专利名称：：温郁金提取物静脉乳剂及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及温郁金提取物的新注射剂型，更具体地说涉及静脉乳剂型。本发明还涉及该剂型的制备方法和用途。现有技术近年来，在抗癌天然药物研究领域中的许多研究人员都致力于研究紫杉醇、榄香烯各种异构体、姜黄提取物、温郁金提fC物等的抗癌活性和这些药物的各种制剂形式。榄香烯是存在于某些植物中的一种倍半萜类化合物，拉丁名为Elemenum,英文名为Elemene,化学名是1-甲基-1-乙烯基-2，4-二异丙烯基环己烷，分子式(:151。榄香烯有多种异构体，这些异构体中卩-榄香烯，S-榄香烯，Y-榄香烯已被证实有抗癌活性。榄香烯是可以从植物温郁金(CurcumaWenyujinY.H.ChenetC.ling)的根茎(俗称温莪术)的挥发油中提取的化合物，或是从植物香茅(Cymbopoqoncitratus(DC.)Stapt)的油中提取的化合物，例如/人香茅油中除掉柠檬醛、香茅醇之后余下的混合油状物，提取的化合物实际上是包含卩-榄香烯的榄香烯异构体混合物。上述植物温郁金与另外两种可作为天然药物使用的植物莪术和姜黄同属于姜科植物类群，产于中国的广东、四川、福建、广西、浙江等省。包含榄香烯的植物有温郁金、香茅、水菖蒲、土木香、人参等50多种，其中香茅是在中国分布广、资源充足的植物。目前，揽香烯类化合物主要从温郁金油和香茅油中提取。有许多文献涉及直接采用天然药物制备防治癌症的草药制剂，例如中国专利公开CN1216256A公开了治疗肝癌的草药制剂，它包括含有白花蛇舌草、姜黄，虎杖和山豆根的提取物作为主要天然药物的可注射组合物(A)和含有白花蛇舌草、重楼、虎杖、山豆根、龙胆草、大黄、连翘、赤芍、姜黄和石菖蒲的提取物作为主要天然药物的口服组合物(B)。在中国专利公开CN1302559中公开了姜黄素制剂，它是通过制备在水可混合的有机溶剂中或水和水可混合的有机溶剂的混合物中的姜黄素分子分散体，然后向该溶液添加保护胶体水溶液，姜黄素的疏水相形成毫微分散相。最终的制剂形式主要是水性分散体或千粉，在优选的情况下粒径小于10pm。在CN1200266A中公开了通过二次分馏从香茅油中提取P-榄香烯的方法。在中国专利公开CN1247756A中公开了用于治疗恶性肺瘤的姜郁注射液，其中姜黄与郁金的重量比为50-60:50-40,该注射液是一种简单的混合物。中国专利公开CN1076613A涉及榄香烯乳注射液及其制备方法，该注射液是一种乳状液，平均粒径一般不超过15微米，特别不超过2微米。中国专利公开CN1244389A涉及榄香烯注射液及其制备方法，该注射液是一种简单混合物，不是脂质体。中国专利公开CN1110134A涉及脂质体制备工艺及制剂，其中特别描述了榄香烯脂质体注射液制备方法和由该方法获4寻的榄香烯脂质体注射液，榄香烯的包封率达85%以上，但没有给出有关脂质体的平均粒径的数据。从制备方法可以判断该脂质体具有较大的平均粒径。中国专利公开CN1221607A涉及利用C02的临界或超临界方法来制备脂溶性药物脂质体的工艺和所制备的榄香烯脂质体注射液，虽然榄香烯的脂质体的包封率很高，但脂质体的平均粒径同样太大。以上这些文献所公开的制剂在贮存稳定性和抗癌活性上都存在着不足。金属络合物。例如，在CN11531158A中公开了一种榄香烯金属络合物和它作为抗癌药物的使用。CN1153167A涉及榄香烯含氮^"生物及其作为抗癌药物的用途。CN1153168A涉及榄香烯羟基类衫f生物及其作为抗癌药物的用途。
发明内容本发明的目的是提供温郁金提取物静脉乳剂。本发明的另一个目的是提供温郁金提取物静脉乳剂的制备方法。本发明的再一个目的是提供温郁金提取物静脉乳剂用于制备治疗癌症或缺血性中风的药物注射剂的用途，这些注射剂型用于緩解肿瘤疼痛的用途，以及用于抑制和/或治疗肿瘤的用途。本发明提供这些药物的新剂型。以温郁金提取物作为原料分别制备成其静脉乳剂型。这些剂型的平均粒径一般小于或等于l微米，甚至小于或等于100纳米。附图简述图1是实施例1的1A制剂的透射电镜照片。本发明的详细i兌明现有
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中已经知道榄香烯某些异构体、姜黄才是取物、温郁金提取物具备抑制胂瘤的作用，一些文献公开了这些天然药物的各种制剂形式(或剂型)，例如脂质体、乳剂、脂肪乳等制剂。^f旦是，由于这些剂型的平均粒径普遍较大，注射到人或动物体内后会引起人或动物体内的各种反应，例如刺激性大，有时候发生溶血现象。本发明人经过多年的研究工作，发现将倍半碎烯类4匕合物或从植物中提取的含倍半碎烯类的提取物制成平均粒径《1微米或《100纳米的各种注射剂型，其中包括脂质体剂型，纳米脂质体剂型，前体脂质体剂型，长循环脂质体剂型，长循环纳米脂质体剂型，纳米微乳剂型，静脉乳剂型，脂质纳米微球剂型，脂肪乳剂型等，可以克服现有技术的注射制剂中的诸多问题，尤其本发明的这些剂型在静脉注射应用中大大减少了刺激性，它们的稳定性得到进一步提高。本发明的新剂型显著提高了药物制剂的药效，但这些剂型的抑制癌细胞的机理目前还不是十分清楚。本发明人根据大量的试验结果作出以下推测由于本发明制剂具有小的平均粒径并且具有特殊的表面性质(例如亲水/亲脂平衡，表面电荷等)，使得这些制剂中的药物(或活4生成分)对癌细胞有较强的亲和力，能够充分附着于癌细胞上，让活性成分直接作用于癌细胞，达到抑制或杀灭癌细胞的效果。另外，发现，纳米粒度的制剂起效快，防止癌细胞转移方面有一定效果。同时，尽管本发明制剂具有小的平均粒径，但是所获得的各种剂型的制剂同时具有高的稳定性，它们在长时间的贮存中不会发生凝聚问题，使得可以较长时间进行贮存而不降低稳定性。