硫辛酸衍生物的制作方法

专利名称：：硫辛酸衍生物的制作方法
技术领域：
：a-硫辛酸第一次被分离得到是作为一种醋酸盐的替代因子。它微溶于水，可溶于特定的有机溶剂。在其分离后，a-硫辛酸最初被认为是一种维生素，但后来其被发现可由包括人在内的哺乳动物合成，也可由植物合成。负责全程合成的完整的酶途径仍然没有被最终阐明。个别研究显示，辛酸酯是作为8-C脂肪酸链的最直接的前体，半胱氨酸似乎是硫的来源。作为一种氨基化合物(硫辛酰胺)，其在复合酶化合物中作为一种辅助因子发挥作用，该复合酶化合物催化a-酮酸的氧化脱羧过程，诸如丙酮酸盐、a-酮戊二酸和支链取代的a-酮酸。a-硫辛酸是一种天然存在的抗氧化剂。(x-硫辛酸(LA)也被称作thiocticacid、1，2-二巯基-3-戊酸、1，2-二巯基-3颉草酸和6，8-硫辛酸。a-硫辛酸具有一个手性碳原子并存在两个对应体(R-和S-)。商店中销售的a-硫辛酸的形态是一种天然异构体(R-)和非天然异构体(S-)的合成混合物。天然形态的R-LA不象合成混合物那样稳定。一制造商，AstaMedica，销售用于糖尿病的R-LA，并通过Tris缓冲液用结晶的方式制备稳定态的R-LA，Tris缓冲液是一种通用的合成而非天然的缓冲液。a-LA不同的对映体形式，其组合物和衍生物(包括其还原形态)，已经被用于治疗多种疾病。例如，LA已被用于治疗循环紊乱。LA和维生素已被发现可用于产生止痛、消炎、抗坏死、抗糖尿病和其它治疗效果。LA特定的垸基化衍生物被用于治疗逆转录病毒疾病。a-硫辛酸，及其还原形态，二氢硫辛酸(DHLA)具有抗氧化特性。Lipoate(用于羧酸酯和盐的一个术语)，或其还原形态，DHLA,与活性氧物质反应，诸如超氧化物自由基、羟基自由基、次氯酸、过氧化氢自由基和纯态氧。它也通过与维生素C和谷胱甘肽相互作用保护膜，其可以依次重复利用维生素E。除了抗氧化活性，DHLA可以对铁的还原过程施以氧化强化剂作用。ot-硫辛酸的服用已经显示出对许多氧化压力模型是有益的，诸如缺血再灌注损伤(IRI)、糖尿病(a-硫辛酸和DHLA均表现出对蛋白质束缚的憎水性，如白蛋白，其能够预防糖基化反应)、白内障形成、HIV活化、神经退行性变和放射损伤。此外，lipoate能够发挥蛋白质氧化还原调节剂的作用，诸如肌球素、泌乳刺激素、硫氧还蛋白和NF-ic-B转录因子的氧化还原调节剂。Lipoate也具有其它活性。例如，DHLA巳被发现在体外是一种抗炎药剂，其同时干扰NO从发炎的巨噬细胞中的释放，并保护靶细胞不受氧自由基的攻击。在生理学的环境下，硫辛酸作为硫辛酰胺存在于至少五种蛋白质中，其中它以共价键联系于一个赖氨酰残基。这些蛋白质中的四种是a-酮酸脱氢酶复合物、丙酮酸脱氢酶复合物、支链酮酸脱氢酶复合物和a-酮戊二酸盐脱氢酶复合物。包含三个硫辛酰胺的蛋白质存在于E2酶二氢硫辛酸酰基转移酶中，其不同于每一，复t物，对于复合物的培养基来说也是特定的。一个硫辛酸残基存在蛋白质X中，其在各个复合物中是相同的。第五和硫辛酰胺残基存在于氨基乙酸裂解系统中。最近，硫辛酸己经在不同天然来源的硫辛酰赖氨酸形态中被检测到。在植物原料的研究中，硫辛酰赖氨酸成分在菠菜中是最高的。当以重量/冻干蔬菜干重表示时，菠菜中天然存在的lipoate的分布量分别高于椰菜的3倍和番茄的5倍。较低浓度的硫辛酰赖氨酸也在豌豆、芽甘蓝和米糠中被发现。在动物组织里，牛组织的丙酮粉末中的硫辛酰赖氨酸的分布量是按以下顺序描绘的1)肾2)心脏3)肝4)脾5)脑6)胰腺和7)肺。可是硫辛酸具有特定的缺点。特别地，天然形态的R-硫辛酸在超过40'C时是不稳定的，因此它在某些仓库储存环境下会降解。硫辛酸也是吸湿性的。带有一种天然盐类的天然形态的硫辛酸的稳定是需要的。012]因此，在某种意义上，需要一种组合物和/或一种制备a-硫辛酸组合物的方法，来克服可用原料的一个或多个确定的现有缺陷。简要说明013]本发明意外地提供了低聚态(x-硫辛酸的合成物。a-硫辛酸的低聚态合成物以及低聚态"游离酸"均可用于稳定营养物质，例如类胡罗卜素，其在不同情况下被认为对热、氧化作用、光、或引起物质降解的其他生理应力是不稳定的。该a-硫辛酸的低聚态复合物和其低聚态游离酸可被用做组合物，从而有助于对营养物质提供一种稳定作用。本发明中a-硫辛酸合成物(在下文中"ALAC")的准确特性没有被最后测定，不是受限于理论，相信它们是两个或更多个硫辛酸之间由硫键结合的縮合产物，因此在两个或更多个单独的a-硫辛酸单体之间形成二硫化物。ALAC能与至少一个平衡离子结合，例如一金属盐、胺或氨基酸，以及下文描述的其它的平衡离子。此外，不受限于理论，本发明所述的"ALAC"有可能进一步包括"聚合态"a-硫辛酸的合成物。目卩，由50或更多个单独的a-硫辛酸子单位间经由多重的二硫键结合的物质产生了超过50个a-硫辛酸单元的縮合物。—方面，聚合体ALAC的数量小于10%(以重量计)，尤其是，小于1%,甚至更加地小于0.5%，在一个特定的实施例中，小于0.1%重量比。本发明中游离的低聚a-硫辛酸(在下文中"ALFA")的确切特性没有被最后测定，不是受限于理论，相信它们是两个或更多个硫辛酸之间由硫键结合的縮合产物，因此在两个或更多个单独的a-硫辛酸单体之间形成二硫化物。ALFA能与至少一个平衡离子结合，例如一金属盐、胺或氨基酸，以及下文描述的其它的平衡离子以形成一种ALAC。同样地，ALAC可将该平衡离子替换为一氢原子以形成ALFA。020]不受限于理论，本发明所述的ALFA可能进一步包括"聚合态"a-硫辛酸的縮合产物。也就是说，超过50个a-硫辛酸单元的缩合产物由50或更多个单独的a-硫辛酸子单元经由多重二硫键结合产生。021]—方面，聚合体ALFA的数量小于10%(以重量计)，尤其是，小于1%，甚至更加地小于0.5%，在一个特定的实施例中，小于0.1%重量比。本发明所述的ALAC和ALFA可被本文所述的不同方法纯化。也就是说，在齐聚/聚合过程之后，通过洗涤该物质、重结晶、沉淀、用分子量切断超滤、渗滤等手段，合成的低聚物可通过除去硫辛酸、硫辛酸聚合物、不想要的副产品等方式被分离和纯化。—方面，该发明涉及一种包括一种低聚态a-硫辛酸和一个或多个平衡离子的合成物的组合物。所述的合成物可以是一种盐，一种在低聚态a-硫辛酸和平衡离子之间形成的缔合体和/或一种在两个或更多个a-硫辛酸分子和至少一个平衡离子之间形成的螯合物。n是介于大约2到大约50之间的数值，特别地介于大约10和大约20之间，特别地介于大约4到大约6之间。仍然在另一个实施例中，本发明提供了一种组合物，其包括一种平均分子量(Mw)介于大约412.6(n=2)和大约10268.5(n=50)道尔顿之间的低聚态a-硫辛酸(ALAC)合成物和一平衡离子。另一方面，本发明提供了一种低聚态a-硫辛酸合成物，通过以下过程制备030]将碱与硫辛酸在水溶液中反应；在一实施例中，该低聚态硫辛酸合成物通过收集析出的合成物而分离得到。在某些方面，根据a-硫辛酸与一个或多个平衡离子的多重的子单位(齐聚过程不含杂质)，ALAC具有超过大约99%的纯度，尤其地超过大约95%,更格外地超过大约98%以及最格外地超过大约99%(以重量计)的纯度，例如，99.5%,99.9%。用于本发明组合物的适宜的平衡离子包括，例如，碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二代取胺，或三取代胺。037]合物一方面，平衡离子为一种氨基酸，其可以包括鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。另一方面，本发明也提供了一种包括含有通式(Ia)的游离的低聚态cx-硫辛酸(ALFA)的组(Ia)其中n是介于大约2到大约50之间的数值，特别地介于大约10和大约20之间，特别地介于大约4到大约6之间。039在另一个实施例中，本发明提供了一种包含低聚态游离的a-硫辛酸(ALFA)的组合物，其平均分子量(Mw)为大约412.6(n=2)和大约10268.5(n=50)道尔顿之间。040在另一方面，本发明提供了制备低聚态游离的a-硫辛酸的方法。本发明所述的组合物也可以包括一种液体载体。048]本发明所述的组合物可特别地提供(x-硫辛酸的低聚物，其具有R构形、S构形、R和S构形的混合体，以致于旋光度不是外消旋的，而是小于纯R或纯S低聚物以及外消旋混合物。〖049本发明所述的组合物可用于药品或营养配制品。图5显示了含有3mmo1对应化合物/L的样品的以mmol/L表示的总抗氧化能力。058]图6显示了LAORN的不同浓度的结果。(浓度是每个试剂浓度之和，他们的摩尔比率是l:l)的浓度对LAORN形成的影响。