专利名称：：一种可以保护细胞膜的药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物，特别是一种可以保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的药物。
背景技术：
：激烈的体力活动时，氧气的消耗量明显增加，使机体处于相对缺氧的状态，同时，机体的抗氧化物质(维生素C、维生素E、巯基)的消耗也相应增加，这两方面的作用的结果，可使机体内产生大量的自由基，这些自由基将侵袭人体所有组织的细胞膜，使细胞膜上的脂质发生过氧化，组织细胞膜的脂质过氧化损伤在运动人群机体表现为疲劳提早发生，疲劳后难以恢复，从而使运动能力下降。另外，由于多种原因，运动人群经常会发生各种运动损伤，特别是肌肉细胞膜的损伤，疼痛难忍，发生运动损伤后，运动人群不仅无法保证训练，还会给生活带来诸多不便，甚至造成终身祸患。因此有必要开发一种防止剧烈运动后的细胞膜损伤的产品。近年来1,6-二磷酸果糖(FDP)的作用引起了大家的重视，FDP是葡萄糖代谢过程中的一种重要的中间产物，具有保护细胞、稳定细胞膜、抗氧化及供氧等作用，能在分子水平上调节细胞代谢中若干酶活性。临床上，FDP主要用于各种原因引起的心力衰竭、缺血、脑血管疾病、糖尿病微血管并发症、支气管哮喘、肝炎、肝硬化等疾病，效果良好，毒副作用较少，如CN94111522.4就报道了用1,6-二磷酸果糖治疗糖尿病、冠心病、肝炎有很好的效果。一般理论认为，磷酸果糖不能经口服进入体内，原因是人体胃液中含有大量胃酸，肠液中含有磷酸酯酶，磷酸果糖经口服进入肠胃后，被胃酸和磷酸酯酶分解，不能进入血液。所以，事实上，运动队确实在应用1，6-二磷酸果糖，并且往往釆取静脉注射方式应用，但注射的不方便及不合法是不言而喻的。在氨基酸的研究中，牛磺酸和L-天门冬氨酸受到了广泛重视。牛磺酸作为一种含硫的B2氨基酸，各位学者结合动物实验，提出牛磺酸具有广泛的生物学作用保护细胞膜、调节渗透压、对抗脂质过氧化、双向调节C^+的跨膜转运、参与糖代谢的调节；牛磺酸还能通过提高肌糖原和糖原的含量，降低血乳酸的含量来提高机体的运动能力，具有抗疲劳作用；大运动量训练后适当补充牛磺酸对于维持心血管系统功能，及时消除运动疲劳，预防心肌损伤等运动性疾病具有一定的作用。因此，从理论上来讲，牛磺酸有望成为一种新的有效的运动营养补剂，有广泛的研究应用前景。L-天门冬氨酸是天然存在的氨基酸，它的主要功效有l)增加活力，消除疲劳，特别是慢性疲劳；2)通过协助消除过多的血氨来保护肝脏；3)与其它氨基酸结合所形成的分子能吸收毒素并能将它们从血液中清除；4)协助细胞运作及DNA/RNA的形成。在医药上主要做为治疗心脏病、肝功能促进剂、氨解毒剂、疲劳消除剂、氨基酸输液成分，在食品工业方面也是一种良好的营养增补剂，且热量低、不蚀牙齿，常用作运动型饮料添加剂。在体内，维生素Bi以辅酶形式参与糖的分解代谢，有保护神经系统的作用，还能促进肠胃蠕动，增加食欲。维生素Bi还对神经组织和精神状态有良好的影响，被称为精神性的维生素。
发明内容运动人群经常会发生各种运动损伤，特别是肌肉细胞膜的损伤。本发明的目的是提供一种使用方便，可以保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的药物。本发明的药物包含的组分及其重量份为1，6-二磷酸果糖或其盐30-40牛磺酸12-14L-天门冬氨酸或其盐4-6柠檬酸1-2维生素B,1-2，其中1，6-二磷酸果糖盐和L-天门冬氨酸盐的重量份以相应的1，6-二磷酸果糖、L-天门冬氨酸计。其中1,6-二磷酸果糖盐和L-天门冬氨酸盐分别是能够提供相应有效组分的钠盐，钙盐和镁盐的一种或多种。1，6-二磷酸果糖(FDP)，不是普通的果糖，作为糖代谢的中间产物，它既可刺激并加速糖代谢的反应过程，又缩短了糖氧化时间，为机体提供了大量的能源物质，对加速骨骼肌在运动中，运动后的能量供应起着多、快、好、省作用，从而使损伤的肌肉得到快速修复。使用1,6-二磷酸果糖可以促进我们机体自身的内源性的1，6-二磷酸果糖、二磷酸甘油和ATP(三磷酸腺苷)成倍增髙，增加心肌供血，使心肌收缩力加强，改善微循环，改善细胞膜的极化状态和促进缺血组织、器官的活动，具有抗氧化作用，能够抑制肌细胞产生自由基，这对维持细胞完整性，恢复和改善细胞膜功能有重要作用。