专利名称：：虎杖提取物用于制备抗艾滋病毒和抗乙肝病毒产品的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药和食品
技术领域：
，具体地说是涉及中药提取物的用途，更具体地说是涉及中药提取物虎杖提取物用于制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品的用途，再具体地说是涉及中药提取物虎杖提取物白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐(简称化合物1)和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐(简称化合物2)用于制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品的用途。
背景技术：
：(一)虎杖的研究概况虎杖为蓼科(Polygonaceae)蓼属植物PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的根茎。多生于山谷、溪旁或岸边，为多年生灌木状草本，高达1米以上。虎杖是蓼科中非常著名的中药。中医认为，虎杖性味苦、平，具有祛风，利湿，破瘀，通经的功效；能治风湿，筋骨疼痛，湿热黄疸，淋浊带下，妇女经闭，产后恶露不下，疮漏下血，跌扑损伤，烫伤，恶疮癣疾等疾病。虎杖分布于江苏、浙江、江西、福建、山东、河南、陕西、湖北、云南、四川、贵州等中部及南部地区，春秋均可采挖。由于近年来人们发现虎杖具有良好的临床应用，已逐渐成为新的研究热点。虎杖中主要含有二苯乙烯、蒽醌、黄酮类等化学成分，并具有广泛的生理活性。发明人曾经对于虎杖的水溶性部位进行了系统研究，分离得到了一系列新的化学成分。新化合物包括带硫酸酯基的二苯乙烯类化合物的钠或钾盐(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)，二苯乙烯苷类二聚体(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.ZhongD.WuH.WangZ.ZhangN.DimericstilbeneglycosidesfromPolygonumcuspidatum.Europ.J.Org.Chem.2002564-568)；苯丙素类成分(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.ZhongD.ConstituentsfromPolygonumcuspidatum.Chem.&Pharm.Bull.2002，50(5)605-608)。另外还包括一些已知的化合物等(肖凯，宣利江，徐亚明等.虎杖的化学成分研究.中国药学杂志.2003，38(1)12-14；肖凯，宣利江，徐亚明等.虎杖的水溶性成分研究，中草药.2003，34(6)496-498)。其中的化合物1(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-2″-sulfate)和化合物2(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-4′-sulfate)为从虎杖中分离得到的两种二苯乙烯类化合物，是两种天然化合物，其分子式皆为C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，其化学结构式如下化合物1化合物2M＝NaorK近代药理学实验表明虎杖具有较好的抗病毒活性，在体外对多种细菌及病毒有抑制和灭活作用。例如其对单纯疱疹病毒、流感亚洲甲型京科68-1病毒及埃可II型等均有抑制作用(阴健，郭力弓.中药现代研究与临床(1)[M].北京学苑出版社.1993，434-439；NambaT，KurokawaM，KadotaS，ShirakiK.Developmentofantiviraltherapeuticagentsfromtraditionalmedicines.YakugakuZasshi，1998，118(9)383-400)，虎杖与黄芪联用对单纯疱疹病毒有很好的协同抑制作用(王志洁，程仲敏，方学韫.虎杖黄芪联用抗I型疱疹病毒药效分析.中国中药杂志，1999，24(3)176-180.)。虎杖醇提物和水提物体外显示了较强的抗HBV的活性(ChangJS，LiuHW，WangKC，ChenMC，ChiangLCetal.EthanolextractofPolygonumcuspidatuminhibitshepatitisBvirusinastableHBV-producingcellline.AntiviralResearch，2005，6629-34.)。虎杖水提液在体外可以抑制HIV-1表面的gp120与细胞表面的CD4结合，抑制HIV-1感染MT-4细胞，而且对HIV-1的逆转录酶具有显著的灭活作用(JiangY，SanoK，MolimatoS，etal.Anti-HIV-1activityofPolygonumcuspidatumextractinvitro.JapaneseArchivesofSexuallyTransmitteddiseases，1994，5(1)138-146.)；在体内虎杖水提液可以抑制LP-BM5病毒导致的艾滋病模型鼠的脾肿大、免疫抑制及病毒血症等(蒋岩，王红霞，鲍作义，等.用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用.中国病毒学，1998，13(4)306-311.)。(二)常用中草药有效成分的提取分离方法1、溶剂提取法(1)原理溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药原料(需适当粉碎)中时，溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。溶剂可分为亲水性有机溶剂及亲脂性有机溶剂，被溶解物质也有亲水性及亲脂性的不同。有机化合物分子结构中亲水性基团多，其极性大而疏于油；有的亲水性基团少，其极性小而疏于水。各类溶剂的性质，同样也与其分子结构有关。这样，发明人就可以通过对中草药成分结构分析，去估计它们的此类性质和选用的溶剂。总的说来，只要中草药成分的亲水性和亲脂性与溶剂的此项性质相当，就会在其中有较大的溶解度，即所谓“相似相溶”的规律。这是选择适当溶剂自中草药中提取所需要成分的依据之一。(2)溶剂的选择运用溶剂提取法的关键，是选择适当的溶剂。溶剂选择适当，就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。选择溶剂要注意以下三点①溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小；②溶剂不能与中药的成分起化学变化；③溶剂要经济、易得、使用安全等。常见的提取溶剂可分为以下三类①水水是一种强的极性溶剂。中草药中亲水性的成分，如无机盐、糖类、分子不太大的多糖类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐及苷类等都能被水溶出。为了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及碱水作为提取溶剂。②亲水性的有机溶剂也就是一般所说的与水能混溶的有机溶剂，如乙醇(又称酒精)、甲醇(又称木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比较好，对中草药细胞的穿透能力较强。亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度也较大。还可以根据被提取物质的性质，采用不同浓度的乙醇进行提取。用乙醇提取比用水量较少，提取时间短，溶解出的水溶性杂质也少。乙醇为有机溶剂，虽易燃，但毒性小，价格便宜，来源方便，有一定设备即可回收反复使用，而且乙醇的提取液不易发霉变质。由于这些原因，用乙醇提取的方法是历来最常用的方法之一。甲醇的性质和乙醇相似，沸点较低(64℃)，但有毒性，使用时应注意。③亲脂性的有机溶剂也就是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。这些溶剂的选择性能强，不能或不容易提出亲水性杂质。但这类溶剂挥发性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，价格较贵，设备要求较高，且它们透入植物组织的能力较弱，往往需要长时间反复提取才能提取完全。如果药材中含有较多的水分，用这类溶剂就很难浸出其有效成分，因此，大量提取中草药原料时，直接应用这类溶剂有一定的局限性。(3)提取方法用溶剂提取中草药成分，常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法及连续回流提取法等。同时，原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率，必须加以考虑。①浸渍提取法(简称浸渍法)浸渍法系将中草药粉末或碎块装入适当的容器中，加入适宜的溶剂(如乙醇、稀醇或水)，浸渍药材以溶出其中成分的方法。本法比较简单易行，但浸出率较差，且如用水为溶剂，其提取液易发霉变质，须注意加入适当的防腐剂。②渗漉提取法(简称渗漉法)渗漉法是将中草药粉末装在渗漉器中，不断添加新溶剂，使其渗透过药材，自上而下从渗漉器下部流出浸出液的一种浸出方法。当溶剂渗进药粉、溶出成分比重加大而向下移动时，上层的溶液或稀浸液便置换其位置，造成良好的浓度差，使扩散能较好地进行，故浸出效果优于浸渍法。但应控制流速，在渗渡过程中随时自药面上补充新溶剂，使药材中有效成分充分浸出为止。或当渗滴液颜色极浅或渗涌液的体积相当于原药材重的10倍时，便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀浸出液作为另一批新原料的溶剂之用。③煎煮提取法(简称煎煮法)煎煮法是中国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿，不宜用铁锅，以免药液变色。直火加热时最好时常搅拌，以免局部药材受热太高，容易焦糊。有蒸汽加热设备的药厂，多采用大反应锅、大铜锅、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过管道互相连接，进行连续煎浸。④加热回流提取法应用有机溶剂加热提取，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。小量操作时，可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。瓶内装药材约为容量的20％～60％，溶剂浸过药材表面约1～2cm。在水浴中加热回流，一般保持沸腾3～6小时，放冷过滤，再在药渣中加溶剂，作第二、三次加热回流分别约半小时，或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采用连续提取法。