专利名称：：一枝蒿酮酸衍生物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一枝蒿酮酸衍生物及其用途，具体而言，该衍生物具有抗流感病毒和疱疹病毒性能的结构以及含有它们的药物组合物。
背景技术：
：长期以来，人类一直与病毒性感染进行斗争，据不完全统计，全球约60%的流行性传染病是由于病毒性感染引起的，目前临床上还没有特效专一的抗病毒药物。抗生素和抗病毒药物的滥用导致病毒的耐药性和变异性增加，从而导致新的病毒不断出现。因此需要开发新结构和新作用机制的抗病毒药物来满足社会的需要。由于纯化学合成的药物活性高、毒副作用也大。在在临床期的淘汰率高(尤其是抗病毒药物的开发难度大，受多种因素的制约，在临床期的淘汰率更高，据统计抗病毒药物进入I-III期临床的淘汰率达70%以上)。因此从天然产物中寻找结构新颖的先导化合物，进而对其进行结构修饰，合成me-too药已成为新药开发的主流。菊科植物新疆一枝蒿(ArtemisiarupestricL.)在新疆民间用药历史悠久，具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、增强免疫力、抗菌、解毒、保肝等活性。已有以新疆一枝蒿为主要成分的复方药品用于临床(如由新疆西域药业有限公司开发的复方一枝蒿颗粒，批准文号国药准字Z20026711，临床上用于解表祛风、凉血解毒以及用于治疗病毒性感冒、咽喉肿痛等疾病)。其中一枝蒿酮酸(Rupestonicacid)是从新疆一枝蒿中分出的一种含多官能团的单体倍半萜，在本发明的前期研究中，合成了一系列一枝蒿酮酸衍生物，并对所有的衍生物进行了体外抗流感病毒和疱疹病毒活性筛选，活性筛选结果表明大部分该类化合物具有较强的抗流感病毒活性，部分衍生物具有较强的抗单纯疱疹病毒活性。本发明是对CN2007101800216的进一步研究，继续对一枝蒿酮酸进行结构衍生，以期发现高活性的以天然产物为母核的抗病毒先导化合物。
发明内容本发明的第一个目的是合成了具有通式I结构的一枝蒿酮酸衍生物及部分化合物的药学上可接受的盐以提高一枝蒿酮酸的药理活性和降低其副作用，本发明的另一个目的是提供了含有通式I结构的一枝蒿酮酸衍生物或药学上可接受的盐作为有效成分，以及一种或多种药学上可接受的惰性载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，及其在抗流感病毒和疱疹病毒等方面的应用。本发明所述的一种一枝蒿酮酸衍生物，具有通式I的一枝蒿酮酸衍生物类化合物或药学上可接受的盐，是以一枝蒿酮酸单体化合物和芳香胺或脂肪胺或有机醇为脂肪醇或芳香醇为原料，采用常规的縮合反应制备出一枝蒿酮酸衍生物A类，B类化合物，其通式为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(I)其中A类化合物中&为正十二烷基或对氯苯基或邻氯苯基或对溴苯基或邻苯基二氯苯基或苄基；B类化合物中R2为乙基或对氯苯基或邻氯苯基或对溴苯基或邻溴苯基或对氟苯基二氯苯基或对羟基苯基或对甲基苯基或节基或对氟节基或对三氟甲基节基或对氯苄基或对硝基苄基或对溴苄基或邻溴苄基或对甲氧基苄基或2，4_二氯苄基或邻氯苄基。所述的一枝蒿酮酸衍生物，A类化合物优选下列任意一种化合物N(正十二-焼基/-一枝蒿酮酸酰胺，N(4-氯-苯基:-一枝蒿酮酸酰胺，N(2-氯-苯基:-一枝蒿酮酸酰胺，N(4-溴-苯基:-一枝蒿酮酸酰胺，N(2-溴-苯基:-一枝蒿酮酸酰胺，N(节基)-一枝蒿酮酸酰胺。1所述的一枝蒿酮酸衍生物，B类化合物优选下列任意一种化合物一枝蒿酮酸乙酯，一枝蒿酮酸(对氯苯基)-酯，一枝蒿酮酸(邻氯苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对溴苯基)-酯，一枝蒿酮酸(邻溴苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对氟苯基)-酯，一枝蒿酮酸(2，4-二氯-苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对羟基_苯基)_酯，一枝蒿酮酸(对甲基苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对氰基_苯基)_酯，一枝蒿酮酸节酯，一枝蒿酮酸(对氟苄基)-酯，—枝蒿酮酸(对三氟甲基-苄基)-酯，[OO32]—枝蒿酮酸(对氯苄基)_酯，[OO33]—枝蒿酮酸(对硝基_苄基)_酯，[OO34]—枝蒿酮酸(对溴苄基)_酯，—枝蒿酮酸(邻溴苄基)_酯，—枝蒿酮酸(对甲氧基-苄基)-酯，—枝蒿酮酸(2，4-二氯-苄基)-酯，—枝蒿酮酸(邻氯苄基)_酯，—枝蒿酮酸(对氰基_苄基)_酯。