本发明提供溫郁金提取物静脉乳剂，它含有从温郁金植物中经填料式真空精馏装置精馏或分子蒸馏仪提取的具有总^f咅半萜烯类含量》70wt。/。的提取物，表面活性剂，和余量的注射用水，所述温郁金提取物静脉乳剂是一种水性分散体，分散相的平均粒径《1微米；所述表面活性剂是大豆磷脂和胆固醇，其中提取物与大豆磷脂、胆固醇的重量比是0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0，静脉乳剂中倍半碎烯类活性成分的最终浓度为1-10mg/ml。本发明提供温郁金提取物静脉乳剂的制备方法，它包括以下步骤(1)、从温郁金挥发油中经填料式真空精馏装置精馏或分子蒸馏仪提取总倍半薛烯类含量》70wty。的^是取物；(2)、以步骤(1)获得的温郁金提取物为原料，添加大豆磷脂和胆固醇混合均匀，添加注射用水，进行高压均质化处理，一直处理到获得分散相平均粒径<1微米的稳定水性分散体为止，从而制得温郁金提取物静脉乳剂，其中提取物与大豆磷脂、胆固醇的重量比是0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0，温郁金提取物静脉乳剂中总倍半碎烯类的最终浓度为1-10mg/ml。(在这里有时候称作活性成分)基本上包括全部倍半薛烯类化合物(C15H24),倍半碎烯类化合物的混合物或从植物中提取的倍半辟烯类优选在75°/;以上，更优选在85"/。以上，特别优选在90%以上，甚至特别优选在95%以上。需要指出的是，在本发明中用于制备各种剂型的制剂的各种原料可以使用商购的产品如榄香烯产品(提取物)、P-榄香烯产品(提取物)、姜黄提取物或温郁金提取物，以及树兰花、香4春子、海风藤、丁香、没药、黄花杜鹃、葛缕子、百里香、欧芹、广藿香、茅苍术、蛇床子、啤酒花、檀香木、香柠檬、防风根、柏木、松节油以及香茅、人参等的提取物产品。如果在本申请中需要自己制备这些提取物，用于制备这些提取物的各种挥发油可以使用商购产品，也可以使用通过普通的水蒸汽蒸馏法或分子蒸镏法从植物中获得的挥发油。倍半碎歸类包括榄香烯(elemene),姜黄烯(curcumene),姜烯(zingiberene)，波旁埽(bourbonene),虫它麻烯(humulene),金合欢花烯(farnesene),杜松烯(cadinene),芽子烯(selinene),马阿里烯(maaliene)，檀香烯(saritalene),广藿香歸(patchonlene)，石竹烯(也称作丁香烯，caryophyllene),吉马烯(大香叶烯，germacrene),毕遏^痴油丈希(cubebene)，牙白木歸(cedrene),-艮叶蜂(longifolene)，防风根烯(或红没药烯，bisabolene),香柠檬烯(bergamotene),古芸烯(gurjunene)，愈痴木烯(guaiene)，衣兰烯(ylangene),异石竹婦(isocaryophyllene),长蒗歸(longipinene)，白菖烯(calarene),木罗歸(muurolene),菖蒲二烯(acoradiene),倍半水芽烯(p-sesquiphellandrene)等。原则上，从植物中提取的含有60w"/。以上倍半薛烯类的所有提取物都可用于制备本发明的新剂型，倍半碎烯类是所有剂型的活性成分。含有70wty。以上倍半萜烯类的提取物是理想的，含有75wt。/。以上倍半薛烯的提取物是优选的，含有85wt。/。以上倍半辟烯的提取物是更优选的，含有90wt。/。以上或甚至含有95wt。/。以上倍半萜烯类的提取物是特别优选的。从天然植物中提取的含榄香烯的提取物通常含有a-榄香烯，卩-榄香烯，5-榄香烯，y-榄香烯，波旁烯等。在本发明中作为特定的实施方案，以温郁金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling挥发油、香茅油Cymbopoqoncitratus(DC.)Stapt次要成分(香茅油除掉柠檬醛、香茅醇之后余下的混合油状物)为原料，经填料式真空精馏装置或分子蒸馏仪精制出榄香烯。另外，每一种榄香烯异构体如a-榄香烯，p-榄香烯，5-榄香烯或Y-榄香烯只要纯度在85wt%以上也能够用于制成本发明的新剂型。目前根据国内榄香烯质量标准(参见2000年的国家药品监督管理局颁发的国家药品标准WS「(X-094)-2000Z),若分离出的产物(提取物)用气相色谱法(聚乙二醇20M为固定相，白色硅藻土担体60~80目，柱温为135-140。C,理论板数按(3-榄香烯计算应不低于1000)检测总榄香烯异构体纯度达到>85%则该产物称作榄香烯，若检测出P-榄香烯纯度达到>95%则产物为(3-榄香烯，实际上这是不准确的，因为使用灵敏度更高的色谱仪器例如30米长毛细管气相色谱-质谱联用仪(色谱仪Bio-RadFTS_65A，HP5890II,色谱柱:BP-5)来检测该>95%纯度的(3-榄香烯样品，会发现它仍然含有至少6%的波旁烯(在低灵敏度色谱仪的色谱图，P-榄香烯的峰与波旁烯的峰重叠成一个峰)，榄香烯样品是多种倍半辟烯的混合物，即含有卩-榄香烯，榄香烯，Y-榄香烯，波旁烯，丁香烯、吉马烯等。姜黄RhizomaCurcumaLongaL.提耳又物是从姜黄植物获耳又的挥发油中提取的产物。在本发明中作为特定的实施方案，姜黄提取物指姜黄挥发油经填料式真空精馏装置或分子蒸馏仪精制出的i是取物，经GC-MS检测，姜黄提取物通常含有》70wa，优选》75wt。/),更优选>80wt°/,特别优选>85\￥1%,甚至更优选^90wt。/。的倍半辟烯类如姜黄烯、姜烯等和少量(相当于全部倍半萜烯类总重量的约1/25~1/5)的姜黄素。