Iap抑制剂用于治疗急性髓性白血病的用途的制作方法

专利名称：：Iap抑制剂用于治疗急性髓性白血病的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及治疗血液恶性肿瘤包括急性髓性白血病(AML)的方法，该方法包括使用抑制Smac蛋白与IAPs结合的化合物("IAP抑制剂，，)。本发还涉及IAP抑制剂在制备治疗血液恶性肿瘤包括AML的药物中的用途。
背景技术：
：AML是一种特征为细胞分化阻断和骨髓前体细胞异常生长的血液恶性肿瘤。近30。/。的AML患者，和一部分急性淋巴细胞白血病(ALL)患者，表达突变形式的III型受体酪氨酸激酶，FLT3(Fms样酪氨酸激酶-3;STK-1，人干细胞酪氨酸激酶-l;或FLK-2，胎肝激酶-2)。参见Rosnet和Birnbaum(1993)和Stirewalt和Radich(2003)。组成性激活的FLT3最常在近膜域内作为内部串联重复出现[参见Nakao等人(1996)]，并在近20-25%的AML患者，但是少于5。/。的骨髓增生异常综合征(MDS)患者中观察到它。参见Nakao等人(1996);Horiike等人(1997);Kiyoi等人(1998);Kondo等人(1999);Kiyoi等人(1999)和Rombouts等人(2000)。已表明移植^t表达FLT3-ITD突变体的逆转录病毒感染的小鼠骨髓细胞导致小鼠快速致死性骨髓增殖性疾病的形成。参见Kdly等人(2002)。功能获得FLT3较少作为点突变发生于活化环(约7%的AML病例)，其特征通常为在835位有天冬酰胺(Asp)残基。参见Yamamoto等人(2001)。不常发生的是在激酶结构域的另外的点突变，包括N841I[参见Jiang等人(2004)和Y842C[参见Kindler等人(2005)]。需要开发用于治疗急性白血病患者的小分子。
发明内容已发现IAP蛋白家族成员在介导细胞凋亡中起作用且这些蛋白是白血病的活性乾点，因为已经发现它们在急性白血病中易变地表达，并且和化学敏感性、化学耐抗力、疾病恶化、緩解及患者的存活有关。本发明涉及治疗患有白血病(尤其是AML、特别是对常规化学疗法耐受的AML)的温血动物(尤其是人类)的方法，该方法包括将治疗有效量的可用于治疗AML的IAP抑制剂给药至所述动物。在另一个实施方案中，本发明涉及IAP抑制剂在制备治疗血液恶性肺瘤包括AML的药物中的用途。附图详述图1图示说明N-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c]吡咬-l-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺在PKC412-敏感型FLT3-ITD-Ba/F3和PKC412-耐药型G697R-Ba/F3上的两天治疗，用PKC412(n=2)。图2图示说明N-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c]吡e定一l-基-乙基卜2-甲基氨基-丙酰胺在PKC412-敏感型FLT3-ITD-Ba/F3和PKC412-耐药型G697R-Ba/F3上的三天治疗，用LBW242(n=2)。图3图示说明N-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-cI吡咬-1-基-乙基-2-甲基#^-丙酰胺在野生型FLT3-Ba/F3和D835Y-Ba/F3上的三天治疗，用LBW242(n=2)。图4图示说明对NCR棵鼠通过静脉注射由尾静脉注入800,000个Ba/F3-FLT3ITD-hic+细胞，然后用溶媒(NMP+PEG300)、LBW242(50mg/kg)通过口腔强饲法处理最多至10天。发明详述细胞凋亡信号的介导代表介入疗法的一种有吸引力的靶标。"第二个源于线粒体的胱天蛋白酶激活因子"("Smac")介导通过内源性细胞凋亡途径发生的细胞凋亡[参见Du等人(2000)]，并结合和抑制IAP家族的蛋白。参见Liu等人(2000)和Wu等人(2000)。Smac可能是果蝇Reaper、Hid和Grim的功能等价物[参见Vucic等人(1998);McCarthy和Dixit(1998)及Goyal等人(2000)];小鼠Smac直向同源物是DIABLO。参见Verhagen等人(2000)。已鉴定的人类IAPs(c-IAP-l、c-IAP-2和X-染色体联接的IAP，或XIAP)与胱天蛋白酶原-9结合并抑制它的激活。参见Deveraux等人(1998)。IAPs还直接结合并抑制活性胱天蛋白酶[参见Deveraux等人(1997);Roy等人(1997)和Deveraux等人(1998)];BIR("杆状病毒IAP重复序列")结构域负责IAPs的抗细胞凋亡活性。参见Takahashi等人(1998)。IAP蛋白家族成员在介导细胞凋亡中发挥作用。