作为通道活化蛋白酶抑制剂的化合物和组合物的制作方法

专利名称：：作为通道活化蛋白酶抑制剂的化合物和组合物的制作方法
技术领域：
：本发明通常涉及通道活化蛋白酶(CAP)抑制剂。
背景技术：
：前列腺蛋白酶是一种存在于多种哺乳动物组织中的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。它是在细胞的胞外膜表达的膜锚定蛋白酶，但是也可以分泌到体液中，所述的体液例如精液、尿液和气道表面液体。前列腺蛋白酶(PRSS8)与蛋白酶例如蛋白裂解酶(matriptase)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、PRSS22、TMPRSSll、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶一起可以刺激氨氯吡唤脒敏感的上皮钠通道(ENaC)的活性。抑制这些酶可以诱导上皮离子转运的改变，并且因而诱导穿过上皮细胞膜的液体内稳态的改变。例如，肾中的CAP抑制被认为促进利尿，同时气道中的CAP抑制促，中粘液和痰的清除。因此，肾中的CAP抑制可以治疗性地用于治疗高血压。气道中的CAP抑制阻止了呼吸分泌物的停滞，否则会〗吏患者易受次级细菌感染。发明的公开本发明提供了化合物、药物组合物以及应用该化合物调节通道活化蛋白酶(CAP)的方法。例如，本发明的化合物和组合物可以用于调节前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP國2)、蛋白裂解酶(MTSP画1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶,在一方面，本发明提供了式(1)化合物或其可药用盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中0-(CR2)p-R2为处于环A任何位置的取代基；J为5-12元单环或稠合的碳环、包含N、O和/或S的杂环；芳基或杂芳基环，条件是J不是三唑基；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>或(CR2)k-R5;Y为键、-S02-、-NHCO-或-O-(CO)-;!^为囟素、一(CR2)广NR6r7、-(CR2)rNRC(=NR)—NR6R7、-(CR2)r~C(=NR)-NR6R7、-C(0)-(CR2)「NR6R7、-(CR2)「NR-S02R6、—(CR2),-NR-C(0)-R6、-(CR2)「S02NR6R7、或-(CR2)「OR6，或任选取代的Cw烷氧基、d-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基；或任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；R3为Ci—6烷基、<:2_6链烯基、C2,6炔基或—(CR2)「R5;或者，NH-Y-R3—起形成NH2;R2、R"和R5独立地为任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；CR=P^)或R4为H、Cw烷基、Cw链烯基、<:2_6炔基，或或N且环E与P—起形成任选取代的5-12元单环或稠环;其中P为CR6与R7独立地为H、d-6烷基、(:2_6链烯基、Qj-6炔基或-(CR2)广R5;每个R为H，或Cw烷基、<:2_6链烯基或(:2_6炔基；1为0-6;k、m、n和p彼jt匕独立地为1-6;x为0-4;条件是当NH-Y-R3—起形成NH2时R4为艰^J^;而且进一步的条件是当B为(CR2)k-R5时R5为哌#。在上述式(l)中，J可以是蓬吩基、噻唑基、苯基、吡咬基、丐l哇基、哌^或吡咯烷基。在其它实例中，112可以是苯基或环己基，其中各自可任选被卣素、s02(CL6烷基)取代，或为任选取代的d—6烷基或Cw烷氧基，诸如任选卣代的C^烷基或Cw烷氧基。在一种实施方式中，本发明提供式(2)的化合物R2n—J—(R，):H(2)其中R2和J独立地为任选取代的是6-元芳基；R3为d—6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或"(CR2)广RS;或NH-Y-R3—起形成NH2;(CR2)中的每个R为H或d-6烷基；且m、n和p独立地为l-2。在上述式(1)和(2)中，Y可以^j睫、S02或-O-(CO)-。在其它实例中，W为卣素、C卜6烷基、CF3、OCF3、苯基、—(CR2)广NR6r7、-(CR2)「C(=NR)—NR6R7、—C(0)-(CR2)「NR6R7、-(CR2)「NR-S02R6、—(CR2)「NR-C(0)画R6、一(CR2)广S02NR6r7或一(CR2)广OR6，其中每个l为0-1;且R、R6和R7独立地为H或d—6烷基。在上述式(1)和(2)中，R"可以是任选取代的5-6元碳环、杂环、芳基、5-6元单环。例如，R"可以是任选取代的哌免基、环己基、苯基、在特殊的实例中，式(2)中W的为d-6烷基或任选取代的卡基。在某些实例中，Y为SOz。在其他实例中，W为任选取代的哌梵基。在另外的实例中，J和RZ独立地为任选取代的苯基。例如，J可以被1-3个R、即，其中的x为l-3)取代，且W可任选被卣素取代。另一方面，本发明提供包含式(1)或(2)化合物与可药用赋形剂的药物组合物。本发明还提供了调节通道活化蛋白酶的方法，该方法包括给系统或哺乳动物施用治疗有效量的具有式(1)或(2)的化合物或其可药用盐或药物组合物，从而调节所述通道活化蛋白酶。在一种实施方式中，本发明提供了一种抑制通道活化蛋白酶的方法，该方法包括给细胞或组织系统或哺乳动物施用治疗有效量的具有式(1)或(2)的化合物或其可药用盐或药物组合物；其中所述的通道活化蛋白酶为前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶，从而抑制所述的通道活化蛋白酶。在特殊实例中，本发明提供了抑制前列腺蛋白酶的方法。在另一方面，本发明提供一种改善或治疗由通道活化蛋白酶介导的病症的方法，该方法包括给细胞或组织系统或哺乳动物施用有效量的具有式(1)或(2)的化合物或其可药用盐或药物组合物，并且任选与第二种治疗剂组杂芳基、或,其中P为C或N且环E与P—起形成任选取代的合，从而治疗所述病症；其中所述的通道活化蛋白酶为前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP画2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。此外，本发明提供用于治疗由通道活化蛋白酶介导的疾病的式(l)或(2)化合物。本发明还提供式(1)或(2)化合物，任选与第二种治疗剂组合，用于制备治疗由通道活化蛋白酶介导的疾病的药物的用途。在特殊实例中，本发明化合物可用于治疗前列腺蛋白酶介导的疾病。在一种实施方式中，第二种治疗剂可以是抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、止咳药、抗生素或DNA酶，而且在施用式(1)或(2)化合物之前、同时或之后施用。在某些实例中，本发明化合物施用于支气管上皮细胞，特别是人类支气管上皮细胞。可以利用本发明化合物改善或治疗的病症的实例包括但不限于与液体经离子转运上皮的移动或呼吸组织中粘液和痰的聚集或它们的组合有关的病症。在某些实例中，可以用本发明化合物调节的病症为嚢性纤维化、原发性睫运动障碍、肺癌、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘或呼吸道感染。定义"烷基"指的是基团或作为其它基团的结构元素，所述的其它基团例如卣素-取代的-烷基和烷氧基，并且可以是直链的或支链的。本文所用的任选取代的烷基、链烯基或炔基可以是任选卣代的(例如CF3)，或者可以具有一个或多个被杂原子(诸如NR、O或S)取代或代替的碳(例如-OCH2CH20-、烷1^克醇、石危代烷氧基、烷基胺等)。"芳基"指的是包含碳原子的单环或稠合的双环芳环。例如芳基可以是苯基或萘基。"亚芳基"指的是衍生自芳基的二价基团。本文所用的"杂芳基"如以上芳基所定义，其中一个或多个环成员是杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡梵基、吲咮基、吲唑基、喹喔啉基、壹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嗜啶基、呋喃基、噍唑基、异嗜、唑基、三唑基、四唑基、吡峻基、噢汾基等。