温郁金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling提耳又物包括从温郁金植物中获取的挥发油中提取的产物。在本申请中作为特定的实施方案，温郁金提取物指溫郁金挥发油经真空填料式精馏装置精馏出的组分或经分子蒸馏仪精制出的产物，经GC-MS检测，产物含有>70wt%，优选》75wt。/。，更优选》80wt。/。，特别优选》85wt。/。，甚至更优选^90wt。/。的倍半薛烯类如各种榄香烯异构体、吉马烯、丁香烯等和较少量(相当于全部倍半碎烯类总重量的约1/50-1/10)的姜黄素。术语的解释在本发明中所述的粒径或粒度是指分散相的粒径或粒度。在本申请中，温郁金提取物指温郁金挥发油经真空填料式精馏装置精馏出的组分或经分子蒸馏仪精制出的组分，经GC-MS检测，温郁金提取物含有主要量的倍半碎烯类和较少量的姜黄素。如果在剂型前加"纳米，，》务饰，则指该剂型的平均粒径《150纳米，在理想的情况下平均粒径《100纳米。注射剂和注射制剂可互换使用。脂质体剂型，在本发明中是指分散或悬浮在含水介质中的由磷脂和胆固醇等组成的脂双层结构，该脂双层结构类似于细胞膜结构。纳米脂质体剂型，在本发明中是指平均粒径低于或等于150纳米的脂质体。前体脂质体剂型，在本发明中是指在脂质体的配方基础上再添加赋形剂，通过真空冷冻干燥(真空冻干)方法所制备的冻干粉。该冻干粉在临床应用之前通过添加注射用水，经过振摇或振荡，使之恢复成脂质体形态。长循环脂质体剂型，简单地说，在本发明中是指在脂质体的配方基础上再增加聚乙二醇磷脂酰乙醇胺所制备的脂质体。它注射到体内后比普通的脂质体在体内发挥效用的时间更长，或在体内消除緩慢。纳米^f敬乳剂型，指平均粒径《150纳米，在理想情况下《1Q0纳米的乳剂。静脉乳剂型，在本发明中指平均粒径《1微米的注射乳。脂质纳米微球剂型，在本发明中是指平均粒径《150纳米的脂肪乳。脂肪乳剂型，在本发明中要求它的平均粒径《1樣i米；另外在中国国家药典中也规定平均粒径《1微米。nm是指纳米，n是指微米。在本申请中纯度是指按重量计的百分纯度，除非另有说明。在本申请中所使用的原料是温郁金提取物，它的总^咅半辟烯类含量》70wt。/"理想的是75wt"/。，优选》80wt。/。，更优选》85wt。/。，特别优选》90wt。/。，更特别优选》95wt。/。。该提取物含有《25wt。/。的姜黄素，理想地含有《15wt。/。的姜黄素，优选含有《10wt。/。的姜黄素，更优选含有《5wt。/。的姜黄素。使用这里所述的30米长毛细管气相色谱-质语联用仪检测提取物，含有>70wty。倍半薛烯类的提取物就可用于本发明中。本申请中所使用的温郁金提取物可以通过商业途径以提取物(各种异构体混合物)或纯异构体(要求纯度高于85wtW产物形式购买获得，也可以根据需要自己制备，对于温郁金提取物的制备方法参见制备例。本申请中所使用的温郁金提取物原料、试剂没有特别的限制，只要该提取物是从天然植物温郁金中提取并且总倍半碎烯类纯度>70wt。/。就可在本发明中使用，更理想的是，该纯度》75wt。/。，更理想>80w,优选》85wt。/。，特别优选》90wt0/0。除非另有说明，否则在本发明中使用的其它成分如胆固醇、大豆磷脂、卵磷脂、甘油、亚油酸、聚乙二醇磷脂酰乙醇胺、脂族胺、大豆油等一般要求符合国家药用标准，溶剂也应该符合国家药用标准，这些主要出于健康方面的考虑；类似地，对于一些原料用"精制"修饰，表明该原料必须符合国家药用标准，例如精制大豆磷脂是注射剂可用的产品，精制大豆油是注射剂可用的产品。除非另有说明，否则在本申请中所使用的气相色谱仪是Bio-RadFTS-65A，HP5890II,色i普柱是BP-5。本发明的各种剂型能够以静脉注射、局部给药方式用于治疗目的。本发明的优选实施方案在下列的实施方案中作为原料主要使用提取物"榄香烯"、提取物"卩-榄香烯"、姜黄提取物、温郁金提取物，还可以使用树兰花、香椿子、海风藤、丁香、没药、黄花杜鹃、葛缕子、百里香、欧芽、广藿香、茅苍术、蛇床子、啤酒花、檀香木、香柠檬、防风根、柏木、松节油以及香茅、人参等的提取物。显然，其中某一种倍半碎烯异构体的纯度较高(例如>85wt%)的产品都能够作为原料，而且利用化学方法合成的各种倍半碎烯类及其衍生物都能够用于本发明中。本发明提供了脂质体或纳米脂质体的制备方法，它包括将提取物与大豆磷脂、胆固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0,优选0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8，更优选0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6,特别优选l:3.2:1.5进行混合；添加溶剂(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以使混合物充分溶解，置入旋转蒸发仪上脱除溶剂成膜，添加余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度来计算该余量)，然后置入常规的超声波细胞粉碎机中进行超声波处理；取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪、.电子显微镜来检验平均粒径，在达到规定的平均粒径例如《1微米(脂质体)，或《100纳米(纳米脂质体)后，调节PH，使PH值为4.5~6.5,经0.8y微孔滤膜过滤和然后装瓶，IOO'C蒸汽流灭菌，利用色谱仪(气相或液相)测得活性成分的最终浓度(倍半萜烯类活性成分的重量(mg)/总制剂体积(ml))为l~10mg/ml，优选为2~7.5mg/ml，更通常为5~7.5mg/ml。