⑤连续回流提取法应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分，不论小型实验或大型生产，均以连续提取法为好，而且需用溶剂量较少，提取成分也较完全。实验室常用脂肪提取器或称索氏提取器。连续提取法，一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间较长，遇热不稳定易变化的成分不宜采用此法。2、分离和纯化方法上述提取法所得到的中草药提取液或提取物仍然是混合物，需进一步除去杂质，分离并进行精制。(1)溶剂分离法一般是将上述总提取物，选用三、四种不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常为胶状物，难以均匀分散在低极性溶剂中，故不能提取完全，可拌入适量惰性填充剂，如硅藻土或纤维粉等，然后低温或自然干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。利用中草药化学成分，在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。(2)溶剂萃取法①萃取法溶剂提取萃取法又简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高；如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行萃取，如果有效成分是偏于亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，就需要改用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时，多用乙酸乙脂和水萃取。提取亲水性强的皂苷则多选用正丁醇、异戊醇和水作萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，对有效成分进一步精制影响很大。②逆流连续萃取法是一种连续的溶剂萃取法。其装置可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充，以增加溶剂萃取时的接触面。如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙酸乙酯等进行萃取，则需将水提浓缩液装在萃取管内，而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全，可取样品用薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。③逆流分配法逆流分配法又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法与溶剂逆流萃取法原理一致，但加样量一定，并不断在一定容量的溶剂中，经多次移位萃取分配而达到混合物的分离。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配法基础上改进的溶剂萃取法。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法，但要求能在短时间内分离成，并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴，在细的分配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表面，促进溶质在溶剂中的分配，故其分离效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附树脂法大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类有机高聚物吸附剂，具有良好的吸附性能，近十余年来逐渐被应用于中草药化学成分的提取分离和中药新药的开发研制。大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果。筛选原理是由于其本身多孔性结构所决定。由于吸附和筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。大孔吸附树脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯缩聚而生成，由于改性剂的加入，大孔吸附树脂的极性发生改变，按照树脂的表面性质，吸附树脂一般分为非极性、中极性和极性三类。非极性吸附树脂是由偶极矩很小的单体聚合物制得的不带任何功能基的吸附树脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯体系的吸附树脂，如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附树脂。中极性吸附树脂指含酯基的吸附树脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯与双甲基丙烯酸酯等交联的一类共聚物。它是在非极性大孔吸附树脂的基础上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈缩聚而成，如中国国内经常使用的AB-8大孔吸附树脂。极性吸附树脂是指含酰胺基、腈基、酚羟基等含氮、氧、硫极性功能基的吸附树脂。此外，有时把含氮、氧、硫等配体基团的离子交换树脂称作强极性吸附树脂，强极性吸附树脂与离子交换树脂的界限很难区别。极性大孔吸附树脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亚砜类缩聚而成，如日本三菱化工的DiaionHP2MG、美国Rohm-hass公司的XAD-10，XAD-9大孔吸附树脂。与活性炭和其它吸附剂相比，大孔吸附树脂具有很多的优点，如对某种物质的吸附选择性较高；物理化学稳定性和机械强度较好；品种规格较多，可根据需要改变树脂物理或化学结构；吸附树脂一般为球状颗粒，流体阻力较小等等。因而被广泛应用于化工、医药等领域，近年来关于大孔吸附树脂在天然产物提取分离中的应用研究报道越来越多。大孔吸附树脂对中草药化学成分如生物碱、黄酮、皂苷、香豆素及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。对糖的吸附能力很差，对色素的吸附能力较强。(4)沉淀法是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，以获得有效成分或除去杂质的方法。如铅盐沉淀法铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中，能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化氢气体，使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。(5)盐析法盐析法是在中草药的水提液中，加入无机盐至一定浓度，或达到饱和状态，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分离。常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。(6)透析法透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，而大分子物质不能通过半透膜的性质，达到分离的方法。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内，而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中，而加以分离精制。(7)结晶、重结晶和分步结晶法鉴定中草药化学成分，研究其化学结构，必须首先将中草药成分制备成单体纯品。在常温下，物质本身性质是液体的化合物，可分别用分馏法或层析法进行分离精制。一般地说，中草药化学成分在常温下多半是固体的物质，都具有结晶体的通性，可以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于这样一基本原理水的饱和蒸气压与温度紧密相关，在真空状态下，水的沸点降低，即在真空下操作也就是在低温下操作，可避免在高温下营养成分如维生素等的破坏，同时提高了干燥速度。真空干燥在食品、制药、化工等行业有广泛的应用，中国也开发和引进了各种真空干燥设备，其结构形式多种多样。常用的形式主要有箱式真空干燥器、双锥式真空干燥器、带式真空干燥器等。这些传统的真空干燥装置主要采用热风，蒸汽或电等加热，利用热传导、对流或辐射原理将热量从外部传到物料内部。真空干燥具有干燥温度低，干燥室内相对缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐变等一系列优点，适合于热敏感性食品物料的干燥，此外设备成本、干燥费用也相对较低。(2)喷雾干燥是流化技术用于液态物料干燥的一种方法。因是瞬间干燥，特别适用于热敏性物料，故所得产品质量好，保持原来的色香味，且易溶解。利用喷雾干燥来制备微囊的研究正在进行，它是将心料混悬在衣料的溶液中，经离心喷雾器将其喷入热气流中，所得的产品是衣料包心料而成的微囊，这种微囊粉末可采用于直接压片，也可制备胶囊剂、糖浆剂或混悬剂。(3)冷冻干燥是将干燥液体物料冷冻成固体，在低温减压条件下利用冰的升华性能，使物料低温脱水而达到干燥的一种方法。由于物料在高度真空及低温条件下干燥，故对某些极不耐热物品的干燥很适合。王大林报道了一种喷雾通气冻干新技术，是利用冷的空气或氮气作为介质，迅速流经冻结物使水升华，喷雾冻干制得的产品微粒小、干燥快、时间短、均匀、流动性好，并具良好的速溶性。近年来，对膏状物料和粘稠物料干燥的研究取得了较大进展，流态化技术、喷射技术、惰性载体技术，则是在此研究基础上发展起来的。旋转闪蒸干燥机、热喷射气流干燥机、惰性载体干燥机均适合热敏性物料和膏状物料的干燥。这些新的研究成果用于中药制剂生产，将大大改善中药加工的技术水平，提高生产效率。(4)远红外加热干燥法是一项新的干燥技术，其干燥原理是将电能转变为远红外辐射，从而被药材的分子吸收，产生共振，引起分子和原子的振动和转动，导致物体变热，经过热扩散、蒸发和化学变化，最终达到干燥的目的。远红外干燥可节省电能20％～50％，效果较好。(5)微波干燥法是一项20世纪60年代迅速发展起来的新技术，微波干燥实际上是通过感应加热和介质加热，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它转变为热量从而达到干燥的目的。微波干燥可杀灭微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中国生产的微波加热成套设备有915mhz和2450mhz两个频率。