本文所用的"碳环"指的是包含碳原子的饱和或部分不饱和的单环、稠合的二环或桥连的多环，其可以任选被取代，例如被=0取代。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙烯、环己酮等。本文所用的"杂环，，如以上碳环所定义，其中一个或多个环碳是杂原子。例如，杂环可以包含N、O、S、-N=、-S-、-S(O)、-S(O)r或-NR-，其中R可以是氢、C,—4烷基或保护基。杂环的实例包括但不限于吗啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、派漆基、哌1^、哌"^酮、1，4-二氧杂-8匿氮杂國螺4.5]癸-8-基等。除非另有说明，当取代基被认为是"任选取代"时，其意味着所述取代基为可以被一个或多个分别且独立选自下述的基团取代的基团例如，任选囟代的烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺、氨基(包括单-和二取代的氨基)、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、羧基、氛基、环烷基、卤素、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基、杂环、羟基、异氰酸酯、异硫氰酸酯、巯基、硝基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氣基曱酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰絲、S-亚磺酰氨基、N-亚磺酰氨基、C-g、全卣代烷基、全氟代烷基、曱硅烷基、磺酰基、硫代羰基、硫氰酸酯、三离代曱磺酰基及其受到保护的化合物。并且可见于参考文献，诸如Greene和Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,第三版"JohnWiley&Sons,NewYork，NY，1999，和Kocienski，ProtectiveGroups,ThiemeVerlag,NewYork,NY，1994，本文整体引用这些文献作为参考。本文所用的术语"共同施用"或"组合施用"等指的是包括给单一患者施用选择的治疗剂，并意欲包括治疗方案，其中药物不必须通过相同施用途径或在相同时间施用。本文所用的术语"药物组合"指的是通过将活性成分混合或组合而获得的产物，并且包括活性成分的固定组合和非固定组合。术语"固定组合"指的是将活性成分例如式(l)化合物与共同药物以单一实体或剂型的形式同时施用于患者。术语"非固定组合"指的是将活性成分例如式(l)化合物与共同药物以分开的实体或者同时、共同或者依次施用于患者，没有特别的时间限制，其中此类施用在患者体内提供了治疗有效水平的活性成分。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或多种活性成分。术语"治疗有效量"指的是在研究者、兽医、医生或其它临床医生探索的细胞、组织、器官、系统、动物或人类中引起生物学或医学响应的主题化合物的量。术语主题化合物的"施用"应当被理解为指的是给需要治疗的个体提供本发明化合物(包括本发明化合物的前药)。本文所用的术语"治疗"指的是减轻或緩和疾病和/或其伴随症状的方法。术语"前列腺蛋白酶"也可以称为人通道活化蛋白酶(hCAP);通道活化蛋白酶-l;和PRSS8、MERPOPSIDS01.159。实施本发明的方式本发明提供了化合物、药物组合物以及应用该化合物调节通道活化蛋白酶(CAP)的方法。在一方面，本发明提供了式(l)的化合物或其可药用盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中0-(CR2)p-R2为处于环A任何位置的取代基；J为5-12元单环或稠合的碳环、包含N、0和/或S的杂环；芳基或杂芳基环，条件是J不是三唑基；B为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>或(CR2)k-R5;Y为键、-S02-、-NHCO-或-O-(CO)-;W为卣素、一(CR2)广NR6R7、—(CR2)广NRC(=NR)—NR6R7、-(CR2)广C(=NR)-NR6R7、-C(OHCR2)i"NR6R7、-(CR2)HVRS02R6、—(CR2)「NR-C(O)画R6、—(CR2)rS02NR6R7、或-(CR2)「OR6，或任选取4戈的C"烷氧基、C"烷基、<:2_6链烯基或<:2_6炔基；或任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；R3为Cw烷基、C2-6链烯基、C2—6炔基或-(CR2)「R5;或者，NH-Y-R3—起形成NH2;R2、议4和议5独立地为任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基;或R4为H、Cw烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基，或、乂，其中P为C或N且环E与P—起形成任选取代的5-12元单环或稠环；R6与R7独立地为H、d—6垸基、<:2-6链烯基、C^炔基或-(CR2)「R5;每个R为H，或C，-6烷基、C2.6链烯基或C2_6炔基；1为0画6;k、m、n和p独立地为l-6;x为0-4;条件是当NH-Y-R3—起形成NH2时R4为咪^^;且进一步的M是当B为(CR2)k-R5时R5为哌M。在其他实施方式中，本发明提供了式(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中R2和J独立地为任选取代的6-元芳基；R3为C"烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)「R5;或NH-Y-R3—起形成NH2;(CR2)中的每个R为H或d-6烷基；且m、n和p独立地为1-2。或者，上述式(1)和(2)中的k、m、n和p独立地为0-6。在特殊实例中,式(l)中的k为2J且J为杂芳基，诸如噻吩基。在其他可选择实施方式中，式(1)和(2)中的Y可以是-CO-。在上述各式中，J还可以选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>其中一个或多个Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7为选自N、NR、O或S的杂原子，其中的R为H或d-6烷基，而且其他的Z^Z原子为CH。在某些实例中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7中至少两个为选自N、NR、O或S的杂原子，其中R为H或CL6烷基，而且其他的^-Z原子为CH。在上述式(1)和(2)，其中每个任选取代的基团可以被以下基团取代卣素、=0、氨基、胍基、脒基、任选取代的d-6烷氧基；d-6烷基、C^链烯基或Cw炔基，其中各自可以任选被卣代或可以任选具有可以被N、O或S代替或取代的碳；C02R8、-O-(CR2)「C(0)-r8;~CCR2)rR8、-(CR2)广C(0)-r8或-(CR2),-S02-R8;或它们的组合，其中每个R8为h、C,—6烷基或任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基。本发明还包括本发明化合物的所有合适的同位素变体或其可药用盐。本发明化合物的同位素变体或其可药用的盐定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子量与自然界常见的原子量不同的原子替换。可掺入本发明化合物及其可药用盐的同位素的实例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，诸如211、3H、13C、"C、15N、170、180、35S、"F和36C1。本发明化合物和其可药用盐的某些同位素变异，例如，其中掺A^:射性同位素诸如sh或"c的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。在特殊实例中，可以使用SH和"C，原因在于它们容易制备和检测。