通过调节抗原呈递细胞的功能调节免疫反应的制作方法

专利名称：通过调节抗原呈递细胞的功能调节免疫反应的制作方法
技术领域：
本发明通常涉及通过调节抗原呈递细胞(APC)的功能调节免疫反应。 特别的，本发明涉及伴侣蛋白IO在调节诸如主要组织相容性复合体(MHC) 分子例如HLA的细胞表面表达的APC功能中的用途，和用于疾病治疗 的相关方法、用途和组合物，以及用于筛选APC功能调节剂的方法。
背景技术：
对抗入侵细菌和病毒病原体的宿主防御系统的核心成分包含通过细 胞受体对病原体、或其成分的成功识别，所述细胞受体诱导导致免疫系 统的刺激的信号级联放大。所述系统的基本方面是主要组织相容性复合 体(MHC)-肽复合体的T-细胞识别。
当源自病原体的肽在MHC II类分子(其包括最初在内质网中组装的 a-和(3-链)的情况下呈现时，CD4+T-细胞能识别所述肽。这些a-链和卩-链与恒定链(Ii)接合，所述恒定链保护肽结合槽并促进MHC II类分子向 内体间隔输送。在内体间隔中，Ii被清除，在结合槽中留下肽(CLIP)。伴 侣蛋白分子HLA-DM促使CLIP被抗原肽替换。载有抗原肽的成熟MHC II类分子而后迁移至细胞表面，在此其能纟皮呈递至CD4+T-细胞。
所述抗原处理系统和成熟MHC II类分子的呈递出现在树突细胞(DC) 中，其是仅有的能刺激天然T细胞和诱导初级免疫反应的APC。因此， DC在抗原呈递和适应性免疫的诱导上起到关键作用。DC诱导免疫反应 的能力依赖于其成熟状态。在细胞表面上表达低水平的MHC和诸如 CD40、 CD80、 CD83和CD86的T细胞共刺激分子的未成熟DC,捕获 周围的抗原。而后，其迁移至二级淋巴组织并经历成熟过程。成熟后， MHC分子/人细胞内间隔重新分配至细胞表面，这导致呈递抗原的能力增 加。伴随着，促进T细胞活化的共刺激分子的表面表达被上调。由DC 分泌的细胞因子分布也依赖于其成熟阶段。成熟DC产生的细胞因子包括IL-12、 IL-1 a/p、 IL隱18、 IFN-a/卩、IL-6、 TNF-a、 IL-IO、和TGF-p。 DC细胞因子分布最后决定免疫反应的Thl/Th2-结果。即，通过DC诱导 的IL-12分泌的抗原诱导Thl分化，而不诱导IL-12产生的抗原促进Th2 分化。
在DC成熟中包涉及的许多调节方法还是未知的。特别的，当MHC II类分子经历从未成熟DC中的内体结构到成熟DC中的质膜的定位的改 变时，所涉及的许多分子信号通路还不清楚。
伴侣蛋白10 (CpnlO)是一种高度保守的线粒体伴侣蛋白，其在蛋白质 的折叠上起基本作用。CpnlO也已经显示涉及大量免疫调节活性，例如， 核因子-kB(NF-kB)活化的抑制和促炎细胞因子的产生，既在体外又在体 内。本发明基于令人惊奇的和意想不到的发现，即CpnlO具有调节APC 功能的能力，包括MHC分子在DC中从细胞内间隔到细胞表面的重新分 配，和T细力包的APC介导的活化。
发明概述
依据本发明的第一方面，提供通过调节至少一个MHC分子的细胞表 面表达的水平、来调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的免疫反应 的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还包括通过调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表 达的水平、来调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的免疫反应，包 括给予有效量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHC I类分子、MHC II类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
伴侣蛋白IO可以是天然衍生的、重组产生的或合成产生的伴侣蛋白 10。伴侣蛋白10可以是真核细胞起源的。伴侣蛋白IO可以是哺乳动物 起源的。伴侣蛋白IO可以是人伴侣蛋白10。
伴侣蛋白10可以包括SEQ ID NO:l 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所列的多肽序列。伴侣蛋白IO可以是乙酰化的或非乙酰化的。
伴侣蛋白IO可以以编码伴侣蛋白10的多聚核苷酸形式被给药。编 码伴侣蛋白IO的多聚核苷酸可以位于基因构建体中，可操作地与启动子
连接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
依据本发明的第二方面，提供一种通过调节至少 一个MHC分子的细
胞表面表达的水平治疗或预防个体的疾病或状态的方法，其中所述方法
包括给予个体有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括通过调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表
面表达的水平治疗或预防个体的疾病或状态的方法，包括给予个体有效
量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC
分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或
HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨嗟细胞、冲对突细胞或B细胞。
疾病或状态可以源自，或另外地相关于，由病毒或细菌病原体引起 的个体的感染。疾病或状态可以是癌症、自体免疫紊乱、炎症、过敏、 哮喘或传染病。
伴侣蛋白IO可以是天然衍生的、重组产生的或合成产生的伴侣蛋白 10。伴侣蛋白10可以是真核细胞起源的。伴侣蛋白IO可以是人伴侣蛋 白10。
伴侣蛋白10可以包括SEQ ID NO:l、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3
中所列的多肽序列。伴侣蛋白IO可以是乙酰化的或非乙酰化的。
伴侣蛋白IO可以以编码伴侣蛋白10的多聚核苷酸形式被给药。编
码伴侣蛋白10的多聚核苷酸可以位于基因构建体中，可操作地与启动子
连接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
依据本发明的第三方面，提供一种用于调节个体或其至少一个细胞、
组织或器官的至少一个MHC分子的细胞表面表达的水平的方法，其中所
述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括调节个体或其至少 一个细胞、组织或器官的至少 一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平的方法，包括给予有效
量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨喧细胞、4对突细胞或B细胞。
依据本发明的第四方面，提供 一 种用于调节个体或其至少 一 个组织 或器官的抗原呈递细胞的功能的方法，其中所述方法包括给予有效量的 伴侣蛋白10。
抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突细胞或B细胞。 功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。 依据本发明的第五方面，提供一种组合物，当用于治疗或预防疾病
或状态时，其中所述组合物包含伴侣蛋白IO和至少一个药学上可接受载
体、稀释剂或佐剂，以及其中所述伴侣蛋白IO调节至少一个MHC分子
的细胞表面表达的水平。
伴侣蛋白IO还可以调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达
的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞
可以选自巨噬细胞、树突细胞或B细胞。
依据本发明的第六方面，提供一种组合物，当用于治疗或预防疾病
或状态时，其中所述组合物包含伴侣蛋白IO和至少一个药学上可接受载
体、稀释剂或佐剂，以及其中伴侣蛋白IO调节个体或其至少一个组织或
器官的抗原呈递细胞的功能。
抗原呈递细J包可以选自巨噬细胞、树突细J包或B细胞。 功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。 依据本发明的第七方面，提供伴侣蛋白IO在用于疾病或状态的治疗或预防的药物的制造上的用途，其中所述伴侣蛋白IO调节至少一个MHC 分子的细胞表面表达的水平。
伴侣蛋白IO还可以调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达 的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞
可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
依据本发明的第八方面，提供伴侣蛋白IO在用于疾病或状态的治疗
或预防的药物的制造上的用途，其中所述伴侣蛋白IO调节个体或其至少
一个组织或器官中的抗原呈递细胞的功能。
抗原呈递细胞可以选自巨喧细胞、树突细胞或B细胞。 功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。 依据本发明的第九方面，提供一种方法，用于调节个体或其至少一
个细胞、组织或器官中的一个或多个免疫调节剂的细胞中的产生、定位
