专利名称：一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株LaDR5的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株，还涉及该细胞株的医疗用途。
背景技术：
TRAIL和Fas配体，TNF-a同属于肿瘤坏死因子TNF基因超家族。这些蛋白都可以有效地诱导靶細胞凋亡。TRAIL己经发现的受体包括DR5 (死亡受体5)、 DR4(死亡受体4)、 DcRl (诱骗受体1)、 DcR2 (诱骗受体2)和OPG(osteoprotegerin)。这些受体具有高度的同源序列，表现出与TRAIL相似的结合亲和性。死亡受体DR4以及DR5胞浆区都含有一个高度同源的死亡结构域(death domain, DD)，当TRAIL与他们结合后，可以通过该死亡结构域介导凋亡信号，诱导靶细胞凋亡。诱骗受体DcR2胞内区仅有一段不完整的死亡域(DD)，而DcRl没有胞内区，因此两者都不能向下传递TRAIL介导的凋亡信号。
DcRl和DcR2在正常组织细胞中表达较为丰富；而肿瘤细胞则高表达DR4和(或)DR5。因此TRAIL能特异性地引起肿瘤细胞的凋亡而对正常组织和细胞没有毒副作用。研究表明，TRAIL可以迅速诱导乳腺癌、直肠癌、肺癌、淋巴瘤以及前列腺癌等多种肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无杀伤作用。动物实验中也显示，TRAIL能有效低抑制肿瘤的形成和生长，甚至可以通过诱导肿瘤细胞的凋亡而导致肿瘤的縮小或消失。所有的这些研究都表明TRAIL作为抗肿瘤药物具有很好的开发前景。
重组表达的TRAIL在临床应用中也存在一些缺陷由于DcRl、 DcR2、OPG等三个诱骗受体的存在，TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的作用因诱骗受体的竞争结合而减弱，并且和其假受体的结合可能会产生副作用；作为小分子药物，TRAIL也存在着在体内半衰期短等应用方面的缺点；体内大量使用重组表达的TRAIL会产生免疫原性；另外，也有研究显示，体外重组表达的TRAIL由于融合形式以及空间结构的差异会诱导肝损伤。
抗体作用机制的深入研究提示抗体的特异性识别可以诱导配体信号，从而介导配体的生物学功能。因此，制备抗TRAIL受体的特异性抗体，替代TRAIL诱导特异性的肿瘤细胞凋亡信号成为研究的热点。
发明内容
为了提供一种新的肿瘤治疗手段，本发明公开了一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株LaDR5。该细胞株分泌可诱导肿瘤细胞凋亡的抗DR5单克隆抗体LaDR5。
本发明还公开了上述单克隆抗体LaDR5的制备方法，其具体过程如下
1) 制备抗原，用作免疫原；
2) 采用所述抗原免疫动物，取所述动物外周血分析血清效价，确定何时取脾脏，制备抗体生成细胞；
3) 准备骨髓瘤细胞；
4) 将抗体生成细胞与骨髓瘤细胞融合；
5) 选择生产所需抗体的克隆；6) 制备单细胞克隆；
7) 培养所获得杂交瘤细胞，或者在动物体内接种所述杂交瘤细胞，以大规模地制备所述单克隆抗体；
8) 测定如此制备的单克隆抗体的生物学活性。
下面参照上述步骤详细描述单克隆抗体的制备方法。制备本发明抗体的方法仅仅是说明制备方法，并非是限制性的。可以采用其他已知的方法，或者采用修改的方法。
1) 抗原的制备
将DR5抗原胞外段全长基因，构建在PET30表达载体上，融合载体上的His标签在XL1-Blue大肠杆菌中进行表达；利用金属(N产)螯合琼脂糖凝胶层析柱亲和纯化，获得的目的蛋白冻干备用。
2) 动物免疫