纳米脂质体的包封率检测用分子筛法3佥测，即，利用S印hadexG25层析系统，将提取物纳米脂质体制剂分成两个流份，即提取物纳米脂质体流份和游离的提取物流份，经气相色谱仪检测两个流份中含有的提取物含量。包封率计算公式=提取物纳米脂质体流份的提取物含量+(提取物纳米脂质体流份的提取物含量+游离的提取物含量)。显微镜或透射电镜验证是否为脂质体。本发明提供前体脂质体的制备方法将提取物与精制大豆磷脂、胆固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1,0-2.0,优选0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8,更优选0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6，特别优选l:3.2:1.5进行混合，添加溶剂(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解该混合物，置入旋转蒸发仪上脱除溶剂成膜，添加余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度来计算该余量)，然后置入超声波细胞粉碎机进行超声处理，取样利用带标尺的显微镜或Coulter仪来检验平均粒径，当平均粒径<1微米后，调节PH,使PH值为4.5~6.5,经0.8M微孔滤膜过滤和然后装瓶，加入占总制剂量的l-2wty。的j武形剂(例如乳4唐或平均分子量Mw为约4000-40000的低分子右旋糖苦)，IO(TC蒸汽流灭菌，无菌条件下冷冻干燥、灌封。在使用之前添加注射水以达到最终活性成分浓度(倍半辟烯类活性成分的重量(mg)/制剂体积(ml))为l~10mg/ml，优选为2~8mg/ml,更优选为2~7.5mg/ml,更通常为5~7.5mg/ml。包封率的检测用分子筛法检测方法，即根据所要配制的最终制剂浓度(mg/ml),将一定量的提取物前体脂质体制剂先添加余量体积的水振摇均匀，此时又变成了脂质体，利用SephadexG25层析系统分成两个流份，即提取物脂质体流份和游离的提取物流份，经气相色谱仪检测两个流份中含有的提取物量。包封率计算公式-提取物脂质体流份的提取物含量+(提取物脂质体流份的提取物含量+游离的提取物量)。显微镜或透射电镜证实是否为前体脂质体。本发明提供长循环提取物纳米脂质体的制备方法，该方法包括将提取物与精制大豆磷脂、聚乙二醇(2000)磷脂酰乙醇胺、胆固醇以重量比0.5-1,5:1.5-3.5:0.3-1.2:0.8-2.0，优选以重量比0.8-1,2:1.8-3.0:0.4-1.0:1.2-1.8，更优选以重量比0.9-1.1:2.4-2.8:0.6-1.0:1.2-1.6，特别优选以重量比1:2.6-2.7:0.7-0.9:1.3-1.5进行混合,添加溶剂(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解该混合物，置入旋转蒸发仪上脱除溶剂成膜，添加余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度来计算该余量)，然后置入常规的超声波细胞粉碎机进行超声波处理，取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪或电子显樣么镜来检验平均粒径，在达到M^定的平均粒径(例如《100纳米)后，调节PH,使PH值为4.5~6.5，经0.8ji微孔滤膜过滤和然后装瓶，IO(TC蒸汽流灭菌，(气相或液相)色谱法测得活性成分的最终浓度(倍半碎烯类活性成分的重量(mg)/总制剂体积(ml))为1~10mg/ml，优选为2~7.5mg/ml，更优选为2~8mg/ml，更通常为5~7.5mg/ml。对于聚乙二醇(2000P粦脂酰乙醇胺，其中"2000"指聚乙二醇链段的平均分子量(道尔顿)。该注射剂的包封率的检测与前面的脂质体注射剂的包封率检测方法4目同。本发明提供带负电荷及带正电荷的提取物纳米微乳的制备方法制备方法l:带负电荷的納米微乳的制备将提取物与精制大豆磷脂、胆固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0,优选0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8,更优选0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6,特别优选1:3.2:1.5进行混合，添加溶剂(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解该混合物，置入旋转蒸发仪上脱除溶剂成膜，添加余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度来计算该余量)，然后置入常规的超声波细胞粉碎机进行超声波处理，取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪或电子显微镜来检验平均粒径，在达到规定的平均粒径(例如<IOO纳米)后，调节PHJ吏PH值为4.5~6.5,经O.8p微孔滤膜过滤和然后装瓶，IO(TC蒸汽流灭菌，活性成分的最终浓度(倍半碎烯类活性成分的重量(mg)/总制剂体积(ml))为1~10rag/ml，优选为2~7.5mg/ml，更通常为5~7.5mg/ml。