和/或细胞表面表达，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10,其中
所述伴侣蛋白10调节至少一个MHC分子或至少一个其他细胞表面分子
的细胞表面表达的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC
分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或
HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨谨细胞、树突细胞或B细胞。
依据本发明的第十方面，提供一种方法，用于鉴定调节免疫反应的 化合物，其中所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与候选化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 候选化合物接触而被调节。
方法还可以包括(C)确定至少一个其他细胞表面分子在所述细胞的表面上的表达是否 与所述候选化合物接触而被调节。
MHC分子可以是MHC I类分子、MHC II类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA画DQ。
细月包表面表达可以是抗原呈递细力包的细力包表面表达。抗原呈递细月包 可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
依据本发明的第十一方面，提供一种方法，用于筛选多个化合物以 鉴定调节免疫反应的化合物，其中所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与所述多个化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 多个化合物接触而被调节。
方法还可以包括
与所述多个化合物接触而被调节。
MHC分子可以是MHC I类分子、MHC II类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨p藍细月包、杉于突细胞或B细胞。
依据本发明的第十二方面，提供一种方法，用于诱导调节个体或其 至少一个细胞、组织或器官中的至少一个MHC分子的细胞表面表达的水 平，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括调节个体或其至少 一个细胞、组织或器官中的 至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平，其中所述方法包括 给予有效量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA画DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突细胞或B细胞。
依据本发明的第十三方面，提供一种方法，用于鉴定调节免疫反应
的化合物，其中所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与所述候选化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定所述细胞向淋巴结的迁移或激活和/或引起T细胞增殖的能力 是否在与所述候选化合物接触的情况下而被调节。
细胞可以是抗原呈递细胞。抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突 细月包或B细月包。
依据本发明的第十四方面，提供一种方法，用于筛选多个化合物以 鉴定调节免疫反应的化合物，其中所述方法包括
(b)确定所述细胞向淋巴结的迁移或激活和/或引起T细胞增殖的能力 是否在与所述多个化合物接触的情况下而被调节。
细胞可以是抗原呈递细胞。抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突 细胞或B细^^包。
依据本发明的第十五方面，提供一种方法，用于调节个体或其至少 一个组织或器官中的抗原呈递细胞的功能，其中所述方法包括给予有效 量的伴侣蛋白10。
抗原呈递细月包可以选自巨噬细月包、冲对突细月包或B细月包。
功能可以选自向淋巴结的迁移或T细胞活化。
定义
本说明书上下文中，术语"包括，，指"主要包括，但不一定仅有"。另夕卜， 单词"包括(comprising)"的变化形式，如"包括(comprise)"和"包括 (comprises)"具有相应的不同含义。
本文所用的术语"治疗(treatment)"、"治疗(treating)"及其变化形式， 指任何或全部应用，其治疗疾病状态或症状、预防疾病产生、或其他无 论以任何方式预防、阻碍、延迟、或逆转疾病或其他不期望症状的进展。
本文所用的术语"有效量"，其含义中包括无毒但足够量的药剂或化 合物以提供期望的治疗或疾病预防效果。准确需要量在个体间依据诸如被治疗的物种、个体的年龄和一般状况、被治疗的状态的严重程度、被 给药的特殊药剂和给药方式等因素而变化。因此，指定准确的"有效量" 是不可能的。然而，对于任何给定情况，适合的"有效量，，可以通过本领 域内的普通技术人员仅用常规试验就可以确定。
术语"多肽，，指由氨基酸通过肽键连接在一起形成的聚合物。术语"多 肽"和"蛋白质"在本文可交换应用，尽管出于本发明目的，"多肽"构成全 长蛋白质的一部分。
本文用到的术语"多聚核苷酸"指脱氧核糖核苷酸碱基、核糖核苷酸 碱基或已知的类似物或天然核苷酸的单链或双链聚合物，或其混合物。
本文用到的术语"调节(modulating)"、"调节(modulates)"及其变化形式 指与没有调节分子或药剂时的活性、产生、分泌或其他起作用的水平 相比时，在本发明的特定调节分子或药剂存在下，增加或降低分子的活 性、产生、分泌或起作用的水平。这些术语不意味着量的增加或减少。 调节可以是任何足以产生期望的结果的数量，并可以是直接或间接的。
本文应用的术语"免疫调节剂"指分子调节剂，其在免疫反应的活化、 保持、成熟、阻止、抑制或增加中起作用。
术语"MHC分子"指任何分子，其复合、联合或形成一部分主要组织 相容性复合体。因而"MHC分子，，可以包括任何说明的人白血球抗原 (HLA)，例如，包括但不限于HLA-DR(MHC II类)、MHCI类分子、或 非经典的MHC分子，例如CDla、 CDlb或CDlc。
术语"其他细胞表面分子，，指在细胞表面上表达的任何分子，可以或 不可以包括共刺激分子。术语"共刺激分子"指能直接或间接有助于涉及 MHC分子的信号传导的任何分子。
附图简述
本发明现在将仅通过非限制性实施例，参考


。 图1. CpnlO显著减少HLA-DR在DC上的表达
在GM-CSF和IL-4存在下，人DC从单核细胞分化5天。用LPS, 单核细胞向DC的转化通过CDla和CD14细胞表面表达的流式细胞检测 分析验证。CDla+ CD14- DC 一皮进一步分析成熟标记物HLA-DR的细胞表面表达。培养的源自单核细胞的DC被用于评估CpnlO调节LPS-诱导DC 成熟的能力。HLA-DR的表达在用CpnlO孵育的未成熟DC上不变(A)。 然而，LPS-i秀导HLA-DR的表达的上调净皮CpnlO显著降^f氐(A对B， p=0.0408; A对C， p=0.0324; A对D, p=0.0161)(B)。代表3个独立的 实验。
图2. CpnlO通过DC减少组成性TNF-a释放
培养的源自单核细胞的DC被用于评估CpnlO调节组成性TNF-a释 放的能力。DC用一定浓度范围的cpnlO孵育20小时。TNF-a在培养上 清中的富集通过ELISA测量。显示的数据代表4个独立的实验。 图3. CpnlO减少原发混合白细胞反应(MLR)中的IFN-y产生 培养的源自单核细胞的DC被用于评估CpnlO调节原发混合白细胞 反应(MLR)中DC对T细胞的活化。DC与异源CD+ T细胞共培养6天， FN-y产生在培养上清中用ELISA测定。IFN-y富集被CpnlO显著降低。 数据代表2个独立的实验。
图4. CpnlO不影响原发混合白细胞反应(MLR)中的T细胞增殖 培养的源自单核细胞的DC和单独的异源CD4+ T细胞在CpnlO存在 或不存在下被共培养6天。用CyQUANT细胞增殖检测试剂盒依据制造 商的说明书测量增殖。代表2个独立的实验。
实施本发明的最佳方式
应用荧光染料标记的蛋白质，发明人已经显示，CpnlO与抗原呈递 细胞、主要是树突细胞间有强相互作用。体外实验的数据，其中从PBMC 而来的骨髓或者类浆细胞的树突细胞(DC)在TLR配体范围内刺激之前被 特定地耗尽，显示了在CpnlO存在下，细胞因子产生的动力学的微小改 变。而且，本发明人证明了与CpnlO —起成熟的源自单核细胞的DC从 细胞内间隔重新分配减少水平的HLA-DR和其他共刺激分子至细胞表 面。此MHC II类分子表达的下调和降低的抗原呈递能力可以有助于 CpnlO的全部抗炎作用。
特别的，为了评估CpnlO在DC成熟上的作用，本发明人应用源自 单核细胞的DC,其在过去已经被广泛描述(J.Exp.Med. 1994; 179: 1109;
18Blood 2002; 99: 993; PNAS 1996; 93: 2588; InUmmunol. 2004; 16: 767)。未 成熟源自单核细胞的DC是CD14-HLA-DR+ CDla+细胞。关于用LPS活 化，其上调HLA-DR和表达对细胞表面上的T细胞的刺激物配体。在此 表明，CpnlO在体外调节DC成熟的程度。
