专利名称：：局部施用于眼的包含羧酸nsaids的酰胺衍生物的制剂的制作方法局部施用于眼的包含羧酸NSAIDS的酰胺衍生物的制剂
背景技术：
：本发明涉及可局部施用于眼的羧酸非甾体抗炎药("NSAID，s，，)的酰胺衍生物的制剂。本发明的制剂用于治疗眼部炎性障碍。许多非甾体抗炎药("NSAID，s")是已知的。一类已知的NSAID，s是羧酸NSAIDs。在其他用途中，羧酸NSAID，s通常用于白内障外科手术。尽管在手术操作和仪器方面有所改善，但是应用局部NSAID，s在白内障外科手术后角膜溃疡发病率持续很低。最近的科学文献表明当NSAID，s使用浓度高于抑制环加氧酶所需的浓度时，NSAID，s启动程序性细胞死亡(凋亡)(即前列腺素合成)。参见，例如Zhang等人，LeukemiaResearch,24:385-392(2000);Taib等人，SaudiMedicalJournal,25(10):1360-1365(2004)和Gomez-Lechon等人，BiochemicalPharmacology,66:2155-2167(2003)。凋亡是由自由^理启动的，其引起线粒体肿胀并且释放细胞色素C。关于释放，细胞色素C活化丝氨酸蛋白酶(胱天蛋白酶-9)，其促进其它胱天蛋白酶的活化，从而引起随后的核成分降解。所需的是羧酸NSAID，s的局部制剂，其能最小化预防或消除肿胀响应和细胞色素C从线粒体释放，从而降低或消除羧酸NSAID，s的局部使用遇到的副作用。美国专利No.4,910,225公开了某些羧酸NSAID，s的局部制剂，其包含用于增强稳定性的亚硫酸盐和水溶性聚合物。，225专利的組合物中的任选的亚石克酸盐添加物的浓度是"在约0.1至1.0w/w。/。范围内"('225专利的笫3栏，第61-62行)。，225专利没有涉及包含小于约0.1w/w。/。的亚硫酸盐的羧酸NSAID组合物或包含羧酸NSAID，s的酰胺衍生物的任何组合物。美国专利No.5,475,034公开了某些芳基乙酸的酰胺衍生物的局部制剂。，034专利中公开的组合物没有一个包含亚硫酸盐添加物。发明概述9本发明的组合物是可局部施用的眼用组合物，其包含抗炎有效量的羧酸NSAID的酰胺衍生物。另外，该组合物包含减弱或预防线粒体肿胀和细胞色素C释放的有效量的亚硫酸盐。该组合物还包含可眼用的载体。本发明还涉及在需要的哺乳动物中治疗目艮部炎性障碍的方法。在本发明的一个实施方案中，将包含抗炎有效量的羧酸NSAID的酰胺衍生物、减弱或预防线粒体肿胀和细胞色素C释放的有效量的亚硫酸盐以及可眼用的栽体的组合物局部施用于哺乳动物眼部。在另一个实施方案中，将包含亚硫酸盐和羧酸NSAID的酰胺衍生物的单独组合物分别依次施用于哺乳动物眼部。在其他因素中，本发明基于以下发现当线粒体受到自由基(例如羟基自由基、超氧化物和过氧化物)应激时，其对羧酸NSAID，s(包括作为羧酸NSAID，s的酰胺衍生物的代谢产物形式的羧酸NSAID，s)敏感并且肿胀。线粒体肿胀(即通透性转变通道开放)伴随细胞色素C的释放和凋亡途径的启动。该形态学变化是由线粒体通透性转变通道开放诱导的。线粒体转变通道抑制剂能够通过预防线粒体肿胀、细胞色素C释放以及随后的角膜细胞凋亡而预防由炎症、过氧化物-应激的组织暴露于NSAID，s诱导的角膜溃疡。角膜细胞对于角膜愈合是至关重要的，其产生细胞因子和生长因子，包括组织或伤口修复所需的细胞外基质组分的合成。附图简述图1表示加入羧酸NSAID，s后非-过氧化物应激(对照)线粒体的体外肿胀响应的时间过程。图2表示加入t-BOOH(150nM)、t-BOOH/双氯芬酸(150|uM/30pM)、t-BOOH/双氯芬酸(150nM/100(iM)或t-BOOH/双氯芬酸(150pM/300pM)后线粒体的体外肺胀响应的时间过程。图3表示加入a)60pM氨芬酸；b)60溴芬酸；c)300jxM亚硫酸钠/60nM氨芬酸；d)300|aM亚硫酸钠/60nM溴芬酸；或e)什么都不加(阴性对照)；CaCl2(阳性对照)后过氧化物(t-BOOH，150^M)-应激线粒体的体外肿胀响应的时间过程。发明详述除非另外说明，所有成分浓度以。/。重量/体积(。/。w/v)的单位呈现。