用与佐剂(例如弗氏完全或不完全佐剂等)混合步骤1)中生产的免疫原免疫小鼠。其他合适的实验动物作为说明包括大鼠、兔子等。给药途径优先选择皮下注射和腹腔注射。免疫方法任选地通过一剂或以适当间隔(l一5周)的数次重复剂量进行。利用固相酶免疫测定(ELISA)等方法监测经过免疫的动物的血清抗体效价，具有足够高抗体效价的动物作为抗体生成细胞源。用于随后融合的抗体生成细胞从最后一次加强免疫后3—4天的动物中收获。
3) 准备骨髓瘤细胞
得自已建立小鼠细胞系的细胞作骨髓瘤细胞来源，包括例如来自Balb/c的小鼠骨髓瘤株系NS-l、sp2/0等。将所选用的细胞系在含有10%FCS的1640
培养基中培养至对数生长期。4) 细胞融合
在最后一次加强免疫后，从具有预定抗体效价的小鼠中取出含有抗体生成细胞的组织，作为说明包括脾、淋巴结、外周血或任何合适的组织，脾细胞是最常用的来源。
目前用于脾细胞与在步骤3)中制备的骨髓瘤细胞融合的合适技术是利用聚乙二醇。
所述融合技术包括用无血清培养基(例如RPMI-1640)或磷酸缓冲液(PBS)洗涤脾细胞和骨髓瘤细胞，使得脾细胞与骨髓瘤细胞的数目比率约为5: 1至10: 1，离心收集细胞。弃去上清液，轻弹离心管，使细胞充分松散。缓慢滴加lmL含有50。/。 (w/v)聚乙二醇(m.w. 1,000-4,000)的无血清培养基并且混合。随后缓慢加入10mL无血清培养基，然后离心。再次弃去上清，将沉淀的细胞悬浮于适量的HAT培养基中。然后将悬浮液加入到培养板中，在5。/。v/vC02存在下，于37'C培养约2周，可适当的添加HAT培养基。观察克隆的形成。
5) 杂交瘤的筛选
采用的骨髓瘤细胞株存在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷，任何抗体生成细胞与骨髓瘤细胞杂交瘤外的融合体都不能长期存活。因此，在HAT培养基中连续培养可以导致仅选择所需的杂交瘤。
将所得杂交瘤培养为集落，然后将培养液换为缺乏氨基蝶呤的培养基(即HT培养基)。培养适当时间后，取出等份的培养上清液，通过ELISA、 FACS等方法测定抗体效价。
6) 克隆化
采用与步骤2)中测定抗体效价的方法确定产生特异性抗体的杂交瘤。将其以合适的方法进行克隆化。相应的方法包括有限稀释法，将杂交瘤细 胞稀释后接种96孔培养板，使得板中的每孔中含有一个细胞，进行培养，观 察单克隆的形成；软琼脂法，采用显微操作来分离单细胞的方法以及通过流 式细胞仪等细胞分选仪器分离单细胞等。
对于显示出一定抗体效价的克隆，将按照例如有限稀释法的克隆程序重 复2 4次，选择具有稳定抗体效价的克隆作为抗体生产细胞。
7) 大量制备单克隆抗体
将通过克隆化获得的杂交瘤培养在正常培养基中。用大培养瓶培养，或 者通过滚瓶培养、转瓶培养等方式，进行大规模培养。收获上清，采用本领 域人员所熟知的合适方法进行抗体纯化，例如凝胶过滤、亲和层析等，获得 本发明抗体。
杂交瘤也可以在同源小鼠腹腔内生长，以获得含大量目的抗体的腹水。 通过如上两种方法获得的单克隆抗体对抗原均具有高度特异性。
8) 单克隆抗体定量及亚型的测定
所述单克隆抗体的亚型和亚类的合适鉴定方法包括ELISA测定、双向免 疫扩散以及相关试剂盒测定等。
抗体的定量可以通过Folin-Lowry法或者通过基于280nm吸光度的计算 (免疫球蛋白(mg/mL) =OD280/1.4)。 本发明的抗体具有下述各种功能特性 a) LaDR5与表达人DR5的细胞特异性结合
本发明的一个独特特征是结合细胞表面DR5的能力。这通过ELISA以 及通过表达DR5的细胞的流式细胞术分析来证明。ELISA实验显示，获得单 抗LaDR5可以与免疫抗原特异性结合。流式细胞术分析实验证明，LaDR5抗体可以特异性与表达DR5的人类恶性肿瘤细胞结合，显示这些细胞均表达 一定水平的DR5抗原。
b) 单独诱导人恶性肿瘤细胞凋亡
在细胞体外培养期间，用各种浓度的LaDR5抗体，通过细胞存活力测定 (ATPlite)、 3H掺入等方法，测定按照本发明产生的抗体识别DR5，并且直 接诱导人恶性肿瘤细胞凋亡的能力。大多数肿瘤细胞对LaDR5诱导的细胞凋 亡敏感。对于某些细胞，LaDR5显示出强细胞凋亡诱导活性，如LaDR5可以 在低浓度诱导Jurkat细胞大量凋亡。重要的是，单用LaDR5即可以诱导恶性 细胞凋亡。