从而，发明人已经显示，Cpnl0下调细胞表面的HLA-DR的LPS诱 导表达。此降低的HLA-DR表达可以是由成熟DC减少IFN-y产生的结 果(在J. Immunol 1989; 143:3781中说明)。另一方面，HLA-DR的CpnlO 诱导下调可以反映将负载抗原的MHC II类分子输送至细胞表面的内吞 途径的效率的改变。然而，在此呈现的数据提供清晰地证据证明，DC成 熟的预防以及DC和B细胞的降低的抗原呈递能力很可能是自身免疫性 疾病的改善中的CpnlO的作用^^式。
因此，本发明提供用于调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的 免疫反应的方法，通过调节至少 一个MHC分子的细胞表面表达的水平， 其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还包括调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的免疫反 应，通过调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平，包括 给予有效量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA腸DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨喧细月包、树突细月包或B细月包。
伴侣蛋白10可以是源自天然的、重组产生的或合成产生的伴侣蛋白 10。伴侣蛋白10可以是真核细胞起源的。伴侣蛋白IO可以是哺乳动物 起源的。伴侣蛋白IO可以是人伴侣蛋白10。
伴侣蛋白10可以包括SEQ ID NO:l、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3 中所列的多肽序列。伴侣蛋白IO可以是乙酰化的或非乙酰化的。
伴侣蛋白IO可以以编码伴侣蛋白10的多聚核苷酸形式被给药。编 码伴侣蛋白IO的多聚核苷酸可以位于基因构建体中，可操作地与启动子 连接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。本发明也提供用于通过调节至少一个MHC分子的细胞表面表达的
水平治疗或预防个体中的疾病或状态的方法，其中所述方法包括给予个
体有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括通过调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表 面表达的水平治疗或预防个体中的疾病或状态，其包括给予个体有效量
的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA陽DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨噬细胞、树突细胞或B细胞。
疾病或状态可以源自，或另外地相关于，由病毒或细菌病原体引起 的个体的感染。疾病或状态可以是癌症、自体免疫紊乱、发炎、过敏、 哮喘或传染病。
伴侣蛋白IO可以是源自天然的、重组产生的或合成产生的伴侣蛋白 10。伴侣蛋白10可以是真核细胞起源的。伴侣蛋白IO可以是人伴侣蛋 白10。
伴倡蛋白10可以包括SEQ ID NO:l 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3 中所列的多肽序列。伴侣蛋白IO可以是乙酰化的或非乙酰化的。
伴侣蛋白IO可以以编码伴侣蛋白10的多聚核苷酸形式被给药。编 码伴侣蛋白10的多聚核苷酸可以位于基因构建体中，可操作地与启动子 连接。多聚核苷酸可以包括SEQ ID NO:4中所列的序列。
本发明另外提供用于调节个体或其至少 一个细胞、组织或器官的至 少一个MHC分子的细胞表面表达的水平的方法，其中所述方法包括给予 有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的至 少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平的方法，包括给予有效 量的伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞
可以选自巨喧细胞、树突细胞或B细胞。
本发明还提供用于调节个体或其至少一个组织或器官的抗原呈递细
胞的功能的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。 抗原呈递细月包可以选自巨噬细胞、树突细力包或B细胞。 功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。 此外，本发明提供组合物，当用于治疗或预防疾病或状态时，其中
所述组合物包含伴侣蛋白IO和至少一种药学上可接受载体、稀释剂或佐
剂，以及其中伴侣蛋白IO调节至少一个MHC分子的细胞表面表达的水平。
伴侣蛋白IO还可以调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达 的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨喧细月包、树突细胞或B细胞。
本发明也提供组合物，当用于治疗或预防疾病或状态时，其中所述 组合物包含伴侣蛋白IO和至少一种药学上可接受载体、稀释剂或佐剂， 以及其中伴侣蛋白10调节个体或其至少 一个组织或器官中的抗原呈递细 胞的功能。
抗原呈递细胞可以选自巨喧细胞、树突细胞或B细胞。
功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。
本发明另外提供伴侣蛋白10在用于疾病或状态的治疗或预防的药剂
的制造上的应用，其中伴侣蛋白IO调节至少一个MHC分子的细胞表面
表达的水平。
伴侣蛋白IO还调节至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞
可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
本发明还提供伴侣蛋白10在用于疾病或状态的治疗或预防的药剂的
制造上的应用，其中伴侣蛋白IO调节个体或其至少一个组织或器官的抗
原呈递细胞的功能。
抗原呈递细月包可以选自巨噬细l包、初于突细月包或B细月包。
功能可以选自向^fr巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。
此外，本发明提供方法，用于调节个体或其至少一个细胞、组织或
器官中的一个或多个免疫调节剂的细胞中的产生、定位和/或细胞表面表
达，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10,和其中伴侣蛋白10调
节至少一个MHC分子或至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA画DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨噬细胞、树突细胞或B细胞。
本发明也提供方法，用于鉴定调节免疫反应的化合物，其中所述方 法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与候选化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 候选化合物接触而被调节。
所述方法还可以包括
(c) 确定至少一个其他细胞表面分子在所述细胞的表面上的表达是否 与所述候选化合物接触而被调节。
MHC分子可以是MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
本发明另外提供方法，用于筛选多个化合物以鉴定调节免疫反应的
化合物，其中所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与多个化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 多个化合物接触而被调节。
所述方法还可以包括
与所述多个化合物接触而被调节。
MHC分子可以是MHC I类分子、MHC II类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨p藍细胞、树突细胞或B细胞。
本发明还提供方法，用于诱导调节个体或其至少一个细胞、组织或 器官中的至少 一个MHC分子的细胞表面表达的水平，其中所述方法包括 给予有效量的伴侣蛋白10。
所述方法还可以包括调节个体或其至少 一个细胞、组织或器官中的 至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平，包括给予有效量的
伴侣蛋白10。
MHC分子可以是MHC I类分子、MHC II类分子、或非经典性MHC 分子。MHCII类分子可以是HLA。 HLA可以是HLA-DR、 HLA-DP、或 HLA-DQ。
细胞表面表达可以是抗原呈递细胞的细胞表面表达。抗原呈递细胞 可以选自巨嗟细胞、树突细胞或B细胞。
此外，本发明也提供方法，用于鉴定调节免疫反应的化合物，其中 所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与候选化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定所述细胞向淋巴结的迁移或刺激和/或引起T细胞增殖的能力
23是否与所述候选化合物接触而被调节。