本发明通过向1，6-二磷酸果糖中加入天门冬氨酸，改变人体胃中的pH值，使l，6-二磷酸果糖可顺利通过肠胃进入血液。1,6-二磷酸果糖与牛磺酸和L-天门冬氨酸协同作用，还可以进一步提高此药物的抗疲劳、保护细胞膜作用。在本发明涉及的药物中，还添加了促进有氧代谢的一些中间产物，如柠檬酸、维生素Bp使堆积的血乳酸重新回到有氧代谢的循环中继续氧化供能。1,6-二磷酸果糖或其盐、牛磺酸、L-天门冬氨酸或其盐、柠檬酸和维生素B^办同作用，既保证了FDP的快速能量补充和细胞修复作用，又避免了相应的乳酸堆积，是运动员恢复运动疲劳、保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害不可缺少的手段之一。本发明的药物还可以包含医药上可接受的辅料，根据需要和辅料的选择，可配制成胶囊剂、片剂、丸剂或其他医药上可接受的剂型。5所述辅料选自淀粉、糊精、滑石粉、蔗糖粉、乙醇、羟丙甲纤维素(HPMC)、羧甲基淀粉钠(CMS-Na)、硬脂酸镁等医药上可接受的辅料中的一种或一种以上。本发明所涉及的保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的药物的各种剂型，是通过本领域常规方法制备得到的。本发明涉及的药物剂型优选胶囊剂。将以上各配料依次根据比例由小到大过40目筛，去除筛上存留物中的杂质，用粉碎机粉碎后再过筛；接着把将重量比例接近的物料,按比例由小到大的顺序一一混合，充分搅拌，倒入胶囊填充模具中，制成胶囊，刨光胶囊表面的粉末，用药瓶分装，药瓶中加入干燥剂、棉花，之后封电磁感应膜，旋盖，灭菌，得到本发明的胶囊制剂药物。通过实验我们发现本发明的药物可显著提高训练大鼠的游泳运动能力，且能够阻止运动给骨骼肌收缩装置带来的损伤。具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例l取各成分如下(重量以g计)1，6-二磷酸果糖35、牛磺酸14、L-天门冬氨酸5.3、维生素B,l、柠檬酸l.l，将以上各配料根据比例依次由小到大过筛(40目)，去除筛上存留物中的杂质，大颗粒用粉碎机粉碎后再过筛；接着把将重量比例接近的物料，按比例由小到大的顺序一一混合，充分搅拌，倒入胶囊填充模具中，制成胶囊，刨光胶囊表面的粉末，用药瓶分装。药瓶中加入干燥剂、棉花，之后封电磁感应膜，旋盖，灭菌，得本发明所述的保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的l,6-二磷酸果糖胶囊制剂。实施例2取各成分如下(重量以g计)1,6-二磷酸果糖40、牛磺酸14、L-天门冬氨酸4、维生素BJ、柠檬酸l,淀粉20、糊精20、蔗糖粉20，将以上各配料依次由小到大过筛(40目)，筛上存留物中杂质去除，大颗粒用粉碎机粉碎后再过筛。接着把将重量比例接近的物料，按比例由小到大的顺序一一混合，充分搅拌，使用80%的乙醇作为黏合剂，制得合适软材，将以上软材经12目筛眼的YK-160型摇摆制粒机制粒，制成湿颗粒；将湿颗粒分量平摊，待酒精挥发完全后，将批量物料置入DPL-30型多功能制粒机中，在50°C沸腾干燥一个小时，使最终产品水分控制在5%以内；再进行整粒和分装，得到本发明所述的保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的1,6-二磷酸果糖颗粒制剂。实施例3取各成分如下(重量以g计)1，6-二磷酸果糖30、牛磺酸12、L-天门冬氨酸6、维生素B,2、柠檬酸2，淀粉5、糊精7,将以上各配料依次由小到大过筛(40目)，筛上存留物中杂质去除，大颗粒用粉碎机粉碎后再过筛。接着把将重量比例接近的物料，按比例由小到大的顺序一一混合，充分搅拌，加入上述物料总重量1。/。的HPMC和1.5。/。