在其他实例中，用同位素如2H替代可以提供某些因代谢稳定性更高产生的治疗优势，例如体内半衰期延长或剂量需求减少。本发明化合物或其可药用盐的同位素变体可利用合适试剂的适当同位素变体通过常规方法制备。本发明的化合物和组合物可以用于调节通道活化蛋白酶。可以应用本蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。本发明的化合物还可以抑制刺激离子通道(诸如上皮钠通道)活性的蛋白酶的活性，并且可以用于治疗CAP相关疾病。药理学和用途本发明化合物调节通道活化蛋白酶的活性、特别是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶诸如前列腺蛋白酶的活性，并且因此用于治疗其中前列腺蛋白酶对疾病的病理学和/或症状学起作用的疾病或障碍。通过抑制通道活化蛋白酶、特别是通过抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶诸如前列腺蛋白酶介导的疾病包括与穿过上皮细胞膜的液体体积调节有关的疾病。例如，气道表面液体的体积是粘膜纤毛清除和保持肺健康的关键调节器。通道活化蛋白酶的抑制将促进气道上皮粘膜侧的液体聚集，从而促进粘液清除并且防止呼吸组织(包括肺气道)中粘液和痰的聚集。此类疾病包括呼吸疾病诸如嚢性纤维化、原发性睫运动障碍、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和细菌性)和肺癌。通过抑制通道活化蛋白酶介导的疾病还包括除呼吸疾病外的疾病，该疾病与经过上皮的异常液体调节有关，可能涉及在它们表面的保护表面液体的异常生理学，例如口干燥症(口干燥)或干燥性角膜结膜炎(keratoconjunctivitissire)(干目艮)。另外，肾中ENaC的CAP调节可以用于促进利尿并且因而诱导低血压作用。慢性阻塞性肺疾病包括慢性支气管炎或与^目关的呼吸困难、肺气肿以及其它药物治疗(特别是其它吸入药物治疗)后的气道高反应性恶化。本发明还适用于治疗任何类型或起源的支气管炎包括例如急性、花生仁吸入性、卡他性、格鲁布性、慢性或结核性支气管炎。哮喘包括内源性(非过敏性)哞喘和外源性(过敏性)哞喘、轻度哞喘、中度哮喘、重度哮喘、支气管孝喘、运动诱导的哮喘、职业性哮喘和细菌感染后诱导的哞喘。哞喘还包括被称为"喘鸣婴儿综合征"的病症，其中包括出现喘息症状并JU皮确诊或可能被诊断为"喘鸣婴儿"的小于4或5岁的个体，这些患者是医学界重点关注的一类患者群并且常常被确诊为初始或早期哮喘。用于治疗由抑制通道活化蛋白酶介导的疾病的通道活化蛋白酶抑制剂(例如前列腺蛋白酶抑制剂)的适合性可以根据下文描述的试验和本领域已知的下列方法通过确定通道活化蛋白酶抑制剂的抑制作用来试验。与前述一致，本发明进一步提供了在需要该治疗的个体中预防或治疗上述任何疾病或障碍的方法，该方法包括给所述个体施用治疗有效量的式(1)或(2)化合物或其可药用盐。对于以上任何用途，所需剂量将取决于施用方式、待治疗的特别病症和所需的作用而不同。(参阅下文的"施用和药物组合物")。"施用和药物组合物通常，本发明化合物以治疗有效量通过本领域已知的任何常规的和可接受的方式单独施用或与一种或多种治疗剂组合施用。本发明的通道活化蛋白酶抑制剂还用作共同治疗剂，用于与其它治疗剂组合。例如，通道活化蛋白酶抑制剂可以与抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药或止咳药、抗生素或脱氧核糖核酸酶治疗剂组合。通道活化蛋白酶抑制剂和其他治疗剂可在相同或不同的药物组合物中。通道活化蛋白酶抑制剂可在固定的药物组合物中与其他治疗剂混合，或者其可以单独施用，在其它治疗剂施用之前、同时或之后施用。所述组合可特别用于治疗嚢性纤维化或者阻塞性或炎性气道疾病(例如上文提及的那些)，例如作为此类药物治疗活性的增效剂或者作为减少此类药物所需剂量或潜在副作用的方法。适合的抗炎药包括类固醇，特别是糖皮质激素诸如布地奈德、丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松、环索奈德或莫米松糠酸酯，或在国际专利申请WO02/88167、WO02/12266、WO02/100879、WO02/00679(例如，实施例3、11、14、17、19、26、34、37、39、51、60、67、72、73、90、99和IOI)、WO03/35668、WO03/48181、WO03/62259、WO03/64445、WO03/72592、WO04/39827和\￥004/66920中描述的类固醇；非类固醇类糖皮质激素受体激动剂，诸如在DE10261874、WO00/00531、WO02/10143、WO03/82280、WO03/82787、WO03/86294、WO03/104195、WO03/101932、WO04/05229、WO04/18429、WO04/19935和WO04/26248中描述的那些；LTD4拮抗剂例如孟鲁司特和4L鲁司特；PDE4抑制剂例如西洛司特(ARIFLOGlaxoSmithKline)、ROFLUMILAST⑧(BykGulden)、V-11294A(Napp)、BAY19-8004(Bayer)、SCH-351591(Schering画Plough)、AROFYLLINE⑧(Almira11Prodesfarma)、PD189659/PD168787(Parke-Davis)、AWD誦12-281(AstaMedica)、CDC画801(Celgene)、SelCID(TM)CC-10004(Celgene)、VM554/UM565(Vernalis)、T画440(Tanabe)、KW-4490(KyowaHakkoKogyo)，以及在WO92/19594、WO93/19749、WO93/19750、WO93/19751、WO98/18796、WO99/16766、WO01/13953、WO03/104204、WO03/104205、WO03/39544、WO04/000814、WO04/000839、WO04/005258、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/018431、WO04/018449、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/019944、WO04/019945、WO04/045607和WO04/037805中乂iHf的那些；以;SJ^甘A2B受体拮抗剂诸如在WO02/42298中描述的那些，其中每个以其整体并入本文。适合的支气管扩张治疗药包括(3-2肾上腺素受体激动剂，诸如沙丁胺醇、奥西那林、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、丙卡特罗、福莫特罗或卡莫特罗及其可药用盐，以及在WO00/75114中描述的式(l)化合物(游离或盐或溶剂化物形式)，下式化合物WO04/16601的式(l)化合物(游离或盐或溶剂化物形式)；以及EP1440966、JP05025045、WO93/18007、WO99/64035、US2002/0055651、WO01/42193、WO01/83462、WO02/66422、WO02/704卯、WO02/76933、WO03/24439、WO03/42160、WO03/42164、WO03/72539、WO03/91204、WO03/99764、WO04/16578、WO04/22547、WO04/32921、WO04/33412、WO04/37768、WO04/37773、WO04/37807、WO04/39762、WO04/39766、WO04/45618、WO04/46083和WO04/80964的化合物或它们的可药用盐；上述每个出版物以其整体并入本文。适合的支气管扩张药还包括抗胆碱能药或抗毒蕈碱药，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵、噢托溴铵和CHF4226(Chiesi)、格隆溴铵，以及在EP424021、US3714357、US5171744、WO01/04118、WO02/00652、WO02/51841、WO02/53564、WO03/00840、WO03/33495、WO03/53966、WO03/87094、WO04/018422和WO04/05285中描述的那些，上述每种文献以其整体并入本文。