细胞可以是抗原呈递细胞。抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突 细胞或B细^<。
本发明还提供方法，用于筛选多个化合物以鉴定调节免疫反应的化
合物，其中所述方法包括
(a) 将细胞或细胞提取物与所述多个化合物在CpnlO存在下接触；和
(b) 确定所述细胞向淋巴结的迁移或刺激和/或引起T细胞增殖的能力 是否与所述多个化合物接触而被调节。
细胞可以是抗原呈递细胞。抗原呈递细胞可以选自巨噬细胞、树突 细月包或B细月包。
本发明另外提供方法，用于调节个体或其至少一个组织或器官的抗 原呈递细胞的功能，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。 抗原呈递细胞可以选自巨喧细胞、树突细胞或B细胞。 功能可以选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。 本领域内的那些技术人员应了解，依据本发明的方法，CpnlO可以 单独或连同一个或多个另外的药剂给药。例如，CpnlO可以与一个或多 个能刺激TLR3、 TLR4、 TLR7和TLR9的一个或多个的TLR激动剂一 同被给药。另外，本发明包括用CpnlO连同其他治疗方法的联合疗法以 治疗疾病和紊乱。例如，CpnlO可以用于病毒疾病的治疗，其响应于I 型干扰素如IFN(3或IFNa的治疗。另夕卜，由于TLR7和TLR9的激动剂 诱导活化先已被报道能增强肿瘤对放射疗法的响应，CpnlO可以连同放 射疗法;故用以治疗癌症。
对于此类联合治疗，联合治疗的每个成分可以同时给药，或以任何 次序顺序给药，或在不同时间给药，以提供期望的效果。可选择的，成 分可以以单一剂量单位被配制在一起作为组合产品。当单独给药时，可 以优选成分通过相同的给药途径给药，尽管这不是必要这样。
CpnlO
依据本发明的方面和实施方案，需要治疗的个体被给予有效量的 CpnlO。在特别实施方案中，被治疗的个体是人，因此，CpnlO多肽是人CpnlO多肽。本领域内的那些技术人员应了解，依据本发明应用的CpnlO 的精确一致性可以依据许多因素而不同，例如要治疗的物种，以使CpnlO 可被选择以衍生自要治疗的物种。
CpnlO可以是天然的、源自天然的、重组的或合成的CpnlO。在Morton 等人在2000年的(Immunol Cell Biol 78:603-607)、 Ryan等人在1995年的 (J Biol Chem 270:22037-22043)和Johnson等人在2005年的(J Biol Chem 280:4037-4047)中说明的方法是用于重组和合成Cpnl0蛋白质的适合的生 产方法的实例，而在Somodevilla-Torres等人在2003年的(Protein Expression and Purification 32:276-287)、 Ryan等人在1995年的(J Biol Chem 270:22037画22043)和Zhang等人在2000年的(J Neurol Sci 182:5-15) 中说明的方法是用于天然和源自天然的CpnlO蛋白质的适合的生产方法 的实施例，尽管技术人员应了解，本发明不受限于所应用的纯化或生产
CpnlO。
依据本发明所用的CpnlO多肽和肽片段可以用标准重组核酸技术得 到或可以例如用传统的液相或固相合成纟支术合成。CpnlO肽可以通过用 诸如endoLys-C、 endoArg-C、 endoGlu-C和葡萄球菌V8-蛋白酶的一个或 多个蛋白酶消化多肽而产生。消化的肽片段能通过例如高效液相色谱 (HPLC)技术纯化。
本发明的实施方案还包括编码CpnlO的多聚核苷酸的给药。在此情 况下，多聚核香酸典型地被可操作地与启动子连接，以使适合的多肽序 列在多聚核芬酸给予个体后产生。多聚核苦酸可以以载体被给予个体。 载体可以是质粒载体、病毒载体、或适于外源序列的插入到、它们的引 入到真核细胞和引入的序列表达的任何其他适合的载体。典型的，载体 是真核细胞表达载体，可以包括表达控制和处理序列，如启动子、增强 子、核糖体结合部位、多腺苷酸化信号和转录终止序列。被给药的核酸 构建体可以包含净果DNA或可以与一个或多个药学上可接受载体一起以 组合物的形式存在。
CpnlO多肽可以具有如SEQ ID NO:l所列的氨基酸序列。编码CpnlO 的多聚核苷酸的核苷酸序列可以是如SEQ ID NO:4所列的，或在此显示与SEQIDNO:4的序列杂交的充分序列一致性。在可选择的实施方案中， 多聚核苷酸的核苷酸序列可以与SEQ ID NO:4所列的序列共有至少30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 85%、 90%、 96%、 97%、 98%或99%的 一致性。
本文所用的术语"多肽"和"多聚核苷酸"的范围内，是其片段和变体。 仅作为实例，如在WO 95/15338 (也就是"伴侣蛋白10" PCT申请号 PCT/AU94/00740)中说明的Cpn10的肽片段可以依据本发明的方面和实 施方案纟皮应用。
术语"片段"指核酸或多肽序列，其编码全长Cpn10蛋白质组分或是 全长Cpn10蛋白质的组分。根据多肽，片段具有与全长蛋白质一样的定 性的生物活性。依据本发明应用的Cpn10的生物活性片^a可以典型地具 有至少约50%的相应于全长蛋白质的免疫调节活性，更典型的是至少约 60%的此活性，更典型的是至少约70%的此活性，更典型的是至少约80% 的此活性，更典型的是至少约90%的此活性，和更典型的是至少约95% 的此活性。
本文应用的术语"变体"指基本上类似的分子。通常，核酸序列变体 编码具有相同的定性的生物活性的多肽。通常，多肽序列变体也具有相 同的定性的生物活性。另外，这些多肽序列变体可以共有至少50%、 55%、 60%、 65%、 70%、 75%、 80%、 85%、 90%、 95%、 96%、 97%、 98%或 99%的序列一致性。
另外，变体多肽可以包括类似物，其中术语"类似物，，指为Cpn10衍 生物的多肽，其中衍生物包括一个或多个氨基酸添加、删除、取代，使 得多肽基本上保留与天然Cpnl0相同的功能。本领域内众所周知的，一 些氨基酸可以在多肽内改变而不会改变多肽的活性(保守取代)。术语"保 守氨基酸取代"指多肽链(蛋白质一级序列)中 一个氨基酸取代或替代为具 有相似特性的另一个氨基酸。例如，带电荷氨基酸谷氨酸(Glu)被类似的 带电荷氨基酸天冬氨酸(Asp)取代就是一个保守氨基酸取代。氨基酸添加 可以源于Cpn10多肽或其片段与另外一个多肽或肽融合，如多聚组氨酸 标记、麦芽糖结合蛋白融合、谷胱甘肽S转移酶融合、绿色荧光蛋白融 合，或诸如FLAG或c-myc的表位标记的添加。例如，野生型人Cpn10多肽可以在N端包含添加的GSM三肽部分(SEQ ID NO:2;参见例如WO 95/15338，其公开通过引用并入本文)或在N端具有添加的丙氨酸(A)残基 (SEQ ID NO:3; WO 2004/041300(也就是"伴侣蛋白IO免疫抑制"PCT申 请号PCT/AU2003/001467),其^^开通过引用并入本文)，或在N端具有 添加的甘氨酸(G)残基(SEQ ID NO:5; PCT/AU2006/001278("修饰的伴侣 蛋白IO，，PCT申请))，其公开通过引用并入本文。本发明也包括编码此 CpnlO的修饰形式的多聚核苷酸应用。
CpnlO变体能通过CpnlO蛋白质的突变或编码核酸的突变产生，如 通过应用本领域内的那些技术人员熟知的方法随机突变或定点诱变。此 类方'法可以在侈寸长口 Cwrewf /Votoco/s in Afo/eci//ar Bz'o/ogy (分子生4勿生4勿 学实验室指南)(Chapter 9), Ausubel et al" 1994， John Wiley & Sons, Inc., New York中被发现，其公开通过引用并入本文。变体和类似物也包括与 其他化学部分、融合蛋白质复合的多肽或其他翻译后修饰的多肽。适合 的修饰的实例在共同未决国际专利申请PCT/AU2005/000041中被说明， 其公开通过引用并入本文。
另外，CpnlO多肽或其片段可以具有其他翻译后修饰，包括侧链修 饰，例如乙酰化、脒化、曱氨酰化、还原性烷基化和本领域内技术人员 已知的其他修饰。
组合物和给药途径
些普通技术人员已知的方法和程序制备，因而可以包括药学上可接受载 体、稀释剂和/或佐剂。
组合物可以通过标准途径给药。通常，组合物可以通过肠胃外(例如 静脉内、脊柱内、皮下或肌肉内)途径、口服或外用途径给药。给药可以 是全身性、区域性性或局部性。在任何给定情况下所采用的具体给药途 径取决于许多因素，包括被治疗状态的性质、所述状态的严重性和程度、 待递送的具体化合物的需要剂量以及所述化合物可能的副作用。
通常，适合的组合物可根据本领域普通技术人员已知的方法制备， 其可包括药学上可接受的稀释剂、佐剂和/或赋形剂。所述稀释剂、佐剂和赋形剂在与组合物的其他成分相容并且对其接受者无毒的方面必须是 "可接受的"。
药学上可接受的载体或稀释剂的实例为软化水或蒸馏水；盐水溶 液；诸如花生油(peanut oil)、红花油、扭t榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油、 花生油(arachisoil)或椰子油的基于植物的油；硅油类，包括聚硅氧烷，如 聚曱基硅氧烷、聚苯基硅氧烷和聚曱苯基硅氧烷；挥发性硅酮；诸如液 状石蜡、软石蜡或角鲨烷的矿物油；诸如曱基纤维素、乙基纤维素、羧 曱基纤维素、羧曱基纤维素钠或羟丙基曱基纤维素的纤维素衍生物；低 级链烷醇，例如乙醇或异丙醇；低级芳烷醇；低级聚烷撑亚烷基二醇或 低级烷撑二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇 或甘油；脂肪酸酯，如棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯；聚 乙烯吡咯烷酮；琼脂；角叉菜胶；黄蓍树胶或阿拉伯树胶和凡士林。典 型的，所述一种或多种载体形成组合物重量的10-99.9%。
