专利名称：：白芍总苷在制备治疗慢性湿疹药物中的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物白芍总苷的新用途，具体而言是白芍总苷在制备治疗慢性湿疹药物中的用途。
背景技术：
：中药白芍为毛茛科植物芍药的干燥根，具有平肝止痛，养血调经，敛阴止汗作用；用于头痛眩晕，胁痛，腹痛，四肢挛痛，血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗。白芍中含有的主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等，合称为白芍总苷(TGP)，其中芍药苷含量较多，为其主要有效成分之一。药理研究表明，白芍总苷具有较强的抗炎和免疫调节作用，主要用于治疗类风湿关节炎，亦有用于治疗病毒性肝炎、幼年慢性关节炎(JCA)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、白塞病、系统性硬化症、膝骨性关节炎(0A)、强直性脊柱炎等疾病的报道(如中国药业2004年第134期第67页、浙江中西医结合杂志2004年第14巻第10期第605页和中华风湿病学杂志2004年第8巻第7期第443页等)，未见白芍总苷用于治疗慢性湿疹的报道。湿疹的病因及发病机制相当复杂，涉及体内、外多种因素，是发生在皮肤的迟发性超敏反应(delayedtypehypersensitivity,DTH)，牵涉到体内的免疫失衡。现在主要是用HI受体拮抗剂、糖皮质激素生物制剂、中药、抗菌药等进行局部或全身药物治疗。此类药物主要作用于I型变态反应，治疗时出现嗜睡、口干、乏力、头晕、恶心等副作用以及长期用药可发生耐受现象；糖皮质激素可抑制DTH，是治疗皮炎，亚急性和慢性湿疹的常用药物，有一定的临床效果，但无论是局部还是全身用药均表现出较明显的不良反应，如满月脸、水牛背、肌肉萎縮、降低胃粘膜的抵抗力等，此外在临床治疗时经常会出现停药后皮损加重或激素依赖性皮炎，上述药物由于其副作用在应用于慢性湿疹时都受到了极大的限制。
发明内容本发明的内容是发现了白芍总苷在治疗慢性湿疹方面的用途。白芍总苷的新用途，是用于治疗慢性湿疹。白芍总苷的新用途在于能调节辅助性T细胞Thl和Th2之间的平衡、纠正免疫紊乱。本发明提供一种治疗慢性湿疹的药物，在于其中含有治疗有效量的白芍总苷及药用载体或赋形剂。白芍总苷在治疗慢性湿疹中，可以单独给药，也可以加药用辅料以及白芍总苷与其他药物组合加辅料共同制备而成各种制剂剂型；经制备而成的剂型可以是硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、片剂、合剂(口服溶液剂)、糖桨剂等口服剂型，也可以是注射剂、大输液等注射剂。本发明专利所用白芍总苷是符合中国国家食品药品监督管理局发布现行的白芍总苷国家标准，标准编号为WS1-(X-159)-2003Z，按干燥品计算，用高效液相色谱法测定白芍总苷原料芍药苷(C23H280n)含量，不得少于40.0%;图1，TGP对慢性湿疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响图图2，TGP对慢性湿疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响图具体实施例方式下面结合动物实验对本发明做进一步详细说明，但并不意味着对本发明有任何限制。实施例1材料与方法实验动物昆明种雄行小鼠,体重(20±2)g，由安徽医科大学实验动物中心提供，皖实动字第01号。药物与试剂白芍总苷(TGP)由宁波立华制药有限公司提供，强的松(predisone，Pre)浙江仙琚制药股份有限公司生产，产品批号060203，实验时均以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的悬液；二硝基氯苯(dinitrochlorobenzol,DNCB)，上海化学试剂公司产品，以丙酮配成O.1%,1%，5W和7X的DNCB丙酮溶液；IL-2和IL-4放射性免疫(radioimmunoassay,RIA)试剂盒购自北京普尔伟业生物科技有限公司。