适合的双重抗炎和支气管扩张药包括双重P-2肾上腺素受体激动剂/毒蕈>!^#抗剂，诸如在US2004/0167167、WO04/74246和WO04/74812中公开的那些。适合的抗组胺药包括盐酸西替利溱、对乙酰氨基酚、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和盐酸非索非那定、activastine、阿司咪唑、氮萆斯汀、依巴斯汀、依匹斯汀、咪唑斯汀和特芬那定(tefenadine)，以及在JP2004107299、WO03/099807和WO04/026841中公开的那些，其中每个以其整体并入本文。适合的抗生素包括大环内酯类抗生物，例如妥布霉素(TOBF^)。适合的DNA酶药物包括阿法链道酶(PULMOZYME1^)，其是重組人脱氧核糖核酸酶I(rhDNase)的高纯度溶液，其选择性裂解DNA。阿法链道酶用于治疗嚢性纤维化。通道活化蛋白酶抑制剂和抗炎药的其它有用的组合是与趋化因子受体拮抗剂的组合，所述的趋化因子受体例如CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR誦7、CCR-8、CCR-9和CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特别是CCR-5拮抗剂诸如先灵葆雅(Schering画Plough)拮抗剂SC画351125、SCH-55700和SCH-D，Takeda拮抗剂诸如]\-[4-[[[6，7-二氢-2-(4-甲基-苯基)-5H-苯并-环庚烯-8-基絲l絲]苯基卜甲基四氢-N，N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化铵(TAK-770)和在US6166037、WO00/66558、WO00/66559、WO04/018425和WO04/026873中描述的CCR-5拮抗剂，其中每个以其整体并入本文。在根据本发明治疗由前列腺蛋白酶的抑制介导的疾病中，游离形式或施用，例如口服，例如以片剂、胶嚢剂或液体形式施用；肠胃外，例如以可注射溶液剂或混悬剂形式施用；鼻内，例如应用适合的鼻内传递装置以气雾剂或其它可雾化制剂形式施用，例如鼻腔喷雾剂诸如本领域已知的那些；或通过吸入施用，特别是应用喷雾器。通道活化蛋白酶抑制剂可以在药物组合物中与可药用稀释剂或载体一起施用。此类组合物可以是例如干粉、片剂、胶嚢剂和液体，还可以是注射溶液剂、输液或吸入混悬剂，其可以应用本领域已知的其它配制成分和技术制备。游离形式或可药用盐形式的通道活化蛋白酶抑制剂的剂量可能取决于多种因素诸如活性成分的活性和作用持续时间、待治疗病症的严重程度、施用方式、个体的种类、性别、种族起源、年龄和体重和/或其个体情况而不同。施用例如口服施用于温血动物、特别是重约75kg的人的典型的日剂量估计约0.7mg至约1400mg;更优选约5mg至约200mg。所述剂量可以以单个剂量施用或分为几部分剂量施用，例如5至200mg。当组合物包含气雾剂时，其可以包含氢-氟-烷(HFA)抛射剂诸如HFA134a或HFA227或它们的混合物；一种或多种本领域已知的共溶剂诸如乙醇(至多20%重量)；和/或一种或多种表面活性剂例如油酸或失水山梨醇三油酸酯；和/或一种或多种填充剂例如乳糖。当组合物包含干粉制剂时，其可以包含例如粒径至多10微米的通道活化蛋白酶抑制剂，任选包含所需粒度分布的稀释剂或载体(诸如乳糖)，以及有助于保护产物免受湿气>5皮坏的化合物(例如硬脂酸镁)。当组合物包含雾化制剂时，其可以包含例如溶于或悬浮于含水栽体中的通道活化蛋白酶抑制剂、共溶剂(诸如乙醇或丙二醇)以;s^稳定剂(其可以是表面活性剂)。在特殊实施方式中，本发明"R供可吸入形式的式(1)或(2)的化合物，例如气雾剂或其它可雾化组合物或可吸入颗粒，例如微粒化形式。本发明还提供包含可吸入形式的本发明化合物的可吸入药物；包含可p及入形式的本发明化合物以及吸入装置的药物产品；以及包含可吸入形式的本发明化合物的吸入装置。制备本发明化合物的方法
技术领域：
：本发明化合物可依照实施例中例举的下述方法制备。在描述的反应中，在终产物中所需的反应的官能团(例如羟基、氨基、亚氨基、硫代或g)可以应用本领域已知的保护基保护，以避免它们参与不希望的反应。常规的保护基可以根据标准方法例如参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的"ProtectiveGroupsinOrganicChemistry(有机化学中的保护基)"，JohnWiley和Sons,1991而使用。本发明化合物还可以通过将游离碱形式的化合物与可药用的无机或有机酸反应制备成可药用的酸加成盐。或者，可以通过将游离酸形式的化合物与可药用无机或有M反应制备本发明化合物的可药用碱加成盐。或者，可利用起始材料或中间体的盐制备盐形式的本发明化合物。游离酸或游离碱形式的本发明化合物可以分别M目应的碱加成盐或酸加成盐制备。例如通过用适合的碱(例如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理，可以将酸加成盐形式的本发明化合物转化为相应的游离碱。通过用适合的酸(例如盐酸等)处理，可以将碱加成盐形式的本发明化合物转化为相应的游离酸。在ox:至8oc下，在适合的惰性有机溶剂(例如乙腈、乙醇、含水二嗜、烷等)中，通过用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理，可以从本发明化合物的N-氧化物制备非氧化形式的本发明化合物。本发明化合物的前药衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备(例如，详见Saulnier等人(1994),BioorganicandMedicinalChemistryLetters,第4巻，第1985页)。例如，适合的前药可以通过将非衍生的本发明化合物与适合的氨曱酰化试剂(例如l，l-酰基氧基烷基碳酰氯(carbanochloridate)、碳酸对-硝基苯基酯等)反应而制备。本发明化合物的保护衍生物可以通过本领域普通技术人员已知的方法制备。可应用于保护基的引入和脱去的技术的详细描述可参见T.W.Greene,"ProtectingGroupsinOrganicChemistry(有机化学中的保护基)"，第3版，JohnWiley和Sons,Inc.,1999。在本发明的制备过程中，本发明化合物可以方便地制备或形成溶剂化物(例如7jC合物)。本发明化合物的7jC合物可以通过应用有机溶剂(诸如二氧芑、四氢呋喃或甲醇)从7jV有机溶剂混合物中重结晶而方便地制备。本发明化合物可以通过以下方法制备成其单独的立体异构体将化合对，将非对映异构体分离并且回收旋光纯的对映异构体。对映异构体的拆分可以应用本发明化合物的共价非对映异构体衍生物进行，或者通过应用可离解的配合物(例如结晶的非对映异构体盐)进行。非对映异构体具有独特的物理学特性(例如熔点、沸点、溶解性和反应性等)并且可以利用这些不同容易地分离。可以通过色镨，或者通过基于溶解性不同的分离/拆分技术将非对映异构体分离。然后，通过不会引起外消旋化的任何实用的方法，应用拆分试剂，回收旋光纯的对映异构体。可应用于将化合物的立体异构体从它们的外消旋体混合物中拆分出来的技术的更详细描述可参见JeanJacques,AndreCollet,SamuelH.Wilen，"Enantiomers，RacematesandResolutions(对映异构体、夕卜消旋体和拆分)"，JohnWiley和Sons,Inc.,1981。简而言之，本发明化合物可依照实施例中例举的方法制备，而且式(l)和(2)化合物可以通过下述方法制备(a)任选将本发明化合物转化为可药用盐；(b)任选将本发明化合物的盐形式转化为非盐形式；(c)任选将本发明化合物的非氧化形式转化为可药用N-氧化物；(d)任选将本发明化合物的N-氧化物形式转化为其非氧化形式；(e)任选将本发明化合物的单一异构体从异构体混合物中拆分出来；(f)任选将非衍生化的本发明化合物转化为可药用前药衍生物；以及(g)任选将本发明化合物的前药衍生物转化为其非衍生化形式。在原料的制备没有特殊描述的范围内，所述化合物为已知的或可以通过与本领域已知的方法类似的方法或下文的实施例中公开的方法制备。本领域的技术人员应意识到以上转化仅是制备本发明化合物的方法的代表，而且其它众所周知的方法同样可以使用。以下说明本发明化合物的制备的中间体(参考化合物)和实施例对本发明作了进一步列举，但不对本发明构成限制。