图15提供了叶黄素-酉旨(1%低聚的包覆的硫辛酸)在人造的胃液中的稳定性。图16提供了未包覆的叶黄素-酯(非低聚的1%硫辛酸)在人造肠液中的稳定性。图17提供了叶黄素-酯(3%低聚的包覆的硫辛酸)在人造的胃液中的稳定性。图19描绘了硫辛酸含量与叶黄素-酯残留比率的特性曲线。另一方面，本发明涉及ALFA和一种或多种ALAC的混合物。在另一个实施例中，所述的ALAC可以仅仅是一不完全的合成物；意思是指，该低聚物的一部分被质子化了，而另一部分与一个或多个平衡离子结合。这被下列通式II所描绘。所述的"a-硫辛酸"和"硫辛酸"在这里可互换地被使用，并在现有技术中被称为硫辛酸(thiocticacid)、1，2-二硫戊环-3-戊酸、1,2-二硫戊环-3-缬草酸以及6,8-硫辛酸。本申请中所述的"a-硫辛酸"应该被理解为包括硫辛酸的任何异构体以及并不受限于此。有趣的是，在生理学条件下，例如胃或回肠中，本发明所述的"低聚态"ALAC和ALFA将随时间发生降解。然而，已经发现在类似的环境中"聚合态"ALFA特别不容易降解。这些区别使应用本发明所述的低聚物传递营养成分，以及在其降解过程中提供硫辛酸本身的有益效果成为可能，尤其是当硫辛酸衍生物为ALAC，例如氨基酸复合物的情况下。所述的"a-硫辛酸盐"或"硫辛酸盐"意指在硫辛酸分子和碱分子之间的酸碱反应产物，这样平衡离子会连接到a-硫辛酸的羧酸部分。所述的"游离酸"是指低聚态硫辛酸的羧酸部分，例如，被质子化的部分。所述的"合成物"在这里被用来指平衡离子以及例如a-硫辛酸的羧酸分子之间形成的缔合体。该缔合可以是通过离子键、共价键、范德瓦尔斯作用，和/或螯合作用等。该术语是指，在所述的如羧基的离子(阴离子和阳离子)和如盐或氨基酸的平衡离子之间存在的一种物理吸引。可接受的盐应理解为包括，当存在于母体化合物中的酸式质子，例如a-硫辛酸，被金属离子(例如，碱金属离子，碱土金属离子或铝离子)置换而形成的盐，或与有机碱(例如，乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺、吗啉、哌啶、二甲胺、二乙胺等等)以配位键结合而形成的盐。也包括如精氨酸盐等氨基酸盐，以及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等有机酸盐，(见，例如，Bergeefa/.,1977，JP/画.5W.66:1-19)。0881也包括"药剂学上可接受的盐"作为适合的平衡离子，其意指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐可在所述化合物的最后分离和提纯期间现场制备得到，或通过分别使游离酸形态的纯化的化合物(ALFA)与适合的碱，例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐、氨水或药剂学上可接受的有机伯胺、仲胺、叔胺或季胺反应制备而得到。典型的碱金属或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁，和铝盐等等。典型的用于形成碱加成盐的有机胺包括乙胺、氢氧化四甲基铵、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等等(见，例如，S.M.Bergeetal.,"PharmaceuticalSalts,"supra,)所述的"碱金属离子"是指元素周期表中Ia族中除氢以外的元素。其他的适合的离子包括，例如，铝、锌、铜或铁。例如氨基酸类似物，诸如鸟氨酸"类似物"包括乙酰化产物、反丁烯二酸衍生物等等，及其可接受的铵和金属盐。所述的"单取代胺"是指所述的胺的N原子上具有单一的取代基。所述的取代基可以是烷基或芳基。适合的单取代胺包括，例如，甲胺、乙胺、苯胺等等。适合的二烃基取代胺包括，例如，二乙胺、二甲胺、二苯胺等。适合的三垸基取代胺包括，例如，三甲胺、三乙胺、三苯胺等。所述的"亚烃基二胺"是指在碳骨架中具有二个胺的化合物。所述的胺可以是在碳骨架的末端或内部。烷基可以包括含有大约20个以下碳原子的直链烷基、支链烷基和环烷基。适合的烷基可以是饱和的或非饱和的。进一步地，所述垸基也可以被一个或多个取代基在一个或多个碳原子上取代一次或多次，所述的取代基可以是C1-C6垸基、C3-C6杂环取代基、芳基、卤素、羟基、氨基、烷氧基和磺酰基。另外，所述烷基可以包含IO个以下的杂原子或杂原子取代基。适合的杂原子包括氮、氧、硫和磷。所述的"重均分子量"(Mw)在现有技术中是公知的，该平均分子量可通过光散射、低角度中子散射(SANS)、X射线散射、沉积速度、碘量法、或由凝胶渗透色谱法(GPC)测定得到。低聚态ALAC和ALFA的重均分子量通常为大约412.6(n-2)到大约10268.5(n=50),优选从大约412.6(n=2)到大约3081.95(n=15)，更优选从大约412.6(n=2)到大约2055.3(n=IO)以及愈加优选从大约412.60=2)到大约1233.98(n=6)。0109]另一方面，本发明提供了包含通式(I)所示的低聚态(x-硫辛酸合成物的组合物。(I)n为大约2到大约50的数值，优选在大约4和大约20之间，更优选在大约10到大约15之间，最优选在大约4到大约12之间的数值，例如，大约4、大约6、大约8、大约IO，或大约12。每个R+可以是相同的，或低聚物中的R+可以是不同的平衡离子。0113]例如，如果聚合度n是2，按照本发明所述的化合物被认为具有如下结构0114]其中每个R+分别地为上述内容所定义。a-硫辛酸子单元的重复链可通过更多的单元被延长(n分别为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、20等，直到并包括50在内)。最终的结构将取决于进一步齐聚的发生处(即硫基所在位置)。进一步地，因为分子量分布是一平均值，n值可以是一非整数，因此，全部数值(整数)部分也被预期和包括在内。通过说明书应当理解的是，本发明所述的组合物可以作为一种分别具有不同聚合度(n)的化合物的混合物形式存在，并可以进一步包括a-硫辛酸的单体合成物或(x-硫辛酸盐。—个或多个R+可以被氢原子取代以提供，例如，ALFA(其中R+全部为氢)。其中n如上所述是介于大约2到大约50之间的数值，优选介于大约10和大约20之间，更优选介于大约4到大约6之间的数值。在另一个实施例中，本发明提供了包括低聚态ct-硫辛酸游离酸(ALFA)的组合物，该ALFA具有介于大约412.6(n=2)到大约10268.5(11=50)道尔顿之间的平均分子量(Mw)。另一个方面，本发明提供了包含通式(II)所示的混合的低聚态a-硫辛酸合成物的组合物。12另一方面，本发明也提供了包含通式(III)所示的a-硫辛酸低聚物的组合物:OR2(in)每个R"独立地为一氢原子或一平衡离子。当全部112是氢原子时，结果为ALFA。在某些方面，每摩尔当量的羧酸中加入l摩尔当量的碱。在其他方面，每摩尔当量的羧酸加入小于1摩尔当量的碱，藉此形成了一种"混合态"ALAC。另一方面，本发明提供了如下过程生成的产物a)碱与a-硫辛酸在水溶液中反应；0135]b)将该溶液在高温下保温大约1到大约5小时；并且c)通过添加一非溶剂，从水溶液中析出低聚态硫辛酸和碱平衡离子的合成物；或者将该水溶液喷雾干燥得到低聚态硫辛酸盐的合成物。在一实施例中，该低聚态硫辛酸合成物通过收集析出的合成物而分离得到。通常该齐聚反应是在大约0'C到大约IO(TC之间进行，优选在大约30'C到大约6CTC之间进行。过量的碱可以存在于反应过程中，任何过量的未反应的碱或未化合的碱可以通过提纯去除。已经发现，在碱性条件下进行反应有利于在较低温度范围内发生齐聚反应，例如在大约30'C到大约6(TC之间发生齐聚反应，并提供了较高的低聚态ALAC的收率。13意外地发现，当诸如一种氨基酸的碱和a-硫辛酸在水溶液中反应并使该溶液在高温下保持一段如上所述的时间，一种低聚态合成物便产生了。应用于步骤a)中所述的碱通常为一种选自鸟氨酸、精氨酸和赖氨酸的氨基酸。所述的氨基酸优选为其L-构型，虽然其R-构型也是可能使用的。最优选的碱是L-鸟氨酸。在一范例中，步骤a)应用的鸟氨酸水溶液可通过向含有鸟氨酸盐酸盐的溶液中添加NaOH至要求的pH值来获得。步骤b)可以包含所述水溶液的浓縮步骤。例如，反应混合物在步骤b)的结束时可以被浓縮至去除大约50%的水。已经发现，除了高温处理过程之外，根据本发明所述过程中的ot-硫辛酸的齐聚过程在某种程度上取决于反应混合物中两种反应物的浓度之和。