A类化合物与医学上可接受的酸形成医学上可接受的盐，其中无机酸盐为盐酸盐或硫酸盐或磷酸盐或硝酸盐；有机酸盐为甲酸盐或草酸盐或乙酸盐或柠檬酸盐或富马酸盐或马来酸盐或氨基酸盐。所述的任意一种化合物作为活性成分，单独或结合一种或几种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体组成药物组合物。所述的衍生物作为制备治疗抗甲、乙型流感病毒的药物的用途。所述的衍生物作为制备治疗抗I、II型单纯疱疹病毒感染的药物的用途。本发明所述的通式I的化合物可以通过以下步骤合成A类化合物的合成在THF体系中，以一枝蒿酮酸和通式I中所列举的芳香胺或脂肪胺为原料，在縮合剂DCC/H0Bt作用下合成了A类化合物，其中&为正十二烷基或对氯苯基或邻氯苯基或对漠苯基或邻苯基或2，4-二氯苯基或节基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>B类化合物的合成在THF/乙腈体系中，以一枝蒿酮酸和有机醇的脂肪醇或芳香醇为原料，在縮合剂DCC/DMAP作用下合成了B类化合物，其中R2为乙基或对氯苯基或邻氯苯基或对溴苯基或邻漠苯基或对氟苯基或2，4_二氯苯基或对羟基苯基或对甲基苯基或节基或对氟节基或对三氣甲基节基或对氯节基或对硝基节基或对溴节基或邻溴节基或对甲氧基节基或2，4_二氯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>本发明所述的通式所示的化合物或A类化合物的盐作为有效成分，分别作为制备治疗抗流感病毒和疱疹病毒的药物的用途。本发明所述的通式I列举的化合物及药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、赋型剂或稀释剂共同组成药物组合物。该药物组合物按常规制药可制成各种药物剂型(如固体口服剂、液体口服剂或液体注射剂等)。本发明所述的通式I的化合物的生物活性是通过以下方式测定1:抗A、B型流感病毒活性的测定测试原理以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主细胞，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE).测试的材料和方法(1)病毒株A型流感病毒(济防90-15)，B型流感病毒(济防97-13)，2006年9月在鸡胚尿囊腔内培养传代，-S(TC保存。(2)样品处理样品溶于DMSO，再用培养液配成适宜的初始浓度，用培养液做3倍稀释，各8稀释度。(3)阳性对照药病毒唑(RBV)，浙江康裕药业有限公司生产(批号960501)。(4)测试方法MDCK细胞接种于96孔培养板，置5%C02，37。C培养24小时，MDCK细胞分别加入A型流感病毒10—3(100倍TCID5。)，B型流感病毒10—2(30倍TCID5。)，37"吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度的药物。设病毒对照和细胞对照，37t:培养36小时，观察结果，纪录CPE，计算个样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC5。)。2:抗单纯I，II型疱疹病毒活性的测定测试原理以Vero(非洲绿猴肾)细胞为病毒宿主细胞，测定样品抑制疱疹病毒I，II型引起细胞病变程度。测试的材料和方法(1)病毒株HSV-I，VR733株，HSV-II，SAV株，均由ATCC提供。(2)样品处理样品临用前溶于匿S0配成适宜的浓度，检测时用培养液做3倍稀释，共8稀释度。(3)阳性对照药无环鸟苷(ACV)，由湖北科益制药厂生产。(4)测试方法Vero细胞接种于96孔培养板，24小时后分别感染I型疱疹病毒10—3(50倍TCIDs。