专利名称：：山药作为蛋白药物溶菌酶肠道吸收促进剂的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药山药作为肠道吸收促进剂的新用途，特别是山药作为蛋白药物溶菌酶的肠道吸收促进剂的应用。
背景技术：
：溶菌酶lysozyme，分子量约为14kDa，等电点10.7，英国细菌学家Fleming于1922年首先发现，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。该酶广泛存在于鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、尿、乳汁等体液中，微生物中也含此酶。其中以鸡蛋清含量最为丰富，是一种碱性蛋白质，对热稳定。溶菌酶的功能l)作为机体非特异免疫因子之一，参与机体多种免疫反应，补充了动物体内的非特异性免疫因子，它可改善和增强巨噬细胞吞噬消化功能，降低细胞抑制剂导致的白细胞减少，结合细菌脂多搪，减轻内毒素作用，从而增强机体免疫力。2)溶菌酶具有天然的抗菌消炎作用，它通过水解肽聚糖中N-乙酞胞壁酸和N-乙酞葡萄糖胺中的fi-l，4糖苷键，在渗透压作用下导致革兰氏阳性菌细胞壁破裂，发生溶菌作用；在体内环境下，由于有分泌型免疫球蛋白A、补体参与，溶菌酶还能水解某些革兰氏阴性菌，如大肠杆菌等，从而杀死肠道内的腐败球菌，维持肠道内菌群正常化，促进双歧杆菌增殖，加强白清灭菌蛋白，Y-球蛋的防御因子，增强抗感染力。3)溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，具有一定的抗病毒能力。而一般的抗菌剂对病毒却束手无策。4)溶菌酶还具有激活血小板的功能，可以改善组织局部血液循环障碍，分泌脓液，增强局部防卫功能，从而体现其止血、消肿等作用。不会造成药害残留和药物蓄积。作为国家0TC化学药品，溶菌酶的口服含片及肠溶胶囊已广泛使用，并且复方溶菌酶滴眼液、复方溶菌酶胶囊和重组人溶菌酶喷雾剂等也己批准为临床研究的新药。但是，这些口服类溶菌酶药物多为直接在消化道中起抗菌消炎作用，无法穿越肠道屏障进入血液，因此不能有效提高血药浓度，导致体内吸收效率非常低，生物利用度很有限，不能充分发挥溶菌酶的药用价值。提高血药浓度的最简便方法为静脉注射药物，已有多项发明专利和文献报导高水平溶菌酶血药浓度的优异药效，如静脉注射溶菌酶30000U/20g小鼠，治疗肺炎、肾炎、膀胱炎、咽喉炎等多种炎症的有效率可达100%。但注射方式给药不仅造成疼痛，特别是长期重复给药为病人带来精神和生理上的巨大压力，造成局部脂肪萎縮，皮肤色素沉着等，甚至可能发生如Arthurs反应等严重的药物过敏反应，产生的免疫复合物在局部血管基底膜沉积，导致病理损伤，以及全身免疫复合物病等(如血清病)。近年来，非注射途径的给药方式受到了广泛的关注，其中口服给药方式无疑是最方便、最安全的途径之一。然而，口服的必经之路——胃肠道是大分子蛋白药物口服给药的最大天然屏障。大鼠离体空肠组织的吸收实验表明，作为一种蛋白类大分子药物，溶菌酶的生物利用度仅为1.47±0.20%，体内吸收效率则更低。为有效提高血药浓度,开发口服给药制剂，可以采用各种手段促进蛋白类大分子药物的肠道吸收，其中在药物中添加肠道吸收的促进剂是一种很好的策略。
发明内容针对已有技术存在的不足，本发明的目的在于提供山药作为蛋白药物溶菌酶的肠道吸收促进剂的应用。本发明的发明目的是通过如下技术方案实现的从中药理论出发，通过筛选数十种中药，对中药作为蛋白药物溶菌酶的肠道吸收促进剂进行了研究,实验发现山药能明显促进溶菌酶药物的肠道吸收，提高其药物的生物利用度。通过筛选数十种中草药，挑选获得到了能有效促进溶菌酶的肠道吸收的中药一山药。《中国药典》以及《全国中草药汇编》记载，山药甘；平；归脾、肺、肾经，具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的作用，是一种常见的，也是常用的中药之一。取市售商品中药材山药，按常规方法煎制，然后按每100ml冷水浸泡120g山药的比例进行浸泡0分钟左右，快火煮沸后文火煎制20分钟左右，低速离心后取上清液，即获得山药水相萃取液部位即山药促进剂,4'C保存备用。按溶菌酶使用剂量为0.5mg-5.Omg/只小鼠，山药使用剂量为0.2ml-2.Oml/只小鼠，进行灌胃给药。实验证明山药确实能够作为大分子蛋白类药物肠道吸收的促进剂，大幅度促进溶菌酶的肠道吸收效率，提高溶菌酶的血药浓度。