本发明所使用的IAP抑制剂的示例包括根据式(I)的化合物或者其药学上可接受的盐其中R是H、C广Q烷基、C广C4烯基、d-C4炔基或C3画C，o环烷基，其是未取代或取代的；R2是H、d-Q烷基、d-Ct烯基、CrC4炔基或QrC,g环烷基，其是未取代或取代的；R3是H、-CF3、-C2F5、C广Q烷基、C广C4烯基、d画C4炔基、-CH2-Z,或R2与R3与氮原子一起形成het环；Z是H、-OH、F、Cl、-CH3、-CF3、-CH2C1、-CH2F或画CH20H;R4是C,-d6直链或支链烷基、Crd6烯基、d-d6炔基或-C3-do环烷基、-(CH^w-z,、-(<:112)0_6-芳基苯基和-(<:112)0_6-11"，其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的；Z,是-N(R8)-C(0)-C广do烷基、-WR+C^OHCH^OkCVC环烷基、-N(R8)-C(0)-(CH2)o.6-苯基、画N(Rs)-C(OHCH2)—6-het、C(0)-N(R9)(Rk))、-C(O)-O画C广do烷基、-C(0)-0-(CH2)16C3-C7环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-苯基、-qC^-CHCHyw-het、-O-C(O)-C广do烷基、-O-qOHCH^w-QrC^环烷基、-0-<:(0)-(012)0-6-苯基、画0-C(0)画(CH2)l6-het，其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的；Het是含有1-4个选自N、0和S的杂原子的5至7元杂环，或者是包含至少一个5至7元杂环(其含有1、2或3个选自N、O和S的杂原子)的8至12元稠环体系，其中所述杂环或稠环体系在碳或氮原子上是未取代或取代的；Rs是H、-CH3、-CF3、-CH2OH或画CH2C1;R9和R,0各自独立地是H、d画d烷基、C3-C7环烷基、-(CH2)wC3誦C7环烷基、-(CH2)o—6-苯基，其中烷基、环烷基和苯基是未取代或取代的，或者R9和R1()与氮原子一起形成het;R5是H、CVd()-烷基、芳基、苯基、C3-C7环烷基、-(CH2)l6-C3画C7环烷基、-c广c,o烷基-芳基、-((:112)()_6-(:3-(:7环烷基-(<:112)().6-苯基、-(CH2)o-4CH-((cH2)K苯基)2、-(<:112)0-6-(:11(苯基)2、-茚满基、-C(0)陽d画d。烷基、-CXOMCHA—6胃C3誦C"环烷基、-C(O)-(CH2)0_6-苯基、-((:112)().6-(:(0)画苯基、-(CH2)o.6-het、-qOHCH^w-het或者Rs是氨基酸残基，其中烷基、环烷基、苯基和芳基取代基是未取代或取代的；U是如结构(II)所示的结构其中n=0-5;X是-CH或N;Ra和Rb独立地是O、S或N原子或者Co-C8烷基，其中烷基链中的一个或多个碳原子可被选自O、S或N的杂原子替换，并且其中烷基可以是未取代或取代的；Rd选自(a)-Re~Q-(Rf)p(Rg)q;或(b)An—D—Ar2;或(c)Ar广D—Ar2;Rc是H或者Rc和Rd可以一起形成环烷基或het;其中如果Rd和Rc形成环烷基或het，Rs连接在所形成的环的C或N原子上；p和q独立地是O或1;Re是d—Cs烷基或亚烷基，并且Re可以是未取代或取代的；Q是N、O、S、S(0)或S(0)2;An和Ar2是未取代或取代的芳基或het;Rf和Rg各自独立地是不存在，或者是H、-C广do烷基、CVC10烷基芳基、-OH、-O-C广Cn)烷基、-(CH2)Q_6-C3-C7环烷基、-0-(<:112)()_6-芳基、苯基、芳基、苯基-苯基、-(CH^^-heL-CMCH^-het、-OR、-C(0)-R、-C(0)-N(R)(R12)、-N(R)(R12)、画S画R"、-S(0)-R、-S(0)2-R、-S(0)2-NRR12、-NRn-S(0)2-R，2、S-C广do烷基、芳基-C广C4烷基、het-d画Ct烷基，其中烷基、环烷基、het和芳基是未取代或取代的，-S02丄LC2烷基、画S02-d-C2烷基苯基、-0陽d画C4烷基或者Rg和Rf形成选自het或芳基的环；D是-CO-、-C(O)-或者Q—C7亚烷基或亚芳基、-CF2-、-O-、画或者S(OV其中rn是0-2、1,3二氧戊环(dioaxolane)或者d—C7烷基-OH，其中烷基、亚烷基或亚芳基可是未被取代的或净皮一个或多个卣素、OH、-O-d-Q;^!