专利名称：：一种含有雷公藤红素的组合物、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，具体为一种雷公藤红素和碱性氨基酸的药物组合物、制备方法及其在制备抗肿瘤药物的用途。
背景技术：
：雷公藤红素(celastrol、tripterine)，又名南蛇藤素，是卫矛科植物雷公藤中一类三萜类成分。结构式如下-早在20世纪60年代，人们已发现雷公藤红素具有较强的抗肿瘤作用KojiNaknishi,YoshikazuTakahashi,"a/.Pristimerin.Spectroscopicpropertiesofthedienone-phenol-typerearrangementproductsandotherderivatives./Og.C7^附"1965(30):1729。1998年，我国学者证实雷公藤红素具有抑制新生血管形成的作用，推测其抗肿瘤活性是通过该机制发挥作用高勇等.红素抑制血管生长的实验研究.肿瘤，1998，18(4):280-281。2006年，中国科学院武汉植物园的学者与美国科学家证实，雷公藤红素可抑制蛋白酶体活性，从而诱发癌细胞凋亡。实验证明雷公藤红素可有效的抑制了裸鼠前列腺癌的增生HuanjieYang，DiChen，QiuzhiCindyCuiWa/.Celastrol,aTriterpeneExtractedfromtheChinese"ThunderofGodVine"IsaPotentProteasomeInhibitorandSuppressesHumanProstateCancerGrowthinNudeMice.C纖er紐2006，66(9):4758-4765。雷公藤红素属脂溶性三萜成分，在有机溶剂如三氯甲烷、乙醇、甲醇中溶解度较好，在水溶液中几乎不溶。文献中给药方式一般使用二甲基亚砜(DMSO)3作为助溶剂，但DMSO毒性较大，不能用于人体注射。虽然有机酸可以与碱性物质在水溶液反应，从而增加水溶性是公知技术，但雷公藤红素由于空间位阻的原因，虽然具有羧基结构但酸性较弱，试验表明不能在水溶液中直接与无机碱如氢氧化钠或有机碱如葡甲胺、精氨酸等直接反应。因此需要通过大量的实验寻找一种特殊的方法来制备可水溶性的雷公藤红素组合物。这也是为何在已知的文献中均使用毒性较大的DMSO作为助溶剂的原因。另外，雷公藤红素具有类醌式结构，且羰基a位具一活泼羟基，稳定性较差，因此解决雷公藤红素的稳定性问题也是雷公藤红素是否能制备临床上可接受的药物的一个关键问题。
发明内容本发明的目的在于提供一种含有雷公藤红素和碱性氨基酸的药物组合物，该组合物与雷公藤红相比具有较好的水溶性和稳定性，能够制备用于抗肿瘤的药物。该药物组合物含有雷公藤红素和碱性氨基酸，摩尔比例为1:1一10，其中碱性氨基酸选自精氨酸、赖氨酸或组氨酸，其中精氨酸可以是L一精氨酸、D—精氨酸或D、L一精氨酸中的一种或几种。雷公藤红素和碱性氨基酸的摩尔比优选为1:2—3。所述的药物组合物，其还可以含有药学上可接受的载体或辅料。所述的药物组合物，其可以以口服给药剂型或注射给药剂型存在。本发明还提供了含有雷公藤红素和碱性氨基酸的药物组合物的制备方法。本发明还提供了含有雷公藤红素和碱性氨基酸的药物组合物用于制备抗肿瘤药物的用途。经试验表明，雷公藤红素与无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾或碱性氨基酸物理混合物不能提高雷公藤红素的水溶性。由于雷公藤红素在水溶液中的溶解度很差，无法直接在水溶液中与碱性氨基酸反应，而碱性氨基酸不溶于无水乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮及四氢呋喃，也无法在该溶液体系中与雷公藤红素反应。因此本发明提供的含有雷公藤红素和碱性氨基酸的药物组合物的制备方法，包括如下关键步骤(1)将雷公藤红素溶解于可与水相混溶的溶剂中，将碱性氨基酸溶解于少量水中，加至溶剂中，30-50'C下搅拌至溶液澄清；(2)常规减压回收或冷冻干燥除去溶剂，即得。