参考化合物1l-B:将4-哌啶乙醇(l-A)(5g，39.7mmol)溶于THF(120mL)中。加入三乙胺(5.6mL，40mmol)并且将溶液冷却到0。C。加入Boc20(9.59g，44mmol)，在室温下将反应溶液搅拌过夜。真空除去溶剂，将粗残留物溶于乙酸乙酯(120mL)。该溶液先后用0.1NHC1(3x100mL)和盐水(lxlOOmL)洗涤，用MgS04干燥，过滤并且在真空下蒸发溶剂，获得透明油状的l-B。l-C:将三氯异氰尿酸(2.66g，11.46mmol)加入到醇l-B(2.39g，10.42mmol)于DCM的溶液中，搅拌该溶液并且保持在0。C，接着加入催化量的TEMPO。添加后，将该混合物温热到室温并且搅拌l小时，然后通过硅藻土过滤。有机相依次用Na2C03饱和水溶液、1NHC1和盐水洗涤。干燥(MgS04)有机层并且蒸发溶剂以获得l-C。NMR(CDC13，400MHz)59.72(1H，s),4.07-4.01(2H，m)，2.70-2.57(2H,m)，2.35-2.31(2H，m)，2.05-1.94(1H，m)，1.64-1.46(2H，m)，1.39(9H，s)，1.30-1.02(2H，m)。l-D:在-78°C下向Cbz-ot-膦酰基甘氨酸三甲酯(2.8g，8.45mmol)于THF的溶液中加入l，l，3，3-四曱基-胍(1.022ml，8.14mmo1)。IO分钟后，加入醛l-C(1.76g，7.76mmol)。然后将该溶^LA0。C冰浴中1小时，接着温热室温并且再搅拌l小时。该溶液用EtOAc稀释，用1MNaHS04洗涤，干燥(MgS04)并且真空浓缩。残留物通过以乙酸乙酯/己烷0-100。/。为洗脱剂的快速色i普纯化，获得白色固体状的l-D。MSm/z333.2(M+1)，&NMR(CDC13,400MHz)5.7.35-7.33(5H，m)，6.63(1H，t，J=8Hz)，6.30(1H，bs)，5.12(2H，s)，4.10-4.04(2H，m)，3.73(3H,s)，2.67-2.62(2H，m)，2.14(2H，t，J=6.8Hz)，1.63-1.46(3H，m)，1.43(9H，s)，1.14-1.06(2H，m)。l-E:在氮气氛下将l-D(1g，2.31mmol)和MeOH(100mL)装入帕尔容器中。对溶液进行三个循环的真空与通氮处理，加入催化剂(R，R)-乙基-DuPHOS-Rh(COD)三氟甲磺酸盐(30mg，0.04mmol)。将该混合物置于室温、压力60psi的氢气下24小时。24小时完全转化为l-E，纯度>99%e.e.,真空下除去溶剂，粗产物通过珪胶色谱(己烷/EtOAc)纯化。l-F:将中间体l-E溶于MeOH。用氮气吹扫溶液，加入Pd/碳(5。/。wt，Degussa)。将混合物置于室温、压力50psi的氢气下并且振摇24小时。用氮气吹扫该混合物并且通过硅藻土过滤。滤饼用MeOH洗涤，合并的有机相在真空下浓缩。加入己烷，然后蒸发至剩余甲醇共沸，获得油状的l-F，其不经纯化直接用于下一步骤。MSm/z201.4(M+1-Boc)，^NMR(CDC13，400MHz)5.4.06-3.97(2H，m)，3.63(3H，s)，3.36-3.31(1H，m),2.63-2.50(2H，m)，1.70-1.61(1H，m)，1.61-1.43(3H，m)，1.36(3H，s)，1.55(6H，s)，1.34-1.15(3H，m)，1.02-1.97(2H，m)。l-G:将粗品l-F(0.6g，1.99mmol)溶于THF(10mL)，将可力丁(315mg,2.38mmol)和甲磺酰氯(0.170ml，2.19mmol)加入到该溶液并且搅拌2小时。用EtOAc(50mL)稀释反应溶液，依次用1MNaHS04(2x25mL)、盐水(25mL)洗涤，并且干燥(MgS04)。在真空下除去溶剂，粗产物通过使用梯度己烷和EtOAc的快速色镨纯化，获得1-G。MS279.4(M+1誦Boc)，NMR(CDC13，400MHz)5.5.60-5.42(1H，m)，3.99-3.96(3H，m)，3.68(3H，s)，2.86(3H，m)，2.60-2.54(2H,m),1.79-1.77(1H，m)，1.60-1.45(2H，m)，1.35(9H，s)，1.35-1.26(3H，m)，1.16-0.95(2H，m)。1画H:将化合物l-G(0.70g,1.84mmol)溶于二嗜、烷(7mL)，并且加入溶于水(4mL)的LiOH'H20(232mg，5.55mmol)。搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂；残留物用EtOAc(25mL)稀释，依次用INNaHS04(25mL)和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgS04)。真空下除去溶剂，粗品残留物通过硅胶色语(己烷/EtOAc梯度)纯化，获得白色固体状的参考化合物1。MSm/z265.4(M+l-Boc)/HNMR(CDC13，400MHz)5.8.97(1H，宽s)，5.44(1H，d，/=8.8Hz)，4.15-3.90(3H，m)，2.94(3H，s)，2.77-2.55(2H，m)，1.88-1.87(1H，m)，1.78-1.58(3H)，1.42-1.37(12H,m)，1.16-0.94(2H，m)。参考化合物2用LiOH.H20皂化中间体l-E，然后采用与获得化合物l-H相同的方法。MSm/z421.5(M+1)，&NMR(CDC13，400MHz)59.75(1H，宽s)，7.26-7.41(5H，m)，5.39(1H,s)，5.10(2H,s)，4.41-4.34(1H,m)，4.46-4.03(2H，m)，2.68-2.61(2H，m)，1.94-1.82(1H，m)，1.78-1.53(3H,m)，1.44(9H，s)，1.44-1.19(3H，m),1.09-1.03(2H,m)。参考化合物33-G3-F3-B:将化合物3-A(2g，9.28mmol)与CBr4(4.46g，13.47mmol)和三苯基膦(3.28g，12.54mmol)在THF(0.2M)中合并，并将溶液搅拌过夜。然后过滤该反应混合物并且蒸发溶剂。通过緩慢地将粗混合物中加入大量的醚沉淀出大部分的三苯基氧化膦。在过滤和浓缩后，通过色镨(EtOAc:己烷梯度)纯化，获得化合物3-B。^-NMR(CDC13，400MHz)5.4.05-3.99(1H，m)，3.83-3.78(1H，m)，3.27-3.24(2H,m)，2.84-2.77(1H，m)，2.66-2.59(1H，m)，1.91-1.74(2H，m)，1.67-1.56(1H，m)，1.42(9H，s)，1.32-1.20(2H，m)。3画C:在回流下将3-B(1g，3.6mmol)和KCN(281mg，4.3mmol)于无水DMF(20mL)中的混合物搅拌过夜。将残留物溶于EtOAc(50ml)，连续用INNaHS04(2x50mL)和盐水(2x50mL)洗涤，并且通过MgS04干燥。蒸发溶剂并且通过色谱(EtOAc:己烷梯度)纯化粗萍材料，获得油状的化合物3-C。iH-NMR(CDC13，400MHz)5.3.83-3.78(1H，m)，3.78-3.69(1H，m)，2.87-2.73(2H，m)，2.28-2.15(2H，m)，1.84-1.72(2H，m)，1.61-1.52(1H，m)，1.42-1.15(IIH，m)。3-D:在-78。C下，将DIBAL(于THF的1M溶液，5ml)加入到3-C(750mg，3.34mmol)于THF(20mL)的溶液中。4吏该混合物达到室温，并且在室温下搅拌l小时。将混合物冷却到0。C，连续加入水(0.2mL)、15%NaOH水溶液(0.2mL)和水(0.5mL)。加入MgS04后，剧烈搅拌混合物并且过滤。蒸发溶剂获得无色油状的化合物3-D。该化合物不经纯化直接用于下一步骤。H画NMR(CDC13，400MHz)5.3.78-3.67(1H,m)，3.67-3.64(1H，m)，2.81-2.71(1H，m)，2.71-2.50(1H，m)，2.24-2.09(2H，m)，1.79-1.66(2H，m)，1.56-1.48(1H，m)，1,39-1.13(IIH，m)。3-E:使用与制备参考化合物l-D相似的方法由3-D制备该化合物。3-F:使用与制备参考化合物l-F相似的方法由3-E制备该化合物。