专利名称：：一种中药药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用的制作方法一种中药药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用[
技术领域：
]本发明属医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用。[
背景技术：
]随着社会的发展，物质文明的进步以及医学水平的不断提高，许多危害人民生命健康的疾病得到了有效的控制。然而人们寿命的普遍提高以及吸烟、高脂饮食、肥胖等诸多因素的存在，心血管疾病的发病率相对上升，尤其是冠心病、心绞痛发病率较高，危害性较大，并严重威胁着人们的生命健康。冠心病是冠状动脉性心脏病的简称。是一种由于冠状动脉固定性(动脉粥样化硬化)或动力性(血管痉挛)狭窄或阻塞，发生冠状循环障碍，引起心肌氧供销需之间失衡而导致心肌缺血缺氧或坏死的一种心脏病，亦称缺血性心脏病。冠心病的发病随年龄的增长而增高，随年龄的增长而加重。冠心病多见于40岁以上男性与绝经期后的女性，主要危险因素为高血压、高脂血症、糖尿病、吸烟、冠心病家族史等。根据临床表现将冠心病分为心绞痛，心肌梗塞，无症状心肌缺血，缺血性心肌病，猝死。中医治疗冠心病有以下几个特点，一是中医根据病人的各种症状辨证施治，进行相应的针对性治疗；二是对患者进行整体调节；三是，治疗冠心病"急则治标、缓则治本"。发明人已经获得了一种治疗心血管疾病的药物组合物专利权，该组合物专利号为ZL00111303.8，其是由人参、丹参、麝香、蟾酥等名贵中药材组成。具有芳香益气通脉、活血化瘀止痛之功效，主治冠心病心绞痛(气虚血瘀证)，症见胸痛胸闷(胸憋)、心悸气短、神倦乏力、面色紫暗、舌淡紫、脉弱而涩者。I、II、III期临床研究显示该药治疗冠心病、心绞痛疗效确切，无毒副作用。按照本处方比例可以制成药剂学上任何一种剂型，包括滴丸、水丸、片剂、胶囊等制剂。本发明所指的药物组合物即为上述药物组合物的任何一种剂型。目前中药复方药物在阐述药物作用机理等基础研究还比较薄弱，大部分药物没有进行药物作用机理的研究，药物作用机理研究还存在作用靶点不明确，药物作用基础物质不明确，观测指标确定难等问题。该药物组合物属中药复方药物，其作用机理十分复杂，因此对其机理的深入研究，有利于进一步阐明该药的作用机制，利于发现新的用途。该药物组合物是新开发的中药，至今为止未见关于其关于治疗冠心病药效学方面的报道。[
发明内容]本发明的目的是提供上述药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用。本发明研究采用了假手术组、模型组、贝复济组、药物组合物组进行对比研究，手术造成心梗模型，通过研究血流动力学和心功能、左室重量指数(LVMI)及心脏指数(CMI)、心肌形态学变化、梗死面积、血清VEGF含量、细胞因子及受体等指标，显示该药物组合物可明显减轻冠脉结扎致心梗大鼠的左室重构，显著改善冠脉结扎致心梗大鼠心肌收縮功能，可能改善缺血心肌能量代谢，增加缺血心肌耐缺氧能力，具有一定程度的促血管新生作用。发明的有益效果本发明显示该药物组合物可明显减轻冠脉结扎致心梗大鼠的左室重构，显著改善冠脉结扎致心梗大鼠心肌收缩功能，可能改善缺血心肌能量代谢，增加缺血心肌耐缺氧能力，具有一定程度的促血管新生作用。首次阐明了该药物组合物对冠心病、心绞痛疾病具有治疗作用。图l假手术组大鼠组织形态学染色图图2模型组大鼠组织形态学染色3西药组大鼠组织形态学染色4药物组合物组大鼠组织形态学染色图[具体实施方式]下面结合实施例对本发明做进一步说明，下面实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。实施例药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用材料1实验方案1.1实验动物及分组雄性SD大鼠100只，体重200250g。