(三)艾滋病和乙型肝炎的研究概况1、概述病毒感染性疾病特别是艾滋病和乙型肝炎严重威胁人类健康和生命。目前艾滋病在全球流行日益猖獗，联合国艾滋病联合规划署公布，截止到2005年底全球艾滋病毒(humanimmunodeficiencyvirus，简称HIV)感染者达6500万以上(①WHOhttp://www.unaids.org/en/KnowledgeCentre/HIVData/GlobalReport/Default.asp；②刘佳，高峰，鲁凤民，庄辉.HIV/AIDS全球流行现状.传染病信息.2006，19(5)228-232.)。艾滋病在亚洲也正以惊人速度蔓延，中国艾滋病流行情况也非常严重，目前有感染者约100万，且每年以30％的速度增长，估计到2010年将达到1000万，相当于整个比利时的人口(①傅继华.艾滋病流行现况及面临的问题与挑战.预防医学论坛.2007，13(3)I0001-I0002，②PortsmouthS，StebbingJ，KeyiX，JianpingZ，GuohuaP.HIVandAIDSinthePeople′sRepublicofChinaacollaborativereview.IntJSTDAIDS，2003，14(11)757-61.)。乙型肝炎是影响人类健康的主要疾病之一。全世界感染过HBV的人数大约超过20亿，目前有3.5亿慢性乙肝患者(参见①Fung，S.K.Luk，A.S.Viralhepatitis.Curr.Opin.Gastroenterol.2003，20241-247，②McMahonBJ.EpidemiologyandnaturalhistoryofhepatitisB.SeminLiverDis，2005，25(Suppl1)3-8)。中国则是病毒性肝炎发病率较高的国家，七亿多人感染过乙肝病毒，总感染率达57％，共有一亿多人携带乙肝病毒，现有慢性乙肝患者三千万人以上，并且每年急性乙肝新发病例多达三百万例。所谓的“无症状带毒者”中60％～70％肝活检病理报告为慢性迁延性肝炎或慢性活动性肝炎，长期的乙肝病毒感染将导致肝硬化、部分发展成肝癌，是主要死因之一(毕胜利.针对问题深入研究中国的病毒性肝炎.中华实验和临床病毒学杂志，2002，16(1)5-6.)。2、抗病毒药物自艾滋病流行以来，抗病毒药物的研究与开发进入了快速发展时期，新的药物不断面市。主要有以下几种核苷类药物，如阿昔洛韦(acyclovir)，羟甲基无环鸟苷(更昔洛韦，ganciclovir)，拉米夫定(lamivudine)等；非核苷类药物，利巴韦林(vibarvirin)和金刚烷胺(amantadine)；其他类药物如α-干扰素等(α-interferon)。上述几类药物可以部分缓解症状，延长生存期，但也有明显的缺点。即它们大都具有严重的毒副反应，且由于病毒很容易变异，故很快会出现耐药性；由于严重的毒副反应，患者治疗依从性差，不能坚持，进一步促进耐药性的产生；药品价格昂贵；它们大都是对活跃复制的病毒有效，而不能清除潜伏状态或非复制期病毒，且停药后易复发。这使得它们的应用受到极大限制(参见①陶佩珍.抗艾滋病病毒药物研究进展.中国新药杂志，2002，11(11)842-846，②GulickRM.Newantiretroviraldrugs.ClinMicrobiolInfect，2003，9(3)186-193，③LaurenceJ.HIVtherapeuticsinchildrenandadultsandtheirsideeffects.AIDSRead，2004，14(1)6-7，④BourinbaiarAS，JirathitikalV.Low-costanti-HIVcompoundspotentialapplicationforAIDStherapyindevelopingcountries.CurrPharmDes，2003，9(18)1419-1431，⑤ThomasC，NelsonM，StebbingJ.HIVandHepatitisBAReview.AIDSPatientCareandSTDs.2003，17(12)623-633.)。3、体外抗艾滋病毒模型采用化合物对HIV诱导宿主细胞形成合胞体的抑制实验。HIV在体内外均能感染人T淋巴细胞、单核巨噬细胞和神经细胞。一般来说，细胞水平的方法可用于筛选和研究抑制病毒复制周期中任一靶点的化合物。化合物对HIV诱导宿主细胞形成合胞体的抑制实验就是一个常用来筛选抗HIV活性的细胞模型。我们体外抗艾滋病毒实验采用人T淋巴细胞系C8166。HIV感染C8166细胞产生大的合胞体细胞和膨胀化效应，4～6d内导致细胞死亡。利用MTT法测试药物对于对HIV-1IIIB致细胞病变(CPE)的抑制活性，确定其对C8166细胞存活和增殖的影响。在倒置显微镜下观察和计数含有不同稀释浓度的化合物和不含待测化合物培养孔中的合胞体细胞数，计算出抑制率和EC50(郑永唐.抗HIV药物的体外筛选和研究方法.中国新药杂志，2002，11(8)596-600.)。4、体内抗艾滋病毒模型包括灵长类和非灵长类动物模型。灵长类包括人免疫缺陷病毒I型(黑猩猩)、II型(狒狒)、猴免疫缺陷病毒(简称SIV)等模型。非灵长类动物这类动物模型属于逆转录病毒慢病毒感染所致。其中研究最多的是感染并使有蹄动物致病的病毒绵羊肺腺瘤-脱髓鞘性脑白质炎病毒(简称MVV)、山羊关节-脑炎病毒(简称CAEV)、马传染性贫血病毒(简称EIAV)和新发现的牛免疫缺陷病毒(简称BIV)(参见杨传波，徐兴然，蔡家利.人类艾滋病动物模型研究进展.动物医学进展.2005，26(3)46-50.)。5、抗乙型肝炎病毒细胞模型选用HBV转基因细胞株HepG2-2.2.15细胞为实验的模型。由于缺乏更好的细胞和动物模型，能在体外长期培养的肝源性肿瘤细胞株HepG2-2.2.15是目前用于体外筛选抗HBV药物的主要细胞模型。HepG2-2.2.15细胞是将含有HBV基因组(2个HBV头对尾二聚体以尾对尾方向串联)的重组载体质粒转染HepG-2细胞，经G418筛选，得到的克隆能稳定分泌HBsAg、HBeAg、HBcAg及Dane颗粒，并可检测到细胞内DNA和RNA等各种中间复制体，还能分泌前s1和前S2。该细胞株能够稳定复制HBV病毒颗粒，是一个非常成熟的体外模型，广泛被用于抗HBV药物的体外筛选与评价。(参见①SellMA，ChenML，AcsG.ProductionofhepatitisBvirusparticlesinHepG2cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1987，84，1005-1009；②SellsMA，ZelentAZ，ShvartsmanM，AcsG.ReplicativeintermediatesofhepatitisBvirusinHepG2cellsthatproduceinfectiousvirions.J.Virol.1988，622836-2844；③LamperticoP，MaherJS，GerberMA.Developmentandapplicationofaninvitromodelforscreeninganti-hepatitisBvirustherapeutics.Hepatology，1991，13422-426.)。6、抗乙型肝炎病毒体内模型应用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV转基因鼠模型。NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV转基因鼠模型是一个应用较为广泛的乙型肝炎病毒(HBV)动物模型(LarkinJ，ClaytonM，SunB，PerchonockCE，etal.HepatitisBvirustransgenicmousemodelofchronicliverdisease.Nat.Med.1999，5907-912；MorrisseyDV，LockridgeJA，ShawL，BlanchardK，etal.Potentandpersistentinvivoanti-HBVactivityofchemicallymodifiedsiRNAs.Nat.Biotechnol.23(8)1002-1007.)。该模型是将HBV载体尾静脉高压注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠，该鼠是免疫缺陷小鼠，缺乏成熟的T细胞和B细胞，并且自然杀伤细胞的活性也大部分缺失。全长HBV基因的头尾二聚体pWTD被用作HBV的载体尾静脉高压注射入。这种HBV转基因鼠伴有单核细胞侵润的肝炎可以模拟人类的肝炎，可以用于研究导致乙肝发病的免疫成分和病毒的抗原靶标。因此结合中国的传统中草药，从中发掘有效、低毒、价廉的抗病毒药物特别是抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒药物，具有非常重要的意义。经文献检索等，到目前为止，尚未发现有此两种化合物在用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病毒和乙型肝炎病毒及其直接相关疾病方面的报道。
发明内容本发明所需要解决的技术问题是公开了一种中药虎杖提取物抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的作用，即该提取物用于制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品的活性成分化合物1和化合物2，以克服现有技术存在的上述缺陷。也就是说，本发明通过细胞和动物实验等研究，意在明确一种虎杖提取物在抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒应用方面的活性，即本发明涉及一种虎杖提取物的新用途。所述的虎杖提取物是指白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐(简称化合物1)和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐(简称化合物2)。虎杖提取物中的化合物1和化合物2均是抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的活性成分，其使用方式是包括分别单独使用、两者合并使用或与其他化学物质联合使用等中的一种，优选分别单独使用，均能够用于制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品是指用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品中的一种或多种；所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一种，优选HIV-1型艾滋病。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品均是包括医药和食品等领域产品中的一种，是包括药物、试剂或食品等中的一种或多种，优选药物。