^-S-C广C6烷基或《F3取代，或者D是-N(Rh)，其中Rh是H、d-C7烷基(未取代或取代的)、芳基、-0(^X7环烷基)(未取代或取代的)、C(0)-do-d()烷基、C(O)-Co-do坑基-芳基、C-O國C广do坑基、C-O-Co-do坑基-芳基或者S02-d()-CKr烷基、S02-(Co-d(r烷基芳基)；R6、R7、R，6和R，7各自独立地是H、-C广Qo烷基、-C广do烷氧基、芳基-d-do烷氧基、-OH、-O-C广do烷基、-(CH2)0_6-C3-C7环烷基、-0-((:112)0-6-芳基、苯基、-(CE^^-he"画0-(CH2)，一6-het、-ORn、-C(O)-R"、-C(O)-N(Rn)(R"、-N(R)(R12)、画S-R"、曙S(O)-R"、-S(0)2-R"、-S(0)2-NRR12、-NR"-S(0)2-R,2，其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；并且R6、R7、R、和R，7能够联合形成环系；R"和R12独立地是H、d画do烷基、-(CH2)0_6-C3-C7环烷基、-(CH2)。_6-(CH)m(芳基)"2、画C(O)画d-Qo烷基、-qOXCE^wCVC环烷基、-C(0)-0-(CH2)o_6-芳基、-C(OHCH2)o-6-0-芴基、-C(0)-NH-(CH2)o—6-芳基、-C(0)-(CH2)o—6-芳基、-C(OHCH2),—6國het、-C(S)-C广do烷基、-C(S)-(CH2)l6-C3-C7环烷基、-C(S)-O-(CH2)0-6-芳基、-C(S)-(CH2)0-6-O-芴基、-C(S)-NH-(CH2)o_6-芳基、-C(SHCH2)o.6-芳基、-C^SXCEy^-het,其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的，或者Rn和R,2是有助于分子跨细胞膜转运的取代基，或者Rn和Ri2与N原子一起形成het;其中R,,和R，2的烷基取代基可以是未被取代的或者被一个或多个选自C广do烷基、卣素、OH、-0-C广C6烷基、-S-d-C6烷基或者-CF3的取代基取代；R"和Ri2的取代的环烷基取代基被一个或多个选自C广do烯、c广C6烷基、卤素、oh、-o-c广Q烷基、^-(:1-<:6烷基或者-CF3的取代基取代；并且Rn和Ri2的取代的苯基或者芳基被一个或多个选自卣素、羟基、C广C4烷基、C广Q烷氧基、硝基、-CN、-o-CCC^-d-Cj烷基和-C(o)-o-C广Cr芳基的取代基取代。在式(i)范围内的化合物和它们的制备方法7>开在U.S.60/835,000中，因此将其引入本申请中作为参考。优选化合物选自(5)-7V-((^H-环己基-2-K5)-2-4-(4-氟-苯甲酰基)-噻唑-2-基-吡咯烷_1_基}_2-氧代-乙基)-2-曱基M-丙酰胺、(5>^-[(5>环己基-(乙基-{(5)-1-[5-(4-氟-苯甲酰基)-吡啶-3-基-丙基}氨基曱酰基)-甲基卜2-甲基M-丙酰胺、(5)-7V-((5)-l-环己基-2-{(5)-2-[5-(4-氟-苯氧基)-吡啶-3-基]-吡咯烷-1-基}-2-氧代-乙基)-2-甲基#^-丙酰胺和Aqi-环己基-2-(2-{2-[(4-氟苯基)-曱基-氨基-吡啶-4画基}吡咯烷-1國基)-2-氧代-乙基-2-曱基#^-丙酰胺和其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，iap抑制剂是式iii化合物或其药学上可接受的盐式iii其中R，是H、C广C4烷基、C2-d烯基、C2-Cj炔基或者C3-do环烷基，该R,可以是未取代或取代的；R2是H、d-C4烷基、QrC4烯基、C2-C4炔基或者C3画do环烷基，该R2可以是未取代或取代的；R3是H、CF3、C2F5、d画Ct烷基、Q-C4烯基、C2-Q炔基、CH2-Z，或者R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成杂环，所述烷基、烯基、炔基或者het环可以是未取代或取代的；Z是H、OH、F、Cl、CH3、CH2C1、CH2F或者CH2OH;R4是C(m0烷基、C3-do环烷基，其中C(mo烷基或环烷基基团是未取代或取代的；A是het，其可以是取代或未取代的；D是d-C7亚烷基或者C2-C9亚烯基、C(O)、O、NR7、S(O)r、C(O)曙C广do烷基、O-C广do烷基、S(O)r画C广do烷基、C(O)C0-C10芳基烷基、OC(tC,q芳基烷基或者S(O)rCQ-C1()芳基烷基，所述烷基和芳基基团可以是未取代或取代的；r是0、1或2jA,是取代的芳基或者未取代或取代的het，所述芳基和het上的取代基是囟素、低级烷氧基、NR5R6、CN、N02或者SRs;每个Q独立地是H、d-do烷基、d-do烷氧基、芳基CVd。烷氧基、OH、O-C广d()-烷基、(CH2V6-C3-C7环烷基、芳基、芳基C广d。烷基、O-(CH2)06芳基、(CH2)广6het、het、0-(CH2)16het、國OR"、C(O)R"、-C(0)N(R)(R12)、N(R)(R12)、SR"、S(O)R"、S(0)2R、S(0)2-N(R)(R12)或者NRu-S(0)2-(R,2),其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；n是0、1、2或3、4、5、6或7;het是包含l-4个选自N、0和S的杂环原子的5-7元单环杂环，或者是包含一个5-7元单环杂环(其包含1、2或3个选自N、O和S的杂环原子)的8-12元稠环体系，所述het是未取代或取代的；Rn和R12独立地是H、d-d。