在一实施例中，步骤a)中水溶液里的碱，例如，诸如鸟氨酸的氨基酸，和01-硫辛酸的各自的浓度之和为大约15%到大约45%(重量/体积)，更优选为大约25%到大约35%(重量/体积)(重量/体积，mg/mL)，且氨基酸对硫辛酸的摩尔比为0.1:1到10:1的范围内。尽管在更高浓度下齐聚反应更为强烈，但由此带来的反应混合物的高浓度使得反应难以进行。通常情况下，所述过程中步骤a)中的碱，例如氨基酸，和a-硫辛酸的摩尔比为大约1:1。在步骤b)中的反应混合物的温度为大约3(TC或更高，优选为大约40'C到大约5(TC。在这点上，较低的温度似乎促进齐聚，然而，3(TC以下的温度是不可取的，因为反应混合物的粘度增大并使得操作更加困难，但并非不可能。用于步骤c)中的非溶剂可以是醇，在一实施例中是乙醇溶液。在步骤c)中用来析出ALAC的水溶液和非溶剂(例如，乙醇)溶液的混合物的含水率通常应该是12%或更低。如果溶液的含水率过高，则析出的合成物趋向于较粘，且干燥变得困难，然而，如果含水率太低，则通常需要增加非溶剂例如乙醇的用量，这会增加生产成本。在一实施例中，依据最终产品的收率和纯度，88%的乙醇终含量被认为是经济和有利的。此外，本发明所述的ALAC似乎随时间释放相对等量的a-硫辛酸，就是说，因此，它能被用作一种具有a-硫辛酸同样效果的"控释"产品。0152]和a-硫辛酸相比，当口服时该ALAC不会引起ct-硫辛酸导致的咽喉刺激。本发明所述的ALAC具有良好的凝胶特性，因此可以减少乃至取消片剂制造对粘合剂的需要量。相比之下，由于其低熔点，(x-硫辛酸不能被压片。ALFA可以通过在醇中溶解硫辛酸，例如乙醇，并在大约3(TC到大约6(TC之间加热该溶液制备得到。当冷却时，根据醇或溶剂的选择，将在溶液中形成黄色析出物，其可以被收集、分离，如果需要还可进一步纯化。低聚的ALFA不具有水溶性，因此可用水去除任何不需要的水溶性物质。另外，可以喷雾干燥该溶液以得到ALFA，其通常具有大约3到大约4的聚合度。同a-硫辛酸相比，ALFA具有很好的热稳定性。本发明所述的ALFA具有一种意想不到的高的抗氧化效果。此外，本发明所述的ALFA似乎随时间释放相对等量的a-硫辛酸，就是说，因此，它能被用作一种具有a-硫辛酸同样效果的"控释"产品。本发明所述的ALFA具有良好的胶凝特性，因此可以减少乃至取消对制片用粘合剂的需要量。相比之下，由于其低熔点，a-硫辛酸不能被压片。—方面，本发明所述的ALAC和/或ALFA可与对热、光、氧及其他诸如潮湿、臭氧等环境压力不稳定的营养物质结合。所述的ALAC和/或ALFA可以包覆于所述的营养物质(比如类胡萝卜素及其衍生物，例如酯，包含例如，棕榈酸酯、柠檬酸酯、没食子酸酯、维生素E酯、硫辛酸酯)外或与营养物质充分混合以帮助稳定该物质。所述营养成分的包覆可通过现有技术中公知的方法完成，例如通过将营养成分简单地浸入ALAC和/或ALFA溶液中，将该物质与ALAC和/或ALFA的混合物喷雾干燥，将营养成分与ALAC和/或ALFA的混合物冷冻干燥等方法。对营养物质的包覆无须完全均匀，虽然在某些情况下更优选均匀包覆。类胡萝卜素吸收400-500nm范围的可见光。这个物理特性赋予该颜料以黄色/红色。类胡萝卜素包含一个由异戊二烯单元组成的共轭骨架，其在分子的中心通常可反转，而显现对称性。关于双键在几何构型方面的变化，导致许多顺式和反式异构体的存在。哺乳动物不能合成类胡萝卜素，因此类胡萝卜素毫无疑问是从诸如果实、蔬菜和蛋黄的饮食来源获得。最近几年，类胡萝卜素已经被认为具有几种健康益处，其包含预防和/或保护人体免于严重的健康失调。类胡萝卜素是非极性化合物，被分为两类，即被称为叶黄素或氧合类胡萝卜素的具有较高极性的化合物，以及如l3-胡萝卜素、番茄红素等非极性的碳氢化合物胡萝卜素。这两类化合物具有至少9个共轭双键，这些双键是形成类胡萝卜素特征颜色的原因。叶黄素在其具有如羟基或酮基的极性官能团的共轭双键链的末端具有环状结构。叶黄素的范例包含黄体素、玉米黄质、辣椒红、角黄素、p-玉米黄质、虾青素等。近年来，包含黄体素和玉米黄质的叶黄素作为天然的着色剂以及由于他们在人类健康中的作用，已经吸引了在生物医学、化学和营养学领域内的科学家和研究人员的再次关注。黄体素和玉米黄质分别表现出黄色和橙黄色。黄体素和玉米黄质在植物体内可以以游离态形式(非酯化)存在也可以作为酯存在。黄体素以游离态存在于绿叶蔬菜中，如菠菜、羽衣甘蓝和椰菜，而以酯的形态存在于果实中，如芒果、橙、番木瓜、红辣椒、藻类和黄玉米。这些来源通常含有以酯等形态存在的黄体素。黄体素也存在于人体的血液和不同组织中，尤其是在眼睛中的黄斑、晶状体和视网膜中。因此，本发明包括不同的ALAC和ALFA包覆酯化的类胡萝卜素，也被称作是类胡萝卜素的衍生物，以及非酯化类胡萝卜素的用途。与非酯化的类胡萝卜素相缔合以得到酯化的类胡萝卜素的通用的酸包括，例如，现有技术中公知的棕榈酸、柠檬酸、没食子酸、维生素E、硫辛酸等。金盏花(7bge/^e^cta)的花瓣是酯化形态黄体素的一种丰富来源。所述酯的部分是脂肪酸。干燥的金盏花包含大约1-1.6%以重量计的类胡萝卜素，且黄体素酯含量占总类胡萝卜素的90%。在金盏花油性树脂中的叶黄素脂肪酸酯组合物主要由以酯形态存在的黄体素组成，所述酯为二棕榈酸酯、肉豆蔻酸-棕榈酸酯、棕榈酸-硬脂酸酯、二肉豆蔻酸酯和单酯。0167]已经发现，通过水解来自金盏花的叶黄素酯而获得的黄体素与在水果、蔬菜、人血浆及黄斑区域中发现的叶黄素相同。吸收后，人体不能辨别叶黄素的来源。因此，鉴于广泛的有效性和成本考虑，广泛种植和商业处理的原料如己经用于食品和饲料行业使用的金盏花，是一种有吸引力的黄体素来源。本质上，黄体素酯和游离态的叶黄素是源自金盏花的重要的商业化保健品。干花部分用于获得金盏花提取物或油性树脂。通过将提取物/油性树脂皂化处理，可获得游离态的叶黄素。除去皂化中产生的脂肪酸碱金属盐，进一步精制含有黄体素和玉米黄质混合物的叶黄素。黄体素酯以反式异构体存在于新鲜的金盏花花瓣中，但是暴露于热、光、氧、酸等条件下会催化叶黄素的几何异构形式由反式转化为顺式。作为一种保健品和食品添加剂，黄体素的反式异构体更为优选，因为相对于对应的顺式异构体，反式异构体具有更好的生物利用度和更深的黄色色泽。0170]优选地，类胡萝卜素是一类碳氢化合物(胡萝卜素)，其对应的氧合衍生物是叶黄素。其由相互结合的八个类异戊二烯单元构成，其中的类异戊二烯单元的排列在分子中心是反转的，因此，两个中心处的甲基处于1,6-位置关系，而其余的非末端甲基处于1,5-位置关系。所有类胡萝卜素可能形式上源于一个具有长的共轭双键主链的脂肪族C4。H56结构(I)(化合物I),通过(1)氣化、(2)脱氢、(3)环化或(4)氧化或这些过程的任何组合而得到。该类化合物还包括由碳骨架(I)(番茄红素)通过某种重排或降解而得到的化合物，条件是保留了两个中心处的甲基。—种特定化合物的名称是通过在母体名称胡萝卜素上增加二个希腊字母作为词头(化合物片段3)构成的。所述的希腊字母词头在化合物IIa中以字母顺序被引用。16171617X0174]氧合的类胡萝卜素(叶黄素)常常包含羟基、甲氧基、羧基、氧代和环氧官能团。重要的和典型的类胡萝卜素(化合物m—x)是番茄红素(y,Y-胡萝卜素)(i)、p-胡萝卜素(p，p-胡萝卜素)(III)、a-胡萝卜素((6'R-p，e-胡萝卜素)(IV)、p-隐黄质((3R)-卩，卩-胡萝卜素-3-醇)(V)、玉米黄质((3R，3'R)-p,(3胡萝卜素-3,3'-二醇)(VI)、黄体素("叶黄素"，(3R,3'R,6'R)-p，e-胡萝卜素-3,3'-二醇)(VII)、新叶黄素((3S，5R,6R，3'S，5'R，6'S)-5',6'-环氧-6,7-二脱氢-5,6,5',6'-四氢-P，(3-胡萝卜素-3，5,3'-三醇)(VIII)、紫黄质((3S,5R，6R，3'S,5'R,6'S)-5,6,5',6'-二环氧-5，6，5',6'-四氢-p，p-胡萝卜素-3,3'-二醇)(IX)、岩藻黄质((3S,5R,6S，3'S,5'R,6'R)-5,6-环氧-3，3',5'-三羟基-6'，7'-二脱氢-5,6,7,8，5'，6'-六氢-p,p-胡萝卜素-8-酮-3'-乙酸酯)(X)、角黄素(貼-胡萝卜素-4,4'-二酮)(XI)和虾青素((3S,3'S)-3,3'-二羟基-(3，(3-胡萝卜素-4，4'-二酮)(XII)。对于鼻腔给药或通过吸入或吹入给药，所述ALAC禾B/或ALFA组合物可以方便地以气溶胶形式从加压容器或喷雾器中喷射释放。其使用一种合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、碳氟化合物、二氧化碳或其他的适合的气体。就加压气溶胶而言，其可通过使用阀门释放定量药物来决定剂量单位。