(一)技术构思自主开发创新药物是中国目前的一项紧迫任务，中国中医药学具有悠久的历史，用中草药预防和治疗疾病方面也积累了丰富的经验，因此从中药中寻找有效的活性成分或发现其新的用途均是有效的快捷途径，也是中国创新药物研制的优势之所在。发明人通过对单味虎杖药材的提取物进行系统的化学成分研究，筛选并证明该提取物的活性和用途。发明人从而推测虎杖的在预防、诊断、保护和治疗艾滋病和乙型肝炎等方面活性的临床药效，也应主要是通过活性部位虎杖提取物特别是化合物1和化合物2的药效来发挥的，研究结果也证明和证实了虎杖提取物特别是化合物1和化合物2具有显著的药理活性。艾滋病和乙型肝炎严重影响中国人口的健康，研制治疗艾滋病和乙型肝炎药物，尤其是预防、诊断、保护和治疗艾滋病和乙型肝炎等方面产品特别是药物具有显著的社会效益、经济效益。(二)虎杖提取物的药理活性本发明对虎杖提取物在预防、诊断、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎等方面的活性进行了多方面的试验。供试样品均是采取常规的制备方法获得，所得到的虎杖粗提物中的化合物1含量一般＜50％、化合物2含量一般＜60％，但是通过对虎杖粗提物进行纯化，能够得到纯化后的虎杖提取物，其中的化合物1和化合物2的纯度均能够在95％以上，即本发明所定义的虎杖提取物。也就是说，采用虎杖提取物的主要成分化合物1和化合物2为原料，或者是直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖药材为原料，或者直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖粗提物为原料，都能够直接或间接用于制备抗抑郁产品。虎杖提取物优选以基本纯的形式使用，如化合物1和化合物2的纯度均≥95％。虎杖提取物艾滋病和乙型肝炎预防、诊断、保护和治疗活性的体外试验1、化合物1和化合物2的抗HIV活性体外抗艾滋病毒实验采用人T淋巴细胞系C8166。利用MTT法测试药物对于对HIV-1IIIB致细胞病变(简称CPE)的抑制活性，结果表明，化合物1对HIV诱导C8166细胞形成合胞体有明显的抑制活性，对艾滋病毒具有显著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50为153.42μg/mL，治疗指数为＞13.04(见表1和表2)。并且该化合物水溶性很好，细胞毒性很低或者说无毒可以作为治疗艾滋病的先导化合物。表1、化合物1和化合物2对C8166细胞的毒性作用表2、化合物1和化合物2对HIV-1IIIB诱导C8166细胞病变的抑制作用2、化合物1和化合物2的体外抗HBV活性体外抗乙型肝炎病毒试验选用HBV转基因细胞株HepG2-2.2.15细胞为实验的模型。该细胞株能够稳定复制HBV病毒颗粒，广泛被用于抗HBV药物的体外筛选。实验结果表明(见表3、表4)化合物1和化合物2均对HBVDNA的复制具有显著抑制活性，化合物1和化合物2还能够明显抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。进一步研究表明该作用具有一定的剂效关系。并且发现该化合物在实验浓度下，对细胞的生长无明显的毒性。表3、化合物不同浓度对HepG2-2.2.15细胞中HBVDNA拷贝数(log10copies/mL)影响*P＜0.05，与DMSO组比较；**P＜0.01，与DMSO组比较；***P＜0.001，与DMSO组比较。表4、化合物不同浓度对HepG2-2.2.15细胞中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影响*P＜0.05，与DMSO组比较；**P＜0.01，与DMSO组比较；***P＜0.001，与DMSO组比较。3、化合物1和化合物2的体内抗HBV活性体内抗乙型肝炎病毒(简称HBV)活性应用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV转基因鼠模型。研究发现，化合物1和化合物2可以显著降低模型鼠体内HBVDNA的拷贝数(见表5)，降低血清中HbsAg的水平(见表6)。研究还发现，化合物1和化合物2在转基因小鼠体内的抗HBV活性呈现一定的的剂效关系(见表7和表8)。表5、化合物对转基因鼠中HBVDNA拷贝数(log10copies/mL)的影响*P＜0.05，在相同时段里，与PBS组比较；**P＜0.01在相同时段里，与PBS组比较。表6、化合物对转基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影响*P＜0.05，在相同时段里，与PBS组比较；**P＜0.01，在相同时段里，与PBS组比较。表7、化合物不同剂量对转基因鼠中HBVDNA拷贝数(log10copies/mL)的影响*P＜0.05，与PBS组比较；**P＜0.01，与PBS组比较；***P＜0.001，与PBS组比较。表8、化合物不同剂量对转基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影响*P＜0.05，与PBS组比较；**P＜0.01与PBS组比较；***P＜0.001，与PBS组比较。(三)虎杖提取物的提取方法本发明以中国江苏所产的虎杖为原料，采用溶剂提取和多种层析方法，分离得到此两种天然化合物。采用紫外光普、红外光谱、质谱、核磁共振氢谱和碳谱等方法，确定了该两种化合物的结构为白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐。本发明所述的虎杖提取物特别是化合物1和化合物2能够通过下述方法制备得到本发明所说的虎杖提取物的制备方法包括如下步骤(1)提取取虎杖原料若干，提取，得提取液，即虎杖粗提物；(2)分离纯化将该粗提物分离纯化，即得虎杖提取物。所述的提取方法包括溶剂提取法等本领域公知的所有可以使用的方法。上文所述的溶剂提取法的提取方法是本领域的常规提取方法，也就是说包括常用的超声提取法、浸渍提取法、渗漉提取法、煎煮提取法、加热回流提取法或连续回流提取法等中的一种或多种，优选加热回流提取法或渗漉提取法；提取次数可以是一次或者是多次。同时，原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率，必须加以考虑。各种提取方法包括技术细节在内的所有技术资料，均可以参见有关的教材和相关的技术文献等。上文所述的溶剂提取法所使用的提取溶剂是本领域的常规提取溶剂，也就是说包括常见的水、亲水性的有机溶剂或亲脂性的有机溶剂等三类提取溶剂的一种或多种；所述的水是包括水、酸水或碱水等中的一种；所述的亲水性的有机溶剂是一般所说的与水能混溶的有机溶剂，包括乙醇、乙醇水溶液、甲醇或丙酮等中的一种或多种，优选乙醇或不同浓度的乙醇水溶液等中的一种或多种，进一步优选不同浓度的乙醇水溶液；所述的亲脂性的有机溶剂是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂，包括石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一种或多种，优选石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一种或多种，进一步优选氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等中的一种或多种。上述提取方法所得到的虎杖粗提物，需进一步分离纯化。所述的分离纯化方法是本领域公知的所有可以使用的方法，包括溶剂分离法，溶剂萃取法(包括萃取法、逆流连续萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一种或多种)，大孔吸附树脂法，沉淀法，盐析法，柱层析法或结晶与重结晶和分步结晶法等中的一种或多种；这些方法均是本领域的公知技术，在需要进一步确证的时候，很容易从有关的教材和相关的技术文献等查阅到包括技术细节在内的所有技术资料。为了使产品性质稳定，便于使用和保存，还可增加一个优化的步骤，即步骤三(3)干燥。所述的干燥方法是本领域公知的可以使用的方法，包括常压干燥法如经烘箱烘干、减压干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法、冷冻干燥法、远红外加热干燥法或微波干燥法等中的一种或多种。在具体实施时，需要根据现有的资金、技术和有关的要求，采用其中合适的方法，并选取合适的条件等必要的措施以达到预期的目标。而这些方法也均是本领域的公知技术，在需要进一步确证的时候，都是很容易从有关的教材和相关的技术文献等查阅到包括技术细节在内的所有技术资料。(四)虎杖提取物的用途1、概述本发明的目的是提供一种用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品，包括药物、试剂、食品等中的一种或多种，优选药物。通过药理活性筛选证明，虎杖提取物为其预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的活性部位。经实验研究表明，虎杖提取物体外能够抑制艾滋病病毒和乙型肝炎病毒，能够显著抑制小鼠体内的乙型肝炎病毒。已完成的急性毒性实验证明，小鼠灌胃给药对该活性部位的最大耐受量超过1.0g/kg，相当于临床推荐用药剂量的200倍以上，表明该有效部位安全可靠，解决了中药复方中成分复杂、有效成分含量低且含有有毒成分的问题。综上所述，发明人对虎杖提取物进行了理论探索，经过大量的实验研究特别是长期的药理学试验，发现所述及的虎杖提取物有显著的预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的活性。因此，虎杖提取物及其组合物可用于制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品，优选以本发明虎杖提取物为原料制备而成的药物。2、虎杖提取物及其组合物的使用方法与要求本发明虎杖提取物可以单独或与其它活性组分联合使用，包括用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品，包括药物、试剂或食品等，尤其是药物。在具体使用方面，本发明所述的虎杖提取物能够单独使用，还能够与其他许多化学物质一起使用。无论这些化学物质是否具有生物活性或具有治疗疾病的功能，包括辅助功能如协同放大作用、拮抗或缓解虎杖提取物的副作用等，这些化学物质是包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药等中的一种或多种；优选包括医药学上可接受的载体或者食品等中的一种或多种；进一步优选医药学上可接受的载体。本文使用的“医药学上可接受的载体”包括任何和所有的生理适用的溶剂、分散介质、胞衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂或吸收延迟剂等中的一种或多种。