感染量)和II型疱疹病毒10—、17倍TCIDs。感染量)，吸附小时，弃病毒液，按以上稀释度加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，48小时观察细胞病变程度(CPE)，用Reed-Muench法分别计算样品对单纯I型疱疹病毒和II型疱疹病毒的半数抑制浓度(IC5。)。具体的实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明仪器与试剂Varian600核磁共振仪(CDC13，TMS为内标)，HP1100LC/MS.D液质连用仪，ShimadzuFTIR-8400S(日本岛津制作所生产)，X_4数字显示显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司生产，温度未经校正).—枝蒿酮酸按常规方法分离，纯度98%，HPLC检测，其余的试剂均为市售的分析纯。实施例1—枝蒿酮酸的制备—枝蒿酮酸采用常规的连续提取方法提取，取粉碎的一枝蒿5kg，用1升的95%的乙醇提取三次，合并提取液，提取液浓縮的浸膏，浸膏用乙酸乙酯多次提取。合并乙酸乙酯层，浓縮后硅胶柱分离，得一枝蒿酮酸粗品，重结晶得一枝蒿酮酸纯品，无色棒状晶体，mp.132-134°C。IR(KBr)u:3230,2970-2860，1720，1680，1635，1415，1390，1238，958cm—1;力NMR(600MHz，CDC13):0.67(d，J=7.2Hz，3H，CH3)，1.63(m，1H)，1.64(m，1H)，1.81(m，1H)，1.84(m，1H)，1.88(m，1H)，2.06(m，1H)，2.14(m，1H)，2.46(m，1H)，2.64(m，1H)，2.86(m，1H)，2.90(m，1H)，3.22(m，1H)，5.76(s，1H)，6.40(s，1H);13CNMR(150MHz，CDC13):7.9，12.0，31.4，35.1，36.4，37.5，38.2，41.1，45.9，125.2，137.6，145.6，171.3，175.2，208.8;ESI-MS(m/z):519[2M+23]+，497[2M+1]+，249[M+l]+。通过XRD单晶衍射确定了一枝蒿酮酸的绝对构型。制备A类一枝蒿酮酸衍生物，[以N-(对甲基-苯基)_一枝蒿酮酸酰胺A-6的合成为例]:将一枝蒿酮酸O.124g(0.5mmo1)和DCC0.113g(0.55mmol)加入25mL的圆底烧瓶中，加入8mL干燥的THF中，冰浴下搅拌反应10min后，将0.08g(0.6mmo1)HOBt溶解在2mL干燥的THF中，冰浴搅拌下通过注射器加入反应体系，冰浴下反应30min后，将0.55mmo1对苄胺溶解在3mL干燥的THF中，滴加入反应体系.冰浴下反应30min后，自然升至室温反应.TLC检测反应完成后，反应液真空浓縮，残渣直接柱分离V(石油醚)V(乙酸乙酯)=5:1-2:1)即得目标化合物A-6.其余的A类化合物按化合物A-6的实验过程合成，其结构均通过IR/HNMR，ESI-MS等分析方法进行了表征。以表的形式进行说明A类化合物的结构、名称结构通式代号名称正十二烷基A-lN(正十二烷基)-一枝蒿酮酸酰胺4-氯-苯基A-2N(4-氯-苯基)-一枝蒿酮酸酰胺^"""^2-氯-苯基A-3N(2-氯-苯基)-一枝蒿酮酸酰胺4-溴-苯基A-4N(4-溴-苯基)-一枝蒿酮酸酰胺H''~~2-溴-苯基A-5N(2-溴-苯基)-一枝蒿酮酸酰胺0节基A-6N(苄基)-一枝蒿酮酸酰胺8A类化合物的物性常数及IR和MS数据<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>A类化合物的"HNMR数据<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>制备B类一枝蒿酮酸衍生物的合成(以一枝蒿酮酸(对甲基-苯基)-酯的合成为例)将一枝蒿酮酸O.124g(0.5mmo1)和DCC0.113g(0.55mmol)加入25mL的圆底烧瓶中，加入8mL干燥的THF中，冰浴下搅拌将0.031g(0.25mmol)DMAP加入反应体系。