用于吸入器或吹药器的胶囊和药盒(例如由明胶制备的胶囊和药盒)可以包含该化合物的粉末混合物和一种适合的粉末基质，例如乳糖或淀粉。为了延长释放，所述ALAC和域ALFA组合物可以配制为用于植入给药或肌肉注射给药的长效制剂。所述ALAC和/或ALFA组合物可以与适合的聚合态的或憎水的物质(例如，作为一种在可接受的油中形成的乳液)或离子交换树脂进行配制，或配制为微溶的衍生物，例如微溶的盐。可选地，可以使用以一种制造为吸盘或贴片的透皮传递系统，其缓慢释放用于经皮吸收的ALAC和/或ALFA组合物。为此目的，可使用渗透增强剂以促进ALAC和/或ALFA组合物的透皮渗透。适合的透皮贴片在美国专利5,407,713;美国专利5,352,456;美国专利5,332,213;美国专利5,336,168;美国专利5,290,561;美国专利5,254,346;美国专利5,164,189;美国专利5,163,899;美国专利5,088,977;美国专利5，087，240;美国专利5,008,110;和美国专利4，921，475中有所记载。可选地，可以使用其他传递系统。脂质体和乳液是众所周知的传递载体，其可用T传递ALAC和/或ALFA组合物。也可以使用某些有机溶剂如二甲亚砜(DMSO)，虽然通常情况下其具有较高的毒性。如果需要，所述的组合物可存在于包装物或分配器装置内，其可以包含一个或多个含有ALAC和/或ALFA组合物的单位剂量制剂。例如，该包装物可以包含金属或塑料薄片，比如泡罩包装。该包装物或分配器装置可以附有服用说明书。02071软凝胶胶囊或软明胶胶囊可以通过，例如但不限于，将所述制剂在适当的载体(例如，米糠油，和/或蜂蜡)内分散形成一种高粘度混合物来制备得到。然后将这些混合物用明胶基薄膜通过软凝胶工业技术人员公知的技术和机械设备制成胶囊。然后将该形成的胶囊干燥至恒重。典型地，胶囊的重量在大约100mg至大约2500mg之间，优选地，在大约1500mg至大约1900mg之间，更优选地可以在大约1500mg至大约2000mg之间。所述乳化剂可用于促进溶解软胶囊内的组分。表面活性剂、乳化剂、或泡腾剂的特定例子包括D-山梨醇、乙醇、角叉菜胶、聚羧乙烯、羧甲基纤维素钠、瓜耳豆胶、甘油、脂肪酸甘油酯、胆固醇、白蜂蜡、丁二酸二辛基磺酸钠、蔗糖脂肪酸酯、十八醇、硬脂酸、聚氧乙烯(40)硬脂酸盐、失水山梨醇倍半油酸酯、鲸蜡醇、明胶、失水山梨醇脂肪酸酯、滑石、失水山梨醇三油酸酯、石蜡、马铃薯淀粉、羟丙基纤维素、丙二醇、丙二醇脂肪酸酯、果胶、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)乙二醇、聚氧乙烯(160)2聚氧丙烯(30)乙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油40、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、聚乙二醇400、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、甲基纤维素、失水山梨醇单油酸酯、单硬脂酸甘油酯、失水山梨醇单棕榈酸酯、失水山梨醇单月桂酸酯、十二垸基二甲胺氧化物溶液、十二垸基硫酸钠、聚桂醇、干燥碳酸钠、酒石酸、氢氧化钠、精制大豆卵磷脂、大豆卵磷脂、碳酸钾、碳酸氢钠、中链甘油三酸酯、柠檬酸酐、棉籽油-大豆油混合物，和液体石蜡。本发明也提供了已包装制剂，其包括本发明所述组合物以及该产品在适当条件下的使用说明书。典型情况下，无论其以什么形式，该已包装制剂是用于有使用需要的个体。典型情况下，其剂量要求为一天大约1到大约4次用量。虽然本发明描述了本发明所述组合物用于治疗不同的症状的软胶囊制剂、其用途、制造和包装，但应认为其仅限于软胶囊。本发明可吸收的组合物可以以如上所述的传统的片剂、丸剂、锭剂、酏剂、乳液、硬胶囊、液体、悬浮液等剂型传递。本发明所述ALAC和/或ALFA组合物或其组合物，通常会以一有效量使用以获得预期结果，例如以一有效量来治疗或预防与特定炎症相关的症状。该组合物可治疗性地服用以获得治疗效果或预防性地服用以获得预防效果。所述治疗效果是指根治或改善潜在的疾病，和/或根治或改善一种或多种与潜在的疾病有关的症状，以使病人报告在感觉或症状方面有改善，尽管该病人仍将可能受到潜在疾病的折磨。例如，遭受疼痛的病人服用本发明所述组合物，其带来的治疗效果不仅体现于当潜在的症状被根除或改善时，而且体现于当该病人报告与该疼痛相关的身体不适的严重程度或持续时间减少时。0216]对于预防性服用，该组合物可用于处于正在发展为前述症状之一的风险中的病人。该组合物服用的剂量将依赖多种因素，包括，例如，接受治疗的特定适应症、给药方式、所期望的效果是预防性的还是治疗性的、接受治疗的适应症的严重程度以及病人的年龄和体重等等。有效剂量的确定在所属领域技术人员的能力范围之内。所述ALAC禾H/或ALFA组合物的总剂量将代表性地处于0.000lmg/kg/天或0.001mg/kg/天或O.Olmg/kg/天到100mg/kg/天范围之内，但是，根据其它因素中的组分活性、其生物利用率、给药方式以及上述讨论过的多种因素，其可以更高或更低。可分别调整用药剂量和间隔，以使所述化合物的血浆水平足以维持治疗性或预防性效果。例如，根据其他情况中的给药方式、被治疗的特定适应症和医嘱，所述化合物可以每周服用一次，每周服用数次(例如，每隔一天)，每日服用一次或每日服用多次。所属领域技术人员不需要非常规实验就可以优化有效局部用量。2.段l所述的组合物，其所述合成物是一种盐。0221]3.段l所述的组合物，其所述合成物是低聚态硫辛酸和平衡离子形成的一种缔合体。4.段3所述的组合物，其中所述缔合体为鳌合物。5.段1所述的组合物，其中所述平衡离子为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺、或三取代胺。段1所述的组合物，其中所述平衡离子为一种氨基酸。段6所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。段l-7任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。段8所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有一种氨基酸。段9所述的组合物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合段1-10任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。段l-10任一段所述的组合物，该组合物进一步包含液态载体。6,7.02268.9.11,12,13.—种组合物，包含—种含有通式(I)所示的低聚态硫辛酸合成物14.段13所述的组合物，其中所述合成物为一种盐。15.段13所述的组合物，其中所述合成物为低聚态硫辛酸和平衡离子形成的一种缔合体。亚烃基二17.二胺、段13所述的组合物，其中每个R+独立地表示为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、单取代胺、二取代胺、或三取代胺。19.段18所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。20,段13-19任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。21.段20所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有氨基酸。23,段13-22任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。24.段13-22任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种液态载体。30.段25所述的组合物，其中所述平衡离子为氨基酸。31.段30所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。32.段25-31任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。33.段32所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有一种氨基酸。合物。34.段33所述的组合物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混2235.