专利名称：：实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂及其制备方法与应用的制作方法实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂及其制备方法与应用
技术领域：
-本发明涉及抗乙肝、丙肝病毒的新药，具体是实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂及其制备方法与应用。技术背景-慢性乙型肝炎在世界上导致死亡的病因中列居第IO位，有约3.5亿的人口感染(终生感染)。另外，世界上80%的原发性肝癌是由慢性乙型肝炎引发的，每年大约有120万人死于与慢性乙型肝炎有关的肝病。中国是全世界感染乙型肝炎病毒人数最多的国家，大约有l.2亿人(占总人口的9.8%)，其中有3000万为慢性感染者。目前，全国有七亿人感染过乙肝病毒，1.2亿是乙肝表面抗原阳性，1千多万人是现状型慢性乙肝，并且约有10%的有转化为肝硬化或者肝癌的危险。丙型肝炎病毒(HCV)为具包膜的单股正链RNA病毒，属于黄病毒家族。HCV是已知惟一能造成慢性感染的RNA病毒(除逆转录病毒外)，据估计，目前全球约l.7亿HCV感染者中，6o%—80%为慢性携带者，而持续性感染最终发展为肝硬化/肝癌的机率高达3.5%—20%。HCV可分为11个基因型(genotype),80多个基因亚型，千扰素、聚乙二醇化、病毒唑及抗纤维化药物的使用是目前治疗丙肝的主要方法，由于丙肝病毒的多型性与变异性使得抗病毒药物效果不佳并容易产生耐药性。关于丙肝疫苗与特异性抗体的研究也是进展不大。目前，治疗慢性病毒性肝炎主要有l.抗病毒药物。以干扰素和核苷类似物拉米呋啶(贺普丁)为代表主要作用是抑制HBV的复制。但由于在用药和停药过程中会出现"反跳"的现象，即HBV的重新复制。而且西药也有许多不良反应，使其应用受到一定的限制。因此国外正在研究新一代的核苷类似药物如阿德福韦、恩替卡韦和聚乙二醇千扰素等，可以提高临床疗效。2.免疫调节药。以胸腺肽为代表的制剂可以提高或调整机体的免疫功能，这是治疗慢性乙型肝炎的另一个有效途径。大多数慢性乙型肝炎患者的免疫功能都有不同程度的紊乱，因此通过调整免疫功能可以达到抑制HBV复制的效果。3.基因疗法。目前尚处于研究和实验阶段，即通过核酸、治疗性疫苗等方法修饰HBV的结构，使体内的HBV不再复制，从而易于最终被机体所清除。从理论J^讲，这是根治乙肝最为有效的方法，但由于基因制剂安全性.和有效性的问题，做到真正用于临床还需要较长时间。4.中医药治疗。乙型肝炎病毒由于其本身的特点而较容易发生变异，在慢性感染过程中，变异可自发或在治疗后发生。据报道该病毒的每一个基因和每一种病毒蛋白都可发生突变，使其感染后临床表现多样化、临床经过复杂化，以及治疗困难化。目前已经发现的比较重要的变异有以下几种一是可以造成乙肝疫苗接种失败的变异，二是可以导致"小三阳"慢性乙肝的变异，三是可以对抗病毒治疗产生耐药的变异，后者主要发生在药物与病毒结合的位置，当病毒基因发生变异时，这些结合位点的空间结构发生改变，药物与病毒的结合能力下降，因而导致病毒耐药，因此，目前还没有一种针对慢性乙、丙肝的理想治疗药物。蛋黄抗体是指蛋黄中存在的抗体，也称蛋黄免疫球蛋白(Eggyolkimmunogbulinseylg)。母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋，母鸡血浆中之IgA与IgM，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。蛋黄的IgG与哺乳类的IgG在分子量、等电点、细胞膜上Fc受质的键结构上存在着相异点而被特定称为IgY。鸡卵黄免疫球蛋白G抗体是一种7S免疫球蛋白，与哺乳动物IgG略有不同。该蛋白质分子量约为180kDa，含两个亚单位，即6770kDa的重链和2230kDa的轻链，存在于免疫后母鸡的卵黄中。近年来，国内外学者就卵黄抗体的研究和开发做了许多工作，证明了免疫鸡的蛋对多种病原体提供特异性IgG，但未见有实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂及其制备方法与应用的报道。
发明内容本发明的目的是要提供一种疗程短、疗效显著、治疗费用低的实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂及应用。本发明的另一个目的是要提供一种实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂的制备方法。一种实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂，它以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽类身上，再从该禽所生的含有抗体的蛋黄中分离、纯化、消毒、分装制成的实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体口服制剂。