797类干酪乳杆菌Lbc81PTA-4798植物乳杆菌Lp-115PTA-4799唾液乳杆菌Ls-33PTA-4800双歧双歧杆菌Bb-02PTA-4801乳双歧杆菌Bi-07PTA-4802所述保藏附有在上述项中说明的_科学描述_建议的分类学描述。本国际保藏单位已于2002年11月15日收至'j并接受了该保藏。按照您的要求X我们将在30年内对于所述菌抹被要求的情况给予通知。如果签署了布达佩斯条约的专利局证明了某人获得所述菌株的权利，或者如果引用所述菌林的美国专利被公布，并且ATCC得到美国专利和商标局或保藏单位释放所述菌抹的指示，则可以获得所述菌抹。在保藏有效期内，如果培养物死亡或者被损坏，您有责任用相同菌抹的活培养物替换已经死亡或者被损坏的培养物。从保藏日起，所述菌林将被保存至少30年，或者被保存至最近一次对样本的要求之后5年，以较长的期限为准。美国和许多其它国家是布达佩斯条约的締约国。上述说明的培养物的存活性在2002年11月25日被检验。在该日期，所述培养物是存活的。国际保藏单位美国典型培养物保藏中心，马纳萨斯，VA20110-2209美国'有权代表ATCC的人的签名MarieHarris_曰期2003年1月3曰MarieHarris,专利专员，ATCC专利保藏单位抄送LaureBerruet权利要求1.微生物的至少一种菌株和/或其代谢物在支持体制备中的用途，该支持体用于向受试者施用来调节饱足感信号传导。2.根据权利要求1的用途，其中所述微生物和/或其代谢物调节一种或多种饱足感标志物。3.根据权利要求2的用途，其中所述调节发生在进食后。4.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物和/或其代谢物调节选自下组的一种或多种饱足感标志物PYY、CCK、胃饥饿素、瘦蛋白、GLP-1、食欲肽、促进食欲的下丘脑神经肽Y、乙酸、糊精和泌酸调节素。5.根据权利要求4的用途，其中将血浆中和/或肠道中下述饱足感标志物中的一种或多种的水平增加PYY、CCK、GLP-1、痩蛋白(外周血中)、胰岛素和乙酸。6.根据权利要求4的用途，其中将下述饱足感标志物中的一种或多种的水平降低胃饥饿素、食欲肽和瘦蛋白(脑内)。7.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述支持体是可药用支持体或食物产品。8.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述用途是美容用途，并且将所述支持体施用于不肥胖的受试者。9.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述支持体是药物。10.根据前述权利要求中任一项的用途，其中将所述微生物的至少一种菌抹和/或其代谢物施用于受试者，用于治疗和/或预防过剩体重和/或由过剩体重引起的疾病。11.根据前述权利要求中任一项的用途，其中将所述微生物的至少一种菌林和/或其代谢物施用于受试者，用于治疗和/或预防肥胖和/或由肥胖引起的疾病。12.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物是益生微生物。13.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物是乳酸细菌。14.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物是益生乳酸细菌。15.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物是乳杆菌属菌种的菌抹。16.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述微生物是嗜酸乳杆菌的菌抹。17.根据权利要求10的用途，其中所述微生物是嗜酸乳杆菌的菌林PTA-4797。18.根据前述权利要求中任一项的用途，其中将所述微生物和/或其代谢物与一种或多种脂质和/或一种或多种脂微胶粒组合使用。19.