显微镜、透射电镜检测，证实是否是纳米微乳。制备方法2:带正电荷的纳米#1乳的制备将提取物、精制卵磷脂、C14-C22直链或支链脂族胺、胆固醇以重量比0.5-1.5:2.5-3.5:0.2-0.6:1.0-2.0，优选0.8-1.2:2.5-3.0:0.3-0.5:1.2-1.8,更优选0.9-1.1:2.7-2.9:0.3-0.5:1.4-1.6，特别优选l:2.8:0.4:1.5进行混合，添加溶剂(如乙醚或丙酮或氯仿)，添加量足以充分溶解该混合物，置入旋转蒸发仪上脱除溶剂成膜，然后添加余量的注射用水(根据所要配制的浓度计算出该余量)，然后置入常规的超声波细胞粉碎机进行超声处理，取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪或电子显微镜来检验平均粒径，在达到规定的平均粒径(例如《100纳米)后，调节PHJ吏PH值为7.5~9.0,经0.8y微孔滤膜过滤和然后装瓶，IO(TC蒸汽流灭菌，倍半碎烯类活性成分的最终浓度为1~10mg/ml，优选为2~7.5mg/ml，更通常为5~7.5mg/ml。显微镜、透射电镜检测，证实是否为纳米微乳。本发明还提供提取物脂质纳米球的制备方法，该方法包括取提取物与大豆磷脂一起加入大豆油中，升温控制成油相(保持为油相)，将该油相加入到含甘油的水溶液中。其具体重量比例为提取物占最终配制剂总量的0.08~0.8wt%,大豆磷脂0.8~2.5wt%,大豆油8-12wt%,甘油1.8-2.8wt%，注射用水加至5000ml;优选的重量比例为提取物占最终配制剂总量的0.1wt%~0.5wt%,大豆磷脂1.2wt%~2.Owt%,大豆油10wt%,甘油2.25~2.5wt%,注射用水加至5000ml。然后高速搅拌，调节PH为4.5~6.5,再经过普通的高压均质机(例如M110-E/H型(日本MIZUHO产))处理，然后进行前面所述的超声波处理，取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪或电子显微镜来检验平均粒径，在其脂质球的平均粒径达到规定值例如《10Qnm之后，再经0.8ia微孔滤膜过滤和然后装瓶，100°C~120。C灭菌。(气相或液相)色谱法测得倍半辟烯类活性成分的最终浓度为l~10mg/ml,优选为2~7.5mg/ml,更通常为2~5mg/ml，更理想为2.0-3.Omg/ml。根据需要可以在该最终制剂中加入适量胆固醇、亚油酸等。本发明提供提取物静脉注射乳的制备方法，该方法包括将提取物、精制大豆磷脂、胆固醇以重量比0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0，优选0.8-1.2:2.8-3.6:1.2-1.8,更优选0.9-1.1:3.0-3.4:1.4-1.6，特别优选1:3.2:1.5,与余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度来计算该余量)进行混合，用常规的高压均质机(例如MllO-E/H型(日本MIZUHO产))乳化，取样利用带标尺的显微镜或Coulter仪来检验平均粒径，在达到规定的平均粒径例如《1微米后，调节PH,使PH值为4.5~6.5，经1.2ja微孔滤膜过滤和然后装瓶，经10(TC12(TC灭菌，得到提取物静脉乳，(气相或液相)色语法测得倍半萜烯类活性成分的最终浓度为l~10mg/ml,优选为2-7.5mg/ffll,更通常为5~7.5mg/ml。本发明提供提取物脂肪乳的制备方法，该方法包括取提取物与大豆磷脂加入大豆油中，升温控制成油相(保持为油相)，将该油相加入到含甘油的水溶液中。其具体重量比为提取物占最终配制剂总量的0.08-0.8wt%,大豆磷脂0.8~2.5wt%,大豆油8-12wt%，甘油1.8-2.8wt%,注射用水加至5000ml;优选的重量比例为掮j又物占最终配制剂总量的0.lwt%~0.5wt%,大豆石岸脂1.2wt%~2.0wt%,大豆油10wt%,甘油2.25-2.5wt%,注射用水加至5000ml。然后高速搅拌，调节PH为4.5~6.5，再经过普通的高压均质机(例如M110-E/H型(日本MIZUHO产))处理，使其粒径小于lja，再经1.2n微孔滤膜过滤和然后装瓶，IO(TC~12(TC灭菌。倍半碎烯类活性成分的最终浓度为l~10mg/ml,优选为2-7.5mg/ml，更理想为2.0~3.Omg/ml或为5~7.5mg/ml。根据需要可以在该最终制剂中加入适量胆固醇、亚油酸等。根据需要，本发明的制剂可以用不同尺寸例如1.2ja、1.0m、0.9ji、0.8ju、0.7ju、0.6ju、0.5ju等的微孔滤膜进行过滤，可以截取平均粒径《0,8ju、《0.7ju、《0.6jLt、《0.5ju、《0.45y、《0.4ju、<0.3]u等的分散相。下面的制备例和实施例用于举例说明本发明，但不应认为限制本发明的范围。本发明的保护范围由权利要求来定义。制备例温郁金提取物的制备制备方法A:以温郁金挥发油为原料，经广州汉维机电公司MD-S80型分子蒸馏仪精制，其工艺条件蒸馏温度3545。C，蒸馏压力70~90Pa,刮膜速度300~320转/分，冷凝面温度20~25°C,系统温度20~25°C，物料流速15~30毫升/小时，仅收集馏余物，将馏余物继续进行分子蒸馏。蒸馏温度为45~60°C,蒸馏压力SO-70Pa，刮膜速度300~320转/分，冷凝面温度20~25°C,系统保温20~25°C,物料流速15~30毫升/小时，分别收集馏出物与馏余物，将馏余物进行分子蒸馏。蒸馏温度为30~70°C，蒸馏压力10~50Pa，刮膜速度300~320转/分，冷凝面温度20-25。