本发明乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂的制备方法，包括如下步骤1、个性化、实时化免疫取'乙肝或丙肝病人A的血lml，免疫接种到一只禽类A，抗体产生后收集禽类A的蛋，取样进行蛋黄抗体含量检测(ELISA)，A禽蛋贮存在4'C冰箱中；每隔7天将禽类A重复免疫接种一次，共4次；2、抗体的纯化A禽蛋外壳用75%酒精消毒、去壳、分离取出蛋黄，用PEG、硫酸葡聚糖、自然胶(如藻酸纳、角叉菜胶)或乙醇沉淀等方法纯化抗体蛋白质；3、制备制剂对纯化的抗体蛋白质进行抗体检测，并进行抗体蛋白的保护，过滤、除菌，按100ml/瓶分装，即制成实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂，4'C冰箱保存。所述的抗体蛋的保护是在抗体制剂中按比例加入30%海藻酸钠或糖醇类物质。本发明实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体(IgY)制剂在抗乙肝或丙肝病毒的应用，口服，每天23次，每次100ml，6个月为一疗程。本发明的优点在于公开了7"种治疗乙肝或丙肝的新药，这种药不仅疗效显著，能克服病毒在复制过程中产生的变异而产生的耐药性问题，而且治疗费用低，为大多数患者所能承受，疗程短，无毒副作用，是乙、丙肝患者的福音。具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的阐述，但不是对本
发明内容的限定。实时个性化乙肝病毒鸡蛋抗体制剂的制备方法步骤如下1、实时化个性化免疫采用一个患者固定三只鸡，取乙肝病人lml血清，免疫接种到一只鸡身上，其他二只同样操作，待检测到产生蛋黄抗体后，收集鸡蛋，4'C保存。鸡每7天重复免疫接种一次，方法同上；2、抗体纯化，收集到的蛋外壳用75%酒精消毒，去壳分离取出蛋黄，用乙醇沉淀法纯化抗体蛋白质，并进行纯度检测；3、过滤、除菌，按100ml/瓶分装，4'C保存；应用实施例l:实时个性化乙肝病毒鸡蛋抗体制剂在抗乙肝病毒上的应用选20例4万性乙肝患者，所有患者均为乙型肝炎e抗原(HBeAg)和HBVDNA双阳性，均排除其他型肝炎及酒精性肝炎，自身免疫性肝炎、药物中毒性肝损伤等其他肝病，分为治疗组10例、对照组10例，治疗组服个性化免疫鸡蛋抗体，每日3次，每次100ml(2个鸡蛋黄)，对照组吃普通蛋黄，结果见表l-表l:乙患者治疗后肝功能及病毒复制指标变化情况(x士s)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>应用实施例2实时个性化丙肝病毒鸡蛋抗体制剂在抗丙肝病毒上的应用16例慢性丙肝患者均为2006年2月至2007年10月间在桂林第三人民医院感染科就诊的患者，其中男性10例，女性6例，年龄为(19一53岁)，平均病程3.4年。病例选择符合2000年修订的《病毒性肝炎防治方案》。所有患者均为丙型肝炎e抗原(HBeAg)和HCVDNA双阳性，均排除甲、乙、丁、戊型肝炎病毒感染及酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、药物中毒性肝损伤等其他肝病。分为治疗组8例和对照组8例。治疗组口服个性化免疫鸡蛋抗体，每日3次，每次100ml(2个鸡蛋黄)总疗程为6个月；对照组口服未免疫鸡蛋，方法同治疗组。疗效判断指标治疗前及治疗结束后分别检测HCVDNA、HBeAg等病毒复制及肝功能指标。结果应用用SSPS统计软件进行统计学处理，结果见表2:表2:丙肝患者治疗后肝功能及病毒复制指标变化情况(义±5)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>应用实施例中的疗效判断，是将治疗前后患者血浆中病毒载量(定量PCR分析)，乙或丙肝病毒标志物的检测，分别定出无效、有效、显效、治愈等指标进行统计学分析。权利要求1、实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂，其特征是它是以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽类身上，再从该禽所生的含有抗体的蛋黄中经分离、纯化、消毒、分装制成的禽蛋抗体口服制剂。2、实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂的制备方法，包括如下步骤-(1)个性化、实时化免疫取乙肝或丙肝病人A的血lml，免疫接种到一只禽类A，抗体产生后收集禽类A的蛋，取样进行蛋黄抗体含量检测(ELISA)，A禽蛋贮存在4'C冰箱中，每隔7天将禽类A重复免疫接种一次，共4次；(2)抗体的纯化A禽蛋外壳用75免酒精消毒、去壳、分离取出蛋黄，用PEG、硫酸葡聚糖、自然胶或乙醇沉淀纯化抗体蛋白质；(3)制备制剂对纯化的抗体蛋白质进行抗体检测、过滤、除菌，按100ml/瓶分装，4'C冰箱保存。3、如权利要求2所述的方法，其特征是所述的自然胶为藻酸纳或角叉菜胶。4、实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂在抗乙肝或丙肝病毒上的应用。全文摘要本发明公开了一种实时个性化乙肝或丙肝病毒禽蛋抗体制剂及其制备方法与应用，它是以乙肝或丙肝病人的血清，注射到禽类身上，再从该禽类所生的含有抗体的蛋黄中分离、纯化、消毒、分装制成的口服制剂，应用于抗乙肝或丙肝病毒治疗，一日2～3次，每日100ml，疗程6个月。本发明制剂疗程短、疗效高、无毒副作用、制剂制备方法简单，是乙、丙肝患者的福音。文档编号A61K39/42GK101224302SQ20081007346公开日2008年7月23日申请日期2008年2月4日优先权日2008年2月4日发明者唐振祥,庆徐,戴志刚,李丽亚,杨景毅,梁荣感,沈星灿,程书权,宁谭申请人:桂林市第三人民医院