专利名称：从沙棘叶中提取总黄酮的工艺方法
技术领域：
本发明属于天然产物化学领域，涉及天然产物提取、分离和纯化，特别涉及 一种从沙棘叶中提取高纯度总黄酮的工艺方法。
背景技术：
沙棘(/^>/wp/zaw /wwrm/fl^ L .)为胡颓子科CE/aeag"aceae)酸刺属的灌木 或小乔木。别名醋柳、黑刺、酸刺、其察日嘎纳(蒙名)、达普(藏名)、吉汗(维吾 尔名)。中国是世界上沙棘分布面积最大，种类最多的国家，全世界95%以上的沙棘 资源在我国。我国沙棘资源主要分布在西北、华北、东北及西南等十多个省区。沙 棘是我国重要的天然植物资源之一，含有200多种化学成分，主要有维生素、有机 酸、单糖、氨基酸、酞氨类、脂肪酸、脂类、酚类、黄酮、蛋白质、微量元素等， 其中总黄酮是沙棘最重要和最活跃的活性成分之一，在沙棘的药用开发中占有重 要的地位。沙棘的果实、叶和全株中都含有黄酮类化合物，而叶中黄酮类化合物 的总含量明显高于果实和其它部位。
现代医学研究表明沙棘总黄酮具有抗心肌缺血、抗心率失常，提高耐缺氧 能力、降低血清胆固醇、抑制血小板聚集、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗
氧化、抗衰老、抗辐射和抗菌、抗病毒及增强免疫等广泛的药理功效(DanelR, et al, J. Agric. Food Chem, 2003, 51:4233-4239; Zu Y G, et al. J. Pharm. Biomed. Anal., 2006, 41: 714-719;肖卓殷，等.四川医学学报，1980, 11(3):174-176)。
目前沙棘总黄酮主要来源于从沙棘果实和沙棘籽榨油后、果实轧汁后的残渣 为原料，提取分离沙棘黄酮。其提取方法主要有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流 提取法、超声波提取法、微波萃取法、碱性助提剂提取法、超临界C02流体连续 萃取法、大孔吸附树脂提取法等。上述提取方法存在生产周期长、提取率低、质 量不稳定、生产成本高、产品纯度低等问题。
发明内容
针对上述现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种从沙棘 叶中提取高纯度总黄酮的工艺方法。
3本发明的技术方案如下
一种从沙棘叶中提取总黄酮的工艺方法，其特征在于将沙棘叶以热水煎提， 将浓縮离心后的提取液经聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚丙烯酸酯或聚甲基丙烯酸酯类 大孔吸附树脂吸附以及解吸附，解吸液浓縮制成浸膏粗粉后，加酸水解，再以有 机溶剂萃取，将有机相浓缩和喷雾干燥后即得。
本发明从沙棘叶制备总黄酮的工艺方法，包括以下步骤
1) 水提称取阴干的沙棘叶，加入8 12倍量的水热提，过滤后合并提 取液，料渣弃去；提取液减压浓縮，将浓縮液充分混匀后放置沉降，待上大孔色 谱柱或树脂塔；
2) 吸附以及解吸附将浓縮并沉降后的沙棘叶提取液上清液上柱进行吸 附，然后用水洗脱除去水溶性杂质，弃去水洗脱液，再用50 90wt。/。乙醇溶液解 吸附，合并醇洗脱液后回收乙醇，剩余物浓縮至干，得到浅棕色提取物粗粉；
3) 水解向第(2)步所得沙棘叶提取物粗粉中加入6 20倍量的盐酸乙 醇溶液进行水解，回流水解；
4) 萃取取第(3)步所得水解液，回收乙醇，然后用氢氧化钠溶液调 pH值至7 9;加入弱极性或中极性有机溶剂进行萃取，重复萃取后弃去水相， 合并浓縮萃取液，再进行喷雾干燥即得淡黄色至深棕色粉末产品。
在吸附以及解吸附树脂柱过程中，树脂塔柱径和柱高比为1:10 15。 在吸附以及解吸附树脂柱过程中，向大孔吸附树脂中加入的样品量为按树
脂对总黄酮静态饱和吸附量的120%。
在吸附以及解吸附树脂柱过程中，吸附速度为0.5 3 BV/h (1 BV为1个
树脂床体积)。
在吸附以及解吸附树脂柱过程中，乙醇解吸附液的流速为0.5 2BV/h。 在萃取过程中，弱极性或中极性有机溶剂选自石油醚、正己烷、环己烷、 乙酸乙酯、丙酮或正丁醇。