医药学上可接受载体的例子包括一种或多种的水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其组合物中的一种或多种。在许多情况下，在该组合物中最好包括等渗剂，例如，糖、诸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化钠等中的一种或多种。医药学上可接受载体还可以包含少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液等中的一种或多种，它们增强了该虎杖提取物的有效期或效力。从具体的分类上看，所说的医药学上可接受的载体是指医药学领域常规的药物载体，包括赋形剂，如淀粉或水等中的一种或多种；润滑剂，如甘油或硬脂酸镁等中的一种或多种；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如淀粉或乳糖等中的一种或多种；粘接剂，如预胶化淀粉、糊精、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或多种；渗透压调节剂，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一种或多种；稀释剂，如水等；崩解剂，如琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠等中的一种或多种；吸收促进剂，如季铵化合物等；表面活性剂，如十六烷醇等；吸附载体，如高岭土或皂粘土等中的一种或多种；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇等中的一种或多种；另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂或甜味剂等中的一种或多种。例如，将活性组分虎杖提取物溶解、混悬或乳化于适宜的水性溶剂中(例如，蒸馏水、生理盐水或格林溶液等中的一种或多种)或油性溶剂中(例如，植物油例如橄榄油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一种或多种)中，即可制得注射制剂，其中溶剂中可含有分散剂(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一种或多种)、渗透压调节剂(例如，氯化钠、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一种或多种)。在这种情况下，如有必要，可加入添加剂，例如增溶剂(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、聚维酮、聚乙二醇40蓖麻油或普郎尼克F-68等中的一种或多种)、稳定剂(例如，人血清白蛋白等)、止痛剂(例如，盐酸普鲁卡因或利多卡因等中的一种或多种)等。本发明所述及的虎杖提取物还可以以组合物的形式联合使用，特别是与用其它化学物质如药物对动物尤其是哺乳动物包括人或其他动物进行治疗所用的组合物或者是类似的组合物。所述哺乳动物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、猪、马、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、猕猴或恒河猴等中的一种或多种，优选人、小鼠、大鼠、猴、猪、兔或犬等中的一种或多种，进一步优选人、大鼠或猴等中的一种或多种。例如，可以将本发明虎杖提取物加入适于给与受治疗者的药用组合物中。通常，该药用组合物包含本发明虎杖提取物和药学上可接受的载体。虎杖提取物的组合物特别是药物组合物可以有各种形式，包括例如液体、半固体和固体等剂量形式中的一种或多种；其中所说的药物组合物包括治疗有效量的虎杖提取物为活性成分，以及一种或多种医药学上可接受的载体。虎杖提取物的药物组合物可以采用本领域公知的常规生产方法制成各种剂型，例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。所述的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂等中的一种或多种，采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种)、粘膜透析等中的一种或多种给药途径进行艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的预防、诊断、检测、保护、治疗或科学研究。药物组合物优选含有重量比为0.5％～99％的活性成分虎杖提取物，进一步优选含有重量比为1％～95％的活性成分虎杖提取物，最优选含有重量比为5％～90％的活性成分虎杖提取物。虎杖提取物的药物组合物一般必须无菌且在生产储存条件下稳定。可以将该组合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂质体或其它适合于高药物浓度的有序结构。通过将所需量的该虎杖提取物与所需上述成分的一种或组合一起加入适当的溶剂中并接着进行除菌过滤制备无菌注射液。一般而言，通过将该虎杖提取物加入含有基本分散介质和所需的上述其它成分的无菌溶媒中制备分散液。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情况下，推荐的制备方法是真空干燥和冷冻干燥剂。例如，通过诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过保持所需颗粒大小和通过使用表面活性剂，可以保持溶液的适当流动性。通过在该组合物中包括延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐或明胶)可以达到注射组合物的延长吸收。用于患者时，本发明所述的虎杖提取物剂量为5～20mg/kg·d，该剂量或用量通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。本发明虎杖提取物及其药用组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明虎杖提取物。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间下有效达到所需治疗效果的量。虎杖提取物的治疗有效量可以根据诸如个体的病况、年龄、性别和体重以及该虎杖提取物在该个体引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量亦指该虎杖提取物的有益治疗效果超过其任何毒性或有害效果的量。“预防有效量”是指在必要剂量和时间下有效达到所需预防效果的量。因为预防剂量用于患病前或疾病早期的受治疗者，预防有效量通常小于治疗有效量。本发明虎杖提取物的治疗或预防有效量的典型的非限制性范围是5～20mg/kg，更优选为5～10mg/kg。应注意，剂量值将根据欲减轻的疾病类型和严重性变化，也就是说用于患者时，本发明所述的虎杖提取物剂量或用量，通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。另外，应理解，对于任何特定受治疗者，应随着时间根据个体需要和给与或监督给与所述组合物的人的专业判断调整特定剂量制度，并且本文设定的剂量范围仅为例证性的，并不会限制要求保护的组合物的范围或实践。也就是说，需要根据治疗的对象、给药途径、所治疗疾病和状况等，变化本发明虎杖提取物的每次和/或每日的剂量或用量。例如，经静脉给予哺乳动物，尤其是成年人(如体重60kg)，所述虎杖提取物的单剂量约为50～400mg，优选约100mg，优选每日给药1～3次。可以调整剂量单位，以提拱最佳所需反应(例如，治疗或预防应答)。例如，可以单次大剂量给药，可以在一段时间内给予几个均分量或根据治疗情况的迫切性按比例降低或增加剂量。配制易于给药和剂量统一的剂量单位形式的非肠道组合物尤其有利。本文使用的剂量单位形式，指适于欲治疗的哺乳动物受治疗者的单元剂量的物理分离单位；每个单位含有预定量的计算用于与所需药用载体一同产生所需治疗效果的活性物虎杖提取物。本发明的剂量单位形式的规格，由以下确定并直接取决于以下(a)该虎杖提取物的独特特征和欲达到的特定治疗或预防效果，和(b)在混合这种用于治疗个体敏感性虎杖提取物的技术中的内在限制。3、虎杖提取物及其组合物的药物剂型和给药途径本发明所述的虎杖提取物及其组合物制备的用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品，其中按照饮料、食品
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的要求制备的产品能够用于预防、保护和治疗艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病；按照医药
技术领域：
的要求制备的产品能够用于患者的治疗或保健，既能够单独直接用于制备治疗或保健的药物，也能够与许多化学物质进行混合或组合，直接或间接用于制备治疗或保健的药物。这里所述的化学物质与本节上文中所述的相同。在本发明中，所需物料包括本发明的原料、上述配套使用的化学物质等，均应根据实际情况和需要，采用食品级或药用级的物料。本发明所述的虎杖提取物及其组合物，可以用本领域已知的各种方法给药，尽管在许多治疗用途中推荐的给药途径/给药方式是喷雾剂或口服给药。但是，技术人员会理解给药途径/给药方式随所需的结果而变化。在某些具体实施中，该活性化合物可以与保护该化合物免于快速释放的载体一同制备例如空释制剂，包括移植物传递系统、透皮贴传递系统或微囊传递系统等中的一种或多种。此外，还可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羟基乙酸、胶原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一种或多种。制备这种制剂的许多方法均已申请专利或一般为本领域技术人员所知(例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinson编辑，MarcelDekker，Inc.纽约，1978)。本发明所述的虎杖提取物及其组合物，通常通过口服、直肠或肠胃外给药等中的一种或多种方式，施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂或胶囊等中的一种或多种。在实施时，本发明虎杖提取物可以与例如惰性稀释剂或可同化的食用载体一同口服。该虎杖提取物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或软壳明胶胶囊、压制成片剂或直接加入受治疗者的膳食中。关于口服治疗给药，可以将所述虎杖提取物与赋形剂一起加入并以可食片剂、颊含片剂、锭剂、胶囊、悬液、糖浆或糯米纸囊剂等等中的一种或多种形式使用。为了以非肠道给药之外给予本发明虎杖提取物，可能需要用防止其失活的材料对该虎杖提取物包衣或与该虎杖提取物一同给予。