实验结果还表明山药促进剂对小鼠溶菌酶血药本底基本没有影响，小鼠体况正常，同时能明显有效地促进蛋白药物溶菌酶的肠道吸收，是一种有效的肠道吸收促进剂。同时实验表明，山药促进剂对内源性蛋白溶菌酶以及外源性蛋白溶菌酶药物代谢没有明显影响。图l为山药对溶菌酶肠道吸收的促进作用。具体实施例方式下面通过具体的实施例进一步说明本发明是如何实现的实施例l山药对溶菌酶肠道吸收的促进作用1、溶菌酶制剂的制备及用量鸡蛋清溶菌酶(20000U/mg)制备方法生理盐水配制2mg/ml或10mg/ml的口服药物溶液，4'C保存备用。使用剂量0.5mg-5.0mg/只小鼠2、山药促进剂的制备及用量市售商品中药材山药，根据《中国药典》的用法用量.制备方法常规方法煎制，每100ral冷水浸泡120g山药30分钟，快火煮沸后文火煎制20分钟，低速离心后取上清液,即获得山药水相萃取液部位,4'C保存备用。使用剂量0.2ml-2.Oml/只小鼠3、溶菌酶血药浓度的测定测定方法溶菌酶微球菌比色法，线性范围为2微克/毫升~10微克/毫升。实验结果1、山药促进剂提高溶菌酶血药浓度的体内效应实验设计实验组--溶菌酶+山药促进剂组对照组---l)山药促进剂组2)溶菌酶组3)本底组(小鼠内源性溶菌酶)各组样本数量为6只小鼠；实验组口服灌胃给药溶菌酶lmg/只和山药促进剂1ml/只;对照组1口服灌胃山药促进剂lml/只；对照组2口服灌胃给药溶菌酶lmg/只；对照组3口服灌胃生理盐水lml/只。给药8小时后眼眶取血，测定溶菌酶血药浓度。结果如下图表l所示表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>上述结果表明，各对照组之间无显著性差异，实验组溶菌酶血药浓度达到15.68微克/毫升，血药浓度提高二倍多，与对照组相比差异显著。仅服用溶菌酶的对照组生物利用度<1%，而实验组生物利用度>5%，实验证明山药确实能够作为大分子蛋白类药物肠道吸收的促进剂，大幅度促进溶菌酶的肠道吸收效率，提高溶菌酶的血药浓度。2、山药促进剂对溶菌酶内源水平的影响由于溶菌酶也是小鼠机体非特异免疫因子之一，是小鼠血液中的内源性物质，因此需考察山药促进剂本身对小鼠本底水平的影响情况。小鼠连续灌服山药促进剂一周，眼眶取血检测溶菌酶血药浓度。发现山药促进剂组小鼠的溶菌酶血药浓度为4.63±0.8,小鼠本底组为3.89±0.63(见图l)，二者之间没有显著性差异，结果表明山药促进剂对小鼠溶菌酶血药本底基本没有影响，小鼠体况正常，同时能明显有效地促进蛋白药物溶菌酶的肠道吸收，是一种有效的肠道吸收促进剂。3、山药促进剂对溶菌酶血药代谢的影响为了考察山药促进剂对溶菌酶血药代谢的影响，对实验组口服给药8小时和16小时后的小鼠追踪测定，检测溶菌酶血药维持情况。结果发现8小时血药浓度15.68±5.88微克/毫升，16小时血药浓度5.69±0.92，同时小鼠本底组血药浓度分别为3.96±0.89和4.04±0.42，结果表明，与8小时血药最高浓度相比，给药16小时后实验组小鼠的血药浓度明显下降，基本恢复正常，与对照组小鼠没有显著性差异，说明由山药促进吸收的药物溶菌酶蛋白能被小鼠正常代谢。这种情况与溶菌酶含片10-12小时人血药药效时间的情况是一致的。因此，山药促进剂对内源性蛋白溶菌酶以及外源性蛋白溶菌酶药物代谢没有明显影响。权利要求1、山药作为蛋白药物溶菌酶肠道吸收促进剂的应用，其特征在于将市售的中药山药按常规方法煎制，按每100ml冷水浸泡120g山药的比例进行浸泡，快火煮沸后文火煎制，低速离心后取上清液，即获得山药水相萃取液部位，4℃保存备用，按溶菌酶使用剂量为0.5mg-5.0mg/只小鼠，山药使用剂量为0.2ml-2.0ml/只小鼠，进行灌胃给药，山药促进了溶菌酶的肠道吸收效率。全文摘要本发明公开了山药作为蛋白药物溶菌酶肠道吸收促进剂的应用。按常规方法将市售山药经过煎制、浸泡、煮沸后，低速离心，取上清液，即获得山药水相萃取液部位即山药促进剂，将山药促进剂与溶菌酶按一定比例进行灌胃给药。实验表明山药能够作为大分子蛋白类药物肠道吸收的促进剂，大幅度促进溶菌酶的肠道吸收效率，提高溶菌酶的血药浓度。实验结果还表明山药促进剂对小鼠溶菌酶血药本底基本没有影响，小鼠体况正常，同时能明显有效地促进蛋白药物溶菌酶的肠道吸收，是一种有效的肠道吸收促进剂。同时实验还表明，山药促进剂对内源性蛋白溶菌酶以及外源性蛋白溶菌酶药物代谢没有明显影响。文档编号A61K38/48GK101361881SQ200810042660公开日2009年2月11日申请日期2008年9月9日优先权日2008年9月9日发明者佳何,静李,沈彦萍,陈宇光申请人:上海沈李科工贸有限公司