适用于本发明的组合物和方法的羧酸NSAID，s的酰胺衍生物是式(I)、(II)和(III)那些化合物其中，对于式(I)和(II)R^H、Cw(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面Z所定义的)、-(CH2)n-X(CH2)n，A;R2=H、d.3烷基、OR3;R3=H、Cw烷基；R4=H、Me画、MeO-、MeS-;R5=H、Me-;X-什么也不是(碳-碳键)、O、C=0、OC(=0)、C(=0)0、C(=0)NR3、NR3C(=0)、S(0)n2、CHOR3、NR3;X2、X2'独立地-H、F;n=2-6;CONR1R2A=H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面Z所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面Z所定义的)；并且Z=H、Cl、F、Br、I、OR3、CN、OH、CF3、R4、N02;以及R其中R=H、d—4(非)支链烷基、CF3、SR4Y=NR，，R，；R，=H、Cw。(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nZ(CH2)n，A;n=2-6;n，=l-6;乙=什么也不是、O、C=0、OC(=0)、C(-O)O、C(=0)NR3、NR3C(=0)、S(0)n2、CHOR3、NR3;n2=0-2;R3=H、C^(非)支链烷基、(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)；A=H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nOR3;R，，=H、OH、OR"X和X，独立地-H、F、Cl、Br、I、OR，、CN、OH、S(0)n2R4、CF3、R4、N02;R^d一6(非)支链烷基；m=0-3;m，=0-5;并且W=0、H。优选的式(I)和(II)化合物是其中R^H、Cw(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面Z所定义的)；R2、X2、R4、R5=H;X2=F;并且Z=C1、F、Br、OH。更优选的式(I)和(II)化合物其中R^H、Cw烷基。本发明应用的最优选的式(I)化合物是2-(3-氟-4-苯基)-丙酰胺。本发明应用的最优选的式(II)化合物是5-苯曱酰基-2，3-二氢-111-吡咯里唤&71"10&1116)-1-甲酰胺。优选的式(III)化合物是其中R=H、Cu烷基；R，=H、d—6(非)支链烷基、-(CH2)nZ(CH2)n，A;乙=什么也不是、O、CHOR3、NR3;R3=H;A=H、OH、(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)；X和X，独立地H、F、Cl、Br、CN、CF3、OR，、SR4、R4;R，，=H;R、d-4(非)支链烷基；m=0-2;m，=0-2;W=H;n=2-4;并且n，=0-3。最优选的式(III)化合物是2-氨基-3-(4-氟苯甲酰基)-苯基乙酰胺；2-氨基-3-苯甲酰基-苯基乙酰胺(奈帕芬胺)；以及2-氨基-3-(4-氯苯曱酰基)-苯基乙酰胺。式(I)-(III)化合物是已知的并且可以容易地由本领域技术人员制备。参见，例如美国专利No.6,646,003和5，475，034，将其全部内容并入本文作为参考。本发明的组合物包含抗炎有效量的羧酸NSAID的酰胺衍生物。该组合物通常包含0.01至0.5。/。的羧酸NSAID的酰胺衍生物。除了式(I)-(III)的酰胺衍生物，本发明的组合物还包含亚硫酸盐。适合的亚硫酸盐包括亚硫酸钠、亚硫酸钾、亚硫酸镁、亚硫酸钩、亚疏酸氩钠、亚硫酸氢钾、亚石克酸氢镁、亚硫酸氩4弓、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾和焦亚硫酸钩。最优选的是亚硫酸钠盐(Na2S03)。本发明的组合物包含对减弱或预防线粒体肺胀和细胞色素C释放的有效量的亚硫酸盐。本发明的组合物通常包含0.001-0.09%、优选0.01-0.09%量的亚硫酸盐。本发明的组合物还包含局部施用于眼的可眼用载体。该组合物可以配制为多种可局部施用的眼用组合物，例如溶液剂、混悬剂、乳剂、凝胶剂或软骨剂。最优选的给药形式是通过含水滴眼剂，但是也可以使用凝胶剂或软膏剂。含水滴眼剂、凝胶剂和软骨剂可以根据常规技术配制，并且将包括一种或多种赋形剂。例如，可局部施用的组合物可以包含表面活性剂(例如聚山梨酯80或泰洛沙泊)、张力调节剂、防腐剂、緩冲剂和增稠剂。