冰浴下反应30min后，将0.128g(0.60mmol)对甲基苯酚加入反应体系，冰浴下搅拌反应30min后自然升至室温反应8h后，过滤掉沉淀DCU，滤液浓縮后柱分离即得目标化合物B-IO。其余的B类化合物按B-10的合成方法合成。所合成的化合物均通过IR，力NMR，ESI-MS等分析方法进行了表征。部分代表该类化合物的力NMR数据如下B类化合物的结构、名称<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>部分B类化合物的物性常数及IR和MS数据<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>实施例3依据实施例1制备一枝蒿酮酸；制备一枝蒿酮酸酰胺衍生物(A类化合物)无机酸盐或有机酸盐(1)N(2-溴-苯基)-一枝蒿酮酸酰胺(A-5)盐酸盐的制备将0.5mmolN(2_溴-苯基)_一枝蒿酮酸酰胺，加入20mL5X的盐酸水溶液中，微热搅拌使其溶解后，加入适量的乙醇，冷藏结晶，过滤，真空干燥即得N(2-溴_苯基)_一枝蒿酮酸酰胺盐酸盐，收率66%。(2)N(2_溴-苯基)_一枝蒿酮酸酰胺(A-5)醋酸盐的制备将O.5mmolA_5加入盛有10mL二氯甲烷的50mL单口圆底烧瓶中，加入2mL冰乙酸，30-4(TC搅拌l-2h，冷却后冷藏结晶，过滤，真空干燥即得A-5醋酸盐，收率约58%左右。A类化合物分别和有机酸和无机酸所成的盐A类化合物分别和无机酸或有机酸所成的盐，「CONH-R,'HxMyHxMyA类化合物所成的无机酸盐盐酸A类化合物的盐酸盐硫酸A类化合物的硫酸盐硝酸A类化合物的硝酸盐磷酸A类化合物的磷酸盐RxCOOHA类化合物所成的有机酸盐甲酸A类化合物的甲酸盐草酸A类化合物的草酸盐乙酸A类化合物的乙酸盐柠檬酸A类化合物的貯檬酸盐富马酸A类化合物的富妈酸盐马来酸A类化合物的马来酸盐氨基酸A类化合物的氨基酸盐实施例4活性筛选实施例本发明所述的通式所示的化合物或其盐作为制备治疗抗流感病毒或疱疹病毒的药物用途。所列举的化合物的生物活性通过下列方式测定—抗甲、乙型流感病毒活性的测定测试原理以MDCK(狗肾)细胞为病毒宿主细胞，测定样品抑制病毒引起细胞病变程度(CPE).测试的材料和方法(1)病毒株甲型流感病毒(济防90-15)，乙型流感病毒(济防97-13)，2006年9月在鸡胚尿囊腔内培养传代，-S(TC保存。(2)样品处理样品溶于DMSO，再用培养液配成适宜的初始浓度，用培养液做3倍稀释，各8稀释度。(3)阳性对照药病毒唑(RBV)，浙江康裕药业有限公司生产(批号960501)。(4)测试方法MDCK细胞接种于96孔培养板，置5%0)2，37"培养24小时，MDCK细胞分别加入A型流感病毒10—3(100倍TCID5。)，B型流感病毒10—2(30倍TCID5。)，37"吸附2小时后倾去病毒液，分别加入不同稀释度的药物。设病毒对照和细胞对照，37t:培养36小时，观察结果，纪录CPE，计算个样品抗流感病毒半数抑制浓度(IC5。)。二抗单纯I，II型疱疹病毒活性的测定测试原理以Vero(非洲绿猴肾)细胞为病毒宿主细胞，测定样品抑制疱疹病毒I，II型引起细胞病变程度。测试的材料和方法(1)病毒株HSV-I，VR733株，HSV-II，SAV株，均由ATCC提供。(2)样品处理样品临用前溶于匿S0配成适宜的浓度，检测时用培养液做3倍稀释，共8稀释度。(3)阳性对照药无环鸟苷(ACV)，由湖北科益制药厂生产。(4)测试方法Vero细胞接种于96孔培养板，24小时后分别感染I型疱疹病毒10—3(50倍TCIDs。感染量)和II型疱疹病毒10—、17倍TCIDs。感染量)，吸附小时，弃病毒液，按以上稀释度加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔和病毒对照孔，48小时观察细胞病变程度(CPE)，用Reed-Muench法分别计算样品对单纯I型疱疹病毒和II型疱疹病毒的半数抑制浓度(IC5。)。使用活性测试方法，本发明所述一枝蒿酮酸衍生物通式所列举的化合物活性测定结果如下优选部分化合物抗流感病毒的活性测试结果化合物代号TC5Q(|Limol/L)抑制A型流感病毒活性抑制B型流感病毒活性IC50—ol/L)SIIC50(|_imol/L)SI<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>"TC5。"