本发明公开的抗体，可以用作细胞不当存活或者不当增殖相关疾病的预 防剂或治疗剂，只要这些细胞表达或被制备成表达DR5，可用本发明获得的 单克隆抗体诱导其凋亡。
本发明的细胞株LaDR5分泌单克隆抗体LaDR5。通过本领域所熟知的合 适方法，可以获得其轻、重链可变区基因。利用这些基因，可获得多种小分 子基因工程抗体，包含但不限于嵌合抗体、单链抗体、单域抗体、Fab抗体、 F (ab') 2抗体、minibody、 diabody、抗体融合蛋白等；基于上述抗体及其 基因编码的多肽或蛋白质，可以交联上多种生物活性分子，制备诊断及治疗 药物，具有非常广阔的应用前景。
本发明的杂交瘤细胞株LaDR5，保藏日期为2008年3月28日，保藏单 位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，单位简称为CGMCC， 保藏编号为CGMCCNo. 2423。
图1为SDS-PAGE和免疫印记方法对表达的DR5抗原的鉴定；其中泳 道1, 9为蛋白质分子量标志；泳道2为IPTG诱导的含pET30a-DR5质粒的 BL21菌液样品；泳道3为镍柱纯化时的穿透样品；泳道4 — 8分别是由10, 40, 70， 100， 120 mmol/L咪唑洗脱后的蛋白样品；泳道10为免疫印记鉴定DR5 抗原。
图2免疫双扩方法检测LaDR5的抗体亚型
图3 ELISA方法检测LaDR5与DR5抗原的结合
图4 FACS方法检测LaDR5与细胞膜天然DR5的结合；1为阴性对照； 2为50ng/mLLaDR5作用于Jurkat细胞的实验结果。
图5 MTT法检测LaDR5对Jurkat细胞的杀伤作用
图6 Annexin V/PI染色检测LaDR5诱导细胞凋亡的作用；1为阴性对照； 2表示1 u g/mLLaDR5作用于Jurkat细胞的实验结果。
具体实施例方式
实施例一 DR5抗原的制备
一、材料
TRIzol为GIBCO公司产品；cDNA合成试剂盒为Invitrogen公司产品； TIANgel Midi Purificaton Kit为TIANGEN公司产品；T-Easy克隆试剂盒为 Promega公司产品；pET30a载体为Invitrogen公司产品；Eco" BL21、 Jurkat 细胞从ATCC引进，本实验室保存；Ni-NTA柱为本元正阳基因股份有限公司 产品；低温冷冻干燥仪为CHRIST公司产品；胎牛血清为北京元亨圣马生物 技术研究所产品；RPMI 1640为Gibco公司产品；抗DR5标准抗体为eBioscience公司产品；其余试剂均为市购。
二、方法结果
1. DR5cDNA的克隆
利用RT-PCR的方法，克隆编码人DR5蛋白的cDNA (gi: 2465585)。
a) 模板
采用TRIzol试剂，提取Jurkat细胞的总RNA。通过用第一条链cDNA 合成试剂盒，按照试剂盒中提供的说明手册获得的cDNA，用于PCR反应的 模板。
b) 引物
合成用于PCR的下述寡核苷酸引物
上游弓l物5,-catgccatggctgatcacccaacaag:acctagc -3，(下戈U线部分为NcoI 酶切位点)，下游引物5，-tccgctcgagggttatcatgattctttgtggacacattcg- 3，(下划线 部分为XhoI酶切位点)。引物设计后，由上海博亚生物工程公司合成部合成。 合成后的引物在溶于蒸馏水后保存在-20'C。
c) PCR反应
PCR反应溶液的组成
模板cDNA，总共30piL的反转录反应物中的2pL; 上游引物，10pmol; 下游引物，10pmol; IOXPCR缓冲液，10pL;
dNTPs (dATP， dCTP， dGTP， dTTP各2.5mmo1混合)4(xL; Taq聚合酶，5单位；