本发明组合物可以为适合通过注射给药的形式；适合口服的制剂 形式(如胶嚢剂、片剂、嚢片、酏剂)；适合外用给药的软膏、乳剂或洗剂 形式；适合作为滴眼剂给药的形式；适合通过诸如鼻内吸入或口腔吸入 的吸入给药的气雾剂形式；适合肠胃外即皮下、肌肉内或静脉内注射给 药的形式。
对于以可注射的溶液或悬浮液给药时，无毒的胃肠外可接受的稀释 剂或载体包括林格氏(Ringer's)溶液、等渗盐水、磷酸盐缓冲盐水、乙醇 和1,2丙二醇。
适于口服使用的载体、稀释剂、赋形剂和佐剂的一些实例包括花生 油(peanutoil)、液状石蜡、羧曱基纤维素钠、曱基纤维素、海藻酸钠、阿 拉伯树胶、黄蓍树胶、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、白明胶和卵磷 脂。此外，这些口服制剂包含适合的增香剂和着色剂。当以胶嚢形式使 用时，用诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯的延迟崩解的化合物包 被所述胶嚢剂。
佐剂通常包括润滑剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、杀菌剂和緩冲剂。 口服给药的固体形式包含人和兽医制药实践中可接受的粘合剂、甜 味剂、崩解剂、稀释剂、增香剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或时间延迟剂。适合的粘合剂包括阿拉伯树胶、白明胶、玉米淀粉、黄蓍树胶、 海藻酸钠、羧曱基纤维素或聚乙二醇。适合的甜味剂包括蔗糖、乳糖、 葡萄糖、阿斯巴特或糖精。适合的崩解剂包括玉米淀粉、曱基纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、黄原胶、皂粘土、海藻酸或琼脂。适合的稀 释剂包括乳糖、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、高岭土、纤维素、碳酸钙、 硅酸4丐或磷酸二钩。适合的增香剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、桔子或 树莓增香剂。适合的包衣剂包括丙烯酸和/或曱基丙烯酸和/或它们的酯的 聚合物或共聚物、蜡类、脂肪族醇类、玉米醇溶蛋白、虫胶或谷蛋白。
适合的防腐剂包括苯曱酸钠、维生素E、 a-生育酚、抗坏血酸、对羟基苯 曱酸曱酯、对羟基苯曱酸丙酯或亚硫酸氢钠。适合的润滑剂包括硬脂酸 镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石。适合的时间延迟剂包括甘油单硬 脂酸酯或甘油二^f更脂酸酯。
除了上述制剂外，口服给药的液体形式还包含液体载体。适合的液 体载体包括水；油类，如橄榄油、花生油(peanutoil)、芝麻油、葵花籽 油、红花油、花生油(arachisoil)、椰子油、液状石蜡、乙二醇、丙二醇、 聚乙二醇、乙醇、丙醇、异丙醇、甘油、脂肪族醇类、甘油三酯类或其 混合物。
口服给药的悬浮液还包括分散剂和/或悬浮剂。适合的悬浮剂包括羧 曱基纤维素钠、曱基纤维素、羟丙曱基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻 酸钠或乙酰基醇。适合的分散剂包括卯磷脂，脂肪酸(诸如硬脂酸)的聚 氧乙烯酯，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯或聚氧乙烯山梨醇二油酸酯、聚氧 乙烯山梨醇单硬脂酸酯或聚氧乙烯山梨醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇 单月桂酸酯或聚氧乙烯山梨醇二月桂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯 或聚氧乙烯山梨聚糖二油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单硬脂酸酯或聚氧乙 烯山梨聚糖二硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单月桂酸酯或聚氧乙烯山梨 聚糖二月桂酸酯等等。
口服给药的乳剂还包括一种或多种乳化剂。适合的乳化剂包括上述 示例性分散剂或诸如瓜尔胶、阿拉伯树胶或黄蓍树胶的天然树胶。
制备肠胃外给药组合物的方法对本领域技术人员而言是显而易见 的，并详细描述在Remington's Pharmaceutical Science(雷明顿药物科学)，
2915th ed., Mack Publishing Company, Easton， Pa.中，该文献通过引用并入本 文。
本发明外用制剂包括活性成分和一种或多种可接受的载体以及任选 的任何其他治疗成分。适合外用给药的制剂包括适合通过皮肤渗透到需 要治疗部位的诸如搽剂、洗剂、乳剂、软膏或糊剂的液体制剂或半液体 制剂，以及适于对眼睛、耳朵或鼻子给药的滴剂。
本发明滴剂包括无菌水或油状溶液或悬浮液。这些滴剂的制备可通 过将活性成分溶解在杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其他适合的防腐剂 的水溶液中，任选地包括表面活性剂。随后通过过滤澄清所得溶液，转 移到适合的容器中并灭菌。通过维持在90。C-100。C半小时的高压蒸汽灭 菌或通过滤过除菌法实现灭菌，接着通过无菌操作转移到容器中。适合 包含在滴剂中的杀菌剂和杀真菌剂的实例为硝酸苯汞或醋酸苯汞 (0.002%)、苯扎氯铵(0.01%)和醋酸氯己定(0.01%)。适合制备油状溶液的 溶剂包括甘油、稀乙醇和丙二醇。
本发明洗剂包括适合应用到皮肤或眼睛的洗剂。洗眼剂包括任选地 含有杀菌剂的无菌水溶液，可通过类似于上述关于制备滴剂的方法制备。 应用到皮肤的洗剂或搽剂还包括诸如乙醇或丙酮的快速干燥和冷却皮肤 的制剂，和/或诸如甘油的湿润剂，或诸如蓖麻油或花生油(arachis oil)的 油。
本发明乳剂、软膏或糊剂为适合外用的活性成分的半固体制剂。它 们的制备是通过将单独的磨成细粉或弄成粉状形式的活性成分或在水或 非水液体溶液或悬浮液中的磨成细粉或弄成粉状形式的活性成分与油脂
性基质或非油脂性基质混和。所述基质包括诸如硬石蜡、软石蜡、液体 石蜡、甘油、蜂蜡、金属鬼的烃类；诸如杏仁油、玉米油、花生油(arachis oil)、蓖麻油或橄榄油的天然来源的油；羊毛脂或其衍生物；或诸如硬脂 酸或油酸的脂肪酸以及诸如丙二醇或聚乙二醇的醇。
所述组合物可掺入任意适合的表面活性剂，如阴离子表面活性剂、 阳离子表面活性剂或诸如山梨坦酯或其聚氧乙烯衍生物的非离子表面活 性剂。还包括诸如天然树胶、纤维素衍生物的悬浮剂或诸如矽杂质 (silicaceous)硅酸盐的无机物质以及诸如羊毛脂的其他成分。也以脂质体形式进行所述组合物的给药。脂质体通常衍生自磷脂类 或其他脂质物质，并通过分散在水介质中的单层或多层含水液晶形成。 可采用能形成脂质体的任何无毒生理学上可接受的并且可代谢的脂质。 脂质体形式的所述组合物包含稳定剂、防腐剂和赋形剂等。优选的脂质 为天然的与合成的磷脂类和磷酯酰胆碱(卵磷脂)。形成脂质体的方法为本
领域已知，关于这方面可具体参考Prescott, Ed" Methods in Cell Biology (细胞生物学方法)，Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y, (1976)， p.33a化《.，其内容通过引用并入本文。
所述组合物可与大量的聚乙二醇(PEG)衍生物偶联。添加PEG到蛋 白上(聚乙二醇化)为已成熟建立的方法，用于降低蛋白的血浆清除率，由 此增加它们的效力(Nucci etal， 1991，爿dv. Z>wgDe/. i ev, 6:133)。聚乙二醇 化的其他益处包括更强的蛋白稳定性、降低的免疫原性、增强的可溶性 和对蛋白质水解降低的敏感性(Sheffield W. 2001， Cwr Z>wg 7brge" CaW/ovosc //aewato/ 1:1 -22)。 PEG分子包含基本重复结构
(OCH3CH2)n-OH,并根据它们的分子量分类。PEG衍生物与蛋白偶联增 加它们的水动力学半径，通常它们半衰期的增加直接与所结合的PEG链 大小有关(Sheffield W.2001, CWr Z>wg r"rgefe GaWomsc //a倒ato/ Dz離cQ:l-22)。
也以微粒形式进行所述组合物的给药。由聚丙交酯(PLA)、聚丙交酯 -共-乙交酯(PLGA)和s-己内酯(-己内酯)形成的可生物降解的微粒广泛用 作药物载体以增加血浆半衰期，由此延长效力(R. Kumar, M.， 2000， / 尸/zarm尸/zawwce^ 3(2) 234-258)。微粒被配制用于递送一 系列药物候 选物，包括疫苗、抗生素和DNA。另外，开发这些制剂用于不同的递送 途径，包括胃肠外皮下注射、静脉注射和吸入。