采用体重分层随机法分为假手术组、模型组、贝复济组、麝香救心滴丸组，每组25只。1.2动物造模所有大鼠适应性饲养l周后造模，假手术组在开胸后不结扎前降支，而仅在相应部位用无线缝针空穿l次即缝合胸壁，其余大鼠进行手术造模。造模方法用盐酸氯胺酮(80mg，kg—')腹腔麻醉，气管插管后接人工呼吸机辅助呼吸(呼吸频率为90次/分，潮气量为4-6ml)。术前75%酒精消毒术野，在左胸第45肋骨间作横切口，从左侧第4肋间钝性分离打开胸腔，轻轻挤压胸腔，暴露心脏，剪开心包，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下12mra处用无创性缝线结扎左侧冠状动脉前降支，然后逐层缝合胸壁，待其恢复自主呼吸，拔除插管。开胸前后即时记录II导联心电图，以结扎部位以下心肌变白搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上明显抬高为造模成功。造模当天始每天注射青霉素3天预防感染。1.3实验用药物1.3.1贝复济(bFGF):珠海亿胜生物制药有限公司，批号20070106;1.3.2肝素钠注射液上海市第一生化药业有限公司，批号060601;1.3.3药物组合物内蒙古伊泰药业有限责任公司，将药物组合物研末，加入到生理盐水中，制成浓度为0.075mg/ml的药物组合物水溶液。1.4给药方法假手术组术后第2天每天单用生理盐水2ml灌胃，共8周；模型组在心梗造模后第2天开始每天以生理盐水2ml灌胃，共8周；贝复济组于开胸结扎冠脉后立即在结扎处周围予贝复济喷洒3揿(125AU/次)，术后开始每日皮下注射肝素1次(1250U/kg)，共5天；在心梗造模后第2天开始每天以生理盐水2ml灌胃，共8周；药物组合物组在心梗造模后第2天开始每天药物组合物水溶液2ml灌胃，共8周。1.5观察指标及检测1.5.1血流动力学和心功能检测通过PowerLab/8SP型生物信号和分析系统记录动脉血压(SBP、DBP及MAP)，左室压力(LVSP、LVEDP)及左室最大压力微分(士dp/dtmax)评估动物心功能情况。1.5.2左室重量指数(LVMI)及心脏指数(CMI)测定完成血流动力学及心功能测定后迅速打开胸腔，取出心脏置于冰氯化钠溶液中，冲洗干净，滤纸吸干后用电子天平称心脏重量，再沿室间隔剪去右心室，用电子天平称取左室(包括室间隔)重量，并与体重相除，计算LVMI及CMI。1.5.3心肌形态学变化①光镜固定后的心脏经常规脱水、透明、石蜡包埋、切片、苏木素-伊红(HE)染色，光镜下观察心肌变化情况。②电镜将2.5%戊二醛前固定的梗死边缘区心肌组织用1%锇酸后固定后脱水，用环氧树脂渗透后包埋，60'C高温聚合，用LKB超薄切片，橼酸铅电子染色，制成电镜切片，H-500透射电镜观察心肌梗死后大鼠心肌(包括梗死区、梗死边缘区、健存区)超微结构变化。1.5.4梗死面积检测固定后的心脏经常规脱水、透明、石蜡包埋、切片，用IMS细胞图像分析系统在10倍物镜显微镜下进行测试，分别检测心肌梗死面积和左室面积，梗塞面积(％)用(心肌梗死面积/左室面积)X100%表示。1.5.5血清VEGF含量测定在2%戊巴比妥麻醉下，右心房所取血5ml，以3000r/min离心10min，分离血清，置-80'C冰箱内保存，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定VEGF含量。1.5.6细胞因子及受体测定采用免疫组织化学SP法染色梗死边缘区心肌组织切片，观察血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，VEGF—R1、VEGF—R2的表达水平，以细胞内出现棕黄色颗粒沉着为阳性反应。1.6数据分析结果以均数土标准差(S±S)表示，应用SPSS11.5版本软件进行统计分析，由专人进行数据的统计学处理。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有显著意义。