C,系统保温20~25°C,物料流速15~30毫升/小时，收集馏出物，放掉馏余物，将得到的二次馏出物混合，继续蒸馏，一直到经气相色谱仪检测达到总倍半萜烯含量》75wt。/。为止(利用30米长毛细管气相色谱一质谱联用仪气相色谱仪才全测，色谱仪Bio-RadFTS-65A，HP5890II,色谱柱BP-5)。该提取物经上述气相色谱仪检测，还含有相当于全部倍半薛烯类总重量的约1/25的姜黄素。用气相色谱法制定供检测用指紋图谱。该产物称作温郁金提取物A。制备方法B.将温郁金挥发油，经填料式真空精馏装置精馏，填料式真空精馏装置由装温郁金挥发油的釜、填料精馏塔、回流器、真空泵构成，由上海化工研究院新型填料技术开发中心设计制造，填料为狄克松填料(Q网环填料)，真空度为13隱Hg，收集82°C/3,Hg以上的馏分。经气相色谱仪分析为倍半辟烯化合物(利用30米长毛细管气相色谱-质谱联用仪气相色谱仪检测)，总倍半辟烯含量》75wt%。提取物经上述气相色谱仪检测，还含有相当于全部倍半萜烯类总重量的约1/25的姜黄素。用气相色谱法制定供;f全测用指紋图谱。该产物称作温郁金提取物B。另外，取经C02超临界提取过挥发油的温郁金药渣，加入曱醇加热回流3小时，得到棕色溶液，用旋转蒸发仪脱除掉曱醇，得到棕色粘稠物，将该棕色粘稠膏状物用硅胶进行制备色谱，以氯仿洗脱，得到纯度》90wt。/。的姜黄素产物。将上述产物A和产物B以50:50重量比混合，将所形成的混合物与该姜黄素产物按20:1(重量)的比例进行混合而获得另一种混合物，称作提取物C。实施例1:温郁金提取物的纳米脂质体注射剂的制备程序1A:将制备例的产品A与精制大豆磷脂、胆固醇以重量比1:3.2:1.5混合，添加乙醚，添加量足以充分溶解该混合物，置入旋转蒸发仪上脱除乙醚成膜，添加余量的注射用水(根据所要配制的最终浓度即5mg/ml来计算该余量)，然后置入山东济宁超声电子仪器厂出产的超声波细胞粉碎机(型号JCS-204)超声处理，取样利用带标尺的显微镜、Coulter仪或电子显微镜来才企验平均粒径，当平均粒径《IOO纳米后，用1M磷酸二氢钠水溶液调节PHJ吏PH值为4,5-6.5，经0.8ja微孔滤膜(上海新亚净化器件厂生产，规格0.8m)过滤和然后装瓶，IO(TC蒸汽流灭菌，所获得的注射剂产品简称1A。取样用气相色谱法(利用30米长毛细管气相色谱-质谱联用仪气相色谱仪)测得活性成分(总倍半萜烯类活性成分的重量(mg)/制剂体积(ml))的最终浓度为5±0,10mg/ml。用分子筛法检测包封率，即，利用SephadexG25层析系统将提取物纳米脂质体制剂分成两个流份，即提取物纳米脂质体流份和游离的提取物流份，经气相色谱仪检测两个流份中含有的提取物含量。包封率超过85%。包封率计算公式=提取物纳米脂质体流份的提取物含量+[提取物纳米脂质体流份的提取物含量+游离的提取物量]。显微镜、透射电镜检测，证实是纳米脂质体，在附图1中给出该注射剂的透射电镜照片(标尺50nm)。程序1B:重复上述1A程序，只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。显微镜、透射电镜检测，证实制剂是纳米脂质体。制剂中总倍半萜烯类的浓度为约5±0.10mg/ml。包封率高于85%。该注射剂简称1B。实施例2:温郁金提取物的前体脂质体的制备2A:按照与实施例1的1A程序中相同的方法和原料配比，重复进行实施例1的1A程序，只是超声波处理后要求分散相的粒径《1微米以及在过滤之后和在装瓶之前，加入占总制剂重量的1-2%的乳糖，然后利用IO(TC蒸汽流灭菌，无菌条件下冷冻干燥、灌封(分装)。用Coulter仪检测证实制剂是前体脂质体。该注射剂产品简称2A。包封率高于85%。该制剂在注射应用之前添加注射水以达到最终活性成分(总倍半萜烯类)浓度为5±0.10mg/ml。2B:重复上述2A，只是用制备例的B产物代替制备例的产物A，用平均分子量Mw为约40000的低分子右旋糖苷代替乳糖。该注射剂简称2B。用Coulter仪检测证实制剂是前体脂质体。包封率高于85%。该制剂在注射应用之前添加注射水以达到最终活性成分浓度(总倍半碎烯类的重量(mg)/制剂体积(ml))为5±0.10mg/ml。实施例3:温郁金提取物的长循环纳米脂质体的制备3A:按照与实施例1的1A程序中相同的方法，重复进行实施例1的1A程序，只是原料和它们的重量配比是温郁金提^L物A:大豆磷脂:聚乙二醇(2000)磷脂酰乙醇胺:胆固醇-l:2.7:0.8:1,4。该注射剂简称3A。取样检验平均粒径《100咖。制剂中总倍半辟烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。包封率高于85%。3B:重复上述3A，只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。所获得的注射剂简称3B。平均粒径《100nm。制剂中总倍半碎烯类的最终浓度为5土0.10mg/ml。包封率高于85%。实施例4:带负电荷及带正电荷的温郁金提取物的纳米微乳的制备4A-1:带负电荷的纳米微乳的制备重复实施例1的1A程序，只是不测定包封率。取样测得总倍半碎烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。用Coulter仪证实是纳米微乳。该注射剂产品简称4A-1。4A-2:带正电荷的纳米微乳的制备重复实施例1的1A程序，只是原料和它们的重量配比是.提取物A:卵磷脂正十八烷基胺胆固醇=1:2.8:0.4:1.5,不测定包封率。取样测得总倍半裕烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。