段25-34任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。37.—种通过下述方法制备的低聚态硫辛酸合成物a)碱与硫辛酸在水溶液中反应；b)将溶液在较高温度下保持大约1-5小时；然后c)通过加入一种非溶剂，从水溶液中析出一种硫辛酸和碱平衡离子的合成物。45.段44所述的低聚态硫辛酸合成物，其pH值为(I-0.1)-I。46.段37-45任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其水溶液具有9.5-10.0的pH值。027147.段43-46任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。50.52.对映体。53.对映体。55.段6、7、9、10、18、19、20、21、30、31、32、33和段43-49中任一段所述的物质，其中所述的硫辛酸和/或低聚态硫辛酸和/或通式(I)是L-构型。56.—种药物组合物，含有段1-11、段13-23、段25-35和段37-55中任一段所述物质和一种药剂学上可接受的载体。通式(Ia)所示的低聚态硫辛酸23<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(la)0283]其中n为大约2-50之间的数值。58.—种药物组合物，含有段57所述的低聚态硫辛酸和一种药剂学上可接受的载体。59.—种含有通式(II)所示的混合态低聚a-硫辛酸合成物的组合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(n)其中，n为大约2-50之间的数值；并且每个R1独立地为一个氢原子或平衡离子，且至少一个W为平衡离子。载体。60.—种药物组合物，含有段59所述的混合态低聚硫辛酸合成物和一种药剂学上可接受的0288]61.—种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有段l-ll、段13-23、段25-35、段37-55、段57和59中任一段所述的低聚态组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的混合物。62.段61所述的稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，其中所述低聚态组合物包覆于类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物上。LAORN在水中具有高溶解度(大于10%，质量/质量)硫辛酸和鸟氨酸之间的用量比为1:1的实例但在有机溶剂中不能很好的溶解c应该包含39%的鸟氨酸。鸟氨酸带有二个氮原子。lg上述分子的含氮量为83.4mg/g。根据Kjeldhal分析法，含氮量的测定为86.1mg/g。这为低聚态物质中1:1的比例提供了证据。硫辛酸的含硫五元环的消失该硫辛酸中的含硫环在约320nm处具有一吸收谱带，其也存在于已知硫辛酸盐(例如钾盐、钠盐)的溶液中。当新的低聚态物质LAORN在水中溶解以后立即测量时，其缺乏320nm处的吸收，表明在新的低聚态物质制备期间所述的含硫环是敞开的。测试LAORN在不同溶剂中的溶解度并和a-硫辛酸的溶解度比较。结果在下表1中显示表l:LAORN的溶解性<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>溶解度模型表示一种盐。最有趣地是，相对于a-硫辛酸，LAORN具有很好的溶解度(大于10%)。傅立叶变换红外光谱(FT-IR):图2和3分别(固体KBr片)显示了a-硫辛酸(图2)禾tlLAORN(图3)的FT-IR谱图。该谱图表明LAORN中不存在a-硫辛酸。所述的二硫键桥含硫环的典型FT-IR谱带在LAORN内消失，该谱带存在于硫辛酸中(在1693cm"处出现)。核磁共振谱图(NMR):图4提供了LAORN的核磁共振谱图(CDC13液体)。0310指示游离态的氨基酸-CH-质子的谱带在3ppm浓度下以三重态存在是可见的。这证明了氨基酸没有以化学键结合到硫辛酸残基上(没有酰胺键)。当向LAORN(大于5%，质量/质量)的浓溶液中加入少量酸(不考虑酸的种类)时，橡胶状物质立即形成。当向LAORN(小于1%，质量/质量)的较稀溶液中加入少量酸(不考虑酸的种类)时，一种稳定乳状液立即形成。该产品肯定地与邻苯二醛反应，也是一种人造的硫辛酸和鸟氨酸混合物。这些观察结果提供了至少一些游离硫醇基的逸出以及游离氨基酸官能团存在的可能性。在这方面硫辛酸反应相似。LAORN显示出与FeS04(褐色Fe(OH)3)发生即时反应。过滤得到清液，其加入酸时，不会产生任何聚合体。这些表明，LAORN可被还原，从而其聚合过程可被阻滞。在中性溶液中用H202处理的LAORN，通过HPLC鉴定，产生了不带有其他峰的硫辛酸。在中性溶液中用H202处理的硫辛酸产生了比硫辛酸早的一个重要清晰的峰。经证实，鸟氨酸的存在/不存在不影响这个峰，通过鸟氨酸单独处理也看不到影响。这有助于证实LAORN不同于硫辛酸。文献中描述了硫辛酸与对应的硫代亚磺酸盐和硫代磺酸盐的氧化作用。因此，再一次排除了LAORN中硫辛酸的存在。LAORN在碱性溶液中用NaBH4处理几乎立即产生了二氢硫辛酸100%的理论值。LAORN的氧化能力使用一种已制定好的测试试验，来测试LAORN的总抗氧化能力。该测试试验(Calbiochem，产品目录号码615700)测定一种特定化合物抑制自由基形成的能力。2，2'-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺斷二铵盐(ABTS)与肌红蛋白的氧化作用产生了ABTS+自由基被选择。该自由基的形成可以通过分析在600nm处的吸光率进行监测。在自由基清除剂没有引入的地方，自由基快速地生长。反之，如果具有自由基清除特性的化合物存在，在600nm处谱带的发展是被抑制的。该结果依照一种标有1.78mmo1抗氧化剂浓度的标准品被校准。0322样品制备纯a-硫辛酸和鸟氨酸以及(LAORN)被溶解于水并用NaOH调节pH值为7.5。测得下列浓度6.1mga-硫辛酸/10mL图5显示了含有3mmo1对应化合物/L的样品的以mmol/L表示的总抗氧化能力。当和纯硫辛酸、鸟氨酸、硫辛酸和鸟氨酸的等克分子混合物对比时，图5显而易见LAORN的协同作用。图6显示了LAORN的不同浓度的结果。可以发现LAORN的总抗氧化能力与剂量比例呈线性增长关系。亚油酸自动氧化的抑制0336]这些试验是基于测定5CTC下亚油酸加速的自动氧化的抑制进行的。结果可以表示为，当对比消极控制(没有抑制)时，自动氧化的相对感应关系。次。0342]再保护)作为一种积极控制(完全抑制)，引入了10mM丁基-羟基甲苯(BHT)/L。每个样品制备3图7显示了获得下列浓度感应的时间过程5mM硫辛酸("LA")/L5mM鸟氨酸("ORN")/L5mM硫辛酸/L+5mM鸟氨酸/L和lOmMLAORN。另外，该图显示了在1.5处的一个阈值，表明感应周期(数值以下表明保护；数值以上表明不积极控制显示了在5(TC抑制亚油酸的自动氧化72小时。同样地，5mM硫辛酸/L在测试周期内产生了完全的保护。正如所料，消极控制在12小时的潜伏期后，产生了相当多的自动氧化。0345]在12小时的潜伏期后，5mM鸟氨酸/L获得的结果强烈地表明鸟氨酸对亚油酸的自动氧化没有保护作用。鉴于10mMLAORN/L被发现产生完全保护作用，5mM硫辛酸/L和5mM鸟氨酸/L的混合物被发现是其保护性能的边界。图8显示了获得50mM硫辛酸/L、50mM鸟氨酸/L、50mM硫辛酸/L+50mM鸟氨酸/L和1OOmMLAORN/L感应值的时间过程。0348]另外，该图显示了在1.5处的一个阈值，表明感应周期(数值以下表明保护；数值以上表明不再保护)。0352在24小时的潜伏期后，50mM鸟氨酸/L的结果强烈地表明鸟氨酸对亚油酸的自动氧化没有保50mM硫辛酸/L和50mM鸟氨酸/L和100mMLAORN/L的混合物发现产生了完全保护。方法控制H20(消极)丁基-羟基甲苯(积极)IO、50禾tU00mg/10mL(H2O,pH二8.0)样品a)硫辛酸0.1、0.61、1、5、6.1禾B10mg/mL(H20,pH=8.0)b)鸟氨酸0.1、0.39、1、3.9、5和10mg/mL(H20，pH=8.0)c)硫辛酸+鸟氨酸0.1、1、5禾n10mg/1mL(H20,pH=8.0)在每个水平比例为61/39。