2实验结果2.1药物组合物对心梗模型鼠心室重构的影响(见表1)与假手术组比较，模型组、贝复济组、药物组合物组的LVMI、CMI及梗死面积均增高(P〈0.01)。与模型组比较，贝复济组及药物组合物组LVMI和CMI均有显著性下降(P〈0.01);梗死面积贝复济组(P〈0.05)和药物组合物组(P〈O.Ol)亦显著性减少。而药物组合物组3项指标改善更优于贝复济组(P<0.05)。表l药物组合物对心脏、左室重量指数及梗死面积的影响((n=8,〗±.、X1000)组别左室重量指数心脏指数梗死面积(％)假手术组1.99土0,152.48±0.200.28±0.48模型组3.08土0.12**4，30±0.31**14.70±5,06**贝复济组2.65±0.22**##3.63±0.34**##11.40±2.02**#药物组合物组2,45±0.14**##△3.29±0.16**##A'8,24±2.14**##A注与假手术组比较**P〈0.01;与模型通组比较^^P〈0.05'##P〈0.01:与贝复济组比较AP〈0.05，△AP<0.012.2药物组合物对心梗模型鼠血流动力学的影响(见表2、表3)与假手术组比较，模型组、贝复济组、药物组合物组动物的SBP、DBP及MAP均有显著性降低(P<0.01);与模型组比较，贝复济组SBP、及MAP明显升高(P<0.05)，药物组合物组SBP、DBP、MAP均显著升高(P<0.01)，且明显高于贝复济组(P<0.05)。(见表2)与假手术组比较，模型组(P<0.01)、贝复济组(P<0.01)、药物组合物组(P<0.05)动物的LVSP有所降低，LVEDP均有所增加(P<0.01);模型组和贝复济组士LVdp/dtmax均明显减小(P<0.01)，而药物组合物组仅+LVdp/dtmax减小(P<0.05)，-LVdp/dtmax无显著变化。与模型组相比，药物组合物组LVSP、LVEDP明显升高(P〈0.01)，士LVdp/dtmax显著加大(P〈0.01);而贝复济组则改善不明显。药物组合物组LVSP(P〈0.01)、+LVdp/dtmax(P<0.05)变化均显著优于贝复济组。(见表3)表2药物组合物对大鼠动脉血压的影响(n=8,组另'JSBP(mmHg)DBP(mmHg)MAP(mmHg)假手术组141,0±5,7114.3±7.1125.5±6,9模型组117.0±6.8**77.5土8,7**95.8±9.1**贝复济组123.7±6.9**#83,7±13.1**103.7±7.5**#药物组合物组130.6±4.6**##A95.6±9,5**##△111.1土4.4**##A注与假手术组比较*P<0.05,**P<0.01:与模型通组比较#P<0.05,##P〈0.01;与贝复济组比较AP<0.05，A△P<0.01'表3-l药物组合物对大鼠左室收縮功能的影响(n=8,<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3-2药物组合物对大鼠左室收缩功能的影响(续)(n=8,<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与假手术组比较*P<0.05，**P<0.01;与模型通组比较#P<0.05，##P〈0.01;与贝复济组比较△P<0.05,A△P<0.01。2.3药物组合物对心梗模型鼠心肌细胞组织形态学的影响2.3.1HE染色经HE染色，IO倍光镜下观察可见假手术组肌纤维排列规整，细胞无明显异型，未见肿胀、变性、萎縮等情况发生；模型组梗死区肌纤维排列紊乱，部分肌纤维断裂，细胞染色变浅，贝复济组及药物组合物组虽然也出现总体染色加深，梗死区心肌排列不规则等现象，但较模型组好转。但药物组合物组梗死心肌染色情况较贝复济组好转。染色图见图l-图6。2.3.2透射电镜假手术组可见正常的排列整齐的肌丝、Z带和正常的线粒体，肌丝清晰，线粒体大小正常，呈椭圆形，未见明显增生。