烷基、(CH2V6-C3-C7环烷基、(CH2)o-6-(CH)(m(芳基),-2、C(O)-C广C。烷基、-C^OHCHdwCVC环烷基、-(:(0)-0-(12)().6-芳基、國C(0)画(CH2)o-6-0-芴基、C(0)-NH-(CH2)o—6画芳基、C(O)-(CH2)0-6-芳基、C(0)画(CH2)l6-het、-C(S)画C广d。烷基、-C(S)-(CH2)l6-C3-C7环烷基、画C(S)-0-(CH2)o-6画芳基、-C(S)-(CH2)0-6-O"^基、C(S)-NH-(CH2)o'6-芳基、-(:(8)-((:112)0-6-芳基或者C(S)-(CH2)i—6-het、C(O)R"、C(O)HC(O)ORn、S(O)nR"、S(0)mNR"R12(m=1或者2)、C(S)R"、C(S)NRR12、C(S)OR，其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；或者Ru和Ru是有助于分子跨细胞膜转运的取代基；或者Rn和Ru与氮原子一起形成het;其中Rn和R12的烷基取代基可以是未被取代的或者是被一个或多个选自C广do烷基、卤素、OH、0-C广C6烷基、-8-(^-<:6烷基、CF3或者NRnR12的取代基取代的；Rn和R12的取代的环烷基取代基是被一个或多个选自CVdo烯、C广C6烷基、卤素、OH、0-d画C6烷基、S誦C,-C6烷基、CF3或者NRnR,2的取代基取代的；并且Rn和R12的取代的het或取代的芳基是被一个或多个选自卣素、羟基、C广C4烷基、C广C4烷氧基、硝基、CN0-C(0)國C广C4烷基和C(0)-0-d画Cr烷基的取代基取代的；R5、R6和R7独立地是氢、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、环烷基或者环烷基低级烷基，并且其中R^R2、R3、R4、Q以及A和A,基团上的取代基独立地是闺素、羟基、低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷酰基、低级烷氧基、芳基、芳基低级烷基、氨基、氨基低级烷基、二低级烷基氨基、低级烷酰基、氨基低级烷氧基、硝基、氰基、氰基低级烷基、羧基、低级烷酯基、低级烷酰基、芳酰基(aryloyl)、低级芳基烷酰基、氨基甲酰基、N-单-或者N，N-二低级烷基氨基甲酰基、低级烷基氨基曱酸酯、脒基、胍、脲基、巯基、磺基、低级烷硫基、磺氨基(sulfoamino)、磺酰胺、苯磺酰胺、磺酸酯、硫烷基低级烷基、芳基磺酰胺、囟素取代的芳基磺酸酯、低级烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基-低级烷基亚磺酰基、低级烷基芳基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基-低级烷基磺酰基、低级芳基烷基低级烷基芳基磺酰基、卣素-低级烷基巯基、卣素-低级烷基磺酰基、膦酰基(-P(=0)(OH)2)、羟基-低级烷氧基磷酰基或者二-低级烷氧基磷酰基、(R9)NC(O)-NR10R13、低级烷基氨甲酸酯或氨基甲酸酯或者-NR8Rw，其中Rs和Rm可以是相同的或者不同的并且独立地是H或低级烷基，或者R8和R,4与N原子一起形成包含氮杂环原子的3-8元杂环并且可以任选含有一个或两个选自氮、氧和硫的其它杂原子，所述杂环可以是未取代的或被下列基团取代低级烷基、卣素、低级烯基、低级炔基、羟基、低级烷氧基、硝基、氨基、低级烷基、氨基、二低级烷基氨基、氰基、羧基、低级烷酯基、曱酰基、低级烷酰基、氧代、氨基曱酰基、N-低级或者N，N-二低级烷基氨基甲酰基、巯基或者低级烷硫基；并且R9、R，o和Rn独立地是氢、低级烷基、卣素取代的低级烷基、芳基、芳基低级烷基、卣素取代的芳基、面素取代的芳基低级烷基。一些落在式III化合物范围内的化合物包括(S)-N-((S)-l-环己基-2-{(8)-2-[4-(4-氟-苯曱酰基)-噻唑-2-基-吡咯烷-1-基}-2-氧代-乙基)-2-曱基氨基-丙酰胺、(S)-N-[(S)-环己基-(乙基-((S)-l-[5-(4-氟-苯甲酰基)-吡啶-3-基j-丙基}氨基曱酰基)-甲基卜2-甲基氨基-丙酰胺和(S)-N-((S)-l-环己基-2-{(8)-2-[5-(4-氟-苯氧基)-吡啶-3-基-吡咯烷-1-基}-2-氧代-乙基)-2-甲基氨基-丙酰胺和药学上可接受的盐。式III的这些化合物公开在PCT/US2007/0747卯和U.S.序列号60/835,000中；将该两者以其全部内容引入文中作为参考。其它IAP抑制剂的示例包括公开在2005年10月20日公布的WO05/097791中的化合物。式(I)范围内的优选化合物是iV-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3^]吡咬-1-基-乙基-2-曱基#^-丙酰胺。