所述组合物可掺入由蔗糖醋酸异丁酸酯(SAIB)与有机溶剂或有机溶 剂混合物组成的控制释放的基质。可将聚合物添加剂添加到作为释放改 良剂的媒介物中以进一步增加粘性并降低释放率。SAIB为公知的食品添 加剂。它是疏水性很强、完全酯化的蔗糖衍生物，标称比为异丁酸酯 乙酸酯=6: 2。作为混和性酯，SAIB不结晶，且以澄清的粘性液体存在。 将SAIB与诸如乙醇或苯曱醇的药学上可接受的有机溶剂混合降低混合物的粘性足以使得可用于注射。可将活性药物成分添加到SAIB递送媒介 物以形成SAIB溶液或悬浮液制剂。当皮下注射所述制剂时，溶剂从基质 中扩散使得SAIB-药物或SAIB-药物-聚合物的混合物原位形成储库。
出于本发明目的，分子和药剂可作为组合物治疗性或者预防性给予 个体。在治疗性应用中，可以以足以治疗或至少部分控制疾病和其并发 症的量将所述组合物给予已患疾病的患者。
所述组合物应提供足以有效治疗所述患者的分子或药剂量。 对任何具体患者的治疗有效剂量水平取决于多种因素，包括被治疗 的病症和病症的严重性；所采用的分子或药剂的活性；所采用的组合物； 患者的年龄、体重、 一般健康、性别和饮食；给药时间；给药途径；分 子或药剂的隔离率；治疗的持续时间；用于联合或同时治疗的药物以及 医学中公知的其他相关因素。
通过常规实验，本领域技术人员能确定治疗可适用疾病所需要的药 剂或化合物的有效无毒量。
一般地，期望的有效剂量范围为约0.0001-1000 mg/kg体重/24小时； 通常约0.001-750 mg/kg体重/24小时；约0.01-500 mg/kg体重/24小时； 约0.1-500 mg/kg体重/24小时；约0.1-250 mg/kg体重/24小时；约1.0-250 mg/kg体重/24小时。更典型地，期望的有效剂量范围为约1.0-200 mg/kg 体重/24小时；约1.0-100 mg/kg体重/24小时；约1.0-50 mg/kg体重/24 小时；约1.0-25 mg/kg体重/24小时；约5.0-50 mg/kg体重/24小时；约 5.0-20 mg/kg体重/24小时；约5.0-15 mg/kg体重/24小时。
可选地，有效剂量高达约500mg/m2。通常，期望的有效剂量范围为 约25-500 mg/m2,优选地约25-350 mg/m2，更优选约25-300 mg/m2，还 更优选约25-250 mg/m2,甚至更优选约50-250 mg/m2，甚至还更优选约 75-150 mg/m2。
通常，治疗性应用中，在疾病状态的持续时间中治疗。
另外，根据被治疗疾病状态的性质和程度、给药形式、途径和部位、 以及被治疗特定个体的自然状况确定个体剂量的最佳量和时间间隔，这 对本领域普通技术人员而言是显而易见的。并且，通过常规技术可确定 这种最佳条件。本领域技术人员采用常规疗程确定试验可确定最佳疗程，如在确定 天数内，每天给予组合物剂量的次数，这对本领域普通技术人员而言也 是显而易见的。
CpnlO激动剂和拮抗剂
本发明也包括CpnlO的激动剂和拮抗剂的应用以及筛选和产生此类 激动剂和拮抗剂的方法。
Cpn 10激动剂和拮抗剂可以依据其对TLR3 、 TLR4、 TLR7和/或TLR9 信号和免疫调节剂分泌的作用而特别设计和筛选。
抗体可以作为CpnlO、或其片段或类似物的激动剂或拮抗剂。优选 适合的抗体由CpnlO多肽的不连续区域或片段制备，特别是包括在赋予 蛋白酶活性和/或伙伴结合或底物结合的那些。抗原ConlO多肽含有至少 约5个，优选至少约10个氨基酸。
的。例如，抗-CpnlO单克隆抗体，典型地含有Fab部分，可以用在 Antibodies-A Laboratory Manual, Harlow and Lane， eds., Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1988)中说明的杂交瘤技术来制备。
基本上，在直接对CpnlO或其片段或类似物的单克隆抗体的制备中， 通过培养中的连续细胞系提供用于抗体分子的产生的任何技术可以被应 用。这些包括最初由Kohler等人于1975年在Nature, 256:495-497中开发 的杂交瘤技术，以及三体杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人, 1983, Immunology Today, 4:72)、和产生人单克隆抗体的EBV-杂交瘤技术 (Cole等人，在Mwoc/o"a/ Jw^ocZ/as朋d Ca"cer 77zera^ (单克隆抗体和 癌症治疗)，pp. 77-96， Alan R.Liss， Inc., (1985)中)。永生的、产生抗体的细 胞系能通过除融合外的其他技术产生，如B淋巴细胞用致癌DNA直接转 化，或用Epstein-Barr病毒转染。见，例如，M. Schreier等人的"Hybridoma Techniques (杂交瘤技术),，(1980) 、 Hammerling等人的"Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas (单克隆抗体和T-细胞杂交瘤细 胞),，(1981)、 Kennett等人的"Monoclonal Antibodies (单克隆抗体)，，(1980)。
总之，产生单克隆抗体的杂交瘤的产生方式是，将骨髓瘤或其他自保持细胞系与淋巴细胞融合，所述淋巴细胞从哺乳动物脾中获得，并用
其识别因子结合部分、或识别因子、或其原点-特异DNA-结合部分超免
疫。杂交瘤产生可用于实践本发明的单克隆抗体，这通过其与本识别因 子的免疫反应能力以及其抑制目标细胞中的特定转录活性的能力确定。
可用于实施本发明的单克隆抗体能通过起始单克隆杂交瘤培养产 生，所述单克隆杂交瘤培养包括含有杂交瘤的营养培养基，所述杂交瘤 分泌适当的抗原特异性的抗体分子。培养保持足以使杂交瘤向培养基中 分泌抗体分子的条件和时间。含抗体培养基而后被收集。抗体分子而后 能进一步通过公知的技术分离。
类似的，在本领域内有各种已知操作可用于产生多克隆抗体。为了
产生抗-CpnlO多克隆抗体，各种宿主动物能通过CpnlO、或其片段或类 似物的注射而被免疫，其包括但不限于兔、小鸡、小鼠、大鼠、绵羊、 山羊等。另外，CpnlO多肽或其片段或类似物能与免疫原载体偶联，例 如，牛血清白蛋白(BSA)或镇眼帽贝血蓝蛋白(KLH)。同时，各种佐剂可 以被应用以增加免疫学响应，包括但不限于Freund's(完全和不完全)、矿 物凝胶如氢氧化铝、表面活性物质如溶血卵磷脂、多聚醇、聚阴离子、 肽、油乳状物、镇眼帽贝血蓝蛋白、二硝基酚、和潜在可用的人佐剂如 BCG(卡介苗)禾口^豆'J 、才奉卄犬牙干菌(Coo^e^actehMm porvww)。
期望的抗体的筛选也能通过各种本领域内已知的技术完成。抗体的 免疫特异性结合的分析可以包括，但不限于，放射性免疫测定 (radioimmunoassay), ELISA(酶联免疫吸附测定)、夹心免疫测定、放射免 疫测定(immunoradiometric assay)、凝胶扩散沉降反应、免疫扩散测定、 原位免疫测定、蛋白质印记(Westemblot)、沉淀反应、凝集测定、补体结 合测定、荧光免疫测定、A蛋白测定、和免疫电泳测定等(见，例如，Ausubel 等人，eds， 1994， Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York)。抗体结合可以依据一级抗体上的可测定标记测 定。可选择的，抗体可以依据其与二级抗体或被适当标记的试剂结合而 测定。用于测定免疫分析中的结合的各种方法是本领域内已知的，并在 本发明的范围内。
由抗CpnlO或其片^殳或类似物产生的抗体(或其片段)具有对CpnlO的结合亲和力。优选的，抗体(或其片段)具有大于约105 M",更优选大
于约106 M",还更优选大于约107 M"和最优选大于约108 M"的结合亲 和力(affinity)或亲和力(avidity)。
在得到适合量的本发明抗体的方面，可以用不含血清的培养基成批 发酵制造抗体。当发酵后，抗体可以通过多步操作结合层析法和病毒灭 活/去除步骤被纯化。例如，抗体可以首先用A蛋白亲和层析法分离，而 后用溶剂/洗涤剂处理以使任何脂质嚢膜病毒灭活。进一步纯化，典型地 通过阴离子和阳离子交换色谱可以被应用以除去剩余蛋白、溶剂/洗涤剂 和核酸。此纯化的抗体可以进一步用凝胶过滤柱纯化和配制于0.9%生理 盐水中。配制的大量制备物而后可以被灭菌和过滤并去除病毒。
除了抗体之外的激动剂和拮抗剂也可以被应用。候选激动剂或拮抗 剂可以通过与TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9、和任选的TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9激动剂形成分子复合物的能力而识别。另外，候选拮抗剂 可以通过预防或中断包含CpnlO，和TLR3、 TLR4、 TLR7或TLR9，和 任选的TLR3 、 TLR4 、 TLR7或TLR9激动剂的分子复合物的形成的能力 而识别。
用于识别和产生激动剂和拮抗剂的技术和操作是本领域内的技术人 员公知的，包括诸如合成化学库(如组合库)的分子库的筛选，结构数据库 的计算机辅助篩选，计算机辅助模拟和/或设计，或更传统的检测分子结 合相互作用的生物物理技术。
现在将参考下述具体实施例更详细地描述本发明，所述具体实施例 不应解释为以任何方式限制本发明的范围。
实施例
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对于下列实施例中说明的试验，重组人CpnlO(GenBank Accession No. X75821)在Johnson等人2005年的(J Biol Chem 280:4037-4047)中说明的 co//(大肠杆菌)中产生。纯度用SDS-PAGE确定为〉97。/。。 CpnlO的冷 冻等分部分仅当应用前才被解冻。在GroEL介导的硫氰酸酶再折叠测定 中，所有CpnlO批次显示与大肠杆菌相同的摩尔活性(数据未显示)。