亦可以将补充的活性化合物加入该组合物中。在具体实施时，将本发明虎杖提取物与一种或多种可以用于治疗疾病的其它治疗药物共配制和/或共给予。这种联合使用，可以优越地利用较低剂量的该给予的治疗药物，因此避免可能的毒性或与各种单一疗法相关的并发症。制成液体制剂如水剂、油悬浮剂或其它液体制剂中的一种或多种，如糖浆、酊剂或酏剂等中的一种或多种；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液剂、水剂或油性悬浮剂等中的一种或多种。以上药物或药物组合物能够使用各种途径，在所述的使用形式中，优选的形式是口服制剂(如片剂、包衣片剂、胶囊、溶液或混悬液等中的一种或多种)、非肠道给予剂型(如注射剂、软膏或贴剂等中的一种或多种)等中的一种或多种，进一步优选片剂、胶囊或注射剂等中的一种或多种，特别优选片剂或注射剂中的一种。此外，虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等在某些情况下也能够单独直接用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品，也能够与许多化学物质进行混合或组合，以组合物的形式直接或间接用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品。这里所述的化学物质与本节上文中所述的相同。例如，虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末用于制备用于艾滋病和乙型肝炎预防、诊断、保护和治疗产品特别是药物的各种剂型，或者是虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的辅料用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品尤其是药物的各种剂型，或者是虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品如药物一起用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品如药物的各种剂型，或者是虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的辅助药物一起用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品如药物的各种剂型，如片剂、胶囊剂或混悬剂等中的一种或多种，优选胶囊剂。所述的方法之一是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末灌装为胶囊剂，方法之二是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品如药物一起灌装为胶囊剂，方法之三是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的辅助药物一起灌装为胶囊剂；方法之四是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末与有关的辅料一起按常规方法直接压为片剂，方法之五是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末、有关的制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品如药物一起与有关的辅料按常规方法直接压为片剂，方法之六是将虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的粉末、有关的辅助药物一起与有关的辅料按常规方法直接压为片剂等。除上述的六种基本方法外，还能够选择虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的其他形式或对虎杖提取物所使用的药材原料进行本领域公知的方法处理后，制备各种剂型的含有虎杖提取物所使用的药材原料的产品如药物。但是，需要注意的是，在上述直接使用虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的时候，应先根据所使用的虎杖提取物的剂量要求，换算得到所需要使用的虎杖提取物所使用的药材原料包括虎杖药材或虎杖粗提物等的用量。综上所述，本发明虎杖提取物及其组合物可用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品，优选药物和食品，进一步优选药物。(四)技术特长本发明对以二苯乙烯苷为主要成分的虎杖提取物拓展了新的医药用途，也为预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病提供了一种新的药物来源。本发明的虎杖提取物安全低毒，药理作用较强，其原料来源丰富、价廉，制备工艺简单，得率高，可用于制备预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品。本发明有针对性地研究虎杖提取物，虎杖提取物药理作用较强，其使用安全，一物多用，最大限度地发挥了作用；虎杖提取物性质稳定，使用制备的制剂质量稳定，更适于抗艾滋病和乙型肝炎产品的工业化生产；预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的效果明显，且使用范围特别广，因此容易推广应用，能够在较短的时间内产生巨大的社会效益和经济效益。总之，本发明积极适应了现代医疗和科研领域的工作需要和人性化服务的需要，本发明为研究开发新的抗HIV和抗HBV产品提供了新的来源，对开发利用中国的药用植物资源具有重要价值，是用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病等方面的安全原料。具体实施例方式本发明研究了现有的虎杖提取物的新的药理作用和新的用途，提供了一种能够用于制备艾滋病和乙型肝炎预防、诊断、保护和治疗等产品的原料，便于医疗行业和相关行业如食品、饮料等领域的安全使用。(一)虎杖提取物的制备方法为进一步阐述上述的虎杖提取物特别是化合物1和化合物2的提取方法，下面通过举例来说明。例如，本发明所说虎杖提取物的制备方法可以为(1)提取按常规将虎杖药材粉碎成粗粉，以10～95％乙醇渗漉提取，收集5～30倍药材体积量渗漉液，即为提取液。或按常规将粉碎的虎杖药材用20～95％乙醇热提，首次溶媒体积用量约为生药的4～8倍；或将粉碎的虎杖药材用20～95％乙醇渗漉提取，溶媒体积用量约为生药的4～12倍；得提取液；将提取液过滤、浓缩，浓缩液离心或过滤；(2)分离纯化提取液浓缩到浓度为0.5～10∶1(药材重量∶溶液体积)，即为样品液。将样品液通过非极性或弱极性大孔树脂吸附(非极性或弱极性大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔树脂等)或MCIgelCHP20P柱层析或SephadexLH-20柱层析，用水淋洗除去杂质；再用含水低级醇洗脱，低级醇为甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇类，其浓度为10～70％，体积用量为树脂床体积的5～24倍，收集低级醇洗脱液，浓缩至合适体积；进一步用MCIgelCHP20P柱层析，用水淋洗除去杂质；再用含水低级醇洗脱，低级醇为甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇类，其浓度为10～70％，体积用量为树脂床体积的5～24倍，收集10％～50％洗脱部位，浓缩至合适体积；再进一步用ToyopearlHW-40F柱层析，用水淋洗除去杂质；再用含水低级醇洗脱，低级醇为甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇类，其浓度为10～60％，体积用量为树脂床体积的5～24倍，收集10％～30％洗脱部位，浓缩至合适体积，即为主要含有化合物1和化合物2的虎杖提取物；再进一步柱层析，能够分别得到分离出的纯化合物1和纯化合物2。(二)虎杖提取物的鉴定方法本发明综合应用质谱(简称MS)，核磁共振氢谱(简称1H-NMR)，核磁共振碳谱(简称13C-NMR)以及核磁共振二维谱(简称2D-NMR)等分析技术对虎杖提取物中的虎杖提取物中的化合物1和化合物2进行结构鉴定。化合物1具有如下理化性质分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色无定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-60°(c0.19MeOH)；紫外光谱UV(MeOH)λmax215，233(sh)，306，319nm；红外光谱IR(KBr)vmax3406，1609，1539，1514，1447，1258，1173，1072，997cm-1；核磁共振氢谱(400MHz，CD3OD+D2O)δ7.03(1H，t，2.0，H-2)，6.71(1H，t，2.0，H-4)，6.85(1H，t，2.0，H-6)，7.57(2H，d，8.7，H-2′，6′)，7.00(2H，d，8.7，H-3′，5′)，7.04(1H，d，16.3，H-α)，7.23(1H，d，16.3，H-β)，5.25(1H，d，7.7，H-1″)，4.50(1H，dd，7.7，9.0，H-2″)，3.97(1H，dd，9.0，9.4，H-3″)，3.74(1H，dd，9.4，9.6，H-4″)，3.74(1H，m，H-5″)，4.14(1H，dd，11.2，1.8，H-6″-α)，3.94(1H，overlapped，H-6″-β)。核磁共振碳谱(100MHz，CD3OD+D2O)δ141.6(C-1)，107.9(C-2)，160.4(C-3)，104.7(C-4)，159.3(C-5)，108.9(C-6)，130.7(C-1′)，129.2(C-2′，6′)，116.8(C-3′，5′)，158.2(C-4′)，129.2(C-6′)，126.8(C-α)，130.3(C-β)，100.8(C-1″)，81.5(C-2″)，77.2(C-3″)，71.3(C-4″)，78.0(C-5″)，62.0(C-6″)。质谱FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(参见XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)。