可以应用多种张力剂以调节组合物的张力，对于眼用组合物优选天然泪液。例如，可以将氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、葡萄糖和/或甘露醇加入到组合物中以接近生理张力。此类张力剂的量将当然取决于所加入的特别试剂而不同。但是，通常组合物具有足以使最终组合物具有可眼用的同渗质量摩尔浓度(通常约l50450mOsm，优选250-350mOsm)的量的张力剂。可以将适合的緩冲系统(例如磷酸钠、乙酸钠、杵檬酸钠、四硼酸钠或硼酸)加入至组合物中以防止在储存条件下pH偏离。特别的浓度将当然取决于所用的试剂而不同。但是，优选将选择緩冲剂以保持目标pH在pH5.5-8的范围内。局部眼用产品通常是以多剂量形式包装。通常需要防腐剂以防止在使14用中微生物污染。适合的防腐剂包括^4L氯铵、三氯叔丁醇、苯度溴铵、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯乙醇、依地酸二钠、山梨酸、聚季铵盐(polyquaternium)-l或本领域技术人员已知的其它试剂。此类防腐剂通常使用水平从0.001至1.0%w/v。本发明的单位剂量组合物是无菌的，但是通常不包含防腐剂并且是不防腐的。典型的滴眼剂制剂由下面实施例1提供。实施例1<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>实施例3-5为了评价亚石克酸盐对羧酸NSAID诱导的线粒体肿胀的作用，应用以下分析方法。根据Broekemeier等人(J.Biol.Chem1985，260，105-113)的方法，由雄性SpagueDawley大鼠的肝脏制备线粒体。简而言之，将20g肝脏在水冷的、添加207mM甘露醇、63mM蔗糖、2.0mMEGTA和2mg/mL无脂肪酸牛血清白蛋白的等渗3.0mMHEPES緩冲液(pH7.4)中用3桨进行匀浆。首先进行低速离心(600xg，IO分钟)以除去细胞核和细胞碎片。将沉淀物弃去并且将上清液在7，740xg下离心10分钟，获得粗品线粒体沉淀物。将上清液弃去并且将沉淀物悬浮于30mL冰冷的等渗洗涤緩沖液(含有207mM甘露醇和63mM蔗糖的3.0mMHEPES緩冲液，pH7.4)中。将悬浮液在7，740xg下离心10分钟。将线粒体沉淀物悬浮于30mL冰冷的洗涂緩冲液中并且在lO,lOOxg下离心10分钟。将线粒体沉淀物悬浮于适当体积的水冷的含有207mM甘露醇和63mM蔗糖的等渗3.0mMHEPES緩冲液(pH7.4)中。将线粒体悬浮液放置在冰上用于立刻分析。将一部分线粒体配制品加入至含有2.95mL等渗HEPES緩冲液(添加了琥珀酸钠和鱼藤酮)的5.0mL试管(l.Ocm光程长度)中。将适当部分的线粒体悬浮液加入至试管中并且通过540nm处的光"lt射来监测肿胀l7分钟。当监测到药物作用时，将线粒体首先对试验品暴露1分钟，然后加入緩沖液、t-BOOH(150jiM)或亚石克酸钠(300^M)。实施例3图l绘制了加入a)緩冲液(对照)；b)氨芬酸(IOOnM);c)溴芬酸(IOOluM);d)布洛芬(IOO^M);和e)双氯芬酸(100^M)后非-过氧化物应激(对照)线粒体的体外肿胀响应的时间过程。这些结果显示羧酸NSAID，s对正常的、非应激线粒体肿胀没有影响。实施例4图2绘制了加入t-BOOH(150pM)或t-BOOH/双氯芬酸(150|aM/30|LiM)、t-BOOH/双氯芬酸(150IliM/100nM)、t-BOOH/双氯芬酸(150iaM)后线粒体的体外肺胀响应的时间过程。这些结果显示与实施例3不同的是，如果线粒体用例如t-BOOH来应激，羧酸NSAID，s(例如双氯芬酸)促进线粒体肿胀。实施例5图3绘制了加入a)60|aM氨芬酸；b)60溴芬酸；c)300|iM亚硫酸钠/60pM氨芬酸；d)300pM亚硫酸钠/60|iiM溴芬酸；e)什么都不加(阴性对照)；CaCl2(阳性对照)后过氧化物(t-BOOH，150nM)-应激线粒体的体外胂胀响应的时间过程。这些结果显示当将亚硫酸盐在加入双氯芬酸之前加入至"过氧化物应激的"线粒体中，线粒体肿胀被阻止。如上所述，本发明的组合物包括羧酸NSAID的酰胺衍生物和亚疏酸盐。在优选的实施方案中，本发明还涉及治疗目艮部炎性障碍的方法，其中该方法包括给需要的哺乳动物眼部局部施用包含羧酸NSAID的酰胺衍生物和亚石克酸盐的组合物。