35实施例1-通用材料和方法 细胞培养和细胞信号分子
含有50 |aM的2-巯基乙醇(2-ME) (Gibco)和1%的非必要氨基酸 (Gibco)的补充RPMI(SPP-036)被应用于全部细胞培养试验中，不同地与 重组人GM-CSF (R&D Systems, #215- GM, Lot No AR115021)、重组人 IL画4 (R&D Systems, #204 IL， Lot No AG235051)、 CD14+微珠(Micro Beads) (Miltenyi #130-050-201， Lot No 5050927008)和源自大肠杆菌的LPS (Sigma #L6529, Lot No 015K4103)—起。 未成熟DC产生
PBMC从健康志愿者中制备(LTP-062.02)。 PBMC储液被储存在液氮 中的细胞管中(LTP-063-03)。单核细胞通过依据制造商的说明书使用 CD14+微珠纯化。5xl07 CD14+单核细胞被接种于含有2-ME和非必要氨 基酸的20ml补充RPMI的75-cm2烧瓶中。为了产生未成熟DC， GM-CSF (10 jig/ml)加IL-4 (10吗/ml) (GM-CSF/IL-4-DC)被添加至培养物中。在培 养4天时，10ml新鲜的含有细胞因子的培养基被添加。 在CpnlO存在或不存在下的DC成熟
未成熟DC在第五天被收获，洗涤并以lx106细胞/孔的浓度和3ml 的补充RPMI/孔涂板于6孔板中。DC的成熟通过LPS(0.12 ng/ml)诱导20 小时。Cpn10 (10昭/ml)在添加LPS前1小时被添加。 细胞表面免疫分型
成熟DC #皮收获、洗涤并在4。C下用随后的由BD: CD14-APC-Cy7、 HLA画DR-APC、 CDla画PE、 CD1 lc-PE、 CD80-PE、 CD83-PE、 CD86-PE 和CD40-PE而来的APC-Cy7-、 PE-或APC-偶联的单克隆抗体(mAB)标记 30分钟。所用的同型对照为IgG广APC-Cy7、 IgGrAPC和IgG广PE。死细 胞和残骸基于其光散射性从分析中被排除。分析在BD FACS-Array流式 细胞仪上进行。 DC的细胞因子释放的分析
DC在培养5天后收获，洗涤和以lxl06/ml涂板于平底^f敖稀释板。DC 用LPS (0.15 ng/ml)成熟20小时。为评估CpnlO在DC细胞因子产生的作用，CpnlO (0.1-10 pg/ml)在LPS添加前1小时净皮添加。上清液,皮收获并 在-20。C下储存。TNF-a在培养物上清液中的积聚随后用CpnlO孵育DC 20小时，通过ELISA用R&D DuoSet试剂盒依据制造商的说明书评估。 原发混合白细胞反应(MLR)测定
CDA+ T细月包通过用CD4 T细胞分离试剂盒II (Miltenyi, # 130-091-155, Lot No 5060928051)依据制造商的说明书从新鲜血液中纯 化。T细胞的纯度通过流式细胞仪常规检测。总共lxl()S个T细胞与lx104 个DC在CpnlO (0.1-10吗/ml)存在或不存在下共培养6天。上清液被收 集并通过ELISA分析IFN-y积聚。细胞增殖用CyQUANT增殖检测试剂 盒(分子探针# C35006, Lot No 45179A)依据制造商的说明书评估。
实施例2-Cpnl0在体外降低DC成熟
培养的源自单核细胞的DC ^皮应用以评估CpnlO调节响应于LPS的 DC成熟的能力。单核细胞转化成DC通过CDla和CD14细胞表面表达 的流式细胞仪分析验证。CDla+ CD14- DC被进一步分析成熟标记物HLA-DR、 CD40、 CD80、 CD83和CD86的表面表达。当CpnlO在成熟期间被 添加时，响应于LPS的HLA-DR的平均荧光强度(MFI)(图l)被显著降低 (p<0.05)。相反，在不存在激动剂时，HLA-DR的表达在用CpnlO孵育的 未成熟DC上是不变的。(图1代表3个独立的实验。)
另外发现，当源自单核细胞的DC在上清液的测试前与CpnlO —起 孵育20小时时，在TNF-a组成性释放进细胞培养液上有显著和剂量依赖 的降低。这些结果可以反应CpnlO降低细胞活化的能力(图2，代表4个 独立的实马全)。
实施例3-CpnlO调节DC对T细胞的刺激
在原发混合白细胞反应(MLR)中，CpnlO调节DC对T细胞的刺激的 能力可以与CpnlO对响应于诸如前列腺素E2、 IL-1(3、 IL-6和TNF-a或 可溶性三聚CD40L的配体的DC成熟的作用的分析一起被研究。如图3 所示，培养的源自单核细胞的DC被用于评估CpnlO调节T细胞活化的 能力，此T细胞活化响应于在测试细胞培养上清液的IFN-y产生前与异源CD4+ T细胞共培养6天。图3显示的数据(代表2个独立的实验)表明， IFN-y积聚被CpnlO显著降低。图4显示的数据证明，在原发MLR期间， CpnlO不影响T细^^曾殖，如CyQUANT细^^增殖测定中所确定的。(图 3的数据代表2个独立的实验)。
实施例4-用于治疗的组合物
依据在此提供的实施本发明的最佳方式，特别优选的组合物概述如 下。下述仅作为组合物的示例性实例被解释，不以任何方式作为本发明 的范围的限制。
实施例4(a)-用于肠胃外给药的组合物
用于肌内注射的组合物能被制备以含有lml的灭菌緩沖水，和lmg 适当的化合物。
类似的，用于静脉输注的组合物可以包含250ml灭菌林格氏(Ringer's) 溶液，和5mg适当的化合物。 实施例4(b)-可注射肠胃外给药的组合物
适合于通过注射给药的组合物可以通过将以重量计1%的适当的化 合物混合于以体积计10%的丙二醇和水中而制备。溶液通过过滤灭菌。 实施例4(c)-胶嚢组合物
适合的化合物的胶嚢形式的组合物可以通过将50 mg粉末形式的试 剂或化合物、100 mg乳糖、35 mg滑石和10 mg硬脂酸4美添入标准两件 硬胶嚢中而制备。 实施例4(d)-滴眼剂组合物
用于作为滴眼剂递送的典型组合物扭克述如下
适合的化合物 0.3g
尼泊金曱酯 0.005g
尼泊金丙酯 0.06g
纯化水 约至100.00ml
在75。C下，尼泊金曱酯和尼泊金丙酯被溶解在70ml纯水中，得到的 溶液被冷却。适合的化合物而后被添力。，溶液通过膜过滤器(0.22iim孔径) 过滤灭菌，并无菌包装至灭菌容器中。实施例4(e)-用于吸入给药的组合物
对容量为20-30 ml的气雾剂容器，将0.5-0.8%重量的诸如聚山梨酯 85或油酸的润滑剂与10 mg适合的化合物的混合物分散在诸如氟利昂的 喷射剂中，装入适合的气雾剂容器中用于鼻内或口腔吸入给药 实施例4(f)-软骨组合物
通常作为软膏递送的组合物包括将1.0 g适合的化合物与100.0 g白
软石蜡一起分散产生光滑均 一 的产物。
权利要求
1. 通过调节至少一个MHC分子的细胞表面表达水平、来调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的免疫反应的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
2. 如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括通过调节至少一 个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平、来调节个体或其至少一个 细胞、组织或器官的免疫反应，包括给予有效量的伴侣蛋白10。
3. 通过调节至少一个MHC分子的细胞表面表达的水平来治疗或预 防个体的疾病或状态的方法，其中所述方法包括给予个体有效量的伴侣 蛋白10。
4. 如权利要求3所述的方法，其中所述方法还包括通过调节至少一 个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平治疗或预防个体的疾病或状 态，包括给予有效量的伴侣蛋白10。
5. 用于调节个体或其至少一个细胞、组织或器官的至少一个MHC 分子的细胞表面表达的水平的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴 倡蛋白10。
6. 如权利要求5所述的方法，其中所述方法还包括调节个体或其至 少一个细胞、组织或器官的至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达 的水平，包括给予有效量的伴侣蛋白10。
7. 如权利要求2、 4或6的任一权利要求所述的方法，其中所述其他 细胞表面分子是共刺激分子。
8. 如权利要求1-7的任一权利要求所述的方法，其中所述MHC分子选自MHCI类分子、MHCII类分子、或非经典的MHC分子。
9. 如权利要求8所述的方法，其中所述MHCII类分子选自HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
10. 如权利要求1-9的任一权利要求所述的方法，其中所述细胞表面 表达是抗原呈递细胞的细胞表面表达。
11. 如权利要求10所述的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 月包、 一对突细力包和B细月包。
12. 如权利要求1-11的任一权利要求所述的方法，其中所述伴侣蛋 白IO是源自天然的、重组产生的或合成产生的伴侣蛋白10。
13. 如权利要求1-12的任一权利要求所述的方法，其中所述伴侣蛋 白IO是真核细胞起源的。