模型的制备小鼠慢性湿疹模型的制备将昆明种小鼠于实验前l天于腹部去毛,面积约2cmX2cm，实验当天以7^二硝基氯苯丙酮溶液100wl涂于小鼠的腹部致敏，5天后在小鼠右耳内侧外涂1%二硝基氯苯丙酮溶液5ixl激发，同时左耳涂予丙酮,每隔3天激发一次，共激发4次。实验分组与给药昆明种小鼠随机分为6组正常对照组，模型组，TGP30,60和120mg.kg-'组和阳性药物对照组(Pre5mg.kg—')。各用药组于致敏当天给予灌胃给药，qd，正常对照组和模型组灌以等体积的0.5%羧甲基纤维素钠。末次激发后24小时处死小鼠，检测各项指标。观察指标1.耳厚度差于诱导前及每次激发后24小时用千分卡尺单盲法测量右耳中部厚度，计算激发前后右耳厚度差。2.耳重量差末次激发后24小时处死实验动物，用直径0.9cm的金属打孔器在耳中部打孔，用电子天平称得每个组织块重量，计算左右耳重量差，同时将右耳片制成石蜡块备用。3.服染色及观察:将石蜡块切为5um厚的切片，HE染色,在光镜下观察炎症细胞浸润情况。4.血清IL-2和IL-4值检测小鼠经眼球，豚鼠经股动脉取血lml，1500r/min离心20分钟，取出血清置于微量离心管内，-80冰箱保存备用，采用放射免疫测定法测定血清IL-2和IL-4值,步骤按IL-2和IL-4试剂盒说明进行。统计学处理测定结果以^士凍示,采用单因素方差分析和q检验进行组间差异。结果TGP对小鼠慢性湿疹模型的影响1.1TGP治疗给药对慢性湿疹小鼠耳肿胀度的影响与正常组相比,模型组小鼠右耳明显肿胀，TGP(30、60和120mg.kg—1)和Pre(5mg.kg—1)能明显改善慢性湿疹小鼠右耳肿胀情况(表1)。表l、TGP对慢性湿疹小鼠耳肿胀度的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>1.2.TGP对慢性湿疹小鼠左右耳重量差的影响与正常组相比,模型组小鼠右耳明显肿胀，重量比左耳明显增加，TGP(120mg.kg—L)和Pre(5mg.kg—l)能改善右耳肿胀情况(表2)。表2TGP对慢性湿疹小鼠左右耳重量差的影响。组别剂量(mg.kg—1)基本重量耳肿胀度(A-右耳-左耳)g**p<0.01vs正常组；弁p〈0.05vs模型组1.3TGP对慢性湿疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响与正常组相比，模型组小鼠血清IL-2水平明显降低，IL-4水平明显升高,TGP(30、60和120mg.kg—')和Pre(5mg.kg')能升高小鼠降低的IL-2水平，降低小鼠升高的IL-4水平(表3和图1)。表3TGP对慢性湿疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响组别~~剂量(mg.kg")IL-2/ng.mr1IL-4/ng.mr1*p〈0.05，**p<0.01vs正常组;#p〈0.05，##p〈0.01vs模型组。1.4.TGP对慢性湿疹小鼠耳病理学改变的影响与正常组相比，模型组小鼠耳片表皮角化过度、增厚，真皮以单核有细胞浸润为主，血管扩张.TGP(30、60和120mgkg，和Pre(5mg-kg—')能减轻炎症细胞的浸润，改善耳片病理改变。实施例2材料与方法实验动物豚鼠，体重(350±20)g;均由安徽医科大学实验动物中心提供，皖实动字第Ol药物与试剂TGP由宁波立华制药有限公司提供，强的松(predisone，Pre)浙江仙琚制药股份有限公司生产，产品批号060203，实验时均以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的0.0010±0.00100.0121±0.0040'0.010U0.00520.0119±0.00420.0078±0.0044#0.0068±0.0038#2.180±0.3361.698±0.423*2.307±0.348#2.315±0,158#2.72歸.602射3.259士0.575附0.399±0.1060.687幼.248**0.514±0.1990.286±0.138##0.152±0.062糊0.428±0.185#o2611常型M正模Kpo2常型w正模Krp悬液；二硝基氯苯(dinitrochlorobenzol，DNCB)，上海化学试剂公司产品，以丙酮配成0.1%，1%，5%和7%的DNCB丙酮溶液；IL-2和IL-4放射性免疫(radioimmunoassay,RIA)试剂盒购自北京普尔伟业生物科技有限公司。