另外的IAP抑制剂包括已在WO04/005284、PCT/US2006/013984和PCT/US2006/021850中^^开的化合物。用于本发明的其它IAP抑制化合物包括那些已公开在WO06/069063、WO05/069888、US2006/0014700、WO04/007529、US2006/0025347、WO06/010118、WO05/069894、WO06/017295、WO04/007529和WO05/094818中的化合物。在上文给出的引用的专利申请的每种情况中，将与化合物有关的主题引入本申请中作为参考。同样还引入在其中公开的其药学上可接受的盐、相应的外消旋物、非对映异构体、对映异构体、互变异构体和上述公开的化合物的相应的晶体变形(crystalmodification),例如盐、7jC合物和多晶型物。在本发明的组合中作为活性成分使用的化合物能够如引用的文献所描述那样分别地制备和给药。多于两种单独的如前述的活性成分的组合同样在本发明的范围内，即在本发明范围内的药物组合可以包含三种或更多种活性成分。术语"治疗"指所述疾病尤其是下面所提到的疾病的预防性或者优选治疗性(包括但不限于緩解、治愈、症状减轻、症状减少、调节性和/或抑制性)治疗。如文中所用，术语"AML"指髓样细胞(例如粒性白细胞以及类红细胞和巨核(megakaryotic)细胞和祖细胞)的失去控制的快速进行性生长。在患有AML的患者中，不成熟的髓样细胞、类红细胞或巨核细胞在数量上严重超过红细胞(红血细胞)从而导致疲劳和出血，并同时增加对感染的敏感性。在儿童以及成人中，尽管使用强力(aggressive)化疗方案，但是AML的预后很差。总存活率是40%-60%。骨髓清除化疗之后进行的自身骨髓移植并不能改变存活，但是在强力化疗之后进行的异体骨髓移植可以使存活率升至70%。不幸地是，能够获得的匹配的同胞供体是有限的。因此，AML疗法的新治疗策略是必要的。温血动物(或者患者)优选为哺乳动物，尤其是人类。待^f吏用的IAP抑制剂化合物的精确剂量取决于一些因素，包括宿主、所治疗的疾病的性质和严重程度、给药方式。IAP抑制剂化合物能以任意途径给药，包括口服给药、肠胃外例如腹膜内、静脉内、肌肉内、皮下、瘤内或直肠给药、或者肠内给药。优选地，IAP抑制剂化合物通过口服给药，优选日剂量为1-300mg/kg体重或者，对于大多数较大灵长类动物，日剂量为50-5,000、优选为500-3,000mg。优选的口服日剂量为1-75mg/kg体重，或者，对于大多数较大灵长类动物，日剂量为10-2，000mg，以单剂量或者分成多剂量给药，例如每天两次给药。通常，最初以,J、剂量给药并且剂量逐渐增加直到确定被治疗的宿主的理想剂量。剂量的上限是副作用迫使的，并且能够通过4皮治疗的宿主进行试验来确定。给药方案必须根据具体适应征、患者的年龄、体重和一般身体状况以及所预期的反应进行剂量调整(titrate)，但是一般来讲，剂量是大约10mg/天到大约500mg/天，按照需要每日单次或多次给药。IAP抑制剂化合物可与一种或多种药学上可接受的载体以及任选的一种或多种其他常规药学辅剂联合，并以片剂、胶嚢、小胶嚢等形式肠内给药，例如口服给药；或者以无菌可注射溶液或者混悬液的形式肠胃外给药例如腹膜内或者静脉内给药。肠内和肠胃外组合物可以按照常规方法制备。7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c吡啶-l-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺在体外抑制表达PKC412-敏感型和耐药突变型FLT3的细胞。A^l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3^吡咬-1-基-乙基-2-甲基M-丙酰胺诱导细胞凋亡，通过膜联蛋白(annexin)-pi染色法和胱天蛋白酶测定，谨慎地观察到有效浓度在微摩尔级范围。7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c]吡咬画l-基画乙基-2-曱基氨基-丙酰氨能有在生理学剂量上有效地对抗突变FLT3并且在体内能很好地耐受。实施例实施例1细胞系和细胞培养将IL-3-依赖型鼠类造血细胞系Ba/F3用包含FLT3-ITD或者FLT3-D835Y的具有新霉素可选标记的MSCV逆转录病毒进行转导，并根据耐受新霉素进行选择。参见Kelly等人(2002)。选择FLT3-ITD转导的细胞，用于在G418(1mg/mL)中生长。按照前面所描述的培养PKC412-耐药型Ba/F3细胞系，其表达在ATP-结合口袋(F691L、A627T、G697R、N676D)具有突变的FLT3-ITD。参见Cools等人(2004)。人类AML-衍生的、表达FLT3-ITD的细胞系，MV4;11[参见Quentmeier等人(2003)，由Dr.ScottArmstrong,DanaFarberCancerInstitute,Boston,MA.