3-G:使用与制备参考化合物l-G相似的方法由3-F制备该化合物。3腸H:使用与制备参考化合物l-H相似的方法由3-G制备该化合物。参考化合物4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>4-B:在室温下将D-高苯丙氨酸乙酯盐酸盐(5.00g，20.5mmol)和DIEA(8.7mL，51.25mmol)溶于THF(IOOmL)并且搅拌。滴加曱磺酰氯(1.67mL，21.52mmol)，在室温下搅拌反应混合物6小时。蒸发THF;将残留物粗品溶于EtOAc(100mL)，依次用水(IOOmL)、INHC1(2x100mL)和盐水(IOOmL)洗涤，并干燥(MgS04)。真空下除去溶剂，粗品材料通过快速色谱(己烷:EtOAc)纯化，获得乙基酯。4-C:将乙基酯4-B溶于二悉烷(50mL)并且在室温下搅拌。加入溶于水(20mL)的LiOH,H20(1.00mg，24mmol),并且搅拌反应溶液直到所述乙基酯消失(通过TLC和LCMS)。在真空下除去溶剂，而且用EtOAc(50mL)和INHC1(50mL)分配粗品材料。用EtOAc(2x50mL)萃取水层，合并的有^l4目用1MNaHS04(2x50mL)和盐水(50mL)洗涤，并且用MgS04o=s=o9X、Ho=s=o干燥。蒸发溶剂，粗品材料通过快速色i普(EtOAc:己烷梯度)纯化，获得白色粉末状的参考化合物4。参考化合物5Boc—0将Boc-D-高苯丙氨酸(l.Og，3.58mmol)溶于THF(IOmL)中，并且在20分钟内将7JC(18)iL，0.72mmol)滴入NaH(于矿物油中的60。/。介歉液；10.0mmol)于四氢呋喃(12mL)的混悬液中，同时保持内部温度20°C。在相同温度下搅拌该混合物10分钟，在20分钟内加入硫酸二甲酯(1.05mL，6.44mmol),同时保持温度20。C。搅拌该反应混合物2小时，然后在10分钟内用30。/。氢氧化铵(6mL)停止反应。同时保持内部温度20。C。再连续搅拌1小时(以确保硫酸二甲酯完全破坏)。用EtOAc(20mL)和水(20mL)稀释混合物。分离有机层，用水(10mL)洗涤，千燥(MgS04)，并且在真空下蒸发，获得白色固体状的参考化合物5。参考化合物6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>6-B:将D-高苯丙氨酸乙酯盐酸盐(6-A)(25.0g，102.5mmol)溶于10%的EtOH水溶液(500mL)中。加入催化量的5%Rh/C，将反应置于氢气氛下(1000psi)、搅拌并且加热到50。C。18小时后，将反应混合物冷却到室温，撤掉氢气供应，并且^^应容器恢复到大气压力。通过硅藻土过滤催化剂，在真空下除去溶剂，获得白色粉末状的D-高环己基丙氨酸乙基酯盐酸盐。6-C:使用与制备参考化合物4-B相似的方法由6-B制备该化合物。6画D:使用与制备参考化合物4-C相似的方法由6-C制备该化合物。参考化合物77-A:将D-高环己基丙氨酸乙基酯盐酸盐(3.83g，18.0mmol)和N-(千基氧基羰基Al0琥珀酰亚胺(Cbz-OSu)(4.49g，18.0mmol)加入其中包含THF(60mL)和水(20mL)的圆底烧瓶中。在室温下搅拌该混合物并且加入Et3N(10.1mL，72.0mmo1),在室温下搅拌该反应混合物过夜。所述的透明溶液用EtOAc(200mL)稀释并且用INHC1(3x100mL)和盐水(lx100mL)洗涤，用MgS04干燥。在真空下除去溶剂，获得白色固体状的所需产物，该产物不经进一步纯化直接使用。7-B^吏用与制备参考化合物4-C相似的方法由7-A制备该化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>参考化合物88陽B:将精细粉末状的KOH(19.4g,0.346mol)溶于DMSO中，并且在室温下搅拌20分钟，然后冷却到0。C。将N-Boc-A-4-羟基-L-脯氨酸(Boc画Hyp國OH,8-A)(10g，43.3mmol)溶于DMSO(10mL)并加入，在0。C下再搅拌反应混合物10分钟。下一步，加入4-氯千基氯(33g，0.204mol)，在0。C下再搅拌反应混合物15分钟。之后，撤掉冰浴，佳反应混合物温热到室温并且搅拌4小时。将反应混合物倒入水(300mL)中，并且用另外的等分水(300mL)洗涤反应容器。合并的水层用醚(2x300mL)萃取并且丢弃。用87。/。H3P04将水层酸化为pH2.3，然后用醚(3x300mL)萃取。合并的醚萃取物用水(2x400mL)和盐水(2x400mL)洗涤并且通过MgS04干燥，过滤并且在真空下浓缩。通过使用EtOAc/己烷(梯度0-100。/。)的硅胶色i普纯化残留物，获得透明油状的化合物8-B。MSm/z256.1(M+1-Boc);JH匪R(DMSO-D6，400MHz)57.39-7.31(4H，m),4.52-4.40(2H，m)，4.16-4.10(2H，m)，3.48-3.41(2H，m)，2.40-2.30(1H，m)，2.03-1.94(1H，m)，1.39-1.34(9H，m)。8-C:将TFA于二氯曱烷的溶液(50/50)加入到8-B中，搅拌该混合物直到完全除去Boc。然后在真空下浓缩反应混合物，粗品残留物不经进一步纯化直接用于下一步骤。MSm/z256.1(M+l);NMR(CDC13，400MHz)5.8.32(1H，宽s)，7.16-6.93(4H,m)，4.41-4.12(4H，m)，4.10-3.75(2H，m)，3.70-3.53(1H，m)，3.51-3.30(1H，m)，2.38-2.24(1H，m)，2.06-1.88(1H，m)。8-D:将中间体8-C溶于200mll，4-二恶烷/H2O(l:l)溶液中。加入NaHC03(17.9g，0.213mol)，接着加入Fmoc-Cl(12g，46.3mmol)。搅拌该混合物过夜。然后用INHC1酸化该溶液，过滤沉淀物并干燥(MgS04)，获得白色固体状的8-D。，H-匪R(CDC13，400MHz)S.8.11(1H，宽s)，7.77-7.66(2H，m)，7.58-7.52(2H，m)，7.42-7.21(8H，m)，4.54-4.26(4H，m),4.24(1H，t，/=7.2Hz)，4.23-4.10(1H，m)，3.69-3.61(2H，m)，2.50-2.38(1H，m)，2.24-2.12(1H，m)。在上述反应方案中，试剂和条件如下(a)SOCl2(3.0当量)，MeOH，0°C，100%;(b)曱磺酰氯(1.2当量)，Et3N(3.0当量)，催化剂DMAP，THF，230C，79%;(c)Hoveyda-Gmbbs易位催化剂(8mol%)，7V-Boc-4-亚甲基旅邻.O当量)，DCM，40°C，51。/o;(d)LiOH,二噍烷，H20，23°C，100%。9-A:在冰浴中，使D-烯丙基甘氨酸(5.03g，43.73mmol，1.0当量)在甲醇(70mL)混悬液中浆体化。在10分钟内滴加亚硫酰氯(9.6mL,131.19mmol,3.0当量)。使所述反应温热到室温并且通过LC/MS判断反应的完成。蒸发溶剂，所获得的白色固体9-A直接用于下一步骤。9画B:在室温下将D-烯丙基甘氨酸甲酯盐酸盐(9-A，7.20g，43.73mmol)、Et3N(18mL，131.19mmol，3.0当量)和DMAP(IOmg，催化的)溶于THF(110mL)并搅拌。滴加甲磺酰氯(4.0mL，52.48mmol，1.2当量)，并且在室温下搅拌反应混合物6小时。蒸发THF，将粗品残留物溶于EtOAc(100mL)并且用水(100mL)、INHC1(2x100mL)和盐水(100mL)洗涤，干燥(MgS04)。在真空下除去溶剂，通过快速色i脊(己烷:EtOAc)纯化粗品材料，获得黄色油状的79-B。9-C:在氮气氛下，通过注射器将无7jC二氯曱烷(10mL，0.1M)加入到9-B(2.15g，10.37mmol，1.0当量)和第二代Hoveyda-Grubbs易位催化剂[(1，3-双-(2，4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(邻-异丙氧基苯基亚甲基)钌II的二氯化物)(510mg，0.815mmol，8mol%)中。通过注射器加入7V-Boc-4-亚甲基旅咬(6mL，31.11mmol，3.0eq.)，所述反应安装回流冷凝器并且加热到40。