模型的制备豚鼠慢性湿疹模型制备在每只豚鼠背颈部剃毛2cmX2cm大小，5%DNCB50u1外涂致敏；2周后每只豚鼠右耳背侧搽药0.1%DNCB100n1作为激发,每周1次,连续4次。实验分组与给药豚鼠随机分为8组正常组、模型组、TGP治疗组21，42和84呢.kg-'组，，TGP(42rag.kg—。+Pre(1.4mg.kg—')组，阳性药物对照组(Pre1.4mg.kg—1，2.8mg.kg1)。各用药组于实验d28天开始给予灌胃给药，每天一次，至实验结束，正常对照组和模型组灌以等体积的0.5%羧甲基纤维素钠，末次激发后24小时处死豚鼠，检测各项指标。观察指标1.耳厚度差于诱导前及每次激发后24小时用千分卡尺单盲法测量右耳中部厚度，计算激发前后右耳厚度差。2.耳重量差末次激发后24小时处死实验动物，用直径0.9cm的金属打孔器在耳中部打孔，用电子天平称得每个组织块重量，计算左右耳重量差，同时将右耳片制成石蜡块备用。3.HE染色及观察:将石蜡块切为5um厚的切片,HE染色,在光镜下观察炎症细胞浸润情况。4.血清IL-2和IL-4值检测小鼠经眼球，豚鼠经股动脉取血lml,1500r/min离心20分钟，取出血清置于微量离心管内，-80冰箱保存备用,采用放射免疫测定法测定血清IL-2和IL-4值，步骤按IL-2和IL-4试剂盒说明进行.统计学处理测定结果以,土凌示,采用单因素方差分析和q检验进行组间差异。结果TGP对豚鼠慢性湿疹模型的影响1.1TGP对慢性湿疹豚鼠耳肿胀度的影响与正常组相比,模型组豚鼠右耳明显肿胀，TGP(84mg争kg-')、TGP(42mg*kg-1)+Pre(1.4mg.kg.1)组、Pre(1.4nigkg—1)和Pre(2.8mg*kg—')能改善慢性湿疹豚鼠右耳肿胀情况(表4)。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表4.TGP对慢性湿疹豚鼠耳肿胀度的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>x±s,n=8.*p<0,05，**p<0.01vs正常组；#p<0.05，##p<0.01vs模型组1.2TGP对慢性湿疹豚鼠左右耳重量差的影响与正常组相比,模型组豚鼠右耳明显肿胀，重量比左耳明显增加，TGP(84mg'kg—')、TGP(42mg'kg—')+Pre(1.4mg'kg-1)组和Pre(1.4、2.8mg，kg—》能改善慢性湿疹豚鼠右耳肿胀情况。其中Pre(2.8mg'kg。组与Pre(1.4mg'kg—')组比较差异有显著性；TGP(42mg*kg—')+Pre(1.4mg'kg—')组与单独应用TGP(42mg'kg—')和Pre(1.4mgkg—1)比较差异有显著性；TGP(42mgkg—1)+Pre(1.4mgkg"组与Pre(2.8mg*kg—')组效果相似，差异无显著性(表5)。表5.TGP对慢性湿疹豚鼠左右耳重量差的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>x±s，n=8.**p<0.01vs正常组;#p<0.05，##p<0.01vs模型组;ApO.05vs(TGP+Pre)组；口二pO.OlvsPrel.4(mg.kg-')组.1.3TGP对慢性湿疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响与正常组相比，模型组豚鼠血清IL-2水平降低，IL-4水平升高，TGP(42、84mgkg—')、Pre(1.4、2.8mgkg-')和TGP(42mg'kg"+Pre(1.4mgkg—')组能升高IL-2水平，降低IL-4水平。