模型组、西药组、中药组梗死区可见线粒体密度增加，形态不规则，并出现线粒体大小相差悬殊，嵴不清晰，还可见内质网扩张的出现，且见大量空泡变性，模型组梗死边缘区亦可见大量空泡变性及内质网的扩张，但较梗死区稍好。贝复济组、中药组梗死边缘区肌纤维规则，线粒体轻微肿胀，空泡变性和体积增大，并且大小不规则，内质网扩张，较模型组明显改善。2.4药物组合物对心梗模型鼠VEGF表达的影响(见表4)2.4.1血清VEGF吸光度与假手术组比较，模型组、贝复济组、药物组合物组血清VEGF吸光度明显增高(P<0.01)。与模型组比较，贝复济组(P<0.05)及药物组合物组(P<0.05)VEGF吸光度明显增高；而药物组合物组比贝复济组更高(P〈0.05)。表4药物组合物对血清VEGF吸光度的影响(n=ll，；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注与假手术组比较**P<0.01;与模型通组比较#P<0.05,##P〈0.01;与贝复济组比较△P<0.05,A△P<0.01。2.4.2心肌bFGF、VEGF、VEGF-R表达(免疫组织化学染色)药物组合物组较其它组bFGF、VEGF、VEGF_R1、VEGF—R2表达情况更加明显。3结论3.1药物组合物可明显减轻冠脉结扎致心梗大鼠的左室重构能显著降低模型鼠的LVMI和CMI(P〈0.01)，显著縮小心肌梗死面积(P〈0.01);并且上述作用显著优于贝复济(P〈0.05)。3.2药物组合物能显著改善冠脉结扎致心梗大鼠血流动力学能显著升高冠脉结扎致心梗大鼠的SBP、DBP和MBP(P〈0.01)，作用优于贝复济(P〈0,05);可显著增加心梗模型鼠LVSP(P〈0.01)，降低LVEDP(P〈0.01)，加大±LVdp/dtmax(P<0.01)，而贝复济无此作用。以上变化证实药物组合物能显著改善冠脉结扎致心梗大鼠心肌收縮功能。3.3光镜HE染色及电镜下观都证实药物组合物能改善冠脉结扎致心梗大鼠梗死区及梗死边缘区心肌组织形态学变化，减轻线粒体肿胀、空泡变性和体积增大，内质网扩张等，提示该药可能改善缺血心肌能量代谢，增加缺血心肌耐缺氧能力。3.4药物组合物能显著升高冠脉结扎致心梗大鼠8周时促血管内皮相关因子清VEGF水平；增加心肌bFGF表达，并且对心肌VEGF相关受体1、2的表达均有所上调。说明药物组合物具有一定程度的促血管新生作用。权利要求1.一种中药药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用2.根据权利要求l所说的用途，其特征在于该药物组合物在制备心肌梗死所致冠心病药物中的应用。3.根据权利要求2所说的用途，该药物组合物可明显减轻心梗大鼠的左室重构，减少心梗面积。4.根据权利要求2所说的用途，该药物组合物能显著改善心梗大鼠血流动力学，显著改善冠脉结扎致心梗大鼠心肌收縮功能。5.根据权利要求2所说的用途，该药物组合物可能改善缺血心肌能量代谢，增加缺血心肌耐缺氧能力。6.根据权利要求2所说的用途，该药物组合物具有一定程度的促血管新生作用。全文摘要本发明属医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备治疗冠心病、心绞痛药物中的应用。本发明研究采用了假手术组、模型组、贝复济组、药物组合物组进行对比研究，手术造成心梗模型，通过研究血流动力学和心功能、左室重量指数(LVMI)及心脏指数(CMI)、心肌形态学变化、梗死面积、血清VEGF含量、细胞因子及受体等指标，显示该药物组合物可明显减轻冠脉结扎致心梗大鼠的左室重构，显著改善冠脉结扎致心梗大鼠心肌收缩功能，可能改善缺血心肌能量代谢，增加缺血心肌耐缺氧能力，具有一定程度的促血管新生作用。文档编号A61K35/55GK101332232SQ20081009398公开日2008年12月31日申请日期2008年4月25日优先权日2008年4月25日发明者斌何,剑刘,刘志科,刘晓燕,刘艳红,王鹏义,解小刚申请人:内蒙古伊泰药业有限责任公司