但是，根据本发明的另一个实施方案，依次(例如在10分钟内，优选在5分钟内并且更优选在2分钟内)施用包含亚硫酸盐的组合物和包含羧酸NSAID的酰胺衍生物的组合物。在该实施方案中，单独的组合物依次施用，包含亚硫酸盐的组合物优选在包含羧酸NSAID的酰胺矛汙生物的组合物之前施用。本发明通过涉及某些优选实施方案已经被描述过，但是，应当理解的是本发明可以体现在其它特别的形式或其变更形式中而不脱离其精神或基本特征。因此，上述实施方案被认为是在所有方面进行说明而不是限制附属权利要求而不是上述所指出的本发明范围。权利要求1.可局部施用的眼用组合物，该组合物包含a)抗炎有效量的羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物，其中酰胺衍生物是式(I)-(III)化合物其中，对于式(I)和(II)R1＝H、C1-6(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面Z所定义的)、-(CH2)n-X-(CH2)n’A；R2＝H、C1-3烷基、OR3；R3＝H、C1-3烷基；R4＝H、Me-、MeO-、MeS-；R5＝H、Me-；X＝什么也不是(碳-碳键)、O、C＝O、OC(＝O)、C(＝O)O、C(＝O)NR3、NR3C(＝O)、S(O)n2、CHOR3、NR3；X2、X2’独立地＝H、F；n＝2-6；n’＝1-6；n2＝0-2；A＝H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面Z所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面Z所定义的)；并且Z＝H、Cl、F、Br、I、OR3、CN、OH、CF3、R4、NO2；以及其中对于式(III)R＝H、C1-4(非)支链烷基、CF3、SR4Y＝NR”R’；R’＝H、C1-10(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nZ(CH2)n’A；n＝2-6；n’＝1-6；Z＝什么也不是、O、C＝O、OC(＝O)、C(＝O)O、C(＝O)NR3、NR3C(＝O)、S(O)n2、CHOR3、NR3；n2＝0-2；R3＝H、C1-6(非)支链烷基、(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)；A＝H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nOR3；R”＝H、OH、OR’X和X’独立地＝H、F、Cl、Br、I、OR’、CN、OH、S(O)n2R4、CF3、R4、NO2；R4＝C1-6(非)支链烷基；m＝0-3；m’＝0-5；并且W＝O、H，b)量为0.001-0.09％(w/v)的亚硫酸盐，以及c)可眼用载体。2.权利要求l的组合物，其中对于式(I)和(II)，R^H、C"(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面Z所定义的)；R2、X2、R4、R5=H;X2=F;并且Z=C1、F、Br、OH，并且对于式(III)，R=H、Ci曙2R，=H、d—6(非)支链烷基、-(CH2)nZ(CH2)n,A;ZHt么也不是、O、CHOR3、NR3;R3=H;A=H、OH、(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)；X和X，独立地-H、F、Cl、Br、CN、CF3、OR，、SR4、R4;R，，=H;R^Cw(非)支链烷基；m=0-2;m，=0-2;W=H;n=2-4;并且n，=0-3。3.权利要求l的组合物，其中羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物选自2-(3-氟-4-苯基)-丙酰胺；5-苯甲酰基-2，3-二氢-lH-吡咯里嗪-l-甲酰胺；2-氨基-3-(4-氟苯曱酰基)-苯基乙酰胺；2-氨基-3-苯甲酰基-苯基乙酰胺和2-絲-3-(4-氯苯甲酰基)-苯基乙酰胺。4.权利要求l的组合物，其中组合物包含0.01至0.5。/。(w/v)的羧酸非齒体抗炎药的酰胺衍生物。5.权利要求1的组合物，其中组合物包含0.01-0.09。/。(w/v)的亚硫酸盐。6.