其中步骤(1)中所述的可与水相混溶的溶剂选自无水乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮及四氢呋喃中的一种或几种，考虑到工业生产的可行性及溶剂的毒性，优选为无水乙醇。上述方法得到的雷公藤红素与碱性氨基酸的组合物，其水溶性较雷公藤红素有很大的提高，在水中的溶解度可达50mg/ml以上，而雷公藤红素小于lmg/ml。按国家药品食品监督管理局公布的《中药、天然药物稳定性研究技术指导原则》的相关要求，经高温、高湿、光照实验表明，雷公藤红素在高温、高湿及光照条件下均不稳定，以0天为100%计算，10天时含量分别下降到67.9%、87.6%、82.6%，而组合物中的雷公藤红素含量分别下降到91.7%、93.1%、94.5%(以0天为100%计算)，与雷公藤红素单体相比，组合物的稳定性有非常大的提高。具体实施方式实施例1:取雷公藤红素2.25g溶于200ml无水乙醇中，取精氨酸1.74g溶于10ml水中，将水溶液加入至乙醇溶液中，室温下搅拌2小时，直至澄清，5(TC下以真空旋转薄膜蒸发器回收溶剂至干，即得，合计固体粉末3.67g。实施例2取雷公藤红素2.25g溶于200ml无水乙醇中，取精氨酸2.61g溶于20ml水中，将水溶液加入至乙醇溶液中，室温下搅拌l小时，直至澄清，4(TC下以真空旋转薄膜蒸发器回收溶剂至干，即得，合计固体粉末4.57g。取本实施例得到的固体粉末4.32g，溶于注射用水中，加入2g甘露醇作为赋形剂，补加注射用水至100ml，以微孔滤膜滤过除菌，以2ml分装于10ml西林瓶冷冻干燥，即得冻干粉针，规格以雷公藤红素计40mg/瓶。实施例3取雷公藤红素2.25g溶于400ml甲醇中，取赖氨酸0.73g溶于10ml水中，将水溶液加入至甲醇溶液中，30'C搅拌2小时，直至澄清，一4(TC冷冻干燥24小时，即得，合计固体粉末2.84g。实施例4取雷公藤红素2.25g溶于400ml四氢呋喃中，取组氨酸7.76g溶于400ml水中，将水溶液加入至四氢呋喃溶液中，2(TC搅拌2小时，直至澄清，一40'C冷冻干燥24小时，即得，合计固体粉末9.82g。取本实施例得到的固体粉末2g，与80g微晶纤维素用5XPVP—乙醇溶液制粒，干燥后，装入胶囊。取本实施例得到的固体粉末2.5g，与120g微晶纤维素用5XPVP—乙醇溶液制粒，干燥后加1%的硬脂酸镁，压片。实施例5取雷公藤红素2.25g溶于200ml丙酮中，取精氨酸1.74g溶于10ml水中，将水溶液加入至丙酮溶液中，室温下搅拌2小时，直至澄清，4(TC下以真空旋转薄膜蒸发器回收溶剂至干，即得，合计固体粉末3.43g。试验例1:本试验例考察了雷公藤红素及雷公藤红素精氨酸组合物溶解度按中国药典(2005版)一部凡例中关于溶解度的试验法操作。分别称取研成细粉的雷公藤红素和雷公藤红素精氨酸(称自实验例3所得的固体份末)，置于25ml25士2'C的水溶液中，每隔5分钟强有力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即视为完全溶解。测定结果6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结论雷公藤红素在水溶液中的溶解度小于lmg/ml，雷公藤红素精氮酸在水溶液中的溶解度大于50mg/ml。试验例2:本试验例考察了雷公藤红素及雷公藤红素精氨酸组合物稳定性1、材料雷公藤红素(LG):烟台靶点药物研究有限公司提供，纯度98.1%;雷公藤红素精氨酸组合物(LG—ARG，摩尔比1:2，按)，烟台靶点药物研究有限公司提供；2、方法(1)高温试验将LG及LG—ARG原料分别置称量瓶中，摊成5mm以下的薄层。于60°C下放置10天，于0、IO天取样检测，比较雷公藤红素含量的变化。(2)高湿试验将LG及LG—ARG原料分别置称量瓶中，摊成5mm以下的薄层，于25'C，朋92.5%±5%的情况下放置10天，于0、IO天取样检测，比较雷公藤红素含量的变化。(3)光照试验将LG及LG—ARG原料分别置称量瓶中，摊成5mm以下的薄层，置稳定性考察箱中，设置照度4500土5001x，放置10天，于0、IO天取样检测，比较雷公藤红素含量的变化。