其中Pre(2.8mg'kg-')组与Pre(1.4mgkg—1)组比较差异有显著性；TGP(42mgkg—')+Pre(1.4mgkg-1)组与单独应用TGP(42mgkg—1)和Pre(1.4mg，kg—)比较差异有显著性；TGP(42mgkg,8—0.528±0.0520.062±0.0420.057±0.0420.057土0.0630.075±0.066—0.526±0.0270.121±0.0610.143±0.056*0.203±0.048**0.245±0.046*210.535±0.0260.106±0.0330.134±0.0710.176±0.0650.199±0.060420.537±0.0460.120±0.0510.139±0.0360.171±0.0310.189±0扁#840.558±0.0390.108±0.0540.128±0扁0.141±0.0870.152土0.086射1.40.532±0.0250.120士0.0660.133±0.0650.161±0.0710.166土0.088#2.80.538±0.0270.102±0.0460.,128±0.0400.138±0.042##0.144±0.063*^1.4+420.555±0.0360.097±0.0540.,118±0.0550.134±0.061##0.144±0.063w0.750±0.4635細±1.553**214.750±U61424.333±1.366A843.625±1.061#1.43.750±0.886#A2.82.500±0.926#s::=1.4+422.625±1.125#Pre+TGPPrePre+TGP常型w正模g常型w正模^+Pre(1.4mgkg—1)组与Pre(2.8mgkg-1)组效果相似，差异无显著性(见表6和图2)表6.TGP对慢性湿疹豚鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响.组别剂量(mg.kg—1)IL-2/ng.mr1IL-4/ng.mr1正常3.542±0.3230.761±0.046模型3.058±0.213*0.876±0.083*TGP213.278±0.1770.797±0.081423.475±0.216#AA0.696±0.035##843.889±0.180##0.562±0.046*#Pre1.43.727±0.195##A0.813±0.078M2.84.254±0.255##—0.735±0.044##Pre+TGP1.4+424.054±0.191##0.661±0.075##x±s,n=8.*p<0.05vs正常组；#p<0.05，井#p<0.01vs模型组；Ap<0.05，厶A〈0,01vs(TGP+Pre)组；口p0.05,口口p0.01vsPrel.4(mg.kg")组.1.4.TGP对慢性湿疹豚鼠病理学改变的影响与正常组相比,模型组豚鼠耳片表皮层有大量炎症细胞浸润，血管扩张。TGP治疗组(21mg.kg\42mg.kg—1和84mg.kg-')、TGP(42mg.kg—1)+Pre("mg.kg—1)组、阳性药Pre组(1.4mg.kg—1、2.8mg.kg—1)，能明显减轻炎症细胞的浸润，改善耳片病理改变。权利要求1、白芍总苷在制备治疗慢性湿疹药物中的新用途，其特征在于药物中含有有效量的白芍总苷及药用载体或赋形剂。全文摘要本发明公开了一种白芍总苷在制备治疗慢性湿疹药物中的新用途，其特征在于白芍总苷在治疗慢性湿疹中，可以单独给药，也可以加药用辅料以及白芍总苷与其他药物组合加辅料共同制备而成各种制剂剂型；经制备而成的剂型可以是硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、片剂、合剂(口服溶液剂)、糖浆剂等口服剂型，也可以是注射剂、大输液等注射剂。文档编号A61P17/00GK101385787SQ20081010698公开日2009年3月18日申请日期2008年7月7日优先权日2008年7月7日发明者周海滨,李传应,江海龙,伟魏申请人:安徽医科大学临床药理研究所;宁波立华制药有限公司