提供。对人类AML-衍生的、表达FLT3-ITD的细胞系(MOLM-13)进行修饰以表达焚光素酶，并由Dr.AndrewKung，DanaFarberCancerInstituteBoston,MA.以MOLM13-luc+提供。所有的细胞系在5%C02、37。C，浓度为2x10s至5xio5的含有10o/。胎牛血清并添加lo/。谷氨酰胺的RPMI(Mediatech，Inc.,Herndon，VA)中培养。表达野生型FLT-3的亲4戈Ba/F3细胞用作为IL-3来源的15。/。WEHI-条件培养基类似地培养。所有的转染细胞系在添加有lmg/mLG418的介质中培养。实施例2化合物和生物试剂Aqi-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3<]吡啶-1-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺由NovartisPharmaAG,Basel,Switzerland合成，并且溶解在DMSO中形成10mM的储备液。同样在DMSO中进行序列稀释，以得到细胞测定的最终稀释液。实施例3细胞存活和凋亡分析之前已经描述了台盼蓝排除分析[参见Weisberg等人(2002)，并将其用于测定在存有和缺失LBW242情况下培养的细胞的增殖。以对照(未处理)的细胞的百分比来报道细胞存活。误差棒代表每个数据点的平均值的标准误差。按照之前所述，使用Annexin-V-FluosStainingKit(BoehringerMannheim,Indianapolis,IN)测定药物处理的细胞的凋亡。参见Weisberg等人(2002)。实施例47V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2,3-cj吡咬匿l-基-乙基-2-甲基^-丙酰胺对表达PKC412-敏感型和耐药突变型FLT3的细胞增殖的作用7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3<]吡咬-1-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺在相对高剂量(21nM)表现对抗PKC412-敏感系FLT3-ITD-Ba/F3和D835Y-Ba/F3细胞以及培养的PKC412-耐药系G697R-Ba/F3的活性，参见图1-3。7V-l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3^]吡啶-1-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺在浓度《1nM时对野生型表达FLT3的Ba/F3细胞的细胞生长没有抑制作用；然而，7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并2，3-c吡啶-l-基-乙基-2-甲基M-丙酰胺的MnM的浓度导致这些细胞死亡(图3)。对于FLT3-ITD-Ba/F3和G697R-Ba/F3细胞系，在17V-l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并2，3-c]吡啶-l-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺存在下培养，分别在两天和三天后发现诱导细胞凋亡和胱天蛋白酶活性。在存在或缺少WEHI(作为IL-3源)情况下用1nM的7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-cI吡啶-l-基-乙基]-2-甲基氨基-丙酰胺将表达突变型FLT3的细胞平行地处理两天。与PKC412-处理的细胞(其被WEHI从PKC412的细胞毒性作用中完全复苏)相比，补加含有WEHI的细胞培养基不能复苏7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c]吡啶-l-基-乙基卜2-曱基氨基-丙酰胺处理的细胞，这表明7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c吡啶-l-基-乙基-2-曱基氨基-丙酰胺，与其推测的IAP抑制的机理一致，不选择性地抑制突变型FLT3，但是干扰生存能力。实施例5yV-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-cj吡咬-1-基-乙基卜2-曱基絲-丙酰胺的体内研究为了直接评估7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c吡咬-l-基-乙基-2-甲基M-丙酰胺的体内抗癌效力，急性白血病小鼠模型中的肿瘤负荷用发光肿瘤细胞的非侵袭性成像进行定量(图4)。