C持续12小时。在通过LC/MS确认反应完成后，反应混合物直接通过自动化的硅胶纯化(0-100%于己烷中的乙酸乙酯)进行纯化，获得深绿色油状的9-C。MSm/z277.2(M-Boc+1)。参考化合物9:使用先前关于参考化合物4所述的步骤皂化9-C。参考化合物10使用与关于参考化合物8所述制备方法类似的方法制备参考化合物10。实施例1Jb4lPAL树脂的装载在AcOH(8当量)存在下，将5-^-2-曱基氨基-瘗吩(3当量)加入到树脂(lmeq/g)于DMF的溶液中。振摇该混合物1小时，然后加入NaH(AcO)3(3当量)并且让该混合物反应过夜。然后用DMF(x2)、DCM(x2)、MeOH(x2)和DCM(x2)洗涤。l-B:在HOBt(3.5当量)和DIC(3.5当量)存在下将Fmoc-保护的酸8-D(3当量)加入到在DMF中的200mg树脂l-A中。振摇该混合物3小时。树脂用DMF(x2)、DCM(x2)、MeOH(x2)和DCM(x2)洗涤。l-C:所述树脂在哌咬于DMF的20%溶液中振摇30分钟，并用DMF(x2)和DCM(x2)洗涤。l-D:使用与l-B相同的方法使^酸与树脂l-C偶联。1-E:将羟胺盐酸盐(40当量)和DIEA(40当量)于DMF的溶'^口入到树脂l-D中，振摇该混合物过夜。所述树脂用DMF(x2)、DCM(x2)、MeOH(x2)和DCM(x2)洗涂。向树脂1-E于DCM的溶液中加入乙酸酐(10当量)。振摇该混合物2小时，然后用DCM(x2)、DMF(x2)和DCM(x2)洗涤。l-G:将树脂l-F用无水THF(x2)洗涤，然后在氮气氛下加入Sml2溶液(0.1M，于THF中)。振摇该混合物2小时，树脂用DMF(x2)、MeOH(x2)DMF(x2)和DCM(x2)洗涤。1-H:通过在TFA/DCM/H2O(45:45:10)溶液存在下由树脂裂解之后获得最终化合物1-H。滤出液在真空下浓缩，将其溶于乙腈并且通过反相HPLC(H20-ACN梯度)纯化。冻干之后，获得白色粉末状的l-H的TFA盐。MSm/z639.5(M+1);^-NMR(CD3CN，400MHz)59.30(1H，s)，7.89(1H，s)，7.72(1H，d，/=4Hz)，7.36-7.26(4H，m)，7.09(1H，d，/=4Hz)，6.06(1H，d，/=8Hz)，4.60-4.41(5H，m),4.33-4.21(1H，m)，4.11-4.05(1H,m)，3.82-3.65(2H，m)，3.29-3.27(2H，m)，2.86(3H，s)，2.86-2.76(2H，m)，2.46-2.36(1H，m)，2.15-2.07(1H，m)，1.75-1.68(2H，m),1.63-1.46(2H，m)，1.46-1.31(2H，m)，1.31-1.27(3H，m)。实施例2-31实施例2-314吏用与关于实施例1合成所述方法类似的方法合成。步骤C试剂32-A使用与关于实施例l-A制备所述方法类似的方法从千胺和Pal-树脂制备。中间体32-B使用与关于实施例l-B制备所述方法类似的方法从固定的32-A制备。中间体32-C和32-D分别依照与实施例l-C和l-D所述类似的方法从载体绑定的32-B和32-C制备。最终的化合物32-E按照与实施例l-H制备方法类似的方法通it^所述的树脂裂解32-D制备。实施例33-54实施例33-54依照与关于实施例32合成所述方法类似的方法合成。55-A:将化合物1-H(1.9g，5.2mmol)加入到甲基酯8-C的盐酸盐(1.6g，5.2mmol)、PyBOP(3.79g，7.28mmol)和DIEA(2.7mL，15.6mmol)于DCM(50mL)的溶液中。搅拌该混合物过夜，然后用1MNaHS04溶液(2x50mL)、饱和NaHC03溶液(2x50mL)和盐水(lx50mL)洗涤。有^M目通过MgS04干燥并且在真空下浓缩。残留物通过快速色谙(己烷:EtOAc)纯化，获得白色固体状的化合物55-A。MSm/z616.2(M+1)。55-B:在室温下将曱基酯55-A(2.2g，3.72mmol)溶于二嗜、烷(20mL)并搅拌。加入溶于水(50mL)的LiOH.H20(467mg，11.12mmol)，并搅拌反应混合物直到所述甲基酯消失(通过TLC和LCMS)。加入1MNaHS04使所述溶液酸化并且用EtOAc(2x50mL)萃取。合并的有机相用盐水(50mL)洗涤并且用MgS04干燥。蒸发溶剂，获得白色粉末状的化合物55-B。MSm/z602.2(M+1);&醒R(CDC13，400MHz)57.33(2H，d，/=8.4Hz)，7.22(2H,d，J=8.4Hz)，5.87(1H，d，/=9.6Hz)，4.43-4.57(4H，m)，4.29-4.32(1H,m),3.95-4.17(4H，m)，3.87-3.93(IH，m)，3.60-3.64(IH，m)，2.89(3H，s)，2.58-2.64(2H，m)，2.45-2.51(IH，m)，2.15-2.51(IH，m)，1.48-1,70(3H，m)，1.44(9H，s)，1.22-1.35(2H，m)，0.95-1,10(2H，m)。55-C:向化合物55-B(60mg，0.1mmol)于二氯甲烷(10mL)的溶液中加入HATU(55mg，0.14mmol)、DIEA(0.035ml，0.2mmol)和2，5誦二氯千胺(23mg，0.13mmol)。在室温下搅拌该混合物过夜，然后连续用1MNaHS04(lOml)、饱和NaHCO3(10ml)和盐水(10ml)洗涤。所述溶液通过MgS04，干燥、过滤、蒸发，并直接用于下一步骤。MSm/z659.2(M+1-Boc)。55-D:向55-C于DCM的溶液中緩慢地加入TFA于DCM的50%溶液。搅拌该混合物30分钟，然后蒸发溶剂，将残留物溶于乙腈，并且通过反相HPLC纯化。在冻干溶剂后，获得白色粉末状的化合物55-D的TFA盐。MSm/z659.2(M+1);力NMR(CDC13，400MHz)59.30(1H，bs)，8.56(1H，bs)，7.31(1H，d，/=2Hz),7.07-7.27(6H，m)，5.88(1H，d，/=8.4Hz)，4.26-4.57(6H,m)，3.93-4.02(1H，m)，3.77-3.86(1H，m),3.47-3.86(1H，m)，3.21-3.34(5H，m)，2.74(3H，s)，2.49-2.88(4H，m)，2.17-2.36(2H，m)，1.18-1.73(9H，m)。实施例55-70使用与关于实施例55合成所勤目似的方法合成实施例56-70。表1显示如实施例1-70所述的式(l)化合物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>物理数据MS(m/z)、元素分析和&NMR400MHz_(DMSO-^)_MSm/z701.2(M+1);C34H41BrF10N6OS2(3TFA)的分析理论值C，39.13;H，3.96;N，8.21;实测值C，39.24;H，4.25;N，8.21;匪R(CD3CN，400MHz)59.99(1H，s)，7.95-7.74(2H，m)，7.74(1H，d，/=4Hz)，7.42-7.32(3H，m)，7.11(1H，d，/=4Hz)，6.13(1H，d，/=8.4Hz)，4.59-4.35(5H，m)，<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>酶裂解后，荧光(用适合的荧光板读数器测定)增加并且底物的转换率(即酶活性)可以被定量，并且因此任何试验化合物的抑制作用可以被定量。试验化合物的作用表示为诱导酶活力(Kj)降低50%的浓度。通常，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至5iaM。在某些实施例中，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至500nM;0.1nM至50nM;0.1nM至5nM;或0.1nM至0.5nM。在特别的实施例中，本发明化合物的Kj值可以为0.1nM至0.5nM;0.5nM至5nM;5nM至50nM;50nM至500nM;或500nM至5^M。在其它实施例中，化合物的Ki值可以小于0.1nM或大于5juM。上皮离子转运根据Danahay等人，Am.J.Physiol.LungCellMol.Physiol.2002;282(2):L226-36中描述的方法培养人支气管上皮细胞。