用Coulter仪证实是纳米微乳。该注射剂简称4A-2。4B-1:带负电荷的纳米微乳的制备重复上述4A-1,只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。取样测得总倍半萜烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。用Coulter仪证实是纳米微乳。所获得的注射剂简称4B-1。4B-2:带正电荷的納米微乳的制备重复上述4A-2，只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。取样测得总倍半萜烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。用Coulter仪证实是纳米微乳。所获得的注射剂筒称4B-2。实施例5:温郁金提取物的脂质纳米球制剂的制备5A:取制备例的提取物A与大豆磷脂一起加入大豆油中，升温控制成油相(即保持为油相)，将该油相加入到含甘油的水溶液中。其具体重量比为提取物A占总制剂重量的0.2%,大豆磷脂17%,大豆油10%,甘油2.5%,余量为注射用水，然后高速搅拌，用1M磷酸二氢钠水溶液调节PH为4.5~6.5，再经M110-E/H型(日本MIZUH0产)高压均质机处理，然后按照实施例3中相同方法进行超声波处理，使其脂质球的平均粒径《100nm，再经0.8m微孔滤膜过滤和然后装瓶，100°C~12(TC灭菌。取样测得总倍半萜烯类的最终浓度为2±0.04mg/ml。所获得的注射剂简称5A。根据需要可以在原料中包括适量的胆固醇、亚油酸等。5B:重复上述5A程序，只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。脂质球的平均粒径《100mn。色谱法测得总倍半薛烯类的最终浓度为2±0.04mg/nil。所获得的注射剂简称5B。实施例6:温郁金提取物的静脉注射乳的制备6A:将制备例的温郁金提取物A、精制大豆磷脂、胆固醇以重量比1:3.2:1.5与余量的注射用水(根据所需最终的浓度即5mg/ml来计算该余量)混合，用M110-E/H型(曰本MIZUHO产)高压均质机乳化，一直用Coulter仪检验粒径小于lja为止。然后，用1M磷酸二氲钠水溶液调节PH,使PH值为4.5~6.5,经1.2ja微孔滤膜过滤和然后装瓶，经IO(TC~12(TC灭菌，得到温郁金提取物静脉乳，取样测得总倍半薛烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。该注射剂简称6A。6B:重复以上6A,只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。用Coulter仪检验粒径小于1微米。制剂中总倍半辟烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。所获得的注射剂简称6B。实施例7:温郁金提取物脂肪乳的制备7A:取制备例的产物A与大豆磷脂加入大豆油中，升温控制成油相，将该油相加入到含甘油的水溶液中。其具体重量比为拔，取物A占总制剂重量的0.2%，大豆磷脂1.2%,大豆油10%,甘油2.5%,余量为注射用水。然后高速搅拌，用1M磷酸二氲钠水溶液调节PH为4.5~6.5,再经M110-E/H型(日本MIZUHO产)高压均质才几处理，一直到用Coulter仪检验粒径《ly为止，再经1.2n微孔滤膜过滤和然后装瓶，IO(TC12(TC灭菌。测得总倍半辟烯类的最终浓度为2±0.04mg/ml。所获得的注射剂简称7A。根据需要可以在原料中包括适量胆固醇、亚油酸等。7B:重复上述7A，只是用制备例的产物B代替制备例的产物A。测得在制剂中总倍半辟烯类的最终浓度为2±0.04mg/ml。所获得的注射剂简称7B。实施例8:C02超临界法制备脂质体8A:将占胆固醇重量的10w"/。的三氯曱烷加入胆固醇中使之浸润，将大豆磷脂和制备例的提取物A加入其中进行混合(提取物A:大豆磷脂胆固醇=重量比1.2:3.2:1.5)，将所获得的混合物放入C02超临界提取仪(广州汉维机电公司生产，型号SFE100ml)的萃耳又器中，通入C02(压力50-80kg)，体系温度50。C,进行临界或超临界分散，使混合物均匀混合，然后緩慢减压释放C02,让C(M寻三氯甲烷带出，取出萃取器，在萃取器中加入余量的注射用水(根据注射剂的最终浓度计算该余量)，用搅拌器搅拌，将所形成的分散体用超声波处理，一直到脂质体的分散相粒径《100纳米为止(称为纳米脂质体)。然后将脂质体用1M磷酸二氢钠水溶液调节PH，使PH值为4.5~6.5，经0.8(i微孔滤膜(上海新亚净化器件厂生产，规格0.8|i)过滤和然后装瓶，IO(TC蒸汽流灭菌，所获得的注射剂产品简称8A。取样用气相色i普法测得总倍半碎烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。包封率高于m。8B:重复上述8A,只是用制备例的产物B代替制备例的产物A，制得脂质体。测得在制剂中总倍半萜烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。所获得的注射剂简称8B。包封率高于88°/。。8C:重复上述8A，只是用制备例的提取物C代替制备例的产物A,制得脂质体。测得在制剂中总倍半碎烯类的最终浓度为5±0.10mg/ml。所获得的注射剂简称8C。包封率高于88%。药效学试验药物制剂的体内抗肺瘤效果的评价方法已在以上列举的某些专利文献中有描述(例如参见CN1153168A)。