用无菌水将体积补齐为lOOpL;按如下步骤进行PCR反应94°C 2mins;此后进行94。C lmin、 55°C lmin、 72°C 3mins循环，重复25次；结束后72 。C加热10mins。如此获得的DNA片段在含有0.25pg/mL溴化乙锭的1%琼 脂糖凝胶上分离，用刀片切下含有所需DNA片段的条带。根据相应的说明书 操作，利用TIANgel Midi Purificaton Kit,从中回收所述DNA;用T-Easy克 隆试剂盒克隆所述DNA片段。对获得的克隆载体中DR5基因测序，该基因 匹配己公布的序列。将如此获得的质粒命名为质粒T-DR5。
2. DR5原核表达载体构建
将DR5基因克隆入原核表达载体pET30a中
a) 基因来源为T-DR5，利用NcoI和XhoI酶切下目的片段，按照实 施案例1.1中所述方法进行回收；
b) 原核表达载体pET30a利用Nco I和Xho I酶切下目的片段，按照 实施案例1.1中所述方法进行回收；
c) 将Nco I和Xho I酶切处理后的DR5基因片段与pET30a载体按如 下体系连接
pET30a载体(NcoI和XhoI酶切处理后) O.ljxg DR5基因片段(Nco I和Xho I酶切处理后)与载体等摩尔量 10xT4 DNA ligase buffer 1 ^iL
T4DNAligase 0.5pL 用无菌水将体积补齐为10pL，混匀后用微量离心机将液体全部甩到管底, 于16i:保温8-24小时。连接产物转化感受态细胞，碱裂解法纯化质粒，Nco I和Xho I双酶切鉴定，获得的阳性克隆命名为pET28a-DR5。
3. DR5表达纯化
将pET30a-DR5质粒转化入￡.co// BL21 (DE3)感受态细菌，挑取单菌落，培养至A柳为0.6时，加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG，于30。C诱导表达4 h。 4°C， 12,000 r/min离心10 min收集菌体；弃上清，用50 mmol/L PBS重悬 菌体，液氮中反复冻融3次，超声破碎菌体；4"C以12，000r/min离心10min， 取上清，0.45pm滤膜过滤后，根据相应的说明书操作，以Ni-NTA柱纯化目 的蛋白。
将洗脱的DR5蛋白对40倍样品体积的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4， PBS) 4'C透析48 h、其间更换透析液4次；最后一次对0.001 mol/L的PBS透 析。采用15y。SDS-PAGE凝胶电泳分析纯化蛋白的纯度(图1)，采用Lowry 氏法定量蛋白质；透析样品用低温冷冻干燥仪冻干。 4. DR5功能鉴定
a) 利用Western Blot技术，用抗DR5标准抗体鉴定纯化的DR5抗原
可以被特异性抗体识别。
b) 利用体外实验鉴定重组人DR5蛋白对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断 作用收集Jurkat细胞，调整浓度为lxl06/mL，按每孔80^iL接种于96孔板 中；加入浓度为100 ng/mL的TRAIL和各浓度的DR5各10 pL。用含10%胎 牛血清RPM 1640为空白对照，设立裸细胞对照和TRAIL单独作用对照。将 培养板放置于C02培养箱中孵育12 h后，每孔加入5 mg/mL浓度的MTT 10 pL， 4h后再向其中加入100jiL体积的酸化SDS，继续于C02培养箱中培养 12 h，直至其颗粒全部被溶解；测定OD570，验证重组人DR5蛋白对TRAIL 诱导细胞凋亡的阻断作用。
实施例二抗DR5抗体LaDR5的制备一、 材料
福氏完全佐剂及不完全佐剂为Sigma公司产品；胎牛血清为北京元亨圣 马生物技术研究所产品；HT、 HAT为SIGMA公司产品；单克隆抗体同种型 试剂盒为Pierce公司产品；无血清RPMI 1640为Gibco公司产品；NS-1细胞 从ATCC引进；本实验室保存；Balb/c小鼠购自军事医学科学院实验动物中 心；其余试剂均为市购。