将鼠FLT3-ITD-Ba/F3细胞改造为稳定表达萤火虫荧光素酶，然后用这些细胞接种到NCr棵鼠中。用非侵袭性成像来连续评估细胞负荷，并且按照相似肿瘤负荷将已患白血病的小鼠分成组。通过口服强饲给药^-[1-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c]吡咬-l-基-乙基]-2-甲基氨基-丙酰胺，同样给药溶媒。对小鼠单独给予溶媒、7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并12，3-cj吡咬-l-基-乙基-2-甲基^t^-丙酰胺(50mg/kg)(图4)。在药物组合的组中，在静脉注射FLT3-ITD-Ba/F3-luc+细胞后笫5天和第7天时观察到通过生物发光法测定的最低肿瘤负荷(并且分别对应于药物治疗的第4天和第6天)。用Studentt检验对静脉注射后第7天，见察到的生物发光的结果进行统计学评价p幼.056247(溶媒和单独的7V-[l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2，3-c吡咬-l-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺相比)。静脉注射5天后统计学评价(通过Studentt检验)得到p幼.077299(溶媒和单独的7V-l-环己基-2-氧代-2-(6-苯乙基-八氢-吡咯并[2,3<吡啶-1-基-乙基-2-甲基氨基-丙酰胺相比)。实施例6在血液细胞系中(S)-N-((S)-l-环己基-2-((S)-2-[4-(4-氟-苯曱酰基)-噻唑-2-基]-吡咯烷-1-基}-2-氧代-乙基)-2-甲基氨基丙酰胺的单一物质活性使用CellTiter-Glo(Promega)(—种测定活细胞中ATP水平的生物发光细胞存活分析)测定EC50值。将细胞铺在分析板中，并且与一定浓度范围的化合物孵育72小时。将细胞溶解，并依照制造商的说明书在光度计上使用CellTiter-Glo试剂测定ATP水平。EC50指抑制50%的细胞生长的化合物浓度。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>权利要求1.治疗患有急性髓性白血病(AML)的温血动物的方法，该方法包括对所述动物给药治疗有效量的根据式(III)的化合物或其药学上可接受的盐id="icf0001"file="A2007800443890002C1.tif"wi="102"he="30"top="54"left="48"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式III其中R1是H、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基或者C3-C10环烷基，该R1可以是未取代或取代的；R2是H、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基或者C3-C10环烷基，该R2可以是未取代或取代的；R3是H、CF3、C2F5、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、CH2-Z，或者R2和R3与它们所连接的氮原子一起形成杂环，所述烷基、烯基、炔基或者het环可以是未取代或取代的；Z是H、OH、F、Cl、CH3、CH2Cl、CH2F或者CH2OH；R4是C0-10烷基、C3-C10环烷基，其中C0-10烷基或环烷基基团是未取代或取代的；A是het，其可以是取代或未取代的；D是C1-C7亚烷基或者C2-C9亚烯基、C(O)、O、NR7、S(O)r、C(O)-C1-C10烷基、O-C1-C10烷基、S(O)r-C1-C10烷基、C(O)C0-C10芳基烷基OC0-C10芳基烷基或者S(O)rC0-C10芳基烷基，所述烷基和芳基基团可以是未取代或取代的；r是0、1或2；A1是取代的芳基或者未取代或取代的het，所述芳基和het上的取代基是卤素、低级烷氧基、NR5R6、CN、NO2或者SR5；每个Q独立地是H、C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、芳基C1-C10烷氧基、OH、O-C1-C10-烷基、(CH2)0-6-C3-C7环烷基、芳基、芳基C1-C10烷基、O-(CH2)0-6芳基、(CH2)1-6het、het、O-(CH2)1-6het、-OR11、C(O)R11、-C(O)N(R11)(R12)、N(R11)(R12)、SR11、S(O)R11、S(O)2R11、S(O)2-N(R11)(R12)或者NR11-S(O)2-(R12)，其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；n是0、1、2或3、4、5、6或7；het是包含1-4个选自N、O和S的杂环原子的5-7元单环杂环，或者是包含一个含有1、2或3个选自N、O和S的杂环原子的5-7元单