半数有毒浓度，"---":样品在最大无毒计量时无抗流感病毒活性。"SI":选择指数，SI二TC5。/ICs。，"l"母体化合物(一枝蒿酮酸)。"RBV":代表阳性药病毒唑。"Oseltamivir"代表阳性药奧斯他韦。权利要求一种一枝蒿酮酸衍生物，其特征在于具有通式I的一枝蒿酮酸衍生物类化合物或药学上可接受的盐，是以一枝蒿酮酸单体化合物和芳香胺或脂肪胺或有机醇为脂肪醇或芳香醇为原料，采用常规的缩合反应制备出一枝蒿酮酸衍生物A类，B类化合物，其通式为其中A类化合物中R1为正十二烷基或对氯苯基或邻氯苯基或对溴苯基或邻苯基或2，4-二氯苯基或苄基；B类化合物中R2为乙基或对氯苯基或邻氯苯基或对溴苯基或邻溴苯基或对氟苯基或2，4-二氯苯基或对羟基苯基或对甲基苯基或苄基或对氟苄基或对三氟甲基苄基或对氯苄基或对硝基苄基或对溴苄基或邻溴苄基或对甲氧基苄基或2，4-二氯苄基或邻氯苄基。F2008100729641C0000011.tif2.根据权利要求1所述的一枝蒿酮酸衍生物，其特征在于A类化合物优选下列任意一种化合物N(正十二-焼基〕-一枝蒿酮酸酰胺，N(4-氯-苯基〕-一枝蒿酮酸酰胺，N(2-氯-苯基〕-一枝蒿酮酸酰胺，N(4-溴-苯基〕-一枝蒿酮酸酰胺，N(2-溴-苯基〕-一枝蒿酮酸酰胺，N(节基)-一枝蒿酮酸酰胺。3.根据权利要求1所述的一枝蒿酮酸衍生物，其特征在于B类化合物优选下列任意种化合物一枝蒿酮酸乙酯，一枝蒿酮酸(对氯苯基)-酯，一枝蒿酮酸(邻氯苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对溴苯基)-酯，一枝蒿酮酸(邻溴苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对氟苯基)-酯，一枝蒿酮酸(2，4-二氯-苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对羟基-苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对甲基苯基)-酯，一枝蒿酮酸(对氰基-苯基)-酯，一枝蒿酮酸节酯，一枝蒿酮酸(对氟苄基)-酯，一枝蒿酮酸(对三氟甲基-苄基)-酯，一枝蒿酮酸(对氯苄基)-酯，一枝蒿酮酸(对硝基_苄基)_酯，一枝蒿酮酸(对溴苄基)-酯，一枝蒿酮酸(邻溴苄基)-酯，一枝蒿酮酸(对甲氧基-苄基)-酯，一枝蒿酮酸(2，4-二氯-苄基)-酯，一枝蒿酮酸(邻氯苄基)-酯，一枝蒿酮酸(对氰基-苄基)-酯。4.根据权利要求1、2和3所述的一枝蒿酮酸衍生物，其特征在于A类化合物与医学上可接受的酸形成医学上可接受的盐，其中无机酸盐为盐酸盐或硫酸盐或磷酸盐或硝酸盐；有机酸盐为甲酸盐或草酸盐或乙酸盐或柠檬酸盐或富马酸盐或马来酸盐或氨基酸盐。5.根据权利要求1、2、3和4所述的任意一种化合物作为活性成分，单独或结合一种或几种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体组成药物组合物。6.根据权利要求1所述的衍生物作为制备治疗抗甲、乙型流感病毒的药物的用途。7.根据权利要求1所述的衍生物作为制备治疗抗I、II型单纯疱疹病毒感染的药物的用途。全文摘要本发明涉及一种一枝蒿酮酸衍生物及其用途，是以从药用植物新疆一枝蒿中分离得到的母核兼奥和倍半萜的多官能团的单体化合物一枝蒿酮酸为母体化合物，将一枝蒿酮酸单体化合物和芳香胺或脂肪胺或有机醇为脂肪醇或芳香醇为原料，采用常规的缩合反应制备出一枝蒿酮酸衍生物A类，B类化合物，通过对一枝蒿酮酸单体化合物进行结构修饰，以寻找高活性的以天然产物为母体化合物的抗病毒的先导化合物，该化合物的活性试验结果表明具有治疗抗甲、乙型流感病毒和抗I、II单纯疱疹病毒感染的药物的用途，同时该化合物单独或结合一种或几种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋形剂或载体组成药物组合物，是用于开发抗病毒药物的候选化合物。文档编号A61K31/215GK101712631SQ20081007296公开日2010年5月26日申请日期2008年10月8日优先权日2008年10月8日发明者赵江瑜,阿吉艾克拜尔·艾萨,雍建平申请人:中国科学院新疆理化技术研究所