d)LAORN0.1、1、5禾口10mg/10mL(H20,pH=8,0)试剂25mL0.1M磷酸钠缓冲液，pH=7.0350mg亚油酸/25mL乙醇(95%)乙醇75%1.5g硫氰酸铵/5mLH20样品培育测试分析将25pL经培养的样品与1.20mL75。/。乙醇、25pL硫氰酸铵和25pL氯化亚铁混合。混合3分钟后在500nm处读吸收值。还原能力的分析结果该分析基于将3价铁还原为2价铁。结果以和控制组比较的还原％表示，控制组还原5mg/mL浓度下的全部3价铁。图例LA...硫辛酸，ORN...鸟氨酸，LA+ORN…硫辛酸和鸟氨酸的等克分子混合物，LAORN,Control是麵HL)。在进一步测试中，分别地在5mM/L浓度下分析硫辛酸和鸟氨酸。此外，测试由5mM/L硫辛酸和5mM鸟氨酸/L组成的硫辛酸和鸟氨酸混合物。最后，测试10mM/L的LAORN。如图10所示，LAORN具有一种强烈的协同效应，当和硫辛酸与鸟氨酸的简单混合物比较时。制备方法例l:混合物在40'C下保持3-5小时。在这一过程的最后，溶液在减压(5CTC，真空度为0.09MPa)下浓縮，直至去除50%的水。通过这样做，原料内全部可能的有机溶剂将被蒸发掉。这个过程大约为5小时。剩余溶液的体积大约为100mL，其pH值为7.5。28将1250mL乙醇(95%)注入该浓縮溶液。搅拌得到的溶液，并有白色析出物形成。该溶液含水率控制在11%以下。过滤该溶液以获得析出物。该母液通过回收乙醇能再次使用，以获得进一步产物。析出物在大约35'C下干燥6小时。根据本发明所述，获得27克LAORN产物。外观浅黄色粉末熔点165170°C0388]pH值:7.56(0.5g溶于20mL水)旋光度的测定(旋光计，类型WZZ-3，制造商上海精密科学仪器有限公司)0.2544g的LAORN(实施例1样品)放入25mL容量瓶并用去离子水稀释到总体积为25mL，得到最终浓度为0.1076g/100ml。)去离子水用作控制组并测定其旋光度。然后测试LAORN的含水样品，发现样品具有一特定的旋光度5.45。。可见在较低温度下LAORN的形成较多。可是，溶液的粘度在某种程度上限制了最低温度。因此，30'C到50r的温度被认为是最理想的。此外，图ll似乎显示在特定的反应条件下，反应3小时后，没有明显产生LAORN。浓度(浓度为每个反应物浓度之和，且其摩尔比为1:1)对LAORN形成的影响。发现浓度较高时，LAORN的形成较多。可是，再一次地，溶液的高粘度限制了最大浓度。因此，优选的浓度为25%-35%(质量/体积)。LAORN中的硫辛酸平均聚合度通过碘量滴定法测定0398测试原理碘可以定量地氧化巯基(-SH)。过量的碘通过Na2S203标准溶液用滴定法测量。通过测量碘的消耗量，可以测定体系内-SH基的含量，然后可计算出平均聚合度。反应物盐酸(HC1)溶液用36%浓盐酸和去离子水(体积比为1/1)制备。Na2S203标准溶液制备滴定04091反应方程式3Na2S203+K2Cr207+6HCI~^2Cr(OH)S04+4NaCI+3S+Na2S04+2KCIlg碘化钾(KI)和5mL水被加入250mL碘量瓶中，该瓶中已加入15.00mLK2Cr2O7标准溶液和5mL盐酸(体积比为ll)至该烧瓶。将该烧瓶封闭，使溶液混合充分并在黑暗处静置5分钟。用Na2S203溶液滴定该溶液至淡黄色，加入0.5mL淀粉-碘指示剂。当蓝色消失时滴定停止。记录标准溶液量，并同时用滴定法测量空白溶液。按照下式计算Na2S203标准溶液浓度—a15.003C—294.181000aK2Cr207重量，mgK用于滴定K2Cr207溶液的Na2S203溶液体积,mlK用于滴定空白溶液的N32S203溶液体积，ml精确称量大约20mg样品，加入5mLDMF、5mL盐酸溶液(1/1，体积比)和10.00mL碘标准溶液。样品被密封并置于黑暗处10分钟，然后用Na2S203溶液滴定测量。当溶液变成淡黄色，加入0.2mL淀粉-碘指示剂。继续滴定直到最终的蓝色消失。该体积记为V4。由于空白滴定，用lO.OOmL碘标准溶液、照上述执行并记录体积V3。反应方程式2Na2S203+l22Nal+Na2S406标准溶液制备将K2Cr207反应物(在105°c干燥2小时)5373.4mg加入1000mL容量瓶中并用水稀释至刻度，制备重铬酸钾(K2Cr207)标准溶液。将1.274g碘和4.0gKI合并入1000mL容量瓶中，并用水稀释，制备碘标准溶液。将溶液混合充分。用水将24.5gNa2S2035H20与0.2gNa2C03合并，转移至lOOOmL棕色玻璃容量瓶中并用水稀释至刻度，制备Na2S203标准溶液。将溶液混合充分。通过滴定，1^0"207标准溶液消耗量是16.8mL。由此Na2S203标准溶液的浓度被测定为0.0489mol/i;1。样品测试0439根据上述试验方法，20.64mg的LAORN(来自实施例1)消耗7.3mL的Na2S203溶液，因此碘消耗量是0.0145mmo1。因此其平均聚合度汗为4.21。0440结果校正游离硫辛酸校正样品重量为100.08mg。HPLC提供了硫辛酸的峰面积是297.9mAs，因此测定样品含有大约4.3%游离的硫辛酸。这个数量从样品重量M中扣除。在包含两个校正值后，修正的平均聚合度测定为大约4.17。0446实施例(钠-硫辛酸)O.lmolNaOH溶于160mL水中，缓慢加入20.6ga-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在a-硫辛酸全部溶解后，该混合物在40'C维持3小时。该溶液在5(TC减压(真空度在-0.09兆帕)浓縮直到去除大约50。/。的水。浓縮溶液中注入1250mL乙醇(95%)。所得溶液搅拌形成白色析出物。收集该析出物然后在大约35'C干燥6小时。所得析出物经测定是具有平均聚合度为大约14(测定通过上述试验方法)的钠-硫辛酸盐。实施例(钾-硫辛酸)0450]O.lmolKOH溶于160mL水，缓慢加入20.6ga-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在a-硫辛酸全部溶解后，该混合物在50'C维持5小时。该溶液在5(TC减压(真空度在-0.09兆帕)浓縮直到去除大约50%的水。浓縮溶液喷雾干燥以提供具有平均聚合度为大约14(测定通过上述试验方法)的钾-硫辛酸盐。实施例(铵-硫辛酸)0453]O.lmol氨水溶于160mL水，缓慢加入20.6ga-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在a-硫辛酸全部溶解后，该混合物在45'C维持5小时。该溶液在50'C减压(真空度在-0.09兆帕)浓縮直到去除大约50%的水。浓縮溶液喷雾干燥以提供具有平均聚合度为大约11(测定通过上述试验方法)的钾-硫辛酸盐粉末。O.lmol乙二胺溶于160mL水中，缓慢加入20.6ga-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在a-硫辛酸全部溶解后，该混合物在40'C维持5小时。该溶液在5(TC减压(真空度在-0.09兆帕)浓縮直到去除大约50%的水。浓縮溶液中注入1250mL乙醇(95%)。所得溶液搅拌形成白色析出物。收集该析出物然后在大约35'C干燥6小时。所得析出物经测定是具有平均聚合度为大约8(测定通过上述试验方法)的钠-硫辛酸盐。实施例(二乙胺-硫辛酸)O.lmol二乙胺溶于160mL水，缓慢加入20.6ga-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在a-硫辛酸全部溶解后，该混合物在5(TC维持5小时。该溶液在50'C减压(真空度在-0.09兆帕)浓縮直到去除大约50%的水。浓縮溶液喷雾干燥以提供具有平均聚合度为大约11(测定通过上述试验方法)的钾-硫辛酸盐粉末。实施例(喹啉-硫辛酸)12.9g(0.1摩尔)喹啉和50ml水中加入20.6g(0.1摩尔)硫辛酸。反应混合物搅拌大约30分钟后在5(TC真空条件下干燥大约2小时去除水。所得产物真空干燥。平均聚合度大约为4(通过上述试验方法测定)。0465实施例(异喹啉-硫辛酸)32O.lmol异喹啉和50mL水中加入20.6g(0.1摩尔)硫辛酸。反应混合物搅拌大约30分钟后在5(TC真空条件下干燥大约2小时去除水。所得产物真空干燥。平均聚合度大约为4(通过上述试验方法测定)。LAORN与硫辛酸比较的CACO-2吸收试验方法CaCo-2细胞的培养CaCo-2试验培养之后，细胞用PBS缓冲液洗涤并用lmLPBS缓冲液移除。