在本发明中，各种剂型的制剂对皮下接种的人体肿瘤异种移植模癌的疗效，可以通过以80mgH咅半萜烯类)/kg(体重)、40mg/kg和20mg/kg的剂量，每天尾静脉给药1次，连续给药IO天的治疗方案来确认，其中没有给药的作为对照组。具体的操作过程和胂瘤抑制率(抑瘤率)的计算按照目前(指本申请的申请曰以前)的国家药品监督管理局的相关规定"抗肺瘤药物的药效评价办法"来实施。抑瘤率％=[(没有给药的模型的肿瘤重量-给药的模型的肿瘤重量)/没有给药的模型的肿瘤重量]xlOO%表1.人体肿瘤异种移植模型QGY肝癌的抑瘤率注射剂剂量(mg/kg)抑瘤率剂量(mg/kg)抑瘤率剂量(mg/kg)抑瘤率1A2030.3%4039.2%8045.3%IB2030.0%4039.1%8045.0%2A2030.1%4037.5%8044.0%2B2030.0%4038.5%8043.7%3A2029.7%4039.7%8044.5%3B2029.8%4038.7%8044.4%4A-12030.4%4038.5%8046.0%4A-22031.7%4037.9%8046.3%4B-12030.3%4037,4%8045.2%4B-22029.4%4038.7%8044.9%5A2029.2%4038.6%8044.2%5B2029.5%4038.7%8044.5%6A2029.8%4037.8%8043.3%6B2029.4%4037.9%8043.5%7A2029.3°/o4037.4%8044.0%7B2029.7%4037.3%8043.3%8A2029.4%4037.4%8044.0%8B2029.3%4037.3%8043.3%8C2029.4%4037.7%8044.3%28表2.人体肿瘤异种移植模型MKN-45胃癌的抑瘤率<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>表4:对皮下接种小鼠脑瘤G422模型的疗效(抑瘤率)。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>另外，各种剂型的注射剂对荷Lewis肺癌的小鼠NK细月包与，于照组比活性提高21%~23%。各种剂型的注射剂对荷Lewis肺癌的小鼠淋巴细胞增殖活性影响、刺激指标提高了1.4~1.55。总之，从上述表中凝:据可以看出，各种制剂经QGY肝癌、MKN-45胃癌、小鼠脑瘤G"模型药理学试验有效。对免疫功能影响试验，荷Lewis肺癌的小鼠NK细胞与对照組比提高21%~23%。淋巴细胞增值活性影响、刺激指标提高了1.4~1.55.所以，注射剂能够用于抑制和/或治疗胂瘤。另外，经过试验，该制剂还能够用于抑制癌细胞转移，用于緩解肿瘤疼痛，用于预防或治疗缺血性中风。权利要求1、温郁金提取物静脉乳剂，它含有从温郁金植物中经填料式真空精馏装置精馏或分子蒸馏仪提取的具有总倍半萜烯类含量≥70wt％的提取物，表面活性剂，和余量的注射用水，其特征在于所述温郁金提取物静脉乳剂是一种水性分散体，分散相的平均粒径≤1微米；所述表面活性剂是大豆磷脂和胆固醇，其中提取物与大豆磷脂、胆固醇的重量比是0.5-1.5∶2.5-4.0∶1.0-2.0，静脉乳剂中倍半萜烯类活性成分的最终浓度为1-10mg/ml。2、根据权利要求1所述的温郁金提取物静脉乳剂，其特征在于所述提取物与大豆磷脂、胆固醇的重量比是0.8-1.2:2.8-3.6:1.2_1.8。3、根据权利要求1所述的温郁金提取物静脉乳剂，其特征在于所述温郁金一是^l物静脉乳剂中倍半萜烯类活性成分的最终浓度为2~7.5mg/ml。4、根据权利要求2所述的温郁金提取物静脉乳剂，其特征》在于所述温郁金提取物静脉乳剂中倍半格烯类活性成分的最终浓度为2~7.5mg/ml。5、根据权利要求1-4中任一权利要求所述的温郁金提取物静脉乳剂，其特征在于所述提取物含有相当于倍半辟烯类总重量的1/50~1/10的姜黄素。6、权利要求1所述的温郁金提取物静脉乳剂的制备方法，它包括以下步骤(1)、从温郁金挥发油中经填料式真空精馏装置精馏或分子蒸馏仪提取总倍半薛烯类含量>70wt。/。的提取物；(2)、以步骤(1)获得的温郁金提取物为原料，添加大豆磷脂和胆固醇混合均匀，添加注射用水，进行高压均质化处理，一直处理到获得分散相平均粒径《1微米的稳定水性分散体为止，从而制得温郁金提取物静脉乳剂，其中^是:取物与大豆磷脂、胆固醇的重量比是0.5-1.5:2.5-4.0:1.0-2.0,温郁金才是取物静脉乳剂中总倍半辟烯类的最终浓度为1-10mg/ml。7、根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述提取物含有相当于倍半薛烯类总重量的1/50~1/10的姜黄素。8.权利要求1-5中任一权利要求所述的温郁金提取物静脉乳剂用于制备抑制或治疗癌症的药物的用途。全文摘要本发明温郁金提取物静脉乳剂及其制备方法和用途涉及涉及温郁金提取物的新注射剂型，更具体地说涉及静脉乳剂型，及该剂型的制备方法和用途。本发明温郁金提取物静脉乳剂含有从温郁金挥发油中经填料式真空精馏装置精馏或分子蒸馏仪提取总倍半萜烯类含量≥70wt％的提取物、大豆磷脂、胆固醇混合均匀，添加注射用水，进行高压均质化处理，获得分散相平均粒径≤1微米的稳定水性分散体的得温郁金提取物静脉乳剂。本发明的温郁金提取物静脉乳剂显著提高了药物制剂的药效，并且减少了在静脉注射应用中的刺激性，提高了稳定性。文档编号A61K31/01GK101306184SQ200810126418公开日2008年11月19日申请日期2002年4月17日优先权日2002年4月17日发明者李德山,恬谢申请人:恬谢