色谱条件如下，色谱柱DiscoveryCl8(250X4.6mm，5p);流动相甲醇水(85:15);柱温30°C;流速lml/min;检测波长425nm。3、结果雷公藤红素o天10天高温100%强光100%高湿100%67.9%82.6%87.6%雷公藤红素精氨酸组合物o天10天高温100%强光100%高湿100%91.7%91.5%93.1%4、结论与雷公藤红素单体相比，含精氨酸的雷公藤红素组合物的稳定性有非常大的提高试验例3:本试验例考察了药物组合物对荷瘤裸鼠的抑瘤作用1、材料与动物U、材料受试样品雷公藤红素精氨酸(LG—ARG，摩尔比l:2，按实施例l方法制备)，烟台靶点药物研究有限公司提供，易溶于水。PC3细胞株引自烟台大学药学院1.2、动物裸鼠，雄性，体重23g25g，购自上海实验动物中心。2、分组与方法复苏人前列腺癌细胞株PC-3原代冻存细胞,培养至细胞恢复正常生长状态，取对数生长期细胞用生理盐水制备肿瘤细胞悬液(2X106个/mL).用1mL注射器吸取细胞悬液O.8mL，分别注入46周龄裸鼠臀部外上限四分之一和前腋皮下各O.20.4mL,复制激素非依赖性前列腺癌荷瘤鼠模型,每天测量体质量.待肿瘤块直径超过1cm,无菌条件下,手术切除瘤块，把瘤块切成1mmX1mm大小的小块,植入20只裸鼠臀部外上限四分之一皮下，种瘤1周后给药.实验动物随机分为4组，分别为雷公藤红素精氨酸低剂量组(lmg/kg)、中剂量组(2mg/kg)、高剂量组(4mg/kg)及对照组。定期测量荷瘤小鼠体质量,连续用药21d.治疗结束3d后处死动物.摘取瘤体，测量瘤体体积、瘤质量;采用免疫组化方法观察Bcl22在各组间的表达差异.在实验过程中每5d测量裸鼠体质量.测量瘤体相互垂直的长径dl(cm)、d2(cm).求出瘤质量及瘤体积，并计算抑瘤率。3、结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>权利要求1.一种药物组合物，其特征在于含有雷公藤红素和碱性氨基酸，摩尔比例为1∶1—10。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中碱性氨基酸选自精氨酸、赖氨酸或组氨酸。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中精氨酸可以是L一精氨酸、D—精氨酸或D、L一精氨酸中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中雷公藤红素和碱性氨基酸的摩尔比优选为1:2—35.根据权利要求1所述的药物组合物，其还可以含有药学上可接受的载体或辅料。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其可以以口服给药剂型或注射给药剂型存在。7.如权利要求1所述的药物组合物的制备方法，包括如下步骤(1)将雷公藤红素溶解于可与水相混溶的溶剂中，将与雷公藤红素摩尔比为1:1_10的碱性氨基酸溶解于适量水中，混合两种溶剂，30-50'C下搅拌至溶液澄清；(2)常规减压回收或冷冻干燥除去溶剂，即得。8.根据权利要求7所述的制备方法，其步骤(1)所述的可与水相混溶的溶剂选自甲醇、无水乙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃中的一种或几种。9.根据权利要求9所述的制备方法，其所述的可与水相混溶的溶剂优选为无水乙醇。10.权利要求l一7中的任一药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种雷公藤红素与精氨酸盐的组合物、制备方法及其用途。利用本方法获得的药物组合物比雷公藤红素本身稳定性好，水溶性好。本发明还提供了该药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。文档编号A61K31/417GK101496804SQ20081001451公开日2009年8月5日申请日期2008年1月31日优先权日2008年1月31日发明者傅莹莹,珂刘,刘军锋,柳全文,翟大伟,萌邵,猛陈申请人:烟台靶点药物研究有限公司