细胞超声处理3次30秒，离心10分钟并丢弃颗粒。上层清液用作样品进一步分析。a)游离硫辛酸和二氢硫辛酸的分析样品被提交至HPLC分析，如下所述进一步的样品制备。HPLC分析柱HypersilODS(250X4.6mm)流动相含有40%乙腈的水检测220nm0486注射体积..50pi表3,培养基中游离LA/DHLA的检测<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>Bid...低于检测极限表4，培养基中总LA/DHLA的检》<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>表6提供了在用LA或LAORN培育之后，重获的总LA/DHLA结果。正如所见到的，可以发现，当与经LA培育之后的数量比较时，总LA的数量显著高于LAORN培育之后的数量。这些发现支持LAORN以低聚态吸收的概念。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>这些得到的结果提供了LAORN以低聚态形式被吸收的证据。根据用LAORN培养的细胞内的游离态和总LA/DHLA的比较，可以推导出，在细胞内发现的大约80%的总LA/DHLA以低聚态形式被吸收。在选定的试验条件下，证实了用硫辛酸培育60分钟之后，细胞内可重新获得9.39%，而在相同的条件下，用LAORN培育之后重新获得了17.3%。鉴于硫辛酸存在于细胞溶液中，可以测定，与LAORN相比，在体内条件下，更少溶解LA的地方，吸收的差异甚至可能更高并更有利于LAORN。结果样品中存在的LA和DHLA的数量(被认为是"游离态LA/DHLA")与相同样品在LA和LAORN还原为DHLA后(被认为是"总LA/DHLA")观察到的数量相比较。如表4所见，在还原为DHLA之后，LA和LAORN均可以几乎完全地重新获得；因此LA和LAORN在测试分析条件下被认为是稳定的。硫辛酸涂层的聚合度原料无水乙醇Sigma实验例如，该硫辛酸顺酸钠剩余物在5(TC下经历1小时以干燥干燥所述包埋的硫酸钠。平均聚合度通过碘滴定法测定。下表提供了聚合度、干燥时间和温度。结果平均聚合度LA/%干燥方法2.21*3.2室温3.573.450°C持续0.5小时3.243.150。C持续1.0小时4.153,550。C持续1.5小时*:大约80%的硫辛酸为游离态，非聚合形式LA/o/。是指基于总重量(例如，硫辛酸和硫酸钠合起来)的硫辛酸的重量百分数在250mL圆底烧瓶中称量10±0.5mg叶黄素-酯，加入100mL人造胃液或肠液。当悬浮液连续搅拌的同时，烧瓶在37'C下避光放置。在选定的时间点(0、40、60、80、100分钟)，叶黄素-酯被萃取进入TBME(叔丁基甲醚)(3X30mL)。如果切实可行，在用TBME萃取之前，取5mL样品用于硫辛酸的测定。在调整pH到9.0(KOH)并在56'C培育60分钟之后，通过HPLC测定硫辛酸。合并的TBME萃取物用TBME填充至100mL，1:25稀释并相对于溶剂在450nm处通过UV/VIS光谱测量吸光度(如果必要，样品被稀释至获得0.9000以下的吸收值)。该吸光度通过实际样品重量被折算为吸收/mg样品。合并的TBME萃取物也被注入到HPLC-系统以定性地证实叶黄素-酯的存在，并跟踪在酯万一水解情况下推定的叶黄素的增加。1)未包覆的叶黄素-酯3)用3%硫辛酸包覆的叶黄素-酯35<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>HPLC泵-柱-流动相:流速温度检测洗脱HPLC-泵YMCC-30250X4.6mmTBME/甲醇二50/50(体积比)1mIVmin300C450nm(UV/VIS检测器)0532]图13和14显示了未包覆的叶黄素-酯在人造胃液或人造肠液中的稳定性。正如所见到的，未包覆的叶黄素-酯在胃消化期间是稳定的，而在肠消化100分钟内观察到20%的分解。图15和16(非齐聚态)显示了用1%齐聚的硫辛酸包覆的叶黄素-酯在人造胃液或人造肠液中的稳定性。正如所见到的，用1%^1辛酸包覆的叶黄素-酯在胃和肠消化期间是稳定的。未包覆的叶黄素-酯在pH-2.0(人造胃液)发现是稳定的，因此涂层在胃酸消化期间不受影响。另一方面，使用了1%或3%硫辛酸的涂层在模拟的肠消化期间阻止降解。可看到没有浓度依赖效果。l.Og柠檬酸与5g叶黄素酯加入100g无水乙醇。该混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。该剩余物真空干燥并测定干重。叶黄素酯中柠檬酸的含量经测定含有大约1%柠檬酸(重量比)。干燥后的柠檬酸与叶黄素酯混合物升温至5(TC保持24小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。结果样品名称残基率/%空白样8.81%柠檬酸包埋样品90.95%柠檬酸包埋样品95.91.5%硫辛酸包埋样品97.8"空白样"是经受50'C高温24小时处理的叶黄素酯。"残基率/%"指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值。在保护叶黄素酯中硫辛酸和多酚的比较硫辛酸和维生素E在保护叶黄素酯中的对比实验300mg叶黄素酯和30mga-生育酚被加入灰泥，彻底磨碎并60'C下保持4小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。0558]通过彻底碾磨两种物质，然后6(TC高温处理4小时，制备1%硫辛酸(基于酯的重量)包覆的叶黄素酯样品，从而提供含有叶黄素酯的低聚硫辛酸，以模拟酯的加速降解。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。37结论稳定叶黄素酯的方法硫辛酸Sigma没食子酸Sigma无水乙醇Sigma混合方法300mg叶黄素酯和预先确定数量的硫辛酸被置于灰泥中，碾磨然后经60'C高温处理4小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。包埋方法05733.0g硫辛酸U4.5mmo1)与5g叶黄素酯溶于lOOg无水乙醇。该混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。真空干燥剩余物并测定剩余物干重。在叶黄素酯中的硫辛酸含量经测定含有大约3.5%硫辛酸(重量比)。硫辛酸/叶黄素酯的混合物然后经60'C高温处理9小时以实现硫辛酸的齐聚。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。结果0576]混合方法稳定性试验后的残基率38<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>"残基率/%"是指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值，通过uv-可见光谱测量。与上述硫辛酸包埋样品相同，通过用没食子酸或白藜芦醇替代硫辛酸，制备没食子酸和白藜戸醇包埋样品。结论人们注意到低聚硫辛酸可保护叶黄素酯，而且随着用量增加，该叶黄素酯的稳定性也增加。由于成分混合在一起，理想的硫辛酸用量为大约10%(基于叶黄素酯的总重量)。通过包埋方法，也测定了多酚和低聚硫辛酸均可以保护叶黄素酯免遭降解；可是，低聚硫辛酸对于防止降解更加有效。进一步注意到，包埋方法比将成分简单紧密混合一起更有效。值得注意的是，对于混合组分，使用相等数量的硫辛酸或其他稳定剂和相同的较长的加热时间，所述的包埋方法样品比成分混合一起的样品具有较大的残基率。作为包覆材料的硫辛酸衍生物的聚合度包埋方法0582]3.0gLAORN(8.42mmo1)与5g硅胶溶于100g水。混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。真空干燥剩余物并测定剩余物干重。平均聚合度是通过上述碘滴定法测定。按照所述的LAORN制备低聚-硫辛酸盐的其他样品。聚合度的测定不同的低聚-硫辛酸盐的平均聚合度通过上述碘量法测定。结果室温下干燥样品名称包埋前聚合度包埋后聚合度LAORN4.215,14硫辛酸铵10.8611.65硫辛酸钠14.1714.56在5'C下干燥样品名称包埋前聚合度包埋后聚合度LAORN4.214.35硫辛酸铵10.8611.22硫辛酸钠14.1714.01"在5'C下干燥"是指样品在真空5'C下干燥。"室温"样品在真空室温条件下干燥。0588]结论稳定性实验实验样品经50'C处理24小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。实验结果样品名称干燥温度残基率/%LAORN室温下干燥95.8硫辛酸铵97.8硫辛酸钠95.2IAORN在5'C下干燥97.2硫辛酸铵92.6硫辛酸钠91.2结论精氨酸-硫辛酸盐的制备虽然本发明已经以优选实施例为基准进行了描述，但是所属