的CMS-Na，将所有上述物料混合，加入60%的乙醇水溶液充分搅拌，制成软材；将以上软材经12目筛眼的YK-160型摇摆制粒机制粒，制成湿颗粒；将湿颗粒分量平摊，待酒精挥发完全后，将批量物料置入DPL-30型多功能制粒机中，在60°C沸腾干燥，制成干颗粒；将颗粒中加入适量硬脂酸镁，用压片机压制成片剂得本发明所述的保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害的1,6-二磷酸果糖片剂。实施例4取实施例1所得胶囊进行动物试验。一、实验对象与方法1.研究对象雄性Wistar大鼠76只，平均体重166.6±16.6g(由北京大学医学部实验动物中心提供)，大鼠在实验室适应三天后被随机分为安静对照组(Con)、训练组(Train)、训练补充活性糖(复方1,6-二磷酸果7糖)组(TFdp)。每组大鼠又根据最终运动后宰杀时间的不同分为两组，具体分组情况见表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.训练及补充方案大鼠运动的方式为游泳，水温3o士rc，有水流，水流速度是6立方米/小时。大鼠在进行游泳训练前，进行三天适应性游泳，每天15分钟左右。大鼠按以下方案(见表2)进行为期6周的游泳运动训练，每周训练5天，星期六、日休息。大鼠最终进行一次力竭游泳运动。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3.取材及处理方法通过腹腔注射戊巴比妥溶液麻醉动物，麻醉剂量为0.25g/Kg体重。由腹主动脉抽取血样，肝素抗凝，用冷冻离心机保温4。C,转速3000转/分钟，离心IO分钟，取血浆，并加入oc-巯基乙醇(终浓度为5mmol/L)和EGTA(终浓度为7.5mmol/L)，-80匸低温冰箱储存直到检测。取同侧比目鱼肌，迅速放入3%戊二醛固定液，固定2小时，以备制作电子显微镜切片。电子显微镜切片准备(l)常规取材，3%戊二醛固定2小时；(2)1%四氧化锷后固定1.5小时；(3)50%~100%酒精逐级脱水，各10分钟；(4)环氧树脂纯丙酮(1:1)浸透2小时；(5)环氧树脂812+815包埋；(6)用Leica超薄切片机切片(50nm);(7)铀铅染色后，用JEM-100电子显微镜进行观察。4.检测指标及仪器设备血浆CK总活性酶动力学方法。北京中生生物工程高技术公司生产的CK检测试剂。日本HITACHI7170A型全自动生化分析仪。血浆CK同功酶琼脂糖凝胶电泳方法。HelenaLaboratories公司生产的CK同工酶电泳胶片及试剂。HelenaRep-I型电泳仪。大鼠力竭游泳运动后比目鱼肌损伤情况的电镜观察每组任选两只大鼠的比目鱼肌制备电子显微镜切片，对于每一个电子显微镜切片，首先在放大2000倍的低倍视野内确定观察区域，然后根据成像清晰程度，在放大8000-10000倍的视野内观察肌纤维的损伤情况，主要观察肌原纤维和肌节排列的规则程度，肌节明带(I带)和暗带(A带)的完整情况与位置关系。本研究通过骨骼肌纤维Z线异常率来反映骨骼肌的损伤程度。Z线异常变化包括Z线流、Z线模糊、Z线扭曲和Z线消失，有上述任何一种情况出现的Z线均算作异常Z线。异常Z线数占被观察Z线总数的百分率即是Z线异常率。每只动物所观察的Z线总数在1500条以上。电子显微镜为日本HITACHI公司生产的JEOLJEM-100CXII扫描电子显微镜。力竭游泳运动时间以大鼠游泳动作不协调，出现挣扎状，且没入水面下5秒钟不浮出水面为游泳运动力竭的标准。5.数据统计所有数据均使用CASIOfx-100计算器和SAS统计软件进行计算和统计处理。对各组数据主要进行描述性统计、t检验和方差分析。显着性水平为P<0.05。二、研究结果1.大鼠力竭游泳运动后血浆CK及其同功酶变化由表3可见，Con组大鼠力竭游泳运动后的即刻血浆CK活性水平最高，但与其它各组大鼠相应的血浆CK活性水平无显著性差异；各组大鼠经过36小时恢复，血浆CK及其同功酶活性水平均显著(PO.05)低于其运动后即刻的水平。