二、 方法结果
1. 动物免疫
用亲和纯化的重组人DR5蛋白免疫6-8周龄雌性Balb/c小鼠。初次免疫 时，将重组蛋白(IOO吗)在弗氏完全佐剂中乳化。 一个月后，将重组蛋白 (100pg)在弗氏不完全佐剂中乳化后加强免疫。加强免疫后两周，通过尾静 脉采血，测定血清效价。选取效价高的小鼠，以无佐剂给予的重组蛋白(100吗) 进行加强。加强后第三天，将得自免疫小鼠局部淋巴器官的淋巴细胞与NS-l 骨髓瘤细胞融合。
2. 细胞融合
制备滋养细胞脱颈处死正常4-6周龄雌性Balb/c小鼠，75%酒精浸泡 消毒皮肤，无菌剥离腹部皮肤，注射器抽取5mLHAT培养液注入小鼠腹腔， 反复冲洗后吸出腹腔洗液(含有腹腔巨噬细胞)，计数，调整细胞浓度至2X 105/mL，接种于96孔板，10(HiL/孔。
在加强免疫后第三天，从小鼠取出局部淋巴器官(如脾脏)，置与10mL 含有50单位/mL青霉素、50吗/mL链霉素和300pg/mL L-谷氨酸的无血清 RPMI1640培养基中，然后用镊子和剪刀使得器官通过筛网破碎。将所得的细 胞悬浮液离心，以沉淀细胞，然后用无血清RPMI培养基洗涤细胞2次。将清RPMI培养基中，记数。
收集培养至对数生长期的NS-1骨髓瘤细胞，破碎、洗涤、重悬浮并计数。 将3X10"NS-1细胞与3X1()S脾细胞混匀，离心，弃去上清，进行细胞融合。 细胞融合过程中，含有所述细胞的管子要始终置于37'C温水中将lmL50M (w/v)聚乙二醇1500在lmin缓慢加入所述管中，同时用移液管管尖轻柔地 搅拌沉淀，静置40s。随后，将预热至37"C的1 mL无血清RPMI培养基在 lmin内缓慢加入，同时用移液管管尖轻柔地搅拌沉淀；然后再加入7mL无血 清RPMI培养基。将所得的混合物离心，弃去上清，加入10mL含有10%(v/v) FCS的HAT培养基，同时用移液管管尖轻柔地搅拌沉淀。再加入20mL含有 10% (v/v) FCS的HAT培养基后，将细胞悬液以100pL/孔接种到含有滋养 细胞的96孔细胞培养板中，在5% (v/v) C02环境下37。C培养。7天后，用 100pL/孔新鲜HAT培养液置换孔中的培养液，观察克隆的形成。 3.通过有限稀释法克隆
如实施例2.2所述，用含10% (v/v) FCS的HT培养基制备滋养细胞。 将实施例2.2所述获得的杂交瘤细胞用加样器反复吹打均匀后，准确计数。 取300个细胞悬浮于6mL含10% (v/v) FCS的HT培养基中(约5个细胞 /10(HiL)，接种于含有滋养细胞的96孔培养板(100^iL/孔)，共32孔；余下 2.8mL，再加入3.2mL含10% (v/v) FCS的HT培养基，共6mL (约2.5个 细胞/100pL)，接种于含有滋养细胞的96孔培养板(100^iL/ L)，共32孔； 最后剩余2.8mL，再加入3.2mL含10% (v/v) FCS的HT培养基，共6mL (约 1.25个细胞/0.1mL)，接种于含有滋养细胞的96孔培养板(100pL/孔)，共32 孔。将培养板置于5%C02， 37"C孵箱中培养，5天左右在显微镜下观察到细 胞克隆。确定单克隆细胞株，适时换液、检测，取阳性单克隆细胞株转入24孔板扩大培养。
4. 阳性克隆筛选
用包有lpg/mLhDR5的板子，通过ELISA方法筛选得自杂交瘤克隆的培 养上清液。用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗小鼠免疫球蛋白与作为底物 的TMB，检测筛选具有结合活性的抗体。
5. 克隆化
对于在以上实施案例2.4中选择得到的细胞，重复以上实施案例2.3和2.4 的步骤5次，从而使得能够选择几个分别产生结合hDR5的单一抗体杂交瘤 克隆。作为这种选择方法的结果，获得命名为LaDR5并且产生与hDR5结合 的抗体的小鼠-小鼠杂交瘤。这株杂交瘤细胞株LaDR5保藏于中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCN0.2423。