权利要求l的组合物，其中亚硫酸盐选自亚硫酸钠、亚疏酸钾、亚硫酸镁、亚疏酸钓、亚硫酸氬钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氩镁、亚硫酸氩钩、焦亚-充酸钠、焦亚^克酸钾和焦亚;p危酸钩。7.权利要求6的组合物，其中亚硫酸盐是亚硫酸钠。8.在哺乳动物眼部治疗眼部炎性障碍的方法，该方法包括给哺乳动物目艮部局部施用权利要求1的组合物。9.在哺乳动物眼部治疗眼部炎性障碍的方法，该方法包括给哺乳动物眼部局部施用权利要求7的組合物。10.在哺乳动物眼部治疗眼部炎性障碍的方法，该方法包括给哺乳动物眼部依次局部施用两种组合物，其中组合物之一包含量为0.001-0.09。/。(w/v)的亚硫酸盐和可眼用载体，并且另一种組合物包含抗炎有效量的羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物和可眼用载体，并且其中羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物是式(I)-(III):其中，对于式(i)和(n)R^H、d-6(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面Z所定义的)、(CH2)n-X(CH2)nA;R2=H、<:13烷基、OR3;R3=H、Cw烷基；R4=H、Me-、MeO國、MeS-;R5=H、Me-;X-什么也不是(碳-碳键)、O、C=0、OC(=0)、C(-O)O、C(=0)NR3、NR3C(=0)、S(0)n2、CHOR3、NR3;X2、X2'独立地-H、F;n=2-6;n，=l-6;n2=0-2;A=H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面Z所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面Z所定义的)；并且Z=H、Cl、F、Br、I、OR3、CN、OH、CF3、R4、N02;以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中对于式(in)R-H、CL4(非)支链烷基、CF3、SR4Y=NR"R，；R，=H、Cwo(非)支链烷基、(非)取代的(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nZ(CH2)n,A;n=2-6;n，=l-6;Z-什么也不是、O、C=0、OC(-O)、C(=0)0、C(=0)NR3、NR3C(=0)、S(0)n2、CHOR3、NR3;n2=0-2;R3=H、C^(非)支链烷基、(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)；A=H、OH、任选(非)取代的芳基(取代基如下面X所定义的)、(非)取代的杂环(取代基如下面X所定义的)、-(CH2)nOR3;R，，=H、OH、OR"X和X，独立地-H、F、Cl、Br、I、OR，、CN、OH、S(0)n2R4、CF3、R4、N02;R4-C^(非)支链烷基；m=0-3;m，=0-5;并且<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>11.权利要求10的方法，其中包含亚硫酸盐的组合物在包含羧酸非齒体抗炎药的酰胺衍生物的组合物之前施用。12.权利要求10的方法，其中亚硫酸盐选自亚硫酸钠、亚硫酸钾、亚硫酸镁、亚硫酸钩、亚硫酸氩钠、亚硫酸氩钾、亚硫酸氩镁、亚疏酸氩钾、焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾和焦亚硫酸4丐。13.权利要求10的方法，其中羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物选自2-(3-氟-4-苯基)-丙酰胺；5-苯甲酰基-2，3-二氢-lH-吡咯里溱-l-曱酰胺；2-氨基-3-(4-氟苯甲酰基)-苯基乙酰胺；2-氨基-3-苯甲酰基-苯基乙酰胺和2-#^-3-(4-氯苯甲酰基)-苯基乙酰胺。全文摘要本发明公开了羧酸非甾体抗炎药的酰胺衍生物的局部组合物。当局部施用于眼时，该组合物具有降低引起线粒体肿胀的潜力。文档编号A61K31/166GK101426487SQ200780014134公开日2009年5月6日申请日期2007年4月26日优先权日2006年4月28日发明者G·格拉夫申请人:爱尔康公司