当适当分化(形成顶端空气界面后14-21天)时，将上皮细胞用载体、抑酶肽(200吗/mL)或试验化合物处理90分钟。然后将上皮置入，应用Danahay等人s叩ra中描述的Chamber,保持上皮顶端側的载体、抑酶肽或试验化合物的浓度。然后通过电压钳制上皮至零毫伏来测定短路电流(ISC)。然后通过将氨氯吡溱脒(10pM)加入至上皮的顶端表面来测定氨氯吡溱脒敏感ISC。试验化合物的潜能表示为诱导总的抑酶肽敏感组分的氨氯吡溱脒敏感ISC抑制50%的浓度。通常，本发明化合物的ICs。值可以为lnM至10iiM。在某些实施例中，本发明化合物的ICso值可以为1nM至1pM;或更特别的是1nM至100nM。在其它实施例中，本发明化合物的ICso值可以为100nM至1pM，或1juM至10pM。在其它实施例中，本发明化合物的IC邻值可以小于1nM或大于10fiM。气管电位差(体内)将豚鼠用短作用的吸入麻醉剂诸如闺烷和]\20麻醉。在短作用麻醉下，将口腔灌胃针通过口咽途径插入至气管中。一旦进入气管，将在适合的基于水的稀释剂中的小体积(50-200ixL)栽体或试验化合物灌入气道中。然后动物恢复并且变得完全能走动。或者，可以将试验化合物用气雾剂或干粉给药施用于动物。在给药后的指定时间，将动物用适合的麻醉剂诸如氯胺酮和赛拉溱外科麻醉。然后将气管暴露并且将塑料的琼脂桥电极插入气管腔中。将参比电极也插入动物颈部的肌肉层中。然后应用Takahashi等人，ToxicolApplPharmacol.1995;131(1):31-6中描述的适合的高阻伏特计测定气管电位差。试验化合物的潜能表示为在敏感组分中诱导气管电位差降<氐50%的剂量。应当理解的是本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且根范围以及附属权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请并入本文作为参考并用于所有目的。权利要求1.式(1)化合物或其可药用盐其中O-(CR2)p-R2为处于环A任何位置的取代基；J为5-12元单环或稠合的碳环、包含N、O和/或S的杂环；芳基或杂芳基环，条件是J不是三唑基；B为id="icf0002"file="A2007800493550002C2.tif"wi="38"he="29"top="123"left="41"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或(CR2)k-R5；Y为键、-SO2-、-NHCO-或-O-(CO)-；R1为卤素、-(CR2)l-NR6R7、-(CR2)l-NRC(＝NR)-NR6R7、-(CR2)l-C(＝NR)-NR6R7、-C(O)-(CR2)l-NR6R7、-(CR2)l-NR-SO2R6、-(CR2)l-NR-C(O)-R6、-(CR2)l-SO2NR6R7、或-(CR2)l-OR6，或任选取代的C1-6烷氧基、C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基；或任选取代的碳环、杂环、芳基或杂芳基；R3为C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)l-R5；或者，NH-Y-R3一起形成NH2；R2、R4和R5独立地为任选取代的5-12元碳环、杂环、芳基或杂芳基；或R4为H、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基，或id="icf0003"file="A2007800493550003C1.tif"wi="27"he="9"top="39"left="132"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中P为C或N且环E与P一起形成任选取代的5-12元单环或稠环；R6与R7独立地为H、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)l-R5；每个R为H、或C1-6烷基、C2-6链烯基或C2-6炔基；l为0-6；k、m、n和p独立地为1-6；x为0-4；条件是当NH-Y-R3一起形成NH2时R4为哌啶基；且进一步的条件是当B为(CR2)k-R5时R5为哌啶基。2.权利要求1的化合物，其中j为蓉吩基、噻唑基、苯基、吡咬基、巧l喳基、哌咬基或吡咯烷基。3.权利要求l的化合物，其中W为鹵素、Cw烷基、CF3、OCF3、苯基、-(cr2)广nr6r7、-(cr2)h:(=nr)-nr6r7、-c(o)-(cr2)广nr6r7、一(CR2)广nr-S02R6、一(CR2)广nr-C(0)-r6、—(CR2)广S02NR6r7或-(cr2)「or6;其中的每个1为0-1;且r、r6和R7独立地为h或c^烷基。4.权利要求l的化合物，其中112为苯基或环己基，其中各自任选被卣素、S02(C,-6烷基)、或任选卣化的Ci-6烷基或d-6烷氧基取代。5.权利要求l的化合物，其中W为任选取代的哌咬基、环己基、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>6.权利要求1的化合物，其中y为键、S02或-o-(co)-。7.权利要求l的化合物，其中所述的化合物为式(2)的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中的R2和J独立地为任选取代的6-元芳基；R3为d-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基或-(CR2)「R5;或NH-Y-R3—起形成NHb;(CR2)中的每个R为H或C，—6烷基；且m、n和p独立地为l画2。8.权利要求7的化合物，其中议2和J独立地为任选取代的苯基。9.权利要求7的化合物，其中x为1-310.权利要求7的化合物，其中Y为S02。11.权利要求7的化合物，其中R"为C^烷基或任选取代的千基。12.权利要求7的化合物，其中R"为任选取代的哌咬基。13.权利要求l的化合物，其中所述化合物选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>14.药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-13中任意项的化合物。15.权利要求1-13中任意一项的化合物用于抑制细胞或组织系统或哺乳动物中的通道活化蛋白酶的用途，其中所述的通道活化蛋白酶为前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A和嗜中性细胞弹性蛋白酶。16.权利要求1-13中任意一项的化合物用于制造治疗由细胞或组织系统或哺乳动物内通道活化蛋白酶介导的病症的药物的用途，并任选与第二种治疗剂组合；其中所述的通道活化蛋白酶为前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。17.权利要求16的用途，其中所述病症与液体经离子转运上皮的移动或呼吸组织中粘液和痰的聚集或它们的组合有关。18.权利要求16的用途，其中所述病症为嚢性纤维化、原发性睫运动障碍、肺癌、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、哞喘或呼吸道感染。19.权利要求16的用途，其中所述第二种治疗剂为抗炎药、支气管扩张药、抗组胺药、止咳药、抗生素或DNA酶，并且在施用根据权利要求1-13中的任意项的化合物之前、同时、或之后施用。20.权利要求15或16的用途，其中所述的通道活化蛋白酶为前列腺蛋白酶。21.权利要求15或16的用途，其中所述的细胞或组织系统包括支气管上皮细胞。全文摘要本发明提供了用于调节通道活化蛋白酶的化合物及其药物组合物，以及应用该化合物治疗、改善或预防与通道活化蛋白酶有关的病症的方法，所述的通道活化蛋白酶包括但不限于前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、组织蛋白酶A或嗜中性细胞弹性蛋白酶。文档编号A61K31/401GK101578120SQ200780049355公开日2009年11月11日申请日期2007年11月21日优先权日2007年1月10日发明者A·K·查特吉,A·维达尔,B·布尔苏拉亚,D·C·塔利,G·斯普拉贡申请人:Irm责任有限公司