在用单克隆抗体同种型试剂盒测定后，表明杂交瘤LaDR5分泌的抗体亚 类为IgGl， k (图2)。
6. LaDR5单克隆抗体的纯化
让杂交瘤LaDR5在500mL无血清培养基中于37°C、 5% v/v C02下培养 5天，生长至lXl()s细胞/mL的细胞密度。然后将培养物离心(10000 r/min， 10mins)，并收集上清液，用G蛋白亲和柱子纯化抗体。
实施例三LaDR5单克隆抗体的鉴定及抗肿瘤作用
一、 材料
TMB为Sigma公司产品；ATPlite为PE公司产品；3H-TDR为中国放射 研究所产品；其他试剂均为市购。
二、 方法结果1. LaDR5单克隆抗体的识别鉴定
表达抗原的ELISA识别鉴定用包有lng/mLhDR5的板子，通过ELISA
方法筛选得自杂交瘤克隆的培养上清液。用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的 抗小鼠免疫球蛋白与作为底物的TMB，检测筛选具有结合活性的抗体，提示 LaDR5可以识别体外表达的DR5抗原，而且其识别活性与抗体浓度呈正比 (图3)。
细胞表面DR5表达的流式细胞术分析收集细胞(1X106)与10吗/mL 亲和纯化抗体LaDR5 —起于室温下孵育30mins，然后用PE或者FITC偶联 的抗小鼠IgG抗体再染色30mins。用流式细胞仪在相应波长下分析10， 000 个活细胞。结果表明在Jurkat等细胞表面可以检测到DR5的表达(图4)。 2. LaDR5诱导人恶性肿瘤细胞凋亡 在细胞体外培养期间，用各种浓度的LaDR5抗体，通过细胞存活力测定 (ATPlite)、 SH掺入等方法，测定LaDR5单克隆抗体直接诱导人恶性肿瘤细 胞凋亡的能力。大多数肿瘤细胞对LaDR5诱导的细胞凋亡敏感。对于某些细 胞，LaDR5显示出强细胞凋亡诱导活性，重要的是，单用LaDR5即可以诱导 恶性细胞凋亡(图5、图6)。如LaDR5可以在低浓度诱导Jurkat细胞大量凋 亡，图5结果显示，当浓度为100ng/ml时，抗体就表现出明显得杀伤效果， 可以抑制约20%的细胞活性；随抗体得浓度升高，杀伤效果也明显提高，当 浓度为10pg/ml时，其杀伤效果可以达到约90%。利用流式细胞术检测抗体 作用后，Jurkat细胞凋亡情况，结果(图6)显示，lpg/ml的抗体作用后，可 以诱导约59.76%的细胞凋亡。
权利要求
1、一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的杂交瘤细胞株LaDR5，保藏号为CGMCC NO.2423。
2、 权利要求1所述细胞株分泌的抗体。
3、 权利要求1所述细胞株LaDR5或权利要求2所述抗体在制备表达DR5的细胞不当存活或者不当增殖相关疾病的诊断或治疗药物中的应用。
4、 根据权利要求3所述应用，其中不当增殖相关疾病为肿瘤。
全文摘要
本发明公开了一种分泌肿瘤坏死因子受体诱导型抗体的细胞株LaDR5，上述抗体为识别TRAIL受体DR5并且在体外诱导DR5表达细胞凋亡的抗体LaDR5，本发明还公开了上述抗体的制备方法。本发明的细胞株分泌的LaDR5抗体通过接触靶细胞可以诱导靶细胞凋亡或抑制靶细胞增殖，可以用于制备表达DR5的细胞不当存活或者不当增殖相关疾病的诊断或治疗药物，具有广阔的市场前景。
文档编号A61K39/395GK101560500SQ20081010425
公开日2009年10月21日 申请日期2008年4月17日 优先权日2008年4月17日
发明者冯健男, 明 吕, 周 林, 沈倍奋, 郎小玲, 燕 黎 申请人:中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所;北京天广实生物技术有限公司