化合物2具有如下理化性质分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色无定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-70.6°(c0.08MeOH)；紫外光谱UV(MeOH)λmax211，229(sh)，301，312nm；红外光谱IR(KBr)vmax3406，1597，1504，1444，1263，1165，1074，1047，871，843cm-1；核磁共振氢谱(400MHz，D2O)δ6.78(1H，t，2.1，H-2)，6.48(1H，t，2.1，H-4)，6.68(1H，t，2.1，H-6)，7.48(2H，d，8.7，H-2′，6′)，6.29(2H，d，8.7，H-3′，5′)，6.89(1H，d，16.4，H-α)，7.00(1H，d，16.4，H-β)，4.98(1H，d，7.6，H-1″)，3.56(overlapped)，3.63(1H，dd，9.2，8.7，H-3″)，3.51(1H，dd，8.7，9.4，H-4″)，3.59(1H，m，H-5″)，3.95(1H，dd，12.5，2.0，H-6″-α)，3.76(1H，12.5，5.7，H-6″-β)。核磁共振碳谱(100MHz，D2O)δ142.5(C-1)，109.2(C-2)，160.7(C-3)，106.1(C-4)，159.5(C-5)，110.9(C-6)，137.4(C-1′)，130.5(C-2′，6′)，124.4(C-3′，5′)，153.3(C-4′)，130.5(C-6′)，130.5(C-α)，131.1(C-β)，103.0(C-1″)，75.6(C-2″)，78.3(C-3″)，72.2(C-4″)，78.8(C-5″)，63.3(C-6″)。质谱FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(参见XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)。(三)常用的实用剂型本发明制备粉针剂一般采用常规的冷冻干燥法，以水作为溶媒，其步骤为取虎杖提取物，加入赋形剂，加水溶解，加入活性炭，过滤除菌，灌装，半轧塞，冷冻干燥，压塞轧盖即可。所用的赋形剂选自甘露醇、水解明胶、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一种或几种。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本发明制备粉针剂也可采用喷雾干燥法，以水作为溶媒，其步骤为取虎杖提取物，加或不加赋形剂(赋形剂同上)，加水溶解，加入活性炭，过滤除菌，喷雾干燥，无菌分装，压塞轧盖即可。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本发明制备小针剂时，以注射用水作为溶媒配制即可，也可加适量辅料，辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺中的一种或几种。每支含虎杖提取物10～100mg。本发明制备葡萄糖输液或氯化钠输液，以注射用水作为溶媒，加入适量葡萄糖或氯化钠配制即可，也可加适量辅料，辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸苄酯、二甲基乙酰胺中的一种或几种。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本发明制备片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等口服制剂，辅料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸盐等，按常规技术制备。在本发明中，以上所述的具体实施方式和以下所述的实例均是为了更好地阐述本发明，并不是用来限制发明的范围。下面通过实施例对本发明作详细描述。实施例1、抗艾滋病毒试验C8166细胞模型测试药品体外抗HIV-1活性的材料、方法与步骤(1)试剂HEPES、MTT、DMF、青霉素(Penicillin)、硫酸链霉素(Streptomycinsulfate)、谷氨酰胺(Glutamine)均购自Sigma公司；2-巯基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethanol)为Bio-Rad公司产品。RPMI-1640和新生小牛血清为Gibco公司产品。(2)培养基RPMI-1640完全培养基，含有10％新生小牛血清，2mML-谷氨酰胺，10mMHEPES，50μM2-巯基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml链霉素。(3)细胞和病毒人T淋巴细胞系C8166以及HIV-1实验株HIV-1IIIB均由英国MedicalResearchCouncil，AIDSReagentProject惠赠。所有细胞和病毒均以含15％小牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养。按常规方法制备HIV-1IIIB，滴定并计算出病毒的TCID50。病毒贮存液分装后，置-70℃保存。细胞和病毒按常规方法冻存和复苏。(4)HIV-1感染性滴定HIV-1IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良进行滴定，简述如下将HIV-1贮存液在96孔板上作4倍稀释，10个梯度，每梯度6个重复孔，同时设置对照孔6孔。每孔加入C8166细胞50μl，每孔终体积为200μl。37.5℃CO2培养。第三天补加新鲜RPMI-1640完全培养基100μl，第七天在倒置显微镜下观察每孔中HIV-1诱导的细胞病变效应(CPE)，以每孔是否有合胞体(Syncytium)的形成确定；按Reed&Muench方法计算病毒的TCID50(50％Tissuecultureinfectiondose)。(5)对C8166细胞的毒性实验4×105/mlC8166细胞悬液100ul与不同的待测药物溶液混合，设三个重复孔。同时设置不含药物的对照孔，37.5℃CO2培养3天，采用MTT比色法检测细胞毒性。ELx800酶标仪测定OD值，测定波长为595nm，参考波长为630nm。计算得到CC50值(50％Cytotoxicconcentration)，即对50％的正常T淋巴细胞系C8166产生毒性时的药物浓度。(6)对HIV-1IIIB致细胞病变(CPE)的抑制实验将8×105/mlC8166细胞50ul/孔接种到含有100μl/孔梯度倍比稀释药物的96孔细胞培养板上，然后加入50μl的HIV-1IIIB稀释上清，1300TCID50/孔。设3个重复孔。同时设置不含药物的正常细胞对照孔。AZT为阳性药物对照。37.5℃CO2培养3天，倒置显微镜下(100×)计数合胞体的形成。EC50(50％Effectiveconcentration)为抑制合胞体形成50％时的药物浓度。(7)计算公式根据实验结果绘制剂量反应曲线，按Reed&Muench法计算出化合物抑制病毒的50％有效浓度(EC50)，50％抑制细胞生长浓度(CC50)及抗HIV-1活性的治疗指数TI值(Therapeuticindex)为TI＝CC50/EC50。①细胞生长存活率(％)＝实验孔OD值/对照孔OD值×100。②HIV-1致细胞病变的抑制率(％)＝(1-实验孔合胞体数/对照孔合胞体数)×100实验结果与结论化合物1对HIV诱导C8166细胞形成合胞体有明显的抑制活性，对HIV具有显著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50为153.42μg/mL，治疗指数为＞13.04(见表1和表2)。并且该化合物水溶性很好，细胞毒性很低或者说无毒可以作为治疗艾滋病的活性化合物。实施例2、体外抗乙型肝炎病毒试验(1)材料与试剂细胞HBV-DNA克隆转染人肝癌细胞的HepG2-2.2.15，由美国TheMountSinaiMedicalCenter于1987年构建。二甲亚砜(简称DMSO)、卡那霉素、MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)均购自美国Sigma公司；RPMI1640培养基和胎牛血清，美国Gibco公司产品；ELISAHBsAg检测试剂盒Bio/Rad公司产品；病毒DNA水平用ABIPrism7000序列检测仪(AppliedBiosystems)检测。(2)试验方法本实验在体外培养的HepG2-2.2.15(2*106/ml)中加入不同浓度的待选药物，药物作用一周后，分别通过定量PCR和Elisa法检测细胞HBVDNA的拷贝数和HBV表面抗原HBsAg的浓度，来初步筛选对HBV有抑制作用的药物.本研究还观察了待选药物作用下HepG2-2.2.15的生长曲线，发现待选药物在实验浓度下，对细胞的生长无明显的毒性。乙型肝炎病毒DNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根据说明书从50μL培养基提取。病毒DNA水平用ABIPrism7000序列检测仪(AppliedBiosystems)检测。定量实时PCR使用以下引物和探针序列正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探针FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全长HBV基因组的psHBV-1载体用来作为计算每mL培养基含有多少拷贝数的标准曲线。乙型肝炎表面抗原(简称HBsAg)酶联免疫吸附测定法(简称ELISA)HbsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA检测试剂盒检测，未转染HBV载体的细胞用来作为分析的背景。实验结果与结论化合物1和化合物2对HBVDNA的复制具有显著抑制活性，化合物1和化合物2还能够明显抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。进一步研究表明该作用具有一定的剂效关系(见表3、表4)。并且发现该化合物在实验浓度下，对细胞的生长无明显的毒性。实施例3、体内抗乙型肝炎病毒试验(1)动物与试剂小鼠采用5-6周的NOD.CB17-Prkdcscid/J雌鼠(JacksonLaboratory)，每只20g左右。(2)试验方法0.3μgpWTDHBV载体质粒通过尾静脉高压注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠(JacsonLaboratory)。化合物1和化合物2在尾静脉高压注射HBV质粒后第7天和第10天，分别腹腔注射1mg/kg或者10mg/kg的剂量。HBVDNA拷贝数用定量实时PCR测定，用log10copies/mL(±s.e.m.)表示。血清HBsAg水平用ELISA法分析，用ng/ml(±s.e.m.)表示(n＝5)。化合物1和化合物2剂效关系研究。HBVDNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根据说明书从50μL鼠血清中提取，HBVDNA水平用ABIPrism7000测序仪(AppliedBiosystems)测定。