环杂环的8-12元稠环体系，所述het是未取代或取代的；R11和R12独立地是H、C1-C10烷基、(CH2)0-6-C3-C7环烷基、(CH2)0-6-(CH)0-1(芳基)1-2、C(O)-C1-C10烷基、-C(O)-(CH2)1-6-C3-C7环烷基、-C(O)-O-(CH2)0-6-芳基、-C(O)-(CH2)0-6-O-芴基、C(O)-NH-(CH2)0-6-芳基、C(O)-(CH2)0-6-芳基、C(O)-(CH2)1-6-het、-C(S)-C1-C10烷基、-C(S)-(CH2)1-6-C3-C7环烷基、-C(S)-O-(CH2)0-6-芳基、-C(S)-(CH2)0-6-O-芴基、C(S)-NH-(CH2)0-6-芳基、-C(S)-(CH2)0-6-芳基或者C(S)-(CH2)1-6-het、C(O)R11、C(O)NR11R12、C(O)OR11、S(O)nR11、S(O)mNR11R12，m＝1或2，C(S)R11、C(S)NR11R12、C(S)OR11，其中烷基、环烷基和芳基是未取代或取代的；或者R11和R12是有助于分子跨细胞膜转运的取代基；或者R11和R12与氮原子一起形成het；其中R11和R12的烷基取代基可以是未被取代的或者是被一个或多个选自C1-C10烷基、卤素、OH、O-C1-C6烷基、-S-C1-C6烷基、CF3或者NR11R12的取代基取代的；R11和R12的取代的环烷基取代基是被一个或多个选自C2-C10烯、C1-C6烷基、卤素、OH、O-C1-C6烷基、S-C1-C6烷基、CF3或者NR11R12的取代基取代的；并且R11和R12的取代的het或取代的芳基是被一个或多个选自卤素、羟基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、硝基、CNO-C(O)-C1-C4烷基和C(O)-O-C1-C4-烷基的取代基取代的；R5、R6和R7独立地是氢、低级烷基、芳基、芳基低级烷基、环烷基或者环烷基低级烷基，并且其中R1、R2、R3、R4、Q以及A和A1基团上的取代基独立地是卤素、羟基、低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷酰基、低级烷氧基、芳基、芳基低级烷基、氨基、氨基低级烷基、二低级烷基氨基、低级烷酰基、氨基低级烷氧基、硝基、氰基、氰基低级烷基、羧基、低级烷酯基、低级烷酰基、芳酰基、低级芳基烷酰基、氨基甲酰基、N-单-或者N，N-二低级烷基氨基甲酰基、低级烷基氨基甲酸酯、脒基、胍、脲基、巯基、磺基、低级烷硫基、磺氨基、磺酰胺、苯磺酰胺、磺酸酯、硫烷基低级烷基、芳基磺酰胺、卤素取代的芳基磺酸酯、低级烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基-低级烷基亚磺酰基、低级烷基芳基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基-低级烷基磺酰基、低级芳基烷基低级烷基芳基磺酰基、卤素-低级烷基巯基、卤素-低级烷基磺酰基、膦酰基(-P(＝O)(OH)2)、羟基-低级烷氧基磷酰基或者二-低级烷氧基磷酰基、(R9)NC(O)-NR10R13、低级烷基氨甲酸酯或氨基甲酸酯或者-NR8R14，其中R8和R14可以是相同的或者不同的并且独立地是H或低级烷基，或者R8和R14与所述N原子一起形成包含氮杂环原子的3-8元杂环并且可以任选含有一个或两个选自氮、氧和硫的其它杂原子，所述杂环可以是未取代的或被下列基团取代的低级烷基、卤素、低级烯基、低级炔基、羟基、低级烷氧基、硝基、氨基、低级烷基、氨基、二低级烷基氨基、氰基、羧基、低级烷酯基、甲酰基、低级烷酰基、氧代、氨基甲酰基、N-低级或者N，N-二低级烷基氨基甲酰基、巯基或者低级烷硫基；并且R9、R10和R13独立地是氢、低级烷基、卤素取代的低级烷基、芳基、芳基低级烷基、卤素取代的芳基、卤素取代的芳基低级烷基。2.根据权利要求l的方法，其中AML对常规化学疗法是耐受的。3.根据权利要求l的方法，其中温血动物是人类。4.根据权利要求3的方法，其中人类是青少年。5.药物组合物，该药物组合物包含如^3L利要求1所定义的式(III)化合物以及任选的药用载体。6.根据权利要求5的药物组合物在治疗AML中的用途。7.商业包装产品，其包含如权利要求1所定义的用于治疗AML的式(III)化合物以及说明书，用于在治疗AML中同时、单独或者依次使用。8.如权利要求1所定义的式(II)化合物在制备治疗AML的药物中的用途。全文摘要本发明涉及治疗血液恶性肿瘤包括急性髓性白血病(AML)的方法，该方法包括使用抑制Smac蛋白与IAPs结合的化合物(“IAP抑制剂”)。本发明还涉及IAP抑制剂在制备治疗血液恶性肿瘤包括AML的药物中的用途。文档编号A61K31/4353GK101541325SQ200780044389公开日2009年9月23日申请日期2007年11月26日优先权日2006年11月28日发明者L·扎维,珧姚申请人:诺瓦提斯公司