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的专业人员将意识到那些没有离开本发明的主旨和保护范围的在形式和细节方面的改变。所有说明书中的引用文献，包括背景在内，在这里将被完全采用。所属领域技术人员将意识到或能够确定许多，仅仅使用常规实验，等同于本发明具体描述的特定的实施例的技术方案。这样的等同方案规定为被包括在下列权利要求的范围内。40权利要求1.一种组合物，含有一种低聚态硫辛酸和平衡离子构成的合成物。2.根据权利要求1所述的组合物，所述的平衡离子为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺或三取代胺。3.根据权利要求1所述的组合物，所述的平衡离子为一种氨基酸。4.根据权利要求3所述的组合物，所述的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。5.—种组合物，含有一种通式(I)所述的低聚态硫辛酸合成物其中每个R+独立地表示一个平衡离子，并且n为2-50之间的数值。6.根据权利要求5所述的组合物，所述的每个R+独立地表示为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺或三取代胺。7.根据权利要求13所述的组合物，所述的每个R+为一种氮基酸。8.根据权利要求7所述的组合物，所述的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。9.一种下述方法制备的低聚态硫辛酸合成物a)碱与硫辛酸在水溶液中反应；b)溶液在较高温度下保持大约1-5小时；然后c)通过加入一种非溶剂，从水溶液中析出一种硫辛酸和碱平衡离子的合成物。10.根据权利要求9所述方法制备的低聚态硫辛酸合成物，进一步包含步骤d)收集析出的合成物。11.根据权利要求9所述的低聚态硫辛酸合成物，所述反应温度为大约30°C-50°C。12.根据权利要求9所述的低聚态硫辛酸合成物，所述溶液在较高温度下保持大约3小时。13.根据权利要求9所述的低聚态硫辛酸合成物，所述非溶剂为醇、氯代烃、脂肪族酮、脂肪族醚、烷烃、芳烃或其混合物。14.根据权利要求13所述的低聚态硫辛酸合成物，所述非溶剂为乙腈、二氯甲烷、丙酮、2-丙醇、二乙醚、己垸、辛垸、甲苯、石油醚、四氢呋喃、辛醇、苯、二氧杂环乙烷或其混合物。15.根据权利要求9所述的低聚态硫辛酸合成物，所述的碱为氨基酸。16.根据权利要求15所述的低聚态硫辛酸合成物，所述的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。17.—种组合物，含有通式(Ia)所示的低聚态硫辛酸ho(la)其中n为大约2-50之间的数值。18.—种含有通式(ID所示的混合态低聚a-硫辛酸合成物的组合物or(ii)所述的n为大约2-50之间的数值；并且每个W独立地为一个氢原子或平衡离子，且至少一个W为平衡离子。19.一种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求1所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。20.—种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求5所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。21.—种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求9所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。22.—种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求17所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。23.—种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求18所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。24.—种药物组合物，含有权利要求1所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。25.—种药物组合物，含有权利要求5所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。26.—种药物组合物，含有权利要求9所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。27.—种药物组合物，含有权利要求17所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。28.—种药物组合物，含有权利要求18所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。29.—种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求1所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。30.根据权利要求29所述的方法，所述的接触方法为包覆。31.根据权利要求29所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求1所述的组合物均匀混合。32.—种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求5所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。33.根据权利要求32所述的方法，所述的接触方法为包覆。34.根据权利要求32所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求5所述的组合物均匀混合。35.—种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求9所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。36.根据权利要求35所述的方法，所述的接触方法为包覆。37.根据权利要求35所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求9所述的组合物均匀混合。38.—种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求17所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。39.根据权利要求38所述的方法，所述的接触方法为包覆。40.根据权利要求38所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求17所述的组合物均匀混合。41.一种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求18所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。42.根据权利要求41所述的方法，所述的接触方法为包覆。43.根据权利要求41所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求18所述的组合物均匀混合。全文摘要本发明涉及具有平衡离子和分子式(Ia)所示的低聚态α硫辛酸的低聚态α硫辛酸合成物，其中n为2到50，以及其在稳定类胡萝卜素及类胡萝卜素衍生物中的应用。文档编号A61K31/045GK101500991SQ200780029055公开日2009年8月5日申请日期2007年7月3日优先权日2006年7月6日发明者托马斯·爱丁伯格申请人:欧博康有限公司