14. 如权利要求1-13的任一权利要求所述的方法，其中所述伴侣蛋 白IO是哺乳动物起源的。
15. 如权利要求14所述的方法，其中所述伴侣蛋白IO是人伴侣蛋白10。
16. 如权利要求15所述的方法，其中所述伴侣蛋白10包括SEQ ID NO: 1 、 SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所列的多肽序列。
17. 如权利要求16所述的方法，其中所述伴侣蛋白IO是乙酰化的或 非乙酰化的。
18. 如权利要求1-17的任一权利要求所述的方法，其中所述伴侣蛋白IO以编码伴倡蛋白10的多聚核苷酸形式被给药。
19. 如权利要求18所述的方法，其中所述编码伴侣蛋白IO的多聚核 芬酸位于基因构建体中，可操作地与启动子连接。
20. 如权利要求18或19的任一权利要求所述的方法，其中所述多聚 核苷酸包括SEQ ID NO:4所列的序列。
21. 用于调节个体或其至少一个组织或器官的抗原呈递细胞的功能 的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
22. 如权利要求21所述的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 月包、4对突细力包或B细月包。
23. 如权利要求21或22的任一权利要求所述的方法，其中所述功能 选自向淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。
24. 组合物，当用于治疗或预防疾病或状态时，其中所述组合物包含 伴侣蛋白IO和至少一个药学上可接受载体、稀释剂或佐剂，以及其中所 述伴侣蛋白10调节至少一个MHC分子的细胞表面表达的水平。
25. 如权利要求24所述的组合物，其中所述伴侣蛋白IO还调节至少 一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平。
26. 如权利要求25所述的组合物，其中所述其他细胞表面分子是共 刺激分子。
27. 如权利要求24-26的任一权利要求所述的组合物，其中所述MHC 分子选自MHCI类分子、MHCII类分子、和非经典的MHC分子。
28. 如权利要求27所述的组合物，其中所述MHC II类分子选自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
29. 如权利要求24-28的任一权利要求所述的组合物，其中所述细胞 表面表达是抗原呈递细胞的细胞表面表达。
30. 如权利要求29所述的组合物，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬 细月包、4对突细力包和B细月包。
31. 组合物，当用于治疗或预防疾病或状态时，其中所述组合物包含 伴侣蛋白IO和至少一种药学上可接受载体、稀释剂或佐剂，以及其中伴 侣蛋白IO调节个体或其至少一个组织或器官中的抗原呈递细胞的功能。
32. 如权利要求31所述的组合物，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬 细胞、树突细胞或B细胞。
33. 如权利要求31或32的任一权利要求所述的组合物，其中所述功 能选自向淋巴结迁移、T细胞活化或T细胞增殖。
34. 伴侣蛋白10在用于制备治疗或预防疾病或状态的药物上的用 途，其中所述伴侣蛋白IO调节至少一个MHC分子的细胞表面表达的水平。
35. 如权利要求34所述的用途，其中所述伴侣蛋白IO还调节至少一 个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平。
36. 如权利要求35所述的用途，其中所述其他细胞表面分子是共刺 激分子。
37. 如权利要求34-36的任一权利要求所述的用途，其中所述MHC分子选自MHCI类分子、MHCII类分子、和非经典的MHC分子。
38. 如权利要求37所述的用途，其中所述MHC II类分子选自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
39. 如权利要求34-38的任一权利要求所述的用途，其中所述细胞表 面表达是抗原呈递细胞的细胞表面表达。
40. 如权利要求39所述的用途，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 胞、树突细胞和B细胞。
41. 伴侣蛋白10在用于制备治疗或预防疾病或状态的药物上的用 途，其中所述伴侣蛋白IO调节个体或其至少一个组织或器官抗原呈递细 胞的功能。
42. 如;f又利要求41所述的用途，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 胞、树突细胞或B细胞。
43. 如权利要求41或42所述的用途，其中所述功能选自向淋巴结迁 移、T细胞活化或T细胞增殖。
44. 用于调节个体或其至少一个细胞、组织或器官中的一个或多个免 疫调节剂的细胞中的产生、定位和/或细胞表面表达的方法，其中所述方 法包括给予有效量的伴侣蛋白10,和其中所述伴侣蛋白IO调节至少一个 MHC分子或至少一个其他细胞表面分子的细胞表面表达的水平。
45. 如权利要求44所述的方法，其中所述其他细胞表面分子是共刺 激分子。
46. 如权利要求44或45所述的方法，其中所述MHC分子选自MHCI类分子、MHCII类分子、和非经典的MHC分子。
47. 如权利要求46所述的方法，其中所述MHC II类分子选自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
48. 如权利要求44-47的任一权利要求所述的方法，其中所述细胞表 面表达是抗原呈递细胞的细胞表面表达。
49. 如权利要求48的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细胞、 才对突细力包和B细月包。
50. 用于鉴定调节免疫反应的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 将细胞或细胞提取物与候选化合物在CpnlO存在下接触；和(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 候选化合物接触而被调节。
51. 如权利要求50所述的方法，其中所述方法还包括 与所述候选化合物接触而被调节。
52. 用于筛选多个化合物以鉴定调节免疫反应的化合物的方法，其中 所述方法包括(a) 将细胞或细月包^是:取物与所述多个化合物在CpnlO存在下接触；和(b) 确定至少一个MHC分子在所述细胞的表面上的表达是否与所述 多个化合物接触而被调节。
53. 如权利要求52所述的方法，其中所述方法还包括(c) 确定至少一个其他细胞表面分子在所述细胞的表面上的表达是否 与所述多个化合物接触而被调节。
54. 用于诱导调节个体或其至少一个细胞、组织或器官中的至少一个 MHC分子的细胞表面表达的水平的方法，其中所述方法包括给予有效量 的伴侣蛋白10。
55. 如权利要求54所述的方法，其中所述方法还包括调节个体或其 至少 一个细胞、组织或器官中的至少 一个其他细胞表面分子的细胞表面 表达的水平，包括给予有效量的伴侣蛋白10。
56. 如权利要求51、 53或55的任一权利要求所述的方法，其中所述 其他细胞表面分子是共刺激分子。
57. 如权利要求50-56的任一权利要求所述的方法，其中所述MHC 分子选自MHCI类分子、MHCII类分子、和非经典的MHC分子。
58. 如^f又利要求57所述的方法，其中所述MHC II类分子选自 HLA-DR、 HLA-DP和HLA-DQ。
59. 如权利要求50-58的任一权利要求所述的方法，其中所述细胞表 面表达是抗原呈递细胞的细胞表面表达。
60. 如^L利要求59所述的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 月包、 一对突细力包和B细月包。
61 .用于鉴定调节免疫反应的化合物的方法，其中所述方法包括(a) 将细胞或细胞提取物与所述候选化合物在Cpnl0存在下接触；和(b) 确定所述细胞向淋巴结的迁移或活化和/或引起T细胞增殖的能力 是否与所述候选化合物接触而被调节。
62.用于筛选多个化合物以鉴定调节免疫反应的化合物的方法，其中 所述方法包括(a) 将细胞或细胞提取物与所述多个化合物在CpnlO存在下接触；和(b) 确定所述细胞向淋巴结的迁移或活化和/或引起T细胞增殖的能力 是否与所述多个化合物接触而被调节。
63. 如权利要求61或62所述的方法，其中所述细胞是抗原呈递细胞。
64. 如权利要求63所述的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 月包、4对突细力包或B细月包。
65. 用于调节个体或其至少一个组织或器官中的抗原呈递细胞的功 能的方法，其中所述方法包括给予有效量的伴侣蛋白10。
66. 如权利要求65所述的方法，其中所述抗原呈递细胞选自巨噬细 胞、树突细胞或B细胞。
67. 如权利要求65或权利要求66所述的方法，其中所述功能选自向 淋巴结的迁移、T细胞活化或T细胞增殖。
全文摘要
本发明涉及应用伴侣蛋白10调节抗原呈递细胞的功能。更特别的，本发明涉及调节诸如HLA的MHC分子的细胞表面表达。
文档编号A61K38/16GK101443032SQ200780013496
公开日2009年5月27日 申请日期2007年3月1日 优先权日2006年3月2日
发明者卡罗琳·阿曼达·多宾, 芭芭拉·简·约翰逊, 英格·E·A·弗莱驰 申请人:悉生物有限公司