定量实时PCR用如下引物和探针来进行检测正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探针FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全长HBV基因组的psHBV-1载体用来作为计算每mL血清含有多少拷贝数的标准曲线。乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附测定法HBsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA检测试剂盒根据说明书检测，未转染HBV载体的细胞用来作为分析的背景。实验结果与结论化合物1和化合物2可以显著降低模型鼠体内HBVDNA的拷贝数，降低血清中HbsAg的水平(见表5、表6)。研究还发现，化合物1和化合物2在转基因小鼠体内的抗HBV活性呈现一定的的剂效关系(见表7、表8)。实施例4、虎杖提取物的制备购自上海市药材公司的中药虎杖10Kg，用60％的丙酮渗漉提取三遍，浓缩蒸去丙酮，沉淀，过滤，除掉大部分脂溶性物质。剩余部分经浓缩至适当体积后，再加水沉淀部分脂溶性物质，浓缩至小体积后，分次上MCIgelCHP20P柱层析，先用水洗脱以去除相当部分的糖，后用10-80％甲醇洗脱，再用80％-100％甲醇洗脱以除去大量的大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷；50-80％甲醇洗脱部分上LH-20柱层析，先用水洗脱，然后用10-80％的甲醇梯度洗脱，30％的甲醇洗脱组分经过各种层析方法MCIgelCHP20P、LH-20、ODSC-18综合应用，分离得到50mg所需的化合物1、70mg化合物2，经理化性质分析，波谱解析(主要是紫外光普、红外光谱、质谱、核磁共振氢谱和碳谱)确定结构。实施例5、虎杖提取物粉针剂的制备取虎杖提取物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g针用活性炭，充分搅拌30分钟；脱炭过滤；用0.22μm微孔滤膜过滤；灌装到无菌的西林瓶中，每瓶2ml，半轧塞；冷冻干燥，再压塞轧盖即可。实施例6、虎杖提取物粉针剂的制备取虎杖提取物60g，加500ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1g针用活性炭，充分搅拌30分钟；脱炭过滤；用0.22μm微孔滤膜过滤；冷冻干燥得无菌粉末，分装成1000瓶。实施例7、虎杖提取物粉针剂的制备取虎杖提取物40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g针用活性炭，充分搅拌30分钟；脱炭过滤；用0.22μm微孔滤膜过滤；喷雾干燥得无菌粉末，分装成1000瓶。实施例8、虎杖提取物粉针剂的制备(1)处方注射用虎杖提取物半成品150g甘露醇400g注射用水加至10000ml共制成10000瓶(2)制备工艺按以上处方称取处方量虎杖提取物，加入到适量注射用水中，搅拌使其溶解；加入处方量甘露醇，搅拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液体量的0.1％针用活性炭，充分搅拌30分钟；脱炭过滤；用0.22μm微孔滤膜过滤；灌装，半轧塞；冷冻干燥，压塞轧盖。共制得9735瓶，成品率为97.35％。实施例9、虎杖提取物小针剂的制备取虎杖提取物5g，加100ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶10ml，灭菌即可。实施例10、虎杖提取物小针剂的制备取虎杖提取物10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g针用活性炭，充分搅拌30分钟；脱炭过滤；用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶5ml，灭菌即可。实施例11、虎杖提取物葡萄糖输液的制备取虎杖提取物2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶100ml，灭菌即可。实施例12、虎杖提取物葡萄糖输液的制备取虎杖提取物2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶250ml，灭菌即可。实施例13、虎杖提取物氯化钠输液的制备取虎杖提取物1g，加入氯化钠90g，加1000ml注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶250ml，灭菌即可。实施例14、虎杖提取物片剂的制备(1)处方虎杖提取物1000.0g微晶纤维素1170.0g预胶化淀粉690.0g乳糖125.0g5％PVP无水乙醇适量硬脂酸镁15.0g共制成10000片(2)制备工艺按以上处方分别称取处方量的主药与辅料，按等量递加法混合均匀后照处方工艺项下进行制软材、制颗粒，干燥，整粒等过程，计算好片重后用单冲压片机和10.5mm浅凹冲模压片，控制裸片硬度5～7kg，共制得片剂9698片，成品率为96.98％。采用滚转喷雾法包衣，包衣工艺如下包衣液的配制胃溶薄膜衣料85G61235，由上海卡乐康包衣技术有限公司提供包衣工艺将待包衣裸片(硬度5～7kg)放入包衣锅中，启动搅拌装置和鼓风加热装置，待裸片温度升至40℃时，开始打开喷枪对准片床的上1/3处喷入包衣液包衣，控制片床温度38～42℃，气磅压力6kg，包衣液流速为50mL/min，包衣膜重占包衣片重的3％。实施例15、虎杖提取物片剂的制备取虎杖提取物100g，微晶纤维素80g、乳糖15g、预胶化淀粉60g，过筛，混合均匀，用适量10％PVP乙醇溶液制软材，制粒，干燥，加入硬脂酸镁3g，整粒，压片，制成1000片。实施例16、虎杖提取物胶囊剂的制备(1)处方虎杖提取物1000.0g微晶纤维素1000g羧甲基淀粉钠140g无水乙醇适量滑石粉80g共制成10000胶囊(2)制备工艺按以上处方分别取原料药虎杖提取物及处方中其它辅料分别过100目筛，置60℃烘干，称取处方量虎杖提取物与微晶纤维素、羧甲基淀粉钠等量递加法混合均匀，用适量无水乙醇制软材，30目筛制粒，50～60℃干燥2小时，用30目筛整粒，加入处方量的滑石粉和羧甲基淀粉钠混合均匀。权利要求1.虎杖提取物在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用。2.虎杖提取物的组合物在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用。3.虎杖提取物的药材原料在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用。4.根据权利要求3所述的虎杖提取物的药材原料在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用，其特征在于，所述的虎杖提取物的药材原料是包括虎杖药材或虎杖粗提物中的一种。5.虎杖提取物的药材原料的组合物在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用。6.根据权利要求5所述的虎杖提取物的药材原料的组合物在制备抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品中的应用，其特征在于，所述的虎杖提取物的药材原料是包括虎杖药材或虎杖粗提物中的一种。7.根据权利要求1～6任一项所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品是指用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相关疾病的产品中的一种。8.根据权利要求7所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一种。9.根据权利要求8所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，所述的艾滋病是HIV-1型艾滋病。10.根据权利要求7所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品是包括药物、试剂或食品中的一种。11.根据权利要求10所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒产品是药物。12.根据权利要求1～6任一项所述的虎杖提取物的应用，其特征在于，该虎杖提取物是指①白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠，结构式如左其中，M＝Na或M＝K；和②钾盐和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐，结构式如下其中，M＝Na或M＝K。13.根据权利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的该虎杖提取物中的白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐的纯度均≥95％。14.根据权利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的该虎杖提取物中的白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐的使用方式是包括分别单独使用、两者合并使用或与其他化学物质联合使用中的一种。全文摘要本发明涉及虎杖提取物的用途。经体外抗艾滋病毒试验显示，其中的白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐和白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基钠或钾盐在细胞模型及体内转基因鼠模型上，显示了显著的抗乙型肝炎病毒的活性；白藜芦醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基钠或钾盐还对艾滋病毒具有显著的抑制作用。病毒感染性疾病特别是艾滋病和乙型肝炎严重威胁人类健康和生命，乙型肝炎是影响人类健康的主要疾病之一，本发明为研究开发新的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒药物提供了先导化合物，为临床提供了一种新的药物来源，对开发利用我国的药用植物资源具有重要价值。文档编号A61K36/704GK101214285SQ20081003232公开日2008年7月9日申请日期2008年1月7日优先权日2008年1月7日发明者凯肖,郑永唐,何晓文,杨柳萌,王云华,蔺红伟,宣利江,徐亚明,张黎明,杰赵,蔡建明申请人:中国人民解放军第二军医大学