根据前述权利要求中任一项的用途，其中将所述微生物和/或其代谢物与益生元组合使用。20.根据权利要求19的用途，其中所述益生元是下述的一种或多种菊粉、转半乳寡糖、帕拉金糖寡糖、大豆寡糖、龙胆寡糖、木糖寡聚物、不可降解的淀粉、乳蔗糖、乳酮糖、乳糖醇、麦芽糖醇或聚右旋糖。21.微生物的至少一种菌株和/或其代谢物在支持体制备中的用途，该支持体用于向受试者施用来诱发饱足感。22.—种调节受试者体内饱足感信号传导的方法，该方法包含向受试者施用有效量的微生物的至少一种菌林和/或其代谢物。23.根据权利要求22的方法，其中所述微生物和/或其代谢物调节一种或多种饱足感标志物。24.根据权利要求22或23的方法，其中所述调节发生在进食后。25.根据权利要求22至24中任一项的方法，其中所述微生物和/或其代谢物调节选自下组的一种或多种饱足感标志物PYY、CCK、胃饥饿素、瘦蛋白、GLP-1、食欲素、促进食欲的下丘脑神经肽Y、乙酸、糊精和泌酸调节素。26.根据权利要求25的方法，其中将血浆中和/或肠道中下述饱足感标志物中一种或多种的水平增加PYY、CCK、GLP-1、瘦蛋白(外周血中)、胰岛素和乙酸。27.根据权利要求25的方法，其中将下述饱足感标志物中的一种或多种的水平降低胃饥饿素、食欲素和瘦蛋白(在脑中)。28.根据权利要求22至27中任一项的方法，其中将所述微生物掺入到支持体中。29.根据权利要求22至28中任一项的方法，其中所述支持体是可药用支持体或食物产品。30.根据权利要求22至29中任一项的方法，其中所述方法是减轻不肥胖的受试者过剩体重的美容方法。31.根据权利要求29或权利要求30的方法，其中所述支持体是药物。32.根据权利要求22至31中任一项的方法，其中所述方法是治疗和/或预防过剩体重和/或由过剩体重引起的疾病的方法。33.根据权利要求22至32中任一项的方法，其中所述方法是治疗和/或预防肥胖和/或由肥胖引起的疾病的方法。34.根据权利要求22至33中任一项的方法，其中所述微生物是益生微生物。35.根据权利要求22至34中任一项的方法，其中所述微生物是乳酸细菌。36.根据权利要求22至35中任一项的方法，其中所述微生物是益生乳酸细菌。37.根据权利要求22至36中任一项的方法，其中所述微生物是嗜酸乳杆菌的菌林。38.根据权利要求22至37中任一项的方法，其中将所述微生物和/或其代谢物与益生元组合施用。39.根据权利要求38的方法，其中所述益生元是下述中的一种或多种菊粉、转半乳寡糖、帕拉金糖寡糖、大豆寡糖、龙胆寡糖、木糖寡聚物、不可降解的淀粉、乳蔗糖、乳酮糖、乳糖醇、麦芽糖醇或聚右旋糖。40.—种用于选择微生物和/或其代谢物以制备支持体的方法，该支持体用于向受试者施用来诱发饱足感和/或治疗过剩体重，包括肥胖，其中所述方法包括步骤1)将#^生物和/或其代谢物与至少一种上皮细胞接触，2)检测所述至少一种上皮细胞中饱足感标志物的表达。41.如本文中参考说明书和附图所概括描述的方法。42.如本文中参考说明书和附图所概括描述的用途。全文摘要微生物的至少一种菌株和/或其代谢物在制备施用于受试者用于调节饱足感信号传导的支持体中的用途，其中所述支持体是可药用支持体或食物产品。合适地，可以将所述微生物的至少一种菌株和/或其代谢物施用于受试者，用于治疗和/或预防过剩体重和/或由过剩体重引起的疾病。同样地，将所述微生物的至少一种菌株和/或其代谢物施用于受试者，用于治疗和/或预防肥胖和/或由肥胖引起的疾病。优选地，所述微生物是益生微生物。合适地，所述微生物可以是乳酸细菌。在一个实施方案中，所述微生物是乳杆菌属菌种和/或双歧杆菌属菌种的菌株，例如嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌、唾液乳杆菌和/或乳双歧杆菌的菌株。文档编号A61K35/74GK101410128SQ200780011326公开日2009年4月15日申请日期2007年1月26日优先权日2006年1月27日发明者尼娜·劳托南,柯尔斯蒂·蒂霍南,沃特·H·努尔德曼,玛尔塔·Z·科津斯卡,赫利·帕塔拉,阿瑟·奥维汉德申请人:丹尼斯科公司;康必奶荷兰控股有限公司