本发明从沙棘叶到该沙棘总黄酮产品的总浸膏得率大于1%，经紫外分光 光度计法(UV)测定，该沙棘总黄酮产品中总黄酮的含量为20% 90%;经高 效液相色谱法(HPLC)测定，该沙棘总黄酮产品中异鼠李素含量为5% 30%。 而纯化前沙棘叶中总黄酮含量仅为0.5 2%，异鼠李素含量小于O.l%。本发明与已有方法技术相比产品中沙棘总黄酮和异鼠李素的含量大为提高， 生产成本低廉，工艺路线简单，适合工业化生产应用，可进一步促进沙棘总黄酮 或异鼠李素作为药物、保健品或保健食品等多功能产品的产业化开发。 实施例1:
称取阴干的沙棘叶3.6 Kg，加入43 L水，在0.1 MPa压力和105'C条件下 煎煮2h，提取液过滤。药渣中再加入29L水，在O.l MPa压力和105'C条件下 煎煮2h，提取液过滤。合并两次提取液，药渣弃去，提取液减压浓縮至浓度为 含生药0.6g/mL，共计6L，放置沉降，弃去固体沉淀。称取聚丙烯酸酯类大孔 吸附树脂2.8Kg，湿法装入内径7.6cm、柱高76 cm (径高比1:10)的玻璃柱中 (1BV二3.45L)。将沉降后的6L提取浓縮液上柱，以2 BV/h的流速循环吸附 3次，弃去吸附残液。向吸附饱和的树脂柱中加入3倍柱床体积的水，以2BV/h 的流速进行水洗，弃去水洗脱液。然后向水洗后的树脂柱中加入60%乙醇溶液， 以2BV/h的流速进行洗脱，洗脱3BV后，合并洗脱液，回收乙醇，浓缩至干， 得浅棕色提取物粗粉0.25 Kg，浸膏得率为6.8%。向提取物粗粉中加入16倍质 量的水解液(含8XHCL和60X乙醇的盐酸乙醇溶液)，回流水解2h后，回收 乙醇，以10XNaOH调溶液pH二7.5，再以乙酸乙酯重复萃取2次，合并浓縮萃 取液后，进行喷雾干燥，即得棕黄色沙棘总黄酮产品，从沙棘叶到最终产品的总 浸膏得率为1%。以UV法测得总黄酮含量为49.4X (以芦丁计)，以HPLC法 测得其异鼠李素含量为11.8%。 实施例2:
将聚丙烯酸酯类大孔吸附树脂改变为聚苯乙烯大孔吸附树脂，径高比1:12 其余操作条件如实施例1。 实施例3:
将聚丙烯酸酯类大孔吸附树脂改变为聚丙烯酸大孔吸附树脂，径高比1:13 其余操作条件如实施例1。 实施例4:
将聚丙烯酸酯类大孔吸附树脂改变为聚甲基丙烯酸酯大孔吸附树脂，其余操 作条件如实施例1。
权利要求
1、一种从沙棘叶中提取总黄酮的工艺方法，其特征在于将沙棘叶以热水煎提，将浓缩离心后的提取液经聚苯乙烯、聚丙烯酸、聚丙烯酸酯或聚甲基丙烯酸酯类大孔吸附树脂吸附以及解吸附，解吸液浓缩制成浸膏粗粉后，加酸水解，再以有机溶剂萃取，将有机相浓缩和喷雾干燥后即得。
2、 如权利要求l所述的方法，其特征在于包括以下步骤1) 水提称取阴干的沙棘叶，加入8 12倍量的水热提，过滤后合并提取 液，料渣弃去；提取液减压浓縮，将浓缩液充分混匀后放置沉降，待上大孔色谱 柱或树脂塔；2) 吸附以及解吸附将浓縮并沉降后的沙棘叶提取液上清液上柱进行吸附， 然后用水洗脱除去水溶性杂质，弃去水洗脱液，再用50 90wt。/。乙醇溶液解吸附， 合并醇洗脱液后回收乙醇，剩余物浓縮至干，得到浅棕色提取物粗粉；3) 水解向第(2)步所得沙棘叶提取物粗粉中加入6 20倍量的盐酸乙醇 溶液进行水解，回流水解；4) 萃取取第(3)步所得水解液，回收乙醇，然后用氢氧化钠溶液调pH 值至7 9;加入弱极性或中极性有机溶剂进行萃取，重复萃取后弃去水相，合 并浓縮萃取液，再进行喷雾干燥即得淡黄色至深棕色粉末产品。
3、 如权利要求2所述的方法，其特征在于树脂塔柱径和柱高比为1:10 15。
4、 如权利要求2所述的方法，其特征在于吸附速度为0.5 3BV/h。
5、 如权利要求2所述的方法，其特征在于乙醇解吸附液的流速为0.5 2 BV/h。
6、 如权利要求2所述的方法，其特征在于弱极性或中极性有机溶剂选自石 油醚、正己烷、环己烷、乙酸乙酯、丙酮或正丁醇。
全文摘要
本发明公开了一种从沙棘叶中提取总黄酮的工艺方法。该方法将沙棘叶以热水煎提，将浓缩离心后的提取液经大孔吸附树脂吸附以及解吸附，解吸液浓缩制成浸膏粗粉后，加酸水解，再以有机溶剂萃取，将有机相浓缩和喷雾干燥后得到。本发明的优点在于产品中沙棘总黄酮和异鼠李素纯度大大提高，生产成本低廉，制备工艺路线简单，适合工业化生产应用，可进一步促进沙棘总黄酮或异鼠李素作为药物、保健品或保健食品等多功能产品的产业化开发。
文档编号A61K36/185GK101618052SQ20081015028
公开日2010年1月6日 申请日期2008年7月3日 优先权日2008年7月3日
发明者辰 李, 王晓飞, 邸多隆 申请人:中国科学院兰州化学物理研究所