表3大鼠力竭游泳运动后及运动恢复36小时后血浆CK活性变化分组数量CK(IU/L)CK-MM%CK-MB%CK-BB%Conl8600.0±240.9al28.5±14.9a24.5±1.3a367.0±15.7a4ConR8139.5土31.6bl24.8±6.8b23.9±1.0b371.4土7.0b4Trainl7494.3±208.0cl21.3±10.6c22.8土2.6c375.9±12.3c4TrainR7195.6土49.3dl24.5±7.2d25.9±3.6d369.6±10.0d4TFdpI9512.2土214.4el18.3土9.4e24.3±1.4e377.4±10.1e4TFdpR9212.7±234.4fl27.4±12.9G5.6±2.5。67.1±14.6f4显著性水平(PO.05):albl,a2b2，a3b3,a4b4,cldl,c2d2,c3d3,c4d4，elfl,e2f2e3f3，e4f4.2.大鼠力竭游泳运动时间与运动后比目鱼肌纤维Z线异常率的变化由表4可见，TFdp组大鼠力竭游泳运动的时间最长，其水平不仅显著(PO.05)长于Con组大鼠的运动时间，而且也显著(P<0.05)长于Train组大鼠的运动时间，Train组大鼠的运动时间比Con组大鼠的运动时间长，但未达到要求的显著性水平。表4大鼠力竭游泳运动时间与运动后比目鱼肌纤维Z线异常率的变化分组数量力竭游泳运动时间(min)数量比目鱼肌Z线异常率(％)Conl856.6±21.5n223.5土4.3dConR852.9±19.9m222.1±5.6Trainl783.3±26.6p221.6土3.5jTrainR789.9±28.4t220.1±3.3TFdpI9144.0±lU.2y216.4±4.3hTFdpR9158.1±116.0v217.3±3.4显著性水平(PO.05):nypydhjhTfdpl组大鼠力竭游泳运动后比目鱼肌Z线异常率均分别显著(P<0.05)低于ConI和TrainI组大鼠运动后比目鱼肌Z线的异常率；而各组大鼠运动后即刻比目鱼肌Z线异常率与36小时恢复后的比目鱼肌Z线异常率没有显著性差异。三、结论本研究中补充活性糖的训练大鼠力竭游泳运动的时间不仅显著(P<0.05)长于非训练大鼠的力竭游泳时间，而且也比训练大鼠的运动时间显著(PO.05)增长。此结果表明，补充该发明制剂可显著提高训练大鼠的游泳运动能力。补充该发明制剂的大鼠力竭运动后比目鱼肌Z线异常率显著(P<0.05)低于训练大鼠运动后比目鱼肌Z线异常率的结果表明，该制剂能阻止运动给骨骼肌收缩装置带来的损伤。权利要求1、一种药物，其含有下列重量份的药效成分1，6-二磷酸果糖或其盐30-40牛磺酸12-14L-天门冬氨酸或其盐4-6柠檬酸1-2维生素B11-2，其中1，6-二磷酸果糖盐和L-天门冬氨酸盐的重量份以相应的1，6-二磷酸果糖、L-天门冬氨酸计。2、如权利要求1所述的药物，其特征在于，其含有下列重量份的药效成分1，6-二磷酸果糖或其盐35牛磺酸14L-天门冬氨酸或其盐5.3柠檬酸1维生素B,1.1，其中1，6-二磷酸果糖盐和L-天门冬氨酸盐的重量份以相应的1,6-二磷酸果糖、L-天门冬氨酸计。3、如权利要求1所述的药物，其特征在于1，6-二磷酸果糖盐是1，6-二磷酸果糖的相应钠盐，钙盐，镁盐和有机盐的一种或多种。4、如权利要求l所述的药物，其特征在于L-天门冬氨酸盐是L-天门冬氨酸的相应钠盐，钙盐，镁盐和有机盐的一种或多种。5、如权利要求1所述的药物，其特征在于，还含有选自淀粉、糊精、滑石粉、蔗糖粉、乙醇、硬脂酸镁、HPMC、CMS-Na或其它医药上可接受辅料中的一种或多种。6、如权利要求15任一所述的药物，其特征在于，其为片剂、胶囊剂、丸剂或其它医药上可接受的剂型。7、如权利要求1~5所述的药物，其特征在于，其为胶囊剂。全文摘要本发明涉及一种可以保护细胞膜的药物，其主要成分为1，6-二磷酸果糖或其盐、牛磺酸、L-天门冬氨酸或其盐、柠檬酸和维生素。此药物可保护细胞膜，降低自由基对细胞膜损害，快速提供大量的能源物质，快速修复损伤的肌肉，促进有氧代谢并可以避免相应的乳酸堆积。动物实验证实本药物可显著提高训练大鼠的游泳运动能力，且能够阻止运动给骨骼肌收缩装置带来的损伤。本发明提供的药物使用方便，适合运动人群尤其适合耐力性项目的运动员使用。文档编号A61P43/00GK101559064SQ200810104118公开日2009年10月21日